ESCUELA SUPERIOR POLITÉCNICA DE
CHIMBORAZO
FACULTAD: CIENCIAS
CARRERA: BIOQUÍMICA Y FARMACIA
GUÍA DE LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA APLICADA
PARALELO: SEXTO A y B
PRÁCTICA No. 1: RECUENTO DE AEROBIOS MESÓ FILOS. MÉ TODO: VERTIDO EN PLACA
1. DATOS GENERALES:
NOMBRE: (estudiante(s) CODIGO(S): (de estudiante(s)
Jessica Granizo. 3788.
Karen Naranjo. 3786.
Johana Rosero. 3767.
Alejandra Villarroel.
Katheryn Saigua.
Evelyn Paguay.
GRUPO No.: 03.
FECHA DE REALIZACIÓN: FECHA DE ENTREGA:
09/05/2022. 16/05/2022.
2. OBJETIVO:
La enumeración de gérmenes aerobios mesófilos es el indicador microbiano más común de la
calidad de los alimentos. Existen varios métodos para esta determinación, uno de los más
usados es el método de vertido en placa
Esta determinación se aplica para:
Conocer el nivel de microorganismos presentes en un producto, sea este preparado,
precocido, refrigerado o congelado.
Conocer las fuentes de contaminación (aire, agua, materia prima, etc) durante la
elaboración de los alimentos.
Verificar la eficacia de los sistemas de limpieza y desinfección.
Conocer si se inicia la alteración de los alimentos y su probable vida útil.
Conocer si han ocurrido fallos en el mantenimiento de las temperaturas de
refrigeración en los alimentos refrigerados
3. INSTRUCCIONES
Preparar la muestra del alimento según los procedimientos antes recomendados sobre
preparación y dilución de los homogenizados.
Marcar las placas de Petri estériles, con la fecha, número de muestra y dilución
correspondiente.
A partir del homogenizado preparar diluciones sucesivas del orden 10 según convenga al
caso.
Conforme se preparan las diluciones pipetear por duplicado en placas Petri estériles,
alícuotas de 1 mL. de las diluciones escogidas para la siembra.
Verter inmediatamente en las placas Petri, 10 a 15 mL. del medio de cultivo (PCA)
fundido y a 45C
Mezclar el inóculo con el medio fundido, con movimientos de vaivén mover las placas 5
veces en una dirección, luego repetir 5 veces el movimiento en dirección que forme
ángulo con la primera, girar 5 veces en sentido de las agujas del reloj, y 5 veces en
sentido opuesto.
Otra alternativa es girar la placa 10 veces efectuando la figura del número 8.
Se debe adoptar un sistema uniforme para todos los recuentos
Para prueba de esterilidad, marcar una placa con CONTROL y adicionar 15 mL. de
medio de cultivo y 1 mL. de diluyente sin inocular.
Dejar reposar las placas en la mesa del laboratorio hasta solidificación del medio (15
minutos).
Luego de solidificado el agar, invertir las placas e incubarlas a 30 C ± 1 C, durante 72
horas ± 3 horas.
Finalizado el período de incubación, contar todas las unidades formadoras de colonias
(UFC) en las placas elegidas para el recuento.
4. ACTIVIDADES POR DESARROLLAR:
Preparació n del material de vidrio, esto es limpieza y esterilizació n de materiales
que van a usar todos los equipos de trabajo.
Preparació n, esterilizació n, dispensació n, rotulació n y almacenamiento adecuado de
los medios de cultivo a emplear.
Preparació n de muestras en el laboratorio
Preparació n del homogeneizado y el sistema de diluciones sucesivas de orden 10
Simultá neamente a la preparació n de las diluciones se inoculan las placas de agar
con 18 mL de medio estéril y templado a 45°C.
Incubació n de las placas
Observació n de las placas Petri para contar las colonias
Desarrollo de cá lculos para conocer el microbiota presente por g o mL de alimento o
superficie contaminada.
Aná lisis de resultados e interpretació n
5. RESULTADOS OBTENIDOS.
Luego del período de incubación se obtendrán placas de PCA con colonias distribuidas en toda la
superficie del medio de cultivo translúcido. No hay colonias en el fondo ni en la interfase de las
placas. El número de colonias debe mantener una relación con las diluciones sembradas.
Tabla 1: Resultados vertido en placa de la muestra de quinoa.
DILUCIÓN. Descripción.
