BIOLOGIA CELULAR

FACULTAD DE EDUCACION Y CIENCIAS

UNIVERSIDAD DE SUCRE
PRÁCTICA N°1 INSTRUMENTACIÓN Y MANIPULACIÓN DE EQUIPOS DE
LABORATORIO

INTRODUCCIÓN

El aprendizaje de los equipos que se utiliza en laboratorio es fundamental ya que ello

conlleva a evitar accidentes y sobre todo permite que el alumno disfrute de la investigación
científica, pues aprende a descubrir su capacidad creativa y valora su interés por la carrera.
Cada elemento que se utiliza en el laboratorio debe el estudiante saber su manipulación,
precauciones para su manejo. Se explicará el uso y manejo de los materiales y equipos de
laboratorio y luego cada estudiante podrá manipular algunos de los materiales como
micropipetas para la absorción de líquidos, balanza analítica, centrifuga entre otros.

Objetivos
-Identificar los principales componentes de los cuatro aparatos de uso común en el
laboratorio de Biología Celular que son: balanza analítica, potenciómetro, centrífuga y
micropipetas.
-Explicar el fundamento y el uso que tienen cada uno de los aparatos.
-Manejar y cuidar correctamente cada uno de ellos.

Balanza Analítica

La balanza analítica es un instrumento indispensable para cualquier procedimiento

analítico, ya se trate de un método clásico de análisis estequiométrico o de un método
instrumental moderno de naturaleza estequiométrica. Si la determinación de la masa no es
absolutamente confiable, el resultado analítico final es inaceptable. La balanza analítica
determina la masa de un objeto y el término peso se utiliza como sinónimo, aunque sea
incorrecto. Las balanzas actuales tienen una pantalla digital, capacidades para restar la tara
y rutinas de prueba y calibración programadas internamente. Algunas balanzas tienen una
capacidad máxima pequeña (de 0.1-1g), mientras que otras balanzas analíticas electrónicas
que utilizan células de carga poseen capacidades de hasta 200 g y una facilidad de lectura
de + 0.10 mg ó + 0.01mg y poseen salida de datos que permiten incorporarlas a sistemas
automatizados. Algunas balanzas pueden registrar en forma continua variaciones del peso
con el tiempo (figura 1). Se emplea principalmente cuando se requieren preparar:
soluciones valoradas, soluciones estándar o estándar primario, para realizar alguna
valoración, para obtener el peso constante en algunas determinaciones, como humedad y
cenizas, en donde es necesario registrar valores de 0.1 mg. Las instrucciones que se deben
seguir para la correcta operación de la balanza analítica son las siguientes:

1. La balanza debe encontrarse nivelada, con la burbuja de aire en el centro, en caso de no

estar así, se mueven los tornillos de las patas, hasta llevar la burbuja al centro (figura 2A).
2. Presionar la membrana del botón de encendido (ON/OFF), hasta conseguir encender la
balanza (figura 2B).

3. Colocar el objeto a pesar en el platillo y observar el peso en la pantalla (utilizar vidrio de

reloj o papel cuando sea necesario). Figura 2C.

4. Presionar nuevamente el botón de encendido, para aplicar la tara, observar que la

pantalla indica nuevamente ceros (figura 2D).

5. Pesar la cantidad de sustancia requerida agregando ésta con una espátula, cuidando de no
tirar sustancias sobre el platillo o fuera del vidrio de reloj(figura 2E).

6. Retirar el vidrio de reloj o el objeto del platillo de la balanza.

7. Oprimir nuevamente el botón de encendido, para dejar nuevamente la escala en ceros.

8. Finalmente oprima el botón de apagado (OFF/MODE).

Para el correcto uso de una balanza analítica se debe considerar que:

-Del buen uso de la balanza analítica dependerán en muchos casos los resultados de los
experimentos. Es un instrumento un tanto delicado que con los cuidados adecuados prestará
excelentes servicios.

-La balanza analítica deberá estar colocada en un lugar donde los resultados del pesado no
estén afectados por vibraciones, radiaciones térmicas, corrientes de aire y donde no reciba
directamente la luz solar.

-Los botones de encendido y apagado, deben presionarse con la yema del dedo, no utilizar
objetos que puedan dañar la membrana.

-En los platillos nunca deben quedar objetos, después de utilizarla se deberá limpiar con
cuidado, sobre todo cuando por accidente alguna sustancia se derrame sobre el platillo.

