CFGS LABORATORIO CLÍNICO Y BIOMÉDICO
TÉCNICAS DE ANÁLISIS HEMATOLÓGICOS
RECUENTO DE RETICULOCITOS
1. INTRODUCCIÓN
Si recordamos la eritropoyesis veremos que, de todas las células de la serie roja, sólo los
reticulocitos y los hematíes aparecían en sangre periférica.
El reticulocito aparece dos días en médula ósea y un día más en sangre periférica hasta
convertirse en eritrocito maduro.
Los reticulocitos son eritrocitos inmaduros que contienen un retículo o red cromatínica
formada por restos de ARN (ribosomas), mitocondrias y otros orgánulos celulares. Tienen un
tamaño de 8-9 μm de diámetro.
La cantidad de RNA en su citoplasma varía en función de su madurez, siendo menor cuanto
más madura es la célula.
La cantidad de reticulocitos en sangre periférica nos indica la velocidad de la eritropoyesis,
por lo que estudiando la cantidad de reticulocitos, indirectamente podemos investigar patologías
que cursen con eritropoyesis alterada. Si están aumentados en sangre periférica indica una
actividad eritropoyética medular alta.
Este RNA tiene afinidad por colorantes especiales, como el azul cresil brillante, característica
que se aprovecha para proceder a su estudio.
2. FUNDAMENTO
Podemos observar los reticulocitos al microscopio óptico mediante la tinción con colorantes
vitales como el azul de cresil brillante. Este colorante da lugar a la precipitación de los restos de
ARN, y se observan como filamentos de color azul intenso en el interior de la célula.
Cuanto más maduro es el reticulocito la red es menos densa
Necesitamos un colorante básico ya que el reticulocito tiene estructuras ácidas (ARN)
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3. TECNICA TINCIÓN SUPRAVITAL
MATERIAL REACTIVOS
-Tubos de hemólisis. -Azul de cresil brillante.
-Portaobjetos -Aceite de inmersión.
-Baño de agua.
-Pipetas pasteur
-Microscopio óptico
MUESTRA
Sangre anticoagulada con EDTA. Debido a que los reticulocitos también maduran in
vitro es aconsejable que la sangre se haya extraído como máximo 6 horas antes de su
análisis
TÉCNICA
Es una tinción supravital, es decir se hace mientras las células están vivas.
1. En un tubo de hemólisis colocamos 3 gotas de colorante y 3 gotas de sangre
homogeneizada.
2. Mezclar suavemente.
3. Tapar con parafilm.
4. Introducir en el baño termostático 5 min a 37 ºC.
5. Pasado este tiempo volvemos a homogeneizar y realizar dos extensiones sobre
portaobjetos, dejándolas secar al aire.
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4. RESULTADOS
- Observamos la extensión con el objetivo de 100x con aceite de inmersión
- Los hematíes se tiñen de color verde amarillento y los reticulocitos se diferencian
porque tienen en su interior unos hilos finos de color azul.
- Para descartar errores en la técnica,
se realizan 2 extensiones y se hace
el recuento en ambas y el resultado
es la media de los dos porcentajes.
- Se busca una zona que por campo
el número de hematíes sea
alrededor de 100 y se cuentan los
reticulocitos.
100 Hematies/ campo (objetivo 100 x)
- Vía fácil: contamos un cuadrante en
el campo en donde la distribución
sea homogénea y se multiplica por
4 para obtener el número de
hematíes por campo.
- Se deben contar unos 2000
hematíes en total.
Dirección en la que se tiene que desplazar el campo para realizar un recuento
homogéneo y sin errores, para no contar dos veces el mismo campo.
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- Se repite la operación en 10 campos diferentes para obtener un recuento de alrededor de 1.000
– 2.000 hematíes en cada extensión.
- Se cuentan los reticulocitos y los hematies y se aplica la fórmula para obtener el número de
reticulocitos por 100 hematies es:
º
% Reticulocitos = º í
100
Se realiza el recuento de la media de reticulocitos en las 2 extensiones.
5. INTERPRETACION DE RESULTADOS
El valor normal oscila de 0,5 % a 1,5% reticulocitos por 100 eritrocitos, aumentando ligeramente
en neonatos (2 – 6 %)
- RETICULOPENIA si < 0,5%
-Aplasia medular ANEMIAS QUE CURSAN CON DIFICULTAD
-Anemia ferropénica EN LA ERITROPOYESIS
-Anemia megaloblástica
- RETICULOCITOSIS si > 1,5
-Anemias hemolíticas. ANEMIAS QUE PRECISAN INCREMENTO DE -
-Anemias post-hemorrágicas ERITROPOYESIS
6. OBSERVACIONES AL MÉTODO
Es conveniente efectuar el recuento en dos frotis distintos de forma que, si hay una
discrepancia superior a 5 células por campo, debe repetirse de nuevo.
Antes de tomar la gota de la mezcla sangre-colorante (punto 5 de la técnica), hay que
homogeneizar ésta, debido a que los reticulocitos suelen sedimentar más lentamente que los
eritrocitos maduros.
Los errores más habituales se producen por:
Cifras elevadas de glucemia dan lugar a una tinción deficiente del RNA.
Es fácil confundir restos de colorante con el RNA
No dejar actuar el colorante durante el tiempo indicado, ya que este no entraría en
la célula, con lo que no se teñiría el RNA.
