FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA
PRACTICA No 10
USO Y CUIDADO DEL ESPECTROFOTÓMETRO DE ABSORCIÓN
UV – VISIBLE
PRÁCTICA Nº11
ESPECTROS DE ABSORCIÓN Y CURVAS DE CALIBRACIÓN DEL
SULFATO DE
QUININA
CURSO: QUIMICA ANALITICA
DOCENTE: Collantes, Adela Marlene
INTEGRANTES:
● Dávila Pérez, Fernando Cleyver
● Quispe Ochoa, Mirian Karen
● Saavedra Chunga, Mercy
● Inche Callupe, Janina Deysi
CICLO: V
AULA: 104
2022
pág. 1
INDICE
1) INTRODUCCIÓN: 3
2) OBJETIVOS: 3
a. Objetivo general: 3
b. objetivo específico: 3
3) MATERIALES 3
4) METODO: 3
5) RESULTADOS: 3
6) DISCUSIÓN: 3
7) CONCLUSIONES: 3
8) BIBLIOGRAFÍA: 3
9) ANEXOS: 3
10) CUESTIONARIO: 3
pág. 2
INTRODUCCIÓN
La espectrofotometría UV-visible es una técnica analítica que permite
determinar la concentración de un compuesto en solución. Se basa en que las
moléculas absorben las radiaciones electromagnéticas y a su vez que la
cantidad de luz absorbida depende de forma lineal de la concentración. Para
hacer este tipo de medidas se emplea un espectrofotómetro, en el que se puede
seleccionar la longitud de onda de la luz que pasa por una solución y medir la
cantidad de luz absorbida por la misma. En esta práctica se darán a conocer las
características generales y conceptos relacionados con la espectrofotometría. A
continuación, y tras la explicación del funcionamiento del espectrofotómetro se
harán espectros de absorción con el fin de determinar la longitud de onda donde
la muestra presenta la máxima absorción, y tras realizar las correspondientes
rectas de calibrado se cuantifican las concentraciones de distintas biomoléculas.
pág. 3
OBJETIVO GENERAL:
❖ Darle el adecuado uso y funcionamiento del espectrofotómetro y analizar
los datos obtenidos en la prueba de precisión y exactitud.
OBJETIVO ESPECÍFICO:
❖ Graficar e interpretar los espectros de absorción en la región ultravioleta
- visible.
❖ Construir el espectro de absorción en la región UV - visible y preparar
una curva de calibración.
MATERIALES:
● Pipetas de 10 ml y 25 ml.
● Vasos de precipitado.
● Fiola de 100ml
➢ EQUIPOS:
● Espectrofotómetro UV - visible.
● Celdas de vidrio y de cuarzo.
➢ REACTIVOS:
● Solución de KMnO4.
● Solución de K2Cr2O7.
pág. 4
Métodos- procedimiento:
1. Preparar el espectrofotómetro en las longitudes de 400-850. Nuestro
analito de permanganato de potasio uno con la concentración de 0.01 y
0.03 en la cubeta de sílice. Y calibrar con cubeta de sílice de agua
destilada lo cual será el blanco
pág. 5
2. introducir nuestras muestras en el espectrofotómetro antes de haber
preparado el blanco para calibrar. Y observaremos la absorbancia y
transmitancia.
pág. 6
RESULTADOS:
1. permanganato de potasio 0.01
pág. 7
2. permanganato de potasio 0.02
3. permanganato de potasio 0.03
pág. 8
4. dicromato 0.01
pág. 9
5. dicromato 0.02
6. dicromato 0.03
pág. 10
DISCUSIÓN:
En esta práctica del uso y cuidado del espectrofotómetro de absorción UV-
visible marca GENESYS 10S UV-VIS, se hizo la lectura de permanganato de
potasio y dicromato de potasio en concentraciones de 0.01 M, 0.02 M y 0.03 M
a una longitud de onda de 400 a 850 nm donde se observa los resultados de
absorbancia que se mencionan a continuación:
Permanganato de potasio
0.01 M --- 1.236
0.02 M --- 1.544
0.03 M --- 1.875
Dicromato de potasio
0.01 M --- 0.880
0.02 M --- 0.870
0.03 M --- 0.874
y usando la Ley de Beer construimos la curva de calibración y determinar la
absortividad molar.