-Los objetos a pesar deben estar limpios, secos y a temperatura ambiente, además cuando se
pesa un recipiente cerrado debe cuidarse que el aire de su interior tenga la misma
temperatura y presión que la ambiental.
Los pasos de operación para realizar una pesada en una balanza semianalítica son similares
a los descritos anteriormente, ésta tiene una capacidad de pesado mayor y la precisión es de
0.001 g. Generalmente se utiliza cuando se preparan soluciones porcentuales o que no
requieran valoración (figura 3).
Potenciómetro

El potenciómetro es un aparato que sirve para determinar el pH de una

sustancia. El pH se define como el -log [H+] y representa la acidez de una
solución.
El potenciómetro es un instrumento que se basa en el principio de balance
nulo, por el cual el potencial que se va a medir es balanceado por un
potencial igual, pero en sentido opuesto. Está constituido por una batería,
una resistencia, un electrodo, un galvanómetro y un voltímetro.
La fuerza electromotriz del electrodo se lee directamente en el voltímetro, en
una escala de pH que va de 1 a 14. Los electrodos indicadores de iones
hidronio son cuatro: electrodo de hidrógeno, el de quinhidrona, el electrodo
de vidrio combinado y electrodos de metal-óxido metálico (antimonio).
La carga del electrodo de hidrógeno puede medirse comparándola con un
electrodo patrón, es decir, encontrando la diferencia del potencial entre
ambos electrodos. Cualquier cambio en la acidez de la disolución hará variar
la diferencia de potencial entre los electrodos.
El electrodo combinado contiene la media celda de pH con una solución
amortiguadora, sellada en el cuerpo del electrodo, así como su media celda
de referencia. El potencial observado será la suma de los potenciales
separados de las medias celdas (de pH y de referencia). Puesto que los potenciales dentro
del electrodo de pH están fijados por la solución de
llenado y el potencial del electrodo de referencia es constante, cualquier
cambio en el potencial del sistema electródico a una cierta temperatura será
debido a cambios de pH de la solución que está siendo medida.
Generalmente los electrodos combinados son de uso común para las
determinaciones de pH y valoraciones de neutralización.
En el potenciómetro puede apreciarse una serie de botones de control y una
pequeña pantalla (figura 4).
Instrucciones y operación.
Calibración.
1. Encienda el potenciómetro (figura 4A).
2. Pulse la tecla CAL (figura 4B).
3. En la pantalla aparecerá el mensaje “CLEAR CAL”; de inmediato oprima el
botón SET CLR (figura 4C).
4. Destape y enjuague el electrodo con agua destilada, e inmediatamente
después sumérjalo en solución buffer pH 7 (figura 4D). Los botones de
aumento y disminución se utilizan para el ajuste de pH.
5. Agite el vaso de precipitados que contiene la buffer pH 7 hasta que en la
pantalla el reloj de arena se apague.
6. Cuando en la pantalla aparezca “CFM”, oprima el botón CFM.
7. Retire el electrodo de la solución buffer y enjuáguelo con agua destilada
(figura 4E).
8. Sumerja el electrodo en solución buffer pH 4 y repita el paso 5 y 6.
Medición de pH
Sumerja el electrodo en la muestra de la cual se desea conocer el pH (figura 4F). Agite
brevemente y registre el pH que se indica en la pantalla (figura 4G).

Los cuidados que se deben tener al manejar un potenciómetro son los siguientes:
1. Nunca permitir que el electrodo esté sin solución si el potenciómetro está en posición de
encendido.
2. Antes de usar el electrodo combinado, se quitan la capucha protectora y la cubierta de
agujero de llenado, para permitir el flujo del electrodo.
3. Cuando no se utilice el electrodo, debe llenar el capuchón protector con una solución
saturada de KCl y colocarlo en el electrodo. El agujero de llenado debe estar tapado para
prevenir la evaporación así como para reducir el flujo de la solución del electrolito a través
de la unión.
4. Al transferir electrodos de una solución a otra, éstos deben enjuagarse con agua
destilada.
5. Nunca limpie los electrodos con papel o trapo, en caso de ser necesario para quitar el
exceso de agua efectúe esta operación: acerque un papel adsorbente y permita, sin tocar el
electrodo, que el agua pase por capilaridad al papel.
6. Para optimizar el funcionamiento de los electrodos, antes de efectuar las mediciones,
deben equilibrarse a la misma temperatura las soluciones amortiguadoras de calibración y
lasmuestras por medir.
7. El potenciómetro se calibra con una solución amortiguadora patrón con un pH cercano al
pH de las muestras por medirse, en caso de no conocer éste, se calibrará con un
amortiguador pH 7.

