Espectroscopía Molecular

Desempeño

Familiarización Productividad

Flexibilidad 2
 Introducción

• Fundamentos de la espectroscopía infrarroja

• Configuraciones instrumentales en FT-IR

• Técnicas de muestreo (transmisión y ATR)

• Aplicaciones

• Software

3
 ESPECTROSCOPÍA

• La espectroscopía estudia las distintas interacciones de la

luz con la materia.

Luz=energía electromagnética

*Calor
*Color
materia *Vibraciones moleculares
*Cambios moleculares

4
 Energía electromagnética

A = amplitud; es la longitud del vector

eléctrico en el máximo de la onda.

 = frecuencia (Hz); es el número de

oscilaciones del campo por
segundos.

 = longitud de onda; es la distancia

lineal entre dos puntos equivalentes.

Número de onda (cm-1): inversamente

proporcional a .

5
Espectro de radiación electromagnética

6
 visible
microwave
near-IR
x-rays
ultraviolet far-IR radio waves
mid -IR

9 7 5 3 1 -1 -3

Wavenumbers

nuclear electronic vibrational rotational transitions

-5 -3 -1 1 3 5 7

Wavelength in microns

7
 Región infrarroja

INTERVALO
REGIÓN APLICACIONES
cm-1 µm
0.75 a Análisis cuantitativo
IR CERCANO 14,000 a 4,000
2.5 (H2O, CO2, azufre, etc.)
Análisis cualitativo y
IR MEDIO 4,000 a 400 2.5 a 25
cuantitativo

Análisis cualitativo
IR LEJANO 460 a 10 25 a 100 (compuestos inorgánicos
y organometálicos)

En esta región, se producen las vibraciones fundamentales de

muchos enlaces de compuestos orgánicos, proporcionando
información única de la molécula.

8
 Espectroscopía infrarroja

•Los enlaces moleculares absorben la energía de infrarrojo a frecuencias

características, creando un espectro.
• La frecuencias se determinan por:
•Masa atómica
•Fuerza del enlace
•Localización del enlace

9
 Requerimientos para tener actividad en el
infrarrojo

• La frecuencia de la energía debe ser idéntica a la

frecuencia de la vibración (resonancia).

• El momento dipolar de la molécula debe cambiar

durante la vibración.

• La dirección del cambio del momento dipolar debe

ser a la misma dirección del vector del campo
eléctrico de la radiación electromagnética.

10
 Cambio en el momento dipolar

• Para absorber energía,

el momento dipolar
debe cambiar cuando la N N
transición ocurre.

• La intensidad de la
absorción es
proporcional a la
magnitud del cambio
del momento dipolar.
Cl H

11
Dirección de la vibración

Most Absorption
H

Some Absorption

Cl No Absorption

Cl

H
12
 Modos vibracionales

+ + - +

Grupos funcionales entre 4000 Menos que ~1500 cm-1

y ~1500 cm-1
13
 Modos vibracionales

Tipos de vibraciones moleculares

• Tensión o estiramiento:
• Tipo de vibración que supone un cambio continuo en la
distancia interatómica a lo largo del eje del enlace entre dos
átomos.

Simétrico Asimétrico
14
 Modos vibracionales
Tipos de vibraciones moleculares
• Flexión o deformación
– Este tipo de vibración se caracteriza por un cambio en el
ángulo entre dos enlaces y son de cuatro tipos :

Balanceo en el plano Tijera en el plano

+ + + -

Aleteo fuera del plano Torsión fuera de plano

15
Vibraciones de Tensión

ν1: Simétrico
ν3: Asimétrico

Vibraciones de Flexión
ν2: Tijereteo
x: Aleteo
y: Torsión
Z: Balanceo

16
 Intervalo de frecuencias Tipo de vibración Enlace

3500 - 3200 Tensión O-H, N-H

3300 - 3000 Tensión =C-H, ΞC-H, Ar-H
3500 - 2500 Tensión O-H + C-H (acido)
3000 - 2800 Tensión CH3, -CH2, C-H, O=C-H

