Citología es una ciencia que según su etimología (Cito: proveniente del griego que

significa Célula) estudia todo lo relacionado con el comportamiento de los seres vivos, en
especial en los seres humanos, ya que es en nosotros en quienes se han desarrollado
mas funciones, aplicaciones y retos. En torno la historia, podemos evidenciar una
ausencia de estos fundamentos, no hasta la invención del microscopio, ya que la creación
de este aparato represento la evolución del estudio celular, aunque es claro que ya con
anterioridad, la medicina había tocado el campo del estudio celular.

Tipos de citología
•    Citología exfoliativa: Es el estudio de las células que son descamadas
espontáneamente o por abrasión de la superficie de un tejido dado. Realizada por
personal entrenado.

•    Citología por punción, citología aspirativa o Aspiración Con Aguja Fina

(ACAF): Es la obtención de material celular de tejidos o estructuras que no están en
contacto directo con cavidades naturales, mediante punción y aspiración con aguja fina
(calibre 23-25). Se utiliza para el estudio de órganos macizos como tiroides, mama,
glándula salival, pulmón, próstata, ganglios linfáticos. Realizada por especialista.

•    Citología de líquidos y secreciones: Es el estudio de las células presentes en

líquidos o secreciones corporales, ya sea de aquellos que son vertidos al exterior o
presentes en cavidades internas (orina, esputo, mama, derrame de cavidades pleurales o
peritoneales, líquido cefalorraquídeo, etc.). Realizada por personal entrenado.

•    Improntas: En órganos donde las células tiene escasos nexos de unión
(principalmente en órganos hematopoyéticos como medula ósea, ganglios linfáticos y
bazo), es posible obtener una capa unicelular sobre portaobjetos por contacto directo de
este con la superficie de sección del órgano, sin que sea preciso realizar raspado o
exfoliación previa. Realizada por especialista.

•    Cepillado: Muestra obtenida en procedimientos endoscópicos, principalmente del

árbol bronquial y biliar, mediante un cepillo adaptado al endoscopio, el cual permite
obtener la muestra del sitio deseado. Realizada por especialista y en ámbito hospitalario.

•    Lavado: Se realiza durante un acto endoscópico exploratorio, añadiendo sustancias

liquidas (suero fisiológico o solución salina), haciendo un lavado en grandes superficies
como el árbol bronquial, peritoneo, estomago, etc. Realizada por especialista.

•    Raspado: Se puede realizar con cualquier instrumental como espátulas, bisturí,

cánulas, etc. Realizada por médico.
 La citología cervical 
El test PAP (de Papanicolaou) es considerado por muchos como el método más costo-
efectivo para la detección del cáncer. El crédito para este concepto y desarrollo es para
George Papanicolaou (1883-1962), anatomista griego emigrado a Estados Unidos (15).
En 1928 presento su hallazgo de células tumorales del cérvix en las secreciones
vaginales de mujeres en “Proceedings of the Third Race Betterment Conference en Battle
Creek”, Michigan. En esta ocasión casi no  se le prestó atención, pero perseveró con su  
trabajo. Posteriormente en 1941 en colaboración con Herbert Traut ginecólogo publico sus
evidencias sobre las lesiones cervicales preinvasivas (1).
Los patólogos y los clínicos tomaron esta técnica con escepticismo pero a finales de 1945
las observaciones de Papanicolaou fueron confirmadas por otros (2).
En 1943 se empezaron a comprender los conceptos de carcinoma in situ y de diagnóstico
por medio citológico. En 1947 el ginecólogo canadiense E. Ayre mejoró la técnica
obteniendo muestras directas del cérvix en lugar de secreciones vaginales con el uso de
la espátula de Ayre. Esta técnica se ha tomado como una prueba de “Screening” ideal
para las lesiones cervicales preinvasivas, que si son tratadas a tiempo previenen su
transformación en lesiones invasivas.
En Colombia los pioneros de esta técnica fueron Ricardo Alvarado Pantoja y Armando
Santamaría Hermida.