Centrífuga

Las centrífugas clínicas son muy útiles para el trabajo diario en un laboratorio clínico o
bioquímico; con ellas se pueden separar suspensiones o trabajar con muestras biológicas,
pero al requerir una separación más fina, como por ejemplo de sustancias con peso
molecular similar, o de organelos, pueden utilizarse las ultracentrífugas, que poseen una
mayor capacidad de separación y requieren cuidados especiales. La centrífuga es un aparato
con el cual puede separarse un sólido de un líquido, gracias a la aplicación de una fuerza
centrífuga. Las partículas de distinta densidad, tamaño o forma sedimentan a diferente
velocidad, cuando se someten a un campo centrífugo, es decir, un campo gravitacional y la
velocidad de sedimentación es directamente proporcional al campo G, que está dada a su
vez por la siguiente ecuación:
r = distancia radial a partir del eje de rotación hasta la solución.

Las ventajas de la centrifugación son: los precipitados se pueden concentrar

en volúmenes pequeños, el precipitado puede lavarse rápida y
efectivamente, las soluciones ácidas y básicas concentradas y líquidos
corrosivos pueden manipularse fácilmente, separar organelos por medio de
la centrifugación diferencial y se pueden determinar los pesos moleculares
de macromoléculas con el uso de ultracentrífugas (con velocidades de 50 000
a 30 000 g).Componentes principales de una centrífuga:

Componentes principales de una centrífuga

1. Interruptor principal de
7. Perilla rotatoria izquierda.
encendido.
2. Botón de frenado. 8. Perilla rotatoria derecha.
9. Etiqueta de identificación
3. Botón de apertura de tapa.
del equipo.
10. Tornillo de
4. Pantalla.
compensación potencial.
5. Tapa.
11. Entrada de cable
6. Botón de inicio. suministrador de
corriente.
Panel de operación.

1. Interruptor principal de encendido. 7. Perilla rotatoria izquierda. 2. Botón de frenado. 8.

Perilla rotatoria derecha. 3. Botón de apertura de tapa. 9. Etiqueta de identificación del
equipo. 4. Pantalla. 10. Tornillo de compensación potencial. 5. Tapa. 11. Entrada de cable
suministrador de corriente. 6. Botón de inicio.

Instrucciones de operación.
1. Asegurar que el equipo se encuentre ubicado en un lugar firme y se encuentre
debidamente conectado.
2. Verter la muestra que se desea centrifugar en un tubo de ensayo teniendo cuidado de no
rebasar 2/3 partes del volumen total del tubo. El tamaño del tubo de ensayo dependerá del
tamaño de la camisa de la centrifuga; es decir, el tubo de ensayo debe entrar y salir de la
camisa con facilidad.
3. Con la ayuda de una balanza de dos platos, equilibrar el peso de dos tubos de ensaye; el
primero de los tubos contendrá la muestra y el segundo contendrá únicamente agua de la
llave. A partir de este momento ambos tubos deberán ser manipulados con guantes para
evitar al máximo la diferencia de pesos.
4. Una vez que se tienen los tubos con el mismo peso, el equipo colocado sobre una
superficie firme y éste se encuentra debidamente conectado a la corriente eléctrica; se
oprime el interruptor principal en posición de encendido.
5. Oprimir el botón de apertura de tapa.
6. Introducir ambos tubos a la centrifuga. LOS TUBOS DEBEN SER
INSTALADOS SIMETRICAMENTE UNO ENFRENTE DEL OTRO (figura 5A).
7. Cerrar la centrífuga.
8. Ajustar el tiempo y la velocidad deseada con las perillas de ajuste.
9. Una vez que se ajustaron los parámetros deseados; se da inicio al proceso de
centrifugado oprimiendo el botón de inicio.
10. El equipo trabajara inmediatamente y de manera automática mostrando el progreso del
proceso en la pantalla. No es necesario oprimir el botón frenado para interrumpir el
proceso.
Nota. Si los tubos no son equilibrados o son colocados de manera incorrecta; se romperán
durante el proceso y se desajustará el equipo. En este caso será necesario oprimir el botón
de frenado para interrumpir el proceso inmediatamente.

