SEP SES TecNM
INSTITUTO TECNOLÓGICO DE TOLUCA
INGENIERÍA QUÍMICA
ANALISIS INSTRUMENTAL
TEMA 2
PRACTICA 1 VIRTUAL
DETERMINACIÓN DE HIERRO EN MUESTRA AGUA POR
ESPECTROSCOPIA UV-Vis
REPORTE
EQUIPO 2
ALUMNOS:
ALFARO GONZÁLEZ FERNANDA
ÁLVAREZ PICHARDO MARÍA SUÑYDEISY
FLORES ALCÁNTARA GABRIEL EDUARDO
FLORES LÓPEZ RODRIGO
JUÁREZ REYES MELANIE MARIANNE
MEJÍA HERNÁNDEZ ILDA ROSARIO
RAMÍREZ BERNAL ANA PAULA
No. CONTROL:
20280234
20280670
20280173
20280657
20280816
18280835
19280824
PROFESORA:
Mtra. ESTHELA MEJÍA ARZATE
METEPEC, ESTADO DE MÉXICO, OCTUBRE DE 2022
PRÁCTICA NO. 1
Determinación de hierro en muestra agua por Espectroscopia
UV-Vis
1. OBJETIVO:
• Que el alumno conozca la operación y manejo del
espectrofotómetro virtual UV-VIS.
• Conozca cómo se realiza la determinación del hierro presente en una
muestra de agua.
2. FUNDAMENTO
El conocer los componentes que conforman la instrumentación analítica de los equipos
de medición, es muy importante, pues cada componente tiene una función específica,
es por ello que es importante investigar los siguientes conceptos.
• Espectroscopia UV-VIS
La espectrofotometría UV-visible es una técnica analítica que permite
determinar la concentración de un compuesto en solución. Se basa en que
las moléculas absorben las radiaciones electromagnéticas y a su vez que la
cantidad de luz absorbida depende de forma lineal de la concentración. Las
longitudes de onda de las radiaciones que una molécula puede absorber y
la eficiencia con la que se absorben dependen de la estructura atómica y de
las condiciones del medio.
• Fotómetro y Espectrofotómetro, diferencias y semejanzas.
Estos son equipos utilizados en el Laboratorio para el análisis de muestras
fisiológicas, b a s á n d o s e en el principio que cada compuesto químico
absorbe o emite energía lumínica de diferente longitud de onda.
La diferencia fundamental consiste en que el fotómetro trabaja únicamente
en el espectro de luz visible y selecciona una longitud de onda determinada
mediante filtros fijos. En cambio, un Espectrofotómetro es capaz de trabajar,
no solo con la luz visible, sino que en otras regiones del espectro
electromagnético (ultravioleta e infrarrojo). Además, posee un monocromador
para seleccionar la longitud de onda deseada.
• Instrumentación de espectrofotómetro de haz sencillo y haz doble.
Los instrumentos de simple haz son aquellos en los cuales el haz de luz sigue
una única trayectoria entre la fuente y el detector. La banda de luz atraviesa
la muestra que se halla contenida en una celda, la luz transmitida por la
muestra pasa al detector originándose una corriente eléctrica que por medio
de diferentes circuitos permite observar una señal, ya sea el movimiento de
una aguja o señal digital o un registro gráfico.
En los instrumentos de doble haz la luz proveniente de la fuente es dividida
en dos haces después de salir del monocromador mediante un sistema de
espejos divisores.
Esta división produce dos haces de luz, uno de ellos se dirige a la celda de
referencia, que contiene el blanco, y el otro haz se dirige hacia la celda de
muestra. Los dos haces de luz después de atravesar la celda de referencia y
la de muestra llegan a detectores separados para obtener la señal
correspondiente.
Mediante espectrofotometría se pueden estudiar sustancias coloreadas, que
absorben a longitudes de onda del espectro visible. Dependiendo de las
características del espectrofotómetro que se disponga, pueden estudiarse
sustancias que absorban en el UV o IR.
3. METODOLOGIA
3.1 El docente presentara el video “Espectrofotómetro virtual UV-Vis:
[Link] donde se
explica el manejo del espectrofotómetro de forma virtual.
3.2 El docente presentara el video: “Determinación Espectrofotométrica UV-Vis”:
[Link] donde se
describe la metodología a seguir de la determinación espectrofotométrica de hierro
en una muestra real.
4. RESULTADOS
4.1 Indicar la metodología descrita en el video para la operación y manejo del
Espectrofotómetro virtual UV-VIS.
Para un correcto uso y manejo del espectrofotómetro virtual UV-VIS se debe seleccionar
la celda determinada para el análisis. Posteriormente, se debe llenar dicha celda con una
pipeta, colocando así el reactivo deseado o el reactivo que se utilizará para realizar la
determinación, después se selecciona la longitud de onda a la que se hará la lectura. Así
pues, se debe abrir la puerta del compartimiento para celdas y se introduce la celda que
tiene la muestra a analizar.