Sistema para la obtención de la muestra de la

citología cervical.
El mejor procedimiento consiste en usar una espátula de punta larga con un cepillo
endocervical ya que permite la obtención de muestra de exocérvix y del canal
endocervical. Existen espátulas de madera o plástico. Desde 1990 se acepta el uso de
cepillos endocervicales. 
Existe otro dispositivo para realizar estas muestras que es denominado “escobilla”. Con
este se pueden tomar muestras del exocérvix, de la zona de transformación y del canal
endocervical. (1). Debe ser realizada por personal entrenado.

 
Informe de resultados de la citología cervical
La lectura de la citología debe ser realizada por un Patólogo o un Citohistotecnologo 
entrenado bajo la supervisión de un Patólogo. El informe de resultado de la citología
vaginal debe ser basado en El sistema Bethesda 2001. Este sistema tiene como fin
unificar criterios e informar la citología vaginal de una forma clara, proporcionar
información relevante al médico y fomentar la comunicación eficaz de los hallazgos
citológicos relevantes al médico con el fin de brindar una atención óptima a las pacientes
(3).
  PREPARACION

 Método directo: se emplea cuando la muestra es rica en células, es decir, presenta muy poca cantidad de
líquido por lo que el material colectado se coloca directamente sobre un portaobjetos para realizar el
frotis, como ejemplos tenemos la punción aspiración con aguja fina, los raspados e improntas.
 Método indirecto: en caso de que las muestras obtenidas sean líquidas y para realizar el frotis habrá que
concentrar la población celular mediante centrifugación, ejemplos son la orina y líquidos procedentes de
lavado.
Los estudios citológicos pueden agruparse en 4 grandes categorías:

 Investigación de las células atípicas en las secreciones líquidas o derrames varios.

 Investigación de células atípicas después de un escobillonado o raspado con instrumentos diversos de
una mucosa o una lesión de piel.

 Citodiagnóstico después de una cito punción, es decir, después de una punción hecha con aguja fina
para recoger líquido tisular recogiendo células en suspensión y no un fragmento del tejido.

 Citodiagnóstico de pieza operatoria no fijada por la técnica de los frotis o del as impresiones.
Los 2 primeros grupos forman parte de la citología de detección precoz o exfoliativa basada
en la investigación de células anormales, a veces poco numerosas y muy alteradas que
requieren del citólogo paciencia, atención y gran experiencia.
Los grupos 3 y 4 permiten en cambio el estudio de verdaderas poblaciones de células, con
frecuencia numerosas y no alteradas, en las que se pueden observar las modificaciones
morfológicas más o menos marcadas, al densidad, la cohesión, la diferenciación y la reacción
celular del estroma avocando en numerosos casos a un verdadero citodiagnóstico inmediato y
al establecimiento de un índice citológico de malignidad que puede intervenir en el pronóstico
y las indicaciones terapéuticas de los tumores.
2. PREPARACION DE LA MUESTRA PARA EL ESTUDIO CITOLOGICO.
2. a. Tipos de muestras según su procedencia.

 Muestras procedentes de líquidos fisiológicos como por ejemplo sangre, orina líquido
cefalorraquídeo, liquido pleural, liquido prostático, contenido gástrico…
 Muestras procedentes de líquidos y fluidos patológicos, liquido de derrames, pleural, peritoneal,
contenido de un quiste, expectoración bronquial, liquido procedente del lavado de esófago, estómago,
colon…. Y las procedentes de cito punciones como por ejemplo la punción de médula ósea, la punción
hepática

 Muestra procedentes de frotis legrados como por ejemplo el frotis vaginal y el cepillado bronquial.
 Piezas operatorias.
2. b. Preparación general de la muestra.
La totalidad de las muestras que recibe el laboratorio de citología se puede separar en 3
grandes grupos:

 Frotis fijados: lo constituyen aquellos frotis que han sido extendidos y fijados por el clínico
inmediatamente después de la obtención de la muestra. Deben llegar al laboratorio adecuadamente
identificadas con el nombre del paciente y uniformemente extendidos, normalmente se fijan con cito
spray, estos portas que ya llegan al laboratorio fijados están listos para proceder a la tinción rutinaria que
 se suele realizar al de papanicolau, ejemplos son las secreciones de mama, las muestras procedentes de
cepillados y otros tipos de muestras citológicas.

 Frotis secados al aire: son frotis extendidos por el clínico inmediatamente después de la obtención de
la muestra y secados al aire, estos frotis no fijados van destinados a ser teñidos con la tinción de
Romanowsky.