CONCLUSIONES:
● Explicamos el principio fundamental detrás del análisis
espectrofotométrico, a través del uso adecuado del equipo conociendo
paso a paso su funcionamiento.
● Se construyó una curva de calibración basada en la Ley de Beer.
● Se usa la Ley de Beer para determinar la absortividad molar del
permanganato de potasio.
pág. 11
INTRODUCCIÓN
La quinina es un alcaloide derivado del árbol de la QUINA. Es una sustancia
que disminuye la fiebre (antipirético) y fue usada durante mucho tiempo para
combatir la Malaria.
De forma natural no existen alimentos que tengan esta sustancia, así que no
debes temer al comer alimentos naturales. En el caso de las bebidas, como el
agua tónica, es minúscula, pero beber grandes cantidades podría provocar
efectos secundarios peligrosos. No tomes bebidas con quinina con fines
medicinales.
Las soluciones acuosas de sulfato de quinina absorben radiación
monocromática cumpliendo con la ley de Beer.
En la presente práctica se trabajará con soluciones de sulfato de quinina con la
finalidad de obtener sus espectros de absorción en la región UV – visible y
preparar curvas de calibración para cada sustancia en los intervalos de
concentraciones en que se cumple la ley de Beer.
pág. 12
OBJETIVO GENERALES:
1. La finalidad es obtener sus espectros de absorción en la región UV -
visible y preparar curvas de calibración para cada sustancia en los
intervalos de concentración en que se cumple la ley Beer.
OBJETIVOS ESPECÍFICOS:
❖ Determinar la concentración de sulfato de quinina en una muestra
problema mediante espectroscopia de absorción molecular UV.
❖ Conocer la importancia representativa que tiene la curva espectral como
parámetro explícito y esencial para la realización de una curva de
calibración.
MATERIALES:
● Pipeta graduada de 5 ml.
● Pipeta volumétrica de 25 ml.
● Fiola de 100 ml.
● Piseta con agua destilada.
● Solución de sulfato de quinina.
➢ EQUIPOS:
● Espectrofotómetro UV - visible.
● Celdas de cuarzo de 10 mm de trayecto óptico.
pág. 13
Métodos- procedimiento:
1. Preparar la solución madre con sulfato de quinina con la concentración
0.1 M en 6 mL, con agua destilada 100 mL y con ácido clorhídrico 1 mL
concentración 1 M. todo en un beaker
pág. 14
Prepararemos nuestra segunda solución madre con sulfato de quinina con la
concentración 0.03 M en 6 mL, con agua destilada 100 mL y con ácido
clorhídrico 1 mL concentración 1 M. todo en un beaker.
pág. 15
2. De nuestras soluciones madres que obtuvimos la usaremos solo una
muestra ósea el analito en las cubetas de sílice, pero antes tendremos
que preparar una cubeta de sílice con agua destilada será el blanco lo
cual sirve para calibrar el espectrofotómetro.
pág. 16
RESULTADOS:
1. quinina 0.01
2. quinina 0.03
pág. 17
3. quinina 0.05
DISCUSIÓN:
En esta práctica de espectros de absorción y curvas de calibración del sulfato
de quinina usando el espectrofotómetro de absorción UV- visible marca
pág. 18
GENESYS 10S UV-VIS, se hizo la lectura de sulfato de quinina en
concentraciones de 0.01 M y 0.03 M a una longitud de onda de 200 a 450 nm
donde se observa los resultados de absorbancia antes mencionados y se
elaboró la curva de calibración usando el fundamento de la ley de Beer.
CONCLUSIONES:
● Se obtienen espectros de absorción en la región UV - visible y preparar
curvas de calibración para el sulfato de quinina en los intervalos de
concentración en que se cumple la ley Beer.
● Se Determinó la concentración de sulfato de quinina en una muestra
problema mediante espectroscopia de absorción molar UV.
● Se da a conocer la importancia representativa que tiene la curva
espectral como parámetro explícito y esencial para la realización de una
curva de calibración para el sulfato de quinina.
