Preguntas finales de repaso de Laboratorio de Biología

Laia Prats i Peñarroya -Laboratorio de biología- 1º de Farmacia- IQS-Blanquerna

¿Por qué se debe autoclavar los medios de cultivo?

Para evitar ser contaminados por microorganismos externos a lo que se quiere cultivar.

¿En qué caso se usa la filtración para esterilizar un cultivo líquido?

Cuando no se disponga de mejores métodos. Esta filtración consiste en dejar pasar los
componentes de interés como el medio de cultivo o microrganismos inferiores al diámetro del
poro del filtro.

¿Cuál es el motivo del uso de la técnica de la estría escocesa?

Para comprobar que las colonias provienen de un solo microorganismo. Se va diluyendo la

¿Por qué se aíslan colonias?

Principalmente para conseguir un cultivo puro, pero a esto se le añade poder caracterizar mejor
las colonias de microorganismos.

¿Se puede comprobar la pureza de un cultivo con una tinción simple?

Sí, si la morfología de los organismos a detectar es diferente.

No, si los organismos tienen la misma morfología, sería muy limitado.

¿Con una tinción simple se puede diferenciar una bacteria de una levadura?

Sí, en el caso de la morfología los estafilococos y las levaduras en general es esférica, pero en
cuanto a tamaño es muy fácil de diferenciar ya que las levaduras son células eucariotas que en
comparación al tamaño de las procariotas (estructura de las bacterias) son mayores.

Célula eucariota > célula procariota

¿Por qué se realiza un aislamiento para hacer una prueba API?

Para asegurar con firmeza que se trata de un cultivo puro y que solo contenga una especie de
microrganismo.

¿Por qué se hacen pruebas previas antes de realizar una prueba API 20E?

Para ver la pureza del microrganismo se realiza una tinción de Gram y para comprobar que se
está usando una enterobacteria y cualquier otro tipo de bacteria u organismo. En resumen, se
hacen pruebas para comprobar que se trata de enterobacteria haciendo pruebas para
comprobar sus características generales.

¿Qué sentido tiene disolver en una disolución salina la prueba API de auxotrofía?

Para observar si crecía algún organismo, para eliminar todos los nutrientes de los medios de
cultivo.
Laia Prats i Peñarroya -Laboratorio de biología- 1º de Farmacia- IQS-Blanquerna

¿Por qué los tiempos de realización de las pruebas API 20C y API 20E son diferentes?

Porque el ritmo metabólico de las células eucariotas (20C) es más lento que en las procariotas
(para ver un crecimiento significativo de las colonias se tiene que esperar más). La prueba 20E
es más rápido porque se trata de un estudio bioquímico de células procariotas en este caso de
enterobacterias.

¿Qué utilidad tiene la parafina añadida a ciertos microtubos del API de identificación de
enterobacterias?

Se usa la parafina para sellar los microtubos y que evitar que entre aire en esos microtubos.

Para disminuir la probabilidad de errores, ¿sería interesante utilizar el Api 20C de auxotrofía
para comprobar el resultado del API 20E bioquímico?

En la práctica no tiene ningún sentido realizarlo ya que la prueba de auxotrofía se usa para
identificar levaduras (células eucariotas) y en la prueba 20E se usa para identificar organismos
enterobacterias por lo tanto no tendría valor significativo. Pero aun así se podría usar alguna
prueba de los microtubos para realizar alguna prueba bioquímica adicional.

¿Qué causa el cambio de color en el caso de la actividad citrato permeasa en el medio citrato
según SIMMONS?

El medio de cultivo SIMMONS contiene azul de bromotimol que en pH neutro o (pH 6-7.6) es de
color verde pero cuando está en pH>7.6 es azul. Esto ocurre porque las bacterias capaces de
usar el citrato producen una alcalinización del medio en el que están.

¿Para qué sirve cerrar el diafragma del microscopio?

Permite que se pueda modular la cantidad de luz que se quiera. Cerrar el diafragma aumentaría
la concentración de luz y proporcionaría más contraste, pero en ningún caso mejoraría el
enfoque de las lentes.

¿Porque se mezclan las espinacas machacadas con acetona en la cromatografía?

Se usa acetona para separar los pigmentos presentes en las hojas de la espinaca. También se
mezcla la acetona con el hexano para realizar el eluyente (seria parte de la fase móvil de la
cromatografía) para separar los pigmentos por polaridad en las capas de silica.

¿Para qué son útiles los pigmentos en las plantas?

Los pigmentos en las plantas son útiles porque son los responsables y los que hacen posible la
fotosíntesis como la clorofila.

¿Qué importancia tienen para la salud las esporas bacterianas?

Principalmente para la resistencia de las bacterias, las esporas bacterias permiten al ADN de las
bacterias que las producen permanecer en estado de latencia por prolongados periodos de
tiempo. Esto provoca un aumento de la virulencia de ciertas bacterias que en algún momento
puedan afectar a la salud de los animales y de las personas provocando enfermedades.
Laia Prats i Peñarroya -Laboratorio de biología- 1º de Farmacia- IQS-Blanquerna

¿Por qué se va calentando sistemáticamente la tinción de endosporas?

Se va calentando sistemáticamente para que el verde malaquita, que se trata de un tinte que
penetra muy débilmente, vaya penetrando en capa exterior de las endosporas, se hace repetidas
veces para se asegura que la tinción sea efectiva y se puedan observar bajo el microscopio las
esporas.

¿Qué función tiene el glicerol estéril en el mantenimiento de las líneas celulares?

La función del glicerol estéril es de crioconservante. Este evita la formación de cristales de hielo
que se producen al congelar las muestras en cultivo líquido. Estos hielos pueden llegar a romper
las membranas de las células de la muestra y esta rotura causar la muerte del organismo en el
cultivo. Es útil para no perder individuos de las muestras que se deben congelar para conservarse
intactas.

¿Qué desventajas tiene hacer el mantenimiento de las cepas subcultivando repetidamente las
mismas? (¿Qué desventajas tiene coger muestras de las muestras cuando se quiere conservar
un cultivo?)

Que cada vez que se cogiera una muestra subcultivada el cultivo acumularía generaciones y por
tanto también iría acumulando mutaciones que modificarían características genéticas de las
cepas iniciales.

¿Cómo se puede identificar si una bacteria posee la enzima catalasa?

Con la prueba del agua oxigenada, si en el cultivo que se quiere determinar al poner una gota
de agua oxigenada (H2O2) salen pequeñas burbujas entonces la prueba será positiva.

¿Qué instrumentos de calor directo se han esterilizado en el laboratorio?

El asa de Kolle y el asa de Drigalski (flambeada con etanol).

¿En qué consiste la esterilización mediante el autoclave?

El autoclave consiste básicamente en una esterilización mediante calor húmedo, esta humedad
se consigue gracias a la capa de agua destilada que reside en el fondo del autoclave. Este se
calienta normalmente a unos 120ºC y suele estar unos 30min.

De forma opcional se pueden usar testigos biológicos que son organismos termorresistentes que
si al final de la esterilización no han sobrevivido se puede dar por buena la esterilización. El uso
de testigos físicos es más común que el uso de biológicos consiste por ejemplo en tiras adhesivas
con marcadores que si alcanzan una determinada temperatura cambian de color o en
indicadores distintos.

La presión en el interior suele ser mayor que la atmosférica por lo que se tiene que ir con cuidado
a la hora de abrirlo cuando aún este caliente y no haya reposado el tiempo debido.

¿Qué se debería observar en la extracción genética del epitelio bucal?

Si se ha hecho correctamente bajo el microscopio se deberían observar cristales generados por