Microbiología
Práctica 1: Preparación, esterilización y
manejo de material en el laboratorio de
Microbiología
Integrantes:
Granados Bárcenas Francisco Javier
López Figueroa Rosario Itzel
Lule Ascensión Jesús Alexis
Profesora: Lara García Cynthia Teresa
Equipo 9, Grupo B
Celaya, Gto., 03 de marzo de 2022
Tecnológico Nacional de México en Celaya
Ing. Bioquímica
ÍNDICE
Reporte de práctica 1.
RESUMEN ...................................................................................................................................3
MARCO TEÓRICO .....................................................................................................................3
MATERIALES Y MÉTODOS ..........................................................................................................5
RESULTADOS ..............................................................................................................................7
DISCUSIÓN .................................................................................................................................7
CONCLUSIONES ........................................................................................................................8
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS ................................................................................................8
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RESUMEN
Para poder realizar esta práctica se realizó esterilizar el material, así como el buen
manejo adecuado del material utilizado en el laboratorio de microbiología. En esta
práctica se realizaron diferentes técnicas, como por ejemplo, el aprender a preparar
la mesa de trabajo, usando como materiales franela y jabón para lavar la mesa de
trabajo, algodón y una solución de agua y alcohol para desinfectarla, así como una
franela para limpiar adecuadamente el área. Se hizo conocimiento del manejo del
autoclave, así como también saber a que temperatura y tiempo es el adecuado
para esterilizar el material utilizado o que se utilizará en las demás prácticas del
laboratorio. Se hizo uso de la cristalería, se lavó, se secó y se etiquetó como se indicó
para poder llevarlo a esterilizar; el material que no se utilizó se guardó en la gaveta
que se nos proporcionó. Se llevó a cabo el envolver las cajas Petri, etiquetarlas y
llevarlas a una charola para que se esterilicen, así como también la pipeta pasó por
el mismo procedimiento. Los resultados esperados fueron que el material se envolviera
y rotulara de manera adecuada, para así llevarla a esterilizar, para que este no se
contamine y se pueda usar en futuras prácticas.
MARCO TEÓRICO
Los materiales de laboratorio son empleados para la comprobación experimental de
las leyes y fenómenos de las ciencias naturales, estudiadas en la teoría. Para trabajar
con eficiencia en el laboratorio es necesario conocer los nombres de los diferentes
materiales y equipos de laboratorio. Para clasificar la gran variedad de materiales,
instrumentos y equipos se eligen dos criterios generales para su mejor estudio y son:
• Por su clase de material empleado en su fabricación.
• Por su uso especifico.
Por su clase de material empleado en su fabricación.
1. Material de porcelana.
2. Material metálico.
3. Material de vidrio.
4. Material de madera.
5. Material de corcho.
6. Material de goma.
7. Material de plástico.
Por su uso.
1. Instrumentos para medición.
2. Materiales para separación.
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3. Materiales para mezclas.
4. Equipos de separación.
5. Materiales para calentamiento.
6. Materiales de soporte.
7. Materiales de conservación.
8. Materiales de reducción de tamaño disgregación y molienda.
9. Materiales de uso diversos.
La esterilización es la destrucción o eliminación de todo organismo vivo de un
producto. Esto implica que un objeto estéril debe considerarse como libre de
cualquier microorganismo.
La eliminación de microorganismos de los líquidos, o del aire, se hace por filtración, en
donde, las formas vivas más pequeñas son las más difíciles de eliminar.
Métodos de esterilización.
Existen muchos métodos de esterilización, pero los más importantes pueden resumirse
en los siguientes:
• Esterilización a la llama: La utilización de este método y su eficacia depende de los
factores: tiempo de exposición y la temperatura. Todos los microorganismos son
susceptibles, en distinto grado a la acción del calor. Se realiza por carbonización.
• Esterilización por aire caliente: Por este método se oxida la materia orgánica
sometida a temperatura alta ocasionando la desecación de la célula. Se lleva a
cabo en hornos bacteriológicos y es aplicable para esterilizar el material de vidrio
o de metal vacío. La temperatura y el tiempo de esterilización más convenientes
es de 170°C por una hora, cuya temperatura es regulable por medio de un
termostato. El trabajo del horno debe llevarse a cabo teniendo en cuenta muchas
precauciones para obtener los beneficios esperados.