2400 - 2100 Tensión CΞC, CΞN

2000 - 1650 VIBRACIONES SECUNDARIAS Procedentes de Ar-H,

deformación de 3-4 bandas
1800 - 1650 Tensión C=O, (cetonas, ácidos, aldehídos,
amidas, ésteres).
1675 - 1500 Tensión C-H, CΞN (alifáticos y
aromáticos)
1650 - 1550 Deformación N-H
1475 - 1300 Deformación C-H
1300 - 1100 Tensión C-O (éteres)
1300 - 1050 Tensión C-O (éteres de 2 bandas)
1000 - 600 Deformación C=C-H, Ar- H (fuera de plano)

17
 Espectro Infrarrojo

Grupos funcionales

Huella digital

18
Espectroscopía infrarroja

•Identificación
•Determinación
•Calidad
•Cantidad
•Consistencia

19
 Espectroscopía infrarroja
Identificación y comparación materiales desconocidos

• Identificación de materiales
desconocidos
• Base de datos espectrales
• Gráficos de correlación

• Comparación de Materiales
• Correlación espectral
• Substracción espectral

• Análisis rápido

• Muestras pequeñas – rastreo de

evidencia.
20
 Espectrofotómetro Infrarrojo de
Transformada de Fourier

Transformada de Fourier

No-destructiva
Rápida y precisa
Sensible
Simple de manejar y calibrar

21
 Espectrofotómetro Infrarrojo

Proceso de análisis de muestra

22
 Conformación del sistema FTIR

LASER
DETECTOR
INTERFEROMETRO

DIVISOR DE HAZ

COMPARTIMIENTO MUESTRA
FUENTE IR

23
 Espectrofotómetro FTIR

DIVISOR DE HAZ

FUENTE IR
DETECTOR

24
Configuraciones: Rango espectral

25
Interferómetro

El interferómetro que sustituye al tradicional monocromador, es la

parte esencial de este instrumento, pues es el encargado de modular
cada frecuencia del infrarrojo con el fin de realizar la transformada de
Fourier.
26
Divisor de haz

• Material delgado que reflecta y

transmite 50:50 .
• Recubierto de material transparente a
la radiación IR.

27
Láser de referencia y control
El láser es usado para calibración interna del instrumento, debido a que emite una luz
conocida a una frecuencia constante y tiene una intensidad muy baja, este sigue el
camino de la radiación infrarroja.
El láser también ayuda a controlar la posición de los espejos y la señal de captura de
los datos.

29
 Láser

Precisión y Exactitud La frecuencia del haz del láser es conocida por su excelente
en la localización de exactitud.
los picos

El espectrómetro usa los

valores de la frecuencia del
láser como referencia cuando
mide la intensidad en cada
frecuencia producida por la
fuente infrarroja

30
Detector

El Detector es como el ojo humano, que responde a la energía de la luz, solo que este
detector responde a la luz infrarroja produciendo una señal eléctrica en respuesta a la
codificación de la radiación que lo impulsa.
El detector mide la intensidad total de la radiación infrarroja alcanzando a cruzar por todas
las frecuencias. Esta medición es leída varias veces por segundo hasta generar un
interferograma.
31
 Detectores para FT-IR. Cada detector tiene una sensibilidad para un rango de
frecuencia única, se determina con base en el ancho de rango de la muestra a
analizar.

Dos tipos de detectores TGS y MCT:

MCT = Mercurio, Cadmio, Telurio

Este detector es más sensible por lo que provee picos con mejor definición
para muestras que absorben poca radiación infrarroja o que se encuentran
en cantidades pequeñas.

TGS = Sulfato de TriGlicina o DTGS = Sulfato de TriGlicina Deuterado

Son lo suficiente sensibles para dar señales de pico para muestras

comunes.

32
Espejos

El haz infrarrojo es reflejado por espejos para guiarlo en todo su

trayecto hasta llegar al detector.
Los espejos pueden ser de oro o de aluminio.

33
Medición

La muestra se coloca en el camino del haz infrarrojo. Las frecuencias de la radiación infrarroja se
absorben para determinar la composición química de la muestra (vibraciones moleculares).
El haz de IR se combina interactuando con la muestra, donde ciertas frecuencias se pueden
absorber total o parcialmente. Como resultado, el haz que sale de la muestra es diferente al que
entro, esto es como si la muestra enviara en el haz su huella digital característica del compuesto.

