ISO/IEC 17025:2005
CRITERIOS ESPECIFICOS LABORATORIOS
QUE REALIZAN ENSAYOS MICROBIOLÓGICOS
Servicio de Acreditación Ecuatoriano SAE
CR-EA-01 R01
AGENDA
4.6 Compras de servicios y suministros
5.2 Personal
5.3 Instalaciones y condiciones ambientales
5.4 Métodos de ensayo y validación de métodos
5.5 Equipos
5.6 Trazabilidad
5.7 Muestreo
5.8 Manipulación de ítems de ensayo
5.9 Aseguramiento de calidad
5.10 Informes de ensayo
ISO/IEC 17025:2005
• Resultados confiables
• Satisfacción al cliente
• Competencia técnica
4.6 Compras de servicios y suministros
DOCUMENTACIÓN
Ficha de datos técnicos
Hoja de seguridad
Certificado de control de calidad
4.6 Compras de servicios y suministros
ACEPTACIÓN DE LA ENTREGA DEL PRODUCTO
R
• Identificación del producto E
• Integridad de envase o embalaje G
• Fecha de caducidad del producto I
• Documentación suministrada
S
• Número de unidades recibidas
• Se registra fecha de entrega T
R
O
4.6 Compras de servicios y suministros
REPARTO Y ESTERILIZACIÓN DE MATERIALES
• Repartir en una cantidad conveniente.
• Repartir en tubos de ensayo.
• Repartir en matraces o botellas.
• Volumen 9 mL; 90 mL; 99 mL; 225 mL
• Cerrar los tubos, matraces o botellas
• Esterilizar en el autoclave a 121° ± 3° C
durante 15 minutos.
• Imprecisión del volumen tras la
esterilización NO debe ser > ± 2%
4.6 Compras de servicios y suministros
MEDIOS COMERCIALES
• Condiciones de
SEGUIR INSTRUCCIONES almacenamiento
DEL FABRICANTE • Fecha de caducidad
• Utilización
MEDIOS PREPARADOS EN EL
LABORATORIO
5 ± 3 °C
• Refrigeración 4 semanas – PLACAS
3 – 6 meses – TUBOS,
BOTELLAS SELLADAS
MEDIO NO SELECTIVO PARA RECUENTO DE
MICROORGANISMO
Medio Microorganismo Función Cepa de Número Medio de Método de
control WDCM referencia control
Criterio
Petrifilm Recuento de PR Escherichia coli 00012 – 00013 TSA Cuantitativo
Recuento colonias Staphylococcus 00034 PR ≥ 0.7
de aerobios aureus
Bacillus subtilis 0003
MEDIO SELECTIVO PARA RECUENTO DE
MICROORGANISMO
Medio Microorganismo Función Cepa de Número Medio de Método de
control WDCM referencia control
Criterio
Petrifilm Enterobacteriaceae PR Escherichia coli 00012 – 00013 TSA Cuantitativo
Recuento de Salmonella 00031 PR ≥ 0.5
enterabacteria Typhimurium
ceae Salmonella 00030
Enteritidis
SF Enterococcus 00009
faecalis 00087
Escherichia coli Salmonella Typhimurium Enterococcus faecalis
MEDIO SELECTIVO PARA RECUENTO DE
MICROORGANISMO
Medio Microorganismo Función Cepa de Número Medio de Método de
control WDCM referencia control
Criterio
Petrifilm Estafilococos PR Staphylococcus 00034-00032 TSA Cuantitativo
Recuento de coagulasa positivos aureus PR ≥ 0.5
Staphylococcu Especificid Staphylococcus 00036
s aureus ad Epidermidis
Staphylococcus 00159
Saprophyticus
SF Escherichia coli 00012 – 00013
Staphylococcus aureus Staphylococcus epidermidis Escherichia coli
5.2 Personal
ü Educación
ü Entrenamiento
CALIFICACION ü Experiencia en la función asignada
DEL ü Curriculum vitae
PERSONAL ü Cantidad suficiente de personal
ü Requisitos de salud y seguridad
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5.3 Instalaciones y condiciones ambientales
Autor: Alicia Cuesta Consultor FAO
14
5.3 Instalaciones y condiciones ambientales
15
5.3 Instalaciones y condiciones ambientales
Manejo adecuado de los desechos del laboratorio
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5.3 Instalaciones y condiciones ambientales
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5.3 Instalaciones y condiciones ambientales
Control de las condiciones ambientales del
laboratorio
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5.3 Instalaciones y condiciones ambientales
5.2 Personal
Acceso restringido
5.4 Métodos de ensayo y validación de
métodos
SELECCIÓN
• Apropiado para los ensayos a realizar
• Informar al cliente del método usado
• Si nos solicitan un método específico, revisar que podemos seguirlo
• Satisfaga las necesidades del cliente
• Si nos proponen usar un método inapropiado, hay que avisar al cliente
antes de comenzar con el ensayo
Métodos
Desarrollados
Métodos Métodos No
por el
normalizados normalizados
propio
laboratorio
5.4 Métodos de ensayo y validación de
métodos
5.4.6 Estimación de la incertidumbre de la
medición
C 5.4.6.2.1 La estimación de Incertidumbre no es
de aplicación a métodos cualitativos ni número
más probable (NMP).