Métodos- procedimiento: ultravioleta virtual
1. Conecta el espectrofotómetro y ajusta la longitud
de onda a 580 nm.
pág. 19
2. Añadir los volúmenes de las tablas con la muestra
C 2 mℓ del reactivo y con 200 µℓ del reactivo de
Folin.
pág. 20
3. Preparar los 9 tubos de ensayo con el analito C y reactivo de
Folin
pág. 21
RESULTADOS:
pág. 22
Cuestionario 10
1. Explique las diferencias entre los instrumentos de un solo haz y de
doble haz para las mediciones de absorbancia.
Instrumento de un haz: Instrumento de doble haz:
1. Los instrumentos de simple haz 1. Los instrumentos de doble haz
son aquellos en los cuales el la luz proveniente de la
haz de luz sigue una única fuente es dividida en dos
trayectoria entre la fuente y el haces después de salir del
detector. monocromador mediante un
2. La banda de luz atraviesa la sistema de espejos divisores.
muestra que se halla contenida 2. La banda de luz atraviesa la
en una celda, la luz transmitida muestra que se halla contenida
por la muestra pasa al detector en una celda, la luz transmitida
originándose una corriente por la muestra pasa al detector
eléctrica que por medio de originándose una corriente
diferentes circuitos permite eléctrica que por medio de
observar una señal, ya sea el diferentes circuitos permite
movimiento de una aguja o observar una señal, ya sea el
señal digital o un registro movimiento de una aguja o
gráfico. señal digital o un registro
gráfico.
3. Los dos haces de luz después
de atravesar la celda de
referencia y la de muestra llegan
a detectores separados para
obtener la señal
correspondiente.
4. Los dos haces de luz después
pág. 23
de atravesar la celda de
referencia y la de muestra llegan
a detectores separados para
obtener la señal
correspondiente.
2. Cuál es el propósito del ajuste del 0,000 de absorbancia (100 % T) antes
de efectuar medidas con un espectrofotómetro?
La absorbancia es mal útil en espectrofotometría que la transmitancia, debido a
que la representación gráfica de la concentración versus la absorbancia
produce una línea recta.
La representación gráfica de la concentración con respecto a la transmitancia
es exponencial. El log calcula el inverso de la transmitancia de tal manera que
la absorbancia aumenta con la concentración creciente de colorante. La
transmitancia decrece cuando se aumenta la cantidad de colorante rojo.
3. ¿Qué diferencia existe entre una cubeta de cuarzo y una cubeta de
vidrio?
Material Rango de Zona de Tolerancia en
transmisión especto transmisión
Cristal óptico o 380 a 780nm3 Visible 0.5%a 365 nm
vidrio boro
silicato
Plástico 380 a 780nm3 Visible
Cuarzo fundido Menos de Ultravioleta
380nm3
Cuarzo UV 185 nm4 Ultravioleta 1% a 220nm
Cuarzo ES De 190 a Ultravioleta 1% a 220nm
200nm
Cuarzo IR De 200 a Infrarrojo 1% a 2730nm
pág. 24
3500nm
4. ¿Qué relación existe entra la absorbancia (A) y el % T.
La transmitancia se define como la fracción de luz incidente que es
transmitida a través de una muestra en solución. T=I/LO, donde LO es igual
a la intensidad de la luz que logra atravesar la muestra. La transmitancia se
expresa como porcentaje.
%T =I/Io) x 100
Absorbancia, densidad óptica o extinción, es una función logarítmica de Ty
es expresada como:
A=log10(1/T) =log10(lo/l)
5. Indique 05 ejemplos de compuestos químicos de interés
farmacéutico que contengan grupos cromóforos.
Sistemas aromáticos
Grupo carbonilo
Diazo
Imino
Nitro
6. Explique por qué son importantes los máximos de absorción que se
observan en los espectros de moléculas que contienen cromóforos.
Los cromóforos son grupos funcionales que poseen electrones de valencia con
energías relativamente bajas.
En estos compuestos ocurre superposición de transiciones, vibraciones con
transición de valencia.
El espectro es una banda ancha que a menudo suele ser continua
pág. 25
Cuestionario 11
1. ¿Por qué no se deben usar las celdas de vidrio para este tipo de
prueba?
No se debe usar porque para medir la absorbancia a longitudes de 300
nm. las celdas de vidrios y otros plásticos absorben sigédicantemente.