• Esterilización por vapor de agua a presión: El calor húmedo produce
desnaturalización y coagulación de proteínas. La esterilización se realiza en
autoclaves. Se esterilizan soluciones, medios de cultivo o materiales orgánicos que
resisten altas temperaturas. El tratamiento térmico más recomendable es de 121 °C
por 15 minutos, aunque otras temperaturas y tiempos pueden considerarse
equivalentes, como por ejemplo:115°C por 30 minutos para algunos medios de
cultivo, o 126 °C por 15 minutos para el material contaminado, que debe ser
esterilizado antes de ser lavado.
• Esterilización por filtración: Por este método es aplicable a la esterilización de
líquidos termolábiles y gases. Cuando el líquido a filtrar no puede resistir sin
descomponerse, la acción del calor, se aplica la técnica de filtración, loque
puede efectuarse mediante presión o aspiración. Se utiliza membranas de 0.45 um
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de diámetro que están fabricados a base de celulosa y son descartables. Lo virus
pueden atravesar estas superficies filtrantes por lo que una solución
bacteriológicamente estéril puede tener todavía partículas virales infectivas.
• Esterilización por vapor de agua sin presión: Se utiliza cuando los ingredientes de
algunos medios de cultivo no resisten las temperaturas superiores a los 100 °C (por
ejemplo ciertos azucares o leche). El tratamiento consiste en una sola exposición a
100 °C durante 90 minutos.
MATERIALES Y MÉTODOS
Materiales Reactivos
Matraz Erlenmeyer de 250 y 500 mL. Algodón.
Tubos de ensaye de diferentes Gasa.
volúmenes.
Pipetas graduadas de 1, 5 y 10 mL. Masking tape.
(1 c/u).
Cajas Petri. Cinta testigo
Bote de lámina de ½ L limpio con Detergente líquido.
un poco de algodón en el fondo
para proteger los tubos.
Fibra o esponja para trastes.
Escobillón.
1. Preparación de la mesa de trabajo.
Descontaminación de la superficie de trabajo con desinfectante (hipoclorito de sodio
al 1% o alcohol isopropílico al 70%).
1. Lavar con agua y jabón, limpiando con una franela húmeda. Posteriormente
enjuagar la franela y volver a limpiar. La franela se debe dejar secar apartada
de la mesa de trabajo.
2. Rociar solución de hipoclorito y distribuir por toda la superficie con una torunda
de algodón. Dejar que se evapore sola.
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3. Solo se pueden tener en la mesa los materiales de laboratorio que van a
utilizarse, y la bitácora de trabajo.
2. Preparación de la cristalería para su esterilización.
Se debe evitar que se contaminan después de haber sido esterilizados.
• Preparación del material
1. Lavar el material con fibra para trastes y jabón líquido, con abundante agua.
Enjuagar con una pipeta de agua destilada y dejar escurrir sobre un paño limpio.
2. Poner un filtro de algodón a cada pipeta y envolver con papel. Rotular de
acuerdo con las especificaciones.
3. Tapar con algodón y gasa los tubos de ensayo y colocarlos en el bote de lámina.
Tapar el bote con papel.
4. Envolver en papel las cajas Petri, con la tapa hacia abajo, procurando que no
quede ningún medio de posible contaminación.
5. Poner un tapón de algodón y gasa a cada matraz y cubrirlo con un gorro de
papel (de preferencia estraza).
6. Colocar un pedazo de cinta testigo a cada material envuelto.
7. Las cajas Petri y las pipetas se esterilizan en un horno a 160°C durante 2hrs.
3. Proceso de esterilización en autoclave.
1. Colocar la olla en la posición adecuada.
2. Asegurarse de que haya un nivel adecuado de agua.
3. Introducir el material, procurando que todo quede bien apoyado sobre la base.
4. Abrir la válvula de salida de vapor y encender la fuente de calor.
5. Vigilar la válvula de purga, dejar que escape la mezcla de vapor-aire.
6. Cerrar la válvula de salida de vapor y dejar que la presión llegue a 15 libras por
pulgada cuadrada.