C 5.4.6.3.1 Los distintos componentes
individuales de la incertidumbre deben
identificarse y demostrar que están bajo control y
evaluar su contribución a la variabilidad de los
resultados.
22
5.5 Equipos
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5.5 Equipos
ØLos laboratorios deben contar con
los equipos necesarios para la
realización de los ensayos.
ØCalibrados y establecer periodos
para ello.
ØMantenidos acorde con los
requerimiento de los mismos.
ØEquipos defectuosos u obsoletos
deben estar fuera de las áreas de
trabajo.
ØEquipos identificados.
5.5 Equipos
CE 5.5.2.4 Cuando se utilice un único autoclave
para separar las cargas de descontaminación y
esterilización deben tomarse las debidas
precauciones, que garanticen la limpieza eficaz del
autoclave, las cuales deben estar documentadas y
registradas.
CE 5.5.5.1 Se debe controlar la temperatura de
funcionamiento de autoclaves, incubadoras, baños
termostáticos, estufas y conservar los registros,
cuando sea de importancia para el ensayo.
Se recibe cepa de referencia 5 ± 3 °C
Se verifican y archivan documentos
Reconstitución, seguir la indicaciones
del proveedor
CONSERVACIÓN Y
MANTENIMIENTO DE
Se aísla en agar de sangre de cordero LOS
al 5%, TSA u otro medio sólido
adecuado MICROORGANISMOS
Verificar pureza y la morfología
NO SÍ
Preparar suspensión en un medio
Cumplimiento
adecuado
Fuente: ISO 11133 Se distribuye en criotubos y se
congela
Lote de reserva - 70 °C
CONSERVACIÓN Y MANTENIMIENTO
DE LOS MICROORGANISMOS
Lotes de reserva - 70 °C
Se descongela
rápidamente
Opción 1 Cultivo de trabajo
Verificar pureza y la
morfología
NO
Cumplimiento
SÍ
Fuente: ISO 11133 Se prepara inoculo para ensayo
- 70 °C Lotes de reserva
Se descongela rápidamente
Se cultiva en un medio de cultivo adecuado
Verificar pureza y la morfología
NO
Opción 2 Cumplimiento
Fuente: ISO 11133
SÍ
Se inocula en un medio adecuado o se congela una
suspensión Cultivo de reserva
Se aísla en un medio adecuado = Cultivo de trabajo
Verificar pureza
NO
Se prepara inóculo para el ensayo Cumplimiento
SÍ
5.7 Muestreo
5.7 Muestreo
PLAN DE MUESTREO DE DOS CLASES
n = número de unidades a analizar
c = número máximo de unidades defectuosas que se pueden
aceptar
m = cantidad que distingue aceptables de defectuosas
m
Aceptables Defectuosas
5.7 Muestreo
PLAN DE MUESTREO DE TRES CLASES
n = número de unidades a analizar
c = número máximo de unidades defectuosas que se pueden
aceptar
m = cantidad que distingue aceptables de defectuosas
M = nivel de contaminación peligroso o inaceptable
m M
Aceptables Marginalmente Defectuosas
Aceptables
5.7 Muestreo
TRANSPORTE DE MUESTRAS
Productos estables Temperatura ambiente (por debajo de
40° C)
Productos congelados -15°C , preferiblemente por debajo -
18°C
Productos no estables 1°C a 8°C
Muestras por frotis véanse las normas ISO 18593
Cuando no se especifican las condiciones, se recomienda
que las partes involucradas lleguen a un acuerdo sobre la
duración y la temperatura del transporte.