En el caso de muestras que se visualizan en el infrarrojo existen celdas
especiales de materiales como NaCI, ArCI y KBr. Las celdas con una
pequeña longitud Interna (micro celdas) son utilidad para soluciones de
alta absorción. Celdas CC. longitud de 10 cm presentan una toma 16
cilíndrica y son apropiadas para medir la absorción de soluciones o
gases.
2. El siguiente es el Espectro de Absorción de un fármaco X, disuelto en
alcohol. ¿después de realizar un barrido desde 230 a 650 nm.
a) ¿Qué lámpara se utilizó en el espectrofotómetro?
Las fuentes de radiación son generalmente lámparas de tungsteno o
tungsteno-halógeno para proveer de una radiación continúa adecuada
del espectro visible al infrarrojo cercano. Para la capacidad de radiar con
los UV se necesita una lámpara de H2o 02
pág. 26
. Una lámpara de D2 es generalmente preferida que una lámpara de H2
por que emito una radiación tres veces mayor. Por simplicidad, una
lámpara de D2 y H2 puede servir como una sola fuente para emitir en la
región UV-visible, aunque la radiación en el espectro visible es más
Pequeña quela emitida por una lámpara de tungsteno y al mismo tiempo
poco estable.
b) ¿Qué longitud o longitudes de onda se pueden utilizar para la
construcción de una curva de calibración?
Al hacer la curva de calibración, se debe emplear la longitud de onda de
máxima absorbancia (λmax.), para obtener una recta con la máxima
pendiente y así tener mayor sensibilidad y precisión al hacer las
mediciones
c) ¿Es buena la sensibilidad a 1?
Sensibilidad: Es la concentración requerida para dar un 1% de absorbancia99%
de transmitancia o lo que es lo mismo 0.0044 unidades de absorbancia A
medida que esta concentración es menor, la sensibilidad de la técnica es mayor
porque es necesaria menos concentración para producir una señalen el
detector.
2. ¿Qué variables experimentales se deben controlar para obtener
datos de absorbancia reproducibles?
Las absorbancias que depende del microambiente, sus cromóforos y
ellos cambian ligeramente hacia al rojo cuando se transfieren de un
ambiente polar a uno no polar, al igual que esta se encuentra en el
exterior o interior de una proteína. Como consecuencia en proteínas
nativas los residuos que son expuestos al solvente y aquellos ocultos
contribuyen de manera diferente al coeficiente de absorción. Estas
diferencias son pequeñas, sin embargo, típicamente es del 5%
pág. 27
3. Escriba la fórmula química desarrollada del sulfato de quinina y
explique para qué se utiliza.
La quinina se usa sola o con otros medicamentos para tratar la malaria (una
enfermedad grave o que pone la vida en riesgo que es transmitida por los
mosquitos en determinadas partes del mundo). La quinina no debe usarse para
prevenir la malaria. La quinina pertenece a una clase de medicamentos
llamados antimaláricos. Actúa eliminando los organismos que causan la
malaria.
4. La absortividad molar para las soluciones acuosas de fenol a 211
nm es de 6.17x103 L cm-3 mol -1. Calcular el intervalo permisible de
concentraciones de fenol que se pueden determinar por
espectrofotometría de absorción UV si la transmitancia debe ser
menor que 80 % y mayor que 5 %, considerando que las
mediciones se efectúan en celdas de 1 cm de trayecto óptico.
Fenol a 211nm es de 6.17 x 103 L cm – 3 mol-1
Si la transmitancia debe ser menor que 80% y mayor que 5%. Celdas de
1cm de trayecto óptico.
El intervalo posible es de 0.5cm.
pág. 28
Bibliografías:
1 Chávez J. Equipos de laboratorio. [Online].; 2018 [cited 2022 noviembre 13.
. Available from: https://www.equiposylaboratorio.com/portal/articulo-
ampliado/quE-es-y-usos-del-espectrofotometro.
2. Sánchez MAS. INSTRUMENTOS OPTICOS EN MEDIDAS DE
ABSORBANCIA [Internet]. Innovacionumh.es. [citado el 14 de noviembre
de 2022]. Disponible en:
https://repositorio.innovacionumh.es/Proyectos/P_22CursoMateriales/
Miguel_Angel_Sogorb/Wimba/Espectroscopia_04.htm/
pág. 29
pág. 30