35
 Espectroscopía Vibracional: FTIR y
Raman
• FTIR
• La energía es absorbida
directamente…
• …lo que resulta en picos

• Raman
• Luz de alta energía incide en la
muestra…
• …la muestra “toma” parte de
esa energía…
• …lo que resulta en picos
• Los picos proveen información de
composición, concentración y mas
• Ambos se basan en modos vibracionales de
las moléculas 36
 Espectroscopía Raman como herramienta de
laboratorio

Resolución de problemas: No
destructiva, no invasiva. PET

HDPE

Identificación, mapeo, imagen, perfil LDPE

de profundidad

Mínima o ninguna preparación de

muestra

Resolución espacial alta

37
 Espectroscopía Raman
violet
light
liquid

Rayleigh Raman
filter scattered scattered
light light

filter

1928 C.V. Raman descubrió el

Observer
efecto Raman durante
experimentos de dispersión de luz
1930 Raman recibió el premio Este experimento se repitió para distintos
Nobel en Física líquidos y cada líquido disperso la luz de
forma diferente

• Muchos artículos se publicaron acerca de la teoría Raman, pero no eran prácticos para
realizar mediciones Raman
6
38
 Espectroscopía Vibracional
Diferentes sustancias dan como resultado diferentes respuestas espectrales

Cada sustancia tiene un espectro característico

Desarrollo de librerías para identificación
Desarrollo de curvas de calibración para cuantificación
39
Modos vibracionales comunes

+ + - +

40
 Espectroscopía Raman

• Técnica de espectroscopía vibracional complementaria a FTIR

• Aplicable a:
• Materiales orgánicos e inorgánicos
• Sólidos y líquidos
• Micro y macro muestras
• Identificación molecular
• Análisis cuantitativo
• Análisis conformacional

R H
H
R

41
 Espectroscopía Raman
Muestra First
=1
LASER =0
Excited
State

Virtual
State

Energy
=1 Ground
=0 State

Stokes Rayleigh Anti-Stokes

• Raman es una técnica de dispersión Scattering Scattering Scattering

• Sensible a modos vibracionales de enlaces covalentes en moleculas

• Más sensible a vibraciones altamente simétricas (i.e. C-C, Si-Si)
• Sensible a cambios de energía en el enlace (i.e. ángulo de enlace)

42
 Espectro Raman
Raylei gh CCl4
ex=488 nm
Stokes ex=20492 cm-1
-459

Intensity
Energy

-314
-218
Anti-Stokes

218
314 459

=1

=0
Stokes Rayleigh -500 -400 -300 -200 -100 0 100 200 300 400 500
Anti-Stokes
Scattering Scattering Scattering Raman Shift, cm-1

Dispersión Rayleigh es cerca de Rejection Filter

1000 veces más intensa que
dispersión Raman

43
 Espectrómetro Raman
• Conformación básica DXR3: Filtro
• Lasers Abertura
Rejilla Muestra
• 455nm
• 532 nm
• 633 nm
• 785nm
• Filtro Rayleigh Laser
• 50 cm-1 cut-off
• Aberturas Detector multicanal
• Slit
• Pinhole (modo confocal)
• Rejillas
• Estándar, 5 cm-1
• Alta resolución, 2 cm-1
G
• Detectores
2D
• CCD, EMCCD

50

44
 Opciones de Láser

• Varios Láseres (455, 532, 633 or 785 nm)?

• Intercambio: Fluorescencia vs Eficiencia
• Fluorescencia puede ser intenso, >> Raman
• Eficiencia depende de longitud de onda de excitación

Eficiencia ∝ 1/λ4
• Alta resolución vs resolución estándar?
• Se pueden ver picos muy unidos pero…
• Cambios en el rango espectral…

• Detectores?
• CCD: Detector estándar, un solo punto, mapeo
• EMCCD: Rápido (no más sensible), para
imágenes rápidas.
45
 ¿Qué le ocurre a la muestra?
• Debe haber un cambio en la polarizabilidad
• Un cambio en la nube de electrones
• Picos ocurren a frecuencias específicas
• Picos pueden presentar dependencia en la polarizabilidad
• Orientación y simetría molecular
• Múltiples usos
• Identificación
• Cuantificación
• Cinética

46
 ¿Qué le ocurre a la muestra?