Los principales cuidados que se deben considerar al usar este equipo son:

1. Los pesos de los tubos deben equilibrarse antes de encenderla, porque de lo contrario se
corre el riesgo de que se rompan los tubos de vidrio.

2. Los tubos no deben llenarse totalmente para evitar que se derrame el líquido.

3. La centrífuga debe cerrarse perfectamente antes de encenderla.

4. Al terminar de centrifugar, se debe esperar a que se detenga totalmente antes de levantar

la tapa y retirar los tubos, de lo contrario, se corre el riesgo de romper el tacómetro o
desbalancear la centrífuga.

Micropipetas

Las micropipetas son dispositivos que se caracterizan por carecer de depósito

y que se utilizan para medir o transvasar pequeños volúmenes de líquido de
un recipiente a otro con gran exactitud, permiten medir volúmenes
pequeños que van desde 0.1 μL y comúnmente hasta 1 mL. Hoy en día
existen una gran cantidad de compañías y modelos similares que funcionan
bajo un mismo principio de pistones. Por lo anterior, es importante consultar
las instrucciones del fabricante sobre el empleo correcto de cada modelo.
Una característica común a todas es que utilizan puntas descartables
plásticas que se ajustan al extremo de cada modelo de micropipeta. En estas
puntas de plástico es donde se deposita el líquido a medir.
Existen micropipetas que sólo miden un volumen fijo y otras que miden
volúmenes variables. Las de volumen fijo son más precisas que las de
volumen variable. Además, pueden ser usadas de forma manual o
electrónicamente automatizada; siendo éstas últimas de alto costo por lo
que su uso se limita en equipos automatizados o robóticos
La pipeta mecánica o de pistón funciona generalmente transmitiendo la
fuerza que un operador ejerce sobre un émbolo que se encuentra unido a un
pistón mediante un eje que los desplaza a lo largo de un cilindro de longitud
fija, forzando un volumen predefinido de líquido fuera de la pipeta.
Las pipetas de pistón de volumen fijo, dispensan un volumen
predeterminado de líquido, el cual es conocido como volumen nominal (Vn) y
las de volumen variable permiten ajustar el volumen dispensado dentro de
un rango determinado en las especificaciones de la pipeta; en este caso, la
variación del volumen se logra modificando la longitud de la carrera del
pistón dentro del émbolo mediante un micrómetro.
Las pipetas de pistón pueden ser de desplazamiento por aire o neumáticas,
debido a que existe un volumen de aire entre la cabeza del pistón y el líquido en el cilindro,
o de desplazamiento directo por que el pistón se encuentra en
contacto directo con el líquido (Fig. 1).

Fig. 1. Tipos de pipetas dependiendo de la forma del pistón.

Todas las pipetas de pistón disponen de puntas desechables para minimizar los riesgos de
contaminación. Para facilitar el uso del tipo de punta adecuado los fabricantes han adoptado
un código de color según el volumen a dispensar (Cuadro 1) y que en las de uso más
general coincide con el color de las puntas utilizadas. Las pipetas utilizadas en nuestros
laboratorios son del tipo Gilson® (Figs. 2 y 3). Cada marca tiene sus particularidades,
especialmente con el ajuste exacto de las puntas desechables; sin embargo, el uso, cuidado
y calibración es similar para todas las de su tipo.
Fig. 3. Esquema de las partes que componen un micropipeta de la
marca Gilson.
Recomendaciones para el pipeteo:

La profundidad de inmersión de la punta es especialmente importante en el uso de

volúmenes pequeños. Si la punta se sumerge demasiado, se aspira más liquido debido al
aumento de la presión. Si, por el contrario, la punta no se sumerge lo suficiente, se puede
cargar aire con las consiguientes burbujas y volumen inadecuado. Es fundamental mantener
un ritmo, velocidad y técnica adecuada al mover el émbolo. Una aspiración demasiado
rápida e incontrolada puede llevar a la formación de aerosoles, salpicaduras y posible
contaminación del eje y del pistón, lo que puede producir incluso pérdida de volumen de la
muestra.