10-1 Se observa colonias de tamañ o porque la
concentració n de la alícuota sembrada es
muy alta.
En esta placa con agar PCA existe 15
UFC de aerobios mesó filos, debido a
que, la concentració n de la alícuota
sembrada es muy alta, por lo que se
puede usar cá lculos para obtener el
UFC/g.
10-2
En esta placa con PCA se contaron 3 UFC
de aerobios mesó filos, no se observa un
crecimiento masivo.
10-3
En esta dilució n se enumeraron 8
colonias de microrganismos aerobios
mesó filos no se observa un crecimiento
masivo.
10-4
En esta placa con PCA se contaron 3 UFC
de aerobios mesó filos, no se observa un
crecimiento masivo.
10-5
En esta dilució n se enumeraron 13
colonias de microrganismos aerobios
mesó filos y observa el tamañ o de las
colonias sin mucha separació n de una
colonia con otra. Podemos realizar el
recuento y expresar los resultados en
UFC/g.
Blanco.
En el caso de la placa que contiene el
blanco no hay crecimiento de
microorganismos.
La placa Petri y el agar PCA se observa
limpia, y sin ninguna mancha de
contaminació n.
Fuente: Grupo 3 de la cátedra de microbiología de alimentos y farmacia. 2022.
Nota: El crecimiento de colonias debe ir disminuyendo a medida que disminuye la
concentració n de la dilució n, sin embargo, como se puede observar en la descripció n de la
placa va en aumento, esto debido a que se pudo haber contaminado al momento de la
inoculació n o la misma se realizó mal.
Cálculos UFC/g.
Tabla 2: Cálculos UFC/gr de Quinoa.
DILUCION DE QUINUA NUMERO DE UFC CALCULOS
10-1 15 C1=n x f
C=15x100/1
C= 0,15 UFC/gr de
quinoa.
10-2
3 C2=n x f
C=3x100/1
C=0,03 UFC/gr de
quinoa.
10-3 8 C3=n x f
C=8x100/1
C=0,08 UFC/gr de
quinoa.
10-4 3 C4=n x f
C=3x100/1
C=0,03 UFC/gr de
quinoa.
10-5
13 C5=n x f
C=13x100/1
C=0,13 UFC/gr de
quinoa.
Fuente: Grupo 3 de la cátedra de microbiología de alimentos y farmacia. 2022.
Cálculos:
Para placas que contiene menos de 15 colonias.
En donde:
ƩC= suma de las colonias contadas en las dos placas.
V= volumen inoculado en cada placa.
n= Nú mero de placas seleccionadas.
d= Factor de dilució n de la primera dilució n inoculada o seleccionada.
UFC/gr.
DISCUSIÓN.
REQUISITOS BIOLÓGICOS PARA LA QUINOA.
Sí cumple con el criterio microbioló gico porque se encuentra inferior al rango establecido
por la normativa INEN de UFC/g
6. CONCLUSIONES
Describir en forma ló gica las conclusiones a que conlleven la prá ctica
7. RECOMENDACIONES
Describir en forma ló gica las recomendaciones que sean pertinentes
-----------------------------------------------
NOMBRE Y FIRMA DEL DOCENTE
DE LA ASIGNATURA
Anexo
Equipos de trabajo: 8
Muestra: Quinoa.
Preparación de la muestra
En el caso de muestras líquidas (agua, leche, jugos, etc tomar 10mL de muestra y mezclar
con 90 mL de diluyente para obtener el homogeneizado o dilució n 10-1
En el caso de muestras só lidas se pesa 10 g y se mezcla con 90 mL de diluyente. Si las
muestras son pulverulentas, segregar los 10 g a partir del muestreo por cuarteo.
Para preparar el homogeneizado de las hierbas medicinales, se pesa 1 g y se mezcla con 99
mL de diluyente.
Para tomar la muestra de la superficie inerte, se fija con una plantilla de muestreo un á rea
de 100 cm2, esta superficie se barre con un hisopo humedecido con diluyente estéril y se
introduce en un tubo con 10 mL de diluyente, a partir de este tubo se preparan diluciones
sucesivas de orden 10, de 1 a 6 diluciones. De estas se escogerá n 3 para la siembra por
duplicado.
Cuestionario
1. Enumere otros métodos para el recuento de microorganismos aerobios mesófilos.
2. ¿Cuáles son otros nombres con los que se conoce a este ensayo?
3. ¿Este método permite recuperar todos los microorganismos presentes en una
muestra?