N N
Vibración molecular Tensor polarizabilidad

N N

• IR → Cambio en el dipolo
• Raman → Cambio polarizabilidad

Vibraciones fundamentales de las

moléculas diatómicas homonucleares

Raman shift, cm-1 47

 Beneficios Raman
• Información complementaria a IR
• Ambas técnicas proveen espectros ricos en información
• Absorbentes débiles en IR normalmente emisores fuertes en Raman
• Enlaces simétricos y homoatómicos mejor representados (S-S, C-C, etc.)
• Mayor énfasis en columna vertebral de la molécula
• Menos énfasis en grupos externos

90

80

70
% Transmission

60 Overtone Bands
50

40 Bending Bands
30

20

10
Antisymmetric Ring Stretching Bands
0.9 C-H Stretching Region
0.8

0.7 Symmetric Ring Breathing

Raman intensity

0.6 Symmetric Ring stretching

0.5

0.4

0.3

0.2

0.1

3000 2000 1500 1000 500

Wavenumbers (cm-1)

48
 Polietileno
• Grupos externos enfatizados en FTIR
• Grupos en columna vertebral de la molecula enfatizados en Raman

3500 3000 2500 2000 1500 1000 500

Ramanshift (cm-1)

%T
Raman Intensity

1500 1400 1300 1200 1100

Raman shift (cm-1)

49
 Beneficios Raman
• Permite acceso a vibraciones de IR Lejano
• Espectro se extiende hasta 50 cm-1
• Excelente para análisis de muestras inorgánicas
• Vapor de agua no afecta

217.78

150.67 48.75
Raman Intensity

Sulfur
81.56

244.61

300 250 200 150 100 50

Raman shift (cm-1)

50
 Raman: Alta especificidad
• Materiales similares pueden ser difíciles de diferenciar en FTIR

90

80
NYLON 6/6
70

60

50

40
% Transmission

30

20
10

90

80

70 NYLON 6
60

50

40

30

20
10
3500 3000 2500 2000 1500 1000

Wavenumbers (cm-1)

51
Raman: Alta especificidad
1.0
Nylon 6/6 [Poly(Hexamethylene Adipamide)]
0.8

0.6

0.4
Raman Intensity

0.2

1.0
0.9 Nylon 6 (Polycaprolactam)
0.8
0.7
0.6
0.5
0.4
0.3
0.2
0.1

3000 2500 2000 1500 1000 500

Raman shift (cm-1)

52
 Beneficios de Raman
Técnica de no contacto
01

02 Técnica de reflexión

03 Geometría de la muestra noimporta

Se expone la superficie dela muestra: un

04 buen espectro casi de cualquier sustrato

53
 Beneficios de Raman
Se puede medir muestra a través del embalaje
05

Se analiza directamente: No dilución,

06 muy rápido

07 Muestreo remoto con fibra óptica

Microscopía: mayor resolución espacial

08 (1 m). Perfil de profundidad.

54
 Aplicaciones
Polymers and
Packaging
Subsurface analysis to identify Semiconductors and Optical
inclusions and verify layers without Materials
sample preparation Stress in Si and GaN; structure, defects and
treatments of HxLi1-xNbO3

PET
HDPE

LDPE

Portable Energy Storage (Li-ion

Gemstones and Geology Batteries) Technologies
Rapid non-destructive identification of fluid In situ lithiation of Graphite, ex situ analysis of a
inclusions in minerals using DXR confocal analysis cross-sectioned anode material

55
 Instrumentación
• DXR3 • DXR3xi Imaging
Microscope Microscope
• Fast Imaging
• Point and Shoot
• Image-driven
• Mapping
collection

• iS50 FT-Raman
• Sample • DXR3
compartment SmartRaman
• Point and Shoot or • Bulk Sampling
Mapping