Se debe procurar mantener el ángulo de inmersión de la pipeta lo más

cercano a la vertical posible. De otra forma, la columna vertical de
líquido será más pequeña y se aspirará demasiada muestra. Por el
contrario, al dispensar el líquido, la punta se ha de mantener en un
ligero ángulo frente a la pared del vaso para asegurar un correcto
vaciado.
Para la mayoría de aplicaciones se recomienda dispensar con el extremo
de la punta apoyado contra la pared del recipiente. Así se reduce o
elimina el hecho de que se quede algo de muestra en el interior de la
punta después de acabar la dispensación. Retirar la pipeta deslizando el
extremo de la punta hacia arriba por la pared lateral para liberar
cualquier gota restante en el orificio de la punta. Otra técnica consiste
en dosificar directamente en la superficie del líquido. Es crucial usar una
punta de pared fina para que no quede ninguna gota en el interior de la
punta. Si se dispensa directamente dentro del líquido tendremos que
sacar la pipeta manteniéndola en el segundo tope para evitar una toma
de muestra después de la dispensación.

Se recomienda enjuagar previamente las puntas como mínimo dos

veces con el líquido a pipetear para compensar la película de líquido en
el interior de la punta. El enjuague previo también tiene otras ventajas:
ayuda a neutralizar los efectos de capilaridad e iguala la temperatura y
humedad del aire del interior de la pipeta con la temperatura y
humedad de la muestra.

1. Pasos para manejar una micropipeta:

a. Ajustar el volumen girando la rueda dentada de control de volumen hasta que en la

ventana aparezca el volumen deseado.
b. Colocar una punta descartable adecuada en la punta de la pipeta haciendo una leve
presión para lograr un buen ajuste.

c. Oprimir el botón pulsador con el dedo pulgar, hasta el primer tope y sin soltarlo
introducir verticalmente la pipeta, hasta que la punta se sumerja de 2mm para volúmenes
pequeños, hasta 5mm para volúmenes mayores dentro del líquido.

d. Liberar lentamente la presión sobre el botón, después de 2-3 segundos retirar, siempre
verticalmente, la pipeta del líquido deslizando la punta contra la pared del recipiente.

Apoyando la punta contra la pared del recipiente colocar el líquido, presionar lentamente el
botón pulsador hasta el primer tope. Después de un segundo, y sin soltar el botón
pulsador, terminar de vaciar la pipeta presionando hasta el segundo tope.

Retirar la pipeta deslizando la punta contra la pared del recipiente.

Cuestionario
1. Defina los términos de masa y peso.
2. ¿Qué es y cómo se utilizan los términos de precisión y exactitud?
3. Mencione 3 experimentos en los que para realizarlos se utilice principalmente el
potenciómetro.
4. Explique la ley de Lambert y Beer.
5. Si usted tiene que centrifugar a 3000 g y cuenta con una centrifuga cuyo rotor tiene un
diámetro de 20 cm, ¿cuántas rpm tiene que aplicar?
6. Defina que es calibración
7. ¿Cuáles otros parámetros se utilizan para realizar la calibración de una pipeta?
8. Defina que es exactitud y precisión
9. ¿Qué marcas de micropipetas son las más comunes?
10. ¿Cuántos rangos de volumen se manejan en las micropipetas y cuáles son?
Referencias
1. Aguilar-Santelises L, Corona-Ortega MT, García-del Valle A, Rangel-Corona R, Cruz-
Millán M. Antología para los laboratorios de Bioquímica Celular y de los Tejidos I y
Laboratorio Integral de Biología I. 2a ed. México: FES Zaragoza, UNAM; 2007.
2. Crouch D, Holler F, Skoog D. Principios de análisis instrumental. 6a ed. México:
CengageLearning Editores S.A.; 2008.
3. Díaz A, Bárcena A, Reyes F. Espectrofometría: Espectros de absorción y cuantificación
colorimétrica de biomoléculas. [on line] Disponible en:
http://www.uco.es/dptos/bioquimicabiolmol/pdfs/08_ESPECTROFOTOMETR%C3%8D.p
df
4. Olsen E. Métodos ópticos de análisis. Barcelona: Editorial Reverté, S.A.; 1990.
5. Catálogo de Productos de Manejo de líquidos. LT800507/A. USA: Gilson S.A.S.; 2011.
6. García M, Silva M. Manual del técnico superior de laboratorio de análisis clínicos.
España: MAD; 2004.
7. Instrucciones de Trabajo Estándar para Pipetas. AESOP13640. Germany: Eppendorf
AG; 2013.
8. Organización Panamericana de la Salud. Manual de mantenimiento para equipo de
laboratorio. Washington: 2005.
9. Segal C, Ortega G. Manual de prácticas de biología molecular de la célula l. México:
Facultad de ciencias de la UNAM; 2005.
10. User’s Guide. PIPETMAN®P. LT801129/A. France: Gilson S.A.S.; 2009.