 Muestras no fijadas ni secadas al aire: este tercer grupo incluye las muestras frescas que llegan a
laboratorio generalmente en forma de fluido líquido o semisólido, requiere mayor dedicación y
habilidad.
El procesamiento de estas muestras puede ser por:
o Extensión directa: es la técnica más rudimentaria especialmente útil para muestras mucosas (esputo,
líquido de aspecto mucoso, aspirado bronquial…). Los pasos a seguir son:

 Identificar dos o más portas con el nombre o número de orden del enfermo.
 Observar la muestra y anotar su aspecto microscópico.
 Se seleccionan aquellas partes de la muestra que son representativas de la misma y ó las de
apariencia patológica.

 Se deben colocar las partes seleccionadas sobre un porta y extenderlas con otro hasta conseguir frotis
uniformes, también se pude hacer con el asa de platino previamente esterilizada.

 Los portas preparados pueden introducirse en la solución fijadora (caso de la tensión de Papanicolau)
o se deja secar al aire (si se van a teñir con Romanowsky).
o Otra forma es mediante centrifugación: es una técnica útil para muestras seromucosas y grandes
volúmenes de líquidos serosos (liquido quístico y procedentes de lavados).
El método consiste en:

 Anotar el aspecto mucoso de la muestra.

 Agitar la muestra para después resuspender las células que contiene y verter igual cantidad en dos
tubos de centrifuga.

 Se centrifuga a una velocidad aproximada de 2000rpm, durante 5 minutos, una vez centrifugado se
decanta el sobrenadante, mezclar el sedimento con unas gotas de sobrenadante para resuspender las
células y depositar con una pipeta pasteaur una gota de este sedimento sobre un porta previamente
identificado.

 Realizar una extensión directa con esta parte de la muestra o citocentrifugarla.

 Fijar rápidamente con la solución fijadora.
o Citocentrifugación: esta técnica se hace con una centrifuga llamada citospyn. Pequeñas alícuotas
(cantidades iguales) de muestra líquida se hacen girar lateralmente sobre un porta para formar una
monocapa de células. Es una técnica de gran utilidad y rapidez para la preparación de muestras líquidas.
o Filtros de membrana: constituyen una técnica de concentración de células en muestras líquidas de baja
densidad celular (orina) ya que rescatan mayor número de células que la citocentrifugación. Estos filtros
son membranas porosas de plástico cuyos poros van de 10 - 8 micras. Los más utilizados son:

 TÉCNICAS DE COLORACIÓN.
 Los principales objetivos de la tinción citológica son:
 Visualización óptima de las células.
 Diferenciación de los constituyentes celulares.
 Destacar lo más posible la estructura nuclear y suavemente el citoplasma, solo para indicar si es
eosinófilo o basófilo.
Para ello se emplean distintos colorantes, si bien, los fundamentales son la Hematoxilina que
tiñe bien los núcleos y Eosina para teñir citoplasmas. Pero hay muchos más colorantes como
el Orange G, verde luz, Fucsina…
Un colorante debe colorear las células, no decolorarse son los disolventes habitualmente
empleados y decolorarse minimamente tras largo tiempo de almacenamiento.
En citología es muy importante la calidad de la tinción del núcleo ya que la distinción entre
células benignas y malignas se basa en la morfología nuclear.
La tinción del citoplasma proporciona información adicional respecto al origen y maduración
de la célula.
Hay muchos métodos de tinción, el más recomendable y usado en citología exfoliativa es el de
Papanicolau.
 Tipos de tinciones.
 Tinción de Papanicolau: está particularmente indicada para el estudio de la queratinización de las
células memalpighianas patológicas. Fue introducida por Papanicolau en 1925, es una tinción diferencial
o policroma.
Usa tres colorantes básicos (o mezclas), el colorante nuclear en la hematoxilina de Harris que
produce una impregnación excelente de la estructura cromatinica y también usa mezclas de
color citoplasmático como el naranja G, verde luz, pardo Brismark, eosina…
La hematoxilina de Harris se usa sin acidificar con ácido acético y proporciona un color azul
oscuro a los núcleos.
El naranja G junto con la solución eosina alcohólica (EA) constituye el colorante del
citoplasma. Aunque la solución puede realizarse en el laboratorio se encuentra comercializada
bajo el nombre de OG - G, tiñe de naranja los citoplasmas celulares que contienen queratina
como por ejemplo las células del carcinoma epidermoide.
Las soluciones EA además de este colorante contiene verde luz y pardo Bismark.
Comercialmente se encuentran ya diluidos constituyendo las mezclas EA - 36, EA - SO y EA -
&%, que si bien proporciona buenos resultados para cualquier muestra, en determinadas
situaciones es recomendable el uso de alguna fórmula en particular. Este es el caso de
algunas muestras ginecológicas con frecuencia gruesas donde es preferible emplear EA - 65
ya que al tener verde luz no colorea tan intensamente el fondo de la preparación, además el
empleo de esta mezcla facilita la distinción entre adenocarcinoma de cerviz (citoplasma
rosáceo) y adenocarcinoma endometrial (citoplasma azulado).