7. Apagar la fuente de calor y dejar que se enfríe solo.
4. Proceso de esterilización en horno de calor seco.
1. Encender el horno y cerrar las ventanillas superiores, elevando la temperatura
hasta 160-170°C.
2. Introducir el material a esterilizar procurando la homogénea distribución de calor, y
cerrar la puerta.
3. Contar 2 horas a partir de que se alcancen los 160-170°C.
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4. Apagar el horno, abrir las ventanillas y dejar enfriar. Sacar el material cuando se
alcancen los 50°C.
Debido a la falta de tiempo, la práctica solamente se pudo realizar hasta la parte en
la que envolvemos el material, sin embargo, no esterilizamos ningún instrumento, por
lo que cada equipo se cercioró de que los objetos estuvieran bien envueltos, para
guardarlos y en la próxima práctica proceder con la esterilización.
RESULTADOS
Posteriormente al lavado del material, procedimos a envolverlo de la manera
correcta, procurando que no haya alguna fuga de aire que pudiera contaminar el
instrumento.
Como equipo, llegamos a la conclusión de que la técnica correcta para envolver
cajas Petri o tubos de ensaye es de primordial importancia para la realización de
prácticas posteriores. Debido a los microorganismos que estaremos manejando, no
podremos hacer cultivos en un instrumento que no ha sido esterilizado al 100%.
Muchos alumnos venimos con una carrera técnica por detrás en donde se nos había
enseñado cómo envolver los materiales, no obstante, reforzar estos conocimientos ha
sido de suma importancia para renovar técnicas y para usos posteriores de ellos, ya
que debido a las áreas en las que nos podemos desarrollar, la microbiología jugará
un papel importante en los controles de calidad de muchos procesos.
DISCUSIÓN
En esta práctica no se tuvieron resultados tangibles ya que no hubo una verificación
de la esterilización, sin embargo se espera que el material haya quedado totalmente
libre de todas las formas de vida (incluyendo esporas bacterianas) , por consiguiente
se espera que de realizarse una prueba para la comprobación de estabilidad del
equipo está revelará la ausencia de microorganismos, si tal prueba mostrará
crecimiento de cualquier tipo de microorganismos esto indicaría una falla en la
programación o el funcionamiento del aparato o una contaminación posterior a la
esterilización; como consecuencia de una mala preparación del material o un mal
manejo de éste una vez terminado el proceso.
En ausencia de una verificación de la esterilización sólo podemos mencionar en
relación a los objetivos que se preparó completa y correctamente el material para
esterilizarlo por ambos métodos es decir con tapones de algodón y papel Kraft para
el material de calor húmedo y con papel aluminio para el de calor seco.
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CONCLUSIONES
La práctica se desarrolló sin inconvenientes, cabe mencionar que la variedad en el
material de laboratorio con el que se llevó a cabo la práctica no representó reto
alguno al momento de esterilizar. Resaltamos además la importancia de la limpieza
que se le tiene que dar al espacio de trabajo en donde se preparan los materiales
para la esterilización, materiales como el papel Kraft, los tapones de algodón y el
aluminio es una parte fundamental para que no exista oportunidad de
contaminación es decir que se ven como barreras contra la contaminación
El material debe ser esterilizado para poder ser usado antes de cultivar
microorganismos porque de lo contrario podrían crecer otros organismos que no son
requeridos.
Por último, se aprendió a envolver correctamente el material y el tiempo que es
necesario para que se logre la esterilización.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
• Manual de Bioseguridad en el Laboratorio (2005). Organización Mundial de la
Salud. 3ª. Edición. Ginebra. Suiza
• Pelczar, M.J., Reid, R.D. y Chan, E.C.S. (2000). Microbiología. 6ª ed. McGraw Hill.
México.
• Prescott L.M., Harley J.P. y Klein D.A. (2003). Microbiología. 5ª ed. McGraw Hill.
España.
• Pommerville, J.C. (2007). Alcamo´s Fundamentals of Microbiology. 8ª Ed.
Massachusets: Jones and Barlett Publishers.