56
Microscopio Raman DXR3

57
 Componentes ópticos
• Research quality visual optics from
Olympus
• Critical for targeting micron-sized sample
features
• Video plus oculars
• USB digital video camera
• Convenient, versatile
• Upgradeable
• Illuminator kits
• Optional brightfield and darkfield optics
• DIC and visual polarizers
• Versatility for a full range of sample types

58
 Iluminación
Brightfield Darkfield

10 m polystyrene beads, 100x

magnification

59
 Resolución espacial
▪ Better than 1 µm spatial resolution

Derivative of the
correlation profile.
FWHM = 0.47 µm

Line map across a silicon knifeedge

0.73 0.92 0.54

µm µm µm

Correlation profile of the silicon knifeedge

Microns
line map against a silicon spectrum

60
 Microscopio confocal
Note color of
2 m spatial emergent beams
resolution in
the Z direction

Plot of peak
Move sample up again
intensity
FWHM = 1.7 µm

61
Mapeo y distribución espacial
• Spatial Distribution of Materials
X-Y Plane

Spot mapping: measurement of non-linear points

Z

Y
Line mapping: measurement of points on a linear X-Y axis

Area mapping: measurement of points in a logic area

Z Direction (into the sample)

• Depth profiling (confocal microscopy)
Z Z
• Collection at different depths (focal points) inside the sample
• Single point depth analysis or depth analysis along a line.
Y Y

X X

62
 Microscopio Raman DXR3
Environment Analytical support labs, materials research
groups, product development

Use Case Point and shoot and small area identification,

with sometimes need for morphological or
structural information in addition to chemical
makeup.
Frequently FTIR microscopes eventually meet
limits as samples get smaller and materials
change; Raman microscopy is the
supplemental tool as these changes come.
Inorganics, carbon materials, and aqueous
samples may be studied or identified, and
subsurface analysis can be accomplished.

Frequency of Small Daily or weekly.

Samples

Sample Size Down to ~1 µm

User Skill Level Skilled spectroscopist or microscopist

Performance High performance with automated optimization

and

Customer Viewpoint We need to identify smaller features, defects,

contaminants and Raman identifies these
cleanly for us. Sometimes our samples need
to be run as is without destructive preparation.

63
Microscopio Raman por imagen
DXR3xi

64
 Software OMNICxi por imagen
Chemical image preview provides one Video and chemical image
click Raman imaging previews tied to mosaic

Sliders allow change of Simple, clean design is easy to

parameters on the fly to give navigate and visually striking
immediate feedback
65
 Software OMNICxi por imagen
Analysis window focuses on display of chemical image data

Profile thumbnails allow Spectra, MCR, and library search

previous analysis to be results displayed in familiar stacked
applied in an instant format
66
 Visualización de la muestra
100 x 100 microns 1 micron spacing (10,000 spectra); 500 Hzdata
collection; 10 “co-adds”

Some Time
20 seconds 1 minute 200 seconds Later….
DXR2xi,
rastering entire
images to desired
quality level, like
other
microscopes
Single scan of entire 3 scans ofentire 10 scans of entire
image with MCR, image with MCR image with MCR
10,000 spectra

Other Raman Imaging

Systems, building
images one spectrum at
a time
1000 co-added 3000 co-added 10,000 MCR
spectra, no useful spectra, no useful spectra Processed
image information image information collected Map

67
Análisis de capas: Visualizacion confocal 3D
Polymer multilayer with 5 μm
spacing between imaging planes

Polystyrene bead on surface: full

surface and 3/4 cutaway view

• Region queue also allows confocal imaging at

different depths
• Also allows loading/saving list of regions
• Data can be easily exported to 3rd party
packages

68
 Imágenes de Raman

MCR (Multivariate Curve Resolution)

Differentiates Spectra into Components

Each Component is Assigned a Color

Color schemes user selectable

Automatic Identification
Automatic library searching

Available While Collecting Data and Post Data Collection

Constantly updates during data collection

Calculates Percent Area Occupied by Each Component

69
¡Gracias por su atención!

Dr. Ing. Roy Zamora-Sequeira

[email protected]