 Tinción de Shorr:
 Es una técnica de coloración de excelentes resultados en la evaluación hormonal de la
citología vaginal. Permite distinguir con gran facilidad las células queratinizadas (color naranja
brillante) de las no queratinizadas (intermedias y parabasales que se tiñen de color azul
verdoso).
Los núcleos se tiñen de azul nunca tan claramente como la técnica de Papanicolau.
Otros componentes de la muestra como leucocitos hematíes, bacterias, espermatozoides… se
distinguen satisfactoriamente.
También puede utilizarse para detectar cuerpos de inclusión intracitoplasmáticos que se tiñen
de color rojo vivo.

 Tinción de May - Grundwald Giemsa

Esta coloración también denominada Pappenheim se realiza sobre material secado al aire en
preparaciones de citología por punción aspiración.
Consiste en una combinación de dos coloraciones sucesivas, la de May - Grundwald y la de
Giemsa que emplea diversas variantes de eosinato de azur o de metileno para producir una
coloración policroma más brillante que la obtenida con cada uno.
Además presenta algunas ventajas sobre los métodos clásicos de Papanicolau y hematoxilina
- eosina para la percepción de los finos detalles citológicos sobre el diagnóstico de malignidad.
Esta tinción resalta detalles del citoplasma como la presencia de vacuolas, gránulos o mucina
y los distintos componentes del fondo como la matriz mixoide, el colágeno, la mucina o el
coloide.

 Coloraciones extemporáneas:
Son coloraciones rápidas, el empleo de la citología para el diagnóstico peri operatorio necesita
coloraciones rápidas, ejemplos:
o Coloración de Azul de Unna: en 15 segundos proporciona una coloración legible. Es monocroma pero
muestra suficientemente la morfología celular: la anisonucleosis, las alteraciones nucleares para permitir
un diagnóstico exacto.
o Coloración de Giemsa: utiliza la secuencia siguiente: alcohol metílico puro de 1 - 2 minutos y
seguidamente colorante Giemsa 2 minutos.
o Coloraciones vitales con rojo neutro al 1 / 1000 - 1/ 500.
o coloración vital con Azul de metileno al 1 %.

 Coloraciones especiales: Tinción con anaranjado de acridina.

Las técnicas histoquímicas pueden ser aplicadas a la citología para investigación del
glucógeno por el carmín de Best o el yodo, la coloración de mucopolisacáridos, las fosfatasas,
las grasas, los ácidos desoxiribonucleicos y los ribonucleicos; aquí veremos la coloración que
utiliza el anaranjado de acridina y la microscopia de fluorescencia.
Técnica de coloración con el anaranjado de acridina en fluorescencia:
Se basa en la fluorescencia roja que da el citoplasma de las células cancerosas a causa de su
riqueza en ADN.
Puede practicarse sobre material fresco y fijado.
Procedimiento Técnico:
Se separa una solución madre de anaranjado de acridina al 0´1 % en agua destilada. Esta
solución se conserva indefinidamente; para la coloración se diluye una parte de dicha solución
en un tampón de fosfato 1/15 molar (M).
Es necesario producir una diferenciación de la fluorescencia del ARN, esto se realiza con una
disolución acuosa de cloruro de Ca.
La fijación se debe realizar inmediatamente después de la extensión durante 5 - 10 minutos en
alcohol o mezcla de alcohol - éter, debe evitarse la fijación con formol.