5.8 Manipulación de los ítems de ensayo
ØProcedimiento de identificación
ØComunicación con el Cliente sobre el estado de la muestra
ØProcedimiento conservación y eliminación
NORMA NTE INEN-ISO 6887-1
PRINCIPIO
Preparación de la suspensión inicial
de manera que se obtenga una
distribución, tan homogénea como
sea posible, de los microorganismos
presentes en la fracción de ensayo
NORMA NTE INEN-ISO 6887-1
DISOLVENTES
• Mejorar la reproducibilidad
1. Preparado completo
deshidratado
2. Instrucciones del
fabricante (Ficha
técnica)
3. Los reactivos de calidad
analítica reconocida
(ISO 11133)
4. Agua destilada o
equivalente (INEN 1105)
NORMA NTE INEN-ISO 6887-1
DISOLVENTES PARA USO GENERAL
• Disolución de peptona al 0,1%
• Disolución salina de peptona pH 7.0 ± 0.2 a 25°C
• Disolución tamponada de peptona
DISOLVENTES PARA CASOS ESPECIALES
NORMA NTE INEN-ISO 6887-1
PORCIÓN DE ENSAYO Y SUSPENSIÓN INICIAL
1 2 Precisión de la medida de
m o V será del ± 5%
3 4
NORMA NTE INEN-ISO 6887-1
DILUCIONES DECIMALES SUCESIVAS
NORMA NTE INEN-ISO 6887-1
DILUCIONES DECIMALES SUCESIVAS
• No deberán introducirse las pipetas más de 1 cm dentro
de la suspensión inicial.
• Mezclar exhaustivamente, haciendo uso del agitador
magnético entre 5 s y 10 s
NORMA NTE INEN-ISO 6887-1
DURACIÓN DEL PROCESO
• Preparación de la suspensión
inicial y el instante en que el
inoculo entra en contacto con
el medio de cultivo.
≤ 45 minutos
• Preparación de la suspensión
inicial y el comienzo de la
preparación de las siguientes
diluciones decimales
30 minutos
5.9 Aseguramiento de calidad
CONTROL DE CALIDAD INTERNO
CE 5.9.1.1 Un programa de controles
periódicos es necesario para demostrar
que controla la variabilidad (por ejemplo,
entre analistas y entre equipos o
materiales, etc.). Dicho programa debe
abarcar todos los ensayos incluidos en el
alcance de acreditación del laboratorio.
5.9 Aseguramiento de calidad
ENSAYOS DE APTITUD
CE 5.9.1.4 Los laboratorios deben participar regularmente en ensayos de aptitud
relacionados con el alcance de su acreditación, dando preferencia a los programas
de ensayos de aptitud que utilicen matrices apropiadas, conforme lo establecido en
CR GA10 Criterios Generales para la participación en Ensayos de Aptitud-SAE.
5.10 Informes de ensayo
5.10.2.1 El resultado no debe expresarse como “cero para una unidad
definida” salvo que sea un requisito reglamentario. Los resultados de los
análisis cualitativos deben expresarse como “detectado/no detectado en una
cantidad o volumen de muestra definidos”. También pueden expresarse
como “por debajo de un número especificado de microorganismos para una
unidad definida”, cuando el número especificado de microorganismos sea
menor al límite de detección del método.
5.10.2.2 En análisis cuantitativos, cuando el número de microorganismos
esté bajo el límite de cuantificación, debe expresarse el resultado como
menor al límite de cuantificación para una unidad definida.
Beneficios de un laboratorio acreditado
ü Tener servicios análisis consistentes.
Uniformidad en los resultados de los análisis.
Certeza en los resultados que brindan.
Promover el reconocimiento internacional.
Trabajo realizado en forma eficaz.
Ordenamiento.
Funciones y responsabilidades del personal definidas y
establecidas.
Mantener la competitividad al tener un laboratorio que
trabaje con un sistema de Control y Aseguramiento de
Calidad.
Ventajas de un laboratorio acreditado
ü Un reconocimiento de competencias para efectuar
pruebas
ü Una ventaja en el mercado
ü Un punto de referencia para el cumplimiento
ü Reconocimiento internacional de su laboratorio
CONCLUSIONES RECOMENDACIONES
• Estandarizar las • Promover el empleo de
actividades del normas en los diferentes
laboratorio. laboratorios de ensayos
• Fortalecer la de las industrias de
reproducibilidad de los alimentos para lograr
resultados de análisis competencia técnica y
microbiológicos. veracidad de los
resultados de ensayos.
Dariel Intriago Bermúdez
[email protected] Manta - Ecuador
GRACIAS