Se debe considerar que las celdas se deben tomar del lado esmerilado ya que de lo
contrario puede perjudicar la lectura. Por último, se registran las lecturas que muestra en
el monitor y el espectro, se borrará dicho dato para poder continuar con una nueva
determinación de distintos reactivos o compuestos.
4.2 De la determinación de hierro presente en una muestra real, identificar:
A) Materiales, reactivos y equipos.
Materiales
• 1 matraz balón de 1L.
• 9 matraz balón de 100mL.
• 1 pipeta graduada de 1mL.
• 1 pipeta graduada de 5mL.
• 1 pipeta graduada de 10mL.
• 1 pipeta aforada de 5mL.
• 1 probeta de 100mL.
• 1 probeta de 50mL.
• 2 vasos de precipitado de 50mL.
• 1 vaso de precipitado de 100mL.
• 1 frasco lavador.
• 1 embudo cónico de vidrio.
• 1 papel de filtro.
• 1 matraz Erlenmeyer.
• 1 agitador de vidrio.
Reactivos
• Sulfato ferroso amoniacal hexahidratado con una pureza del 99.5%.
• Acetato de sodio 10 % en medio acuoso.
• 1,10-fenantrolina 0.1%.
• Cloruro de hidroxilamina 10%.
• Cloruro de hidroxilamina 99.5%.
• 2.5 mL de Ácido sulfúrico concentrado.
• Agua desionizada.
• Muestra de trabajo
• Pisetas con agua.
Equipos
• Balanza analítica.
• Espectrofotómetro.
• Celdas espectrofotométricas en cuarzo o vidrio óptico.
B) Preparación de la muestra real:
Se agita por dos minutos y se procede a verter una cantidad de muestra (objeto
de estudio) en un vaso de precipitado. Se utiliza un sistema de filtración
convencional, a este se le agrega muestra en cantidades que nos permita el
proceso de filtración (se debe homogenizar correctamente puesto que la
presencia de partículas puede intervenir en el análisis) esto se realizó con el
objetivo de obtener la muestra original sin interferencias.
C) Preparación de la disolución patrón o stock:
Pesar en la balanza analítica, con ayuda de medio filtrante o vidrio de reloj, 0,07g
aproximadamente del reactivo original (sulfato ferroso amoniacal- 6- hidrato,
pureza 99,5%). Posteriormente se vierte a un vaso de precipitado y se agrega
una pequeña cantidad de agua 20, 30 o 40ml, con ayuda de un agitador de vidrio
disolver completamente. Agregar 2,5ml de H2SO4 concentrado y disolver.
Finalmente, verter en el balón aforado y llevar a la marca de aforo.
D) Preparación de los estándares de trabajo, blanco de calibración, muestra
sintética (MS) y muestra real (MR).
• Preparación del blanco de calibración:
− Medir 50mL de agua desionizada y posteriormente agregar volúmenes
específicos de los diferentes reactivos para la generación del color.
• Preparación de estándares:
Tabla 1. Volúmenes de disolución.
Matraz a: 1ml Matraz b: 5ml Matraz c: 10ml
Matraz d: 25ml Matraz e: 50ml Matraz f: 75ml
Posteriormente preparar los estándares desde 1 a 75, es decir, para cada
uno de los recipientes vamos a agregar (1, 5, 10, 25, 50 y 75) mL de la
solución stock.
− Después, de la misma manera que se hizo con el blanco se agregan los
diferentes volúmenes de los reactivos formadores de color: acetato de
sodio (10%) 8 ml, el cloruro de hidroxilamina (10%) 1 ml, y el 1,10
fenantrolina (0.1%), y finalmente llevamos al aforo a 100mL para preparar
los estándares de trabajo.
• Muestra sintética (MS):
Muestra que solamente conoce el docente cuál es su concentración y que
se les entrega a los estudiantes con el objeto de ver qué tanto el estudiante
se acerca a la concentración real de la muestra, por lo tanto, vamos a tener
dos valores: la concentración de hierro obtenida por la técnica medida por
el estudiante y la concentración de hierro obtenida inicialmente por el
docente, que es la correcta y la adecuada porque previamente se ha
estandarizado.
• Muestra real (MR):
Para la muestra real es medir 50 mL de agua objeto de estudio y luego
agregar los reactivos formadores de color: acetato de sodio (10%) 8 ml, el
cloruro de hidroxilamina (10%) 1 ml, y el 1,10 fenantrolina (0.1%) y
finalmente aforar con la misma agua hasta los 100 mL del aforo.
(En el blanco solo se agrega agua desionizada y ácido sulfúrico).
En cada uno de los recipientes incluyendo al blanco se agrega en
secuencia los 3 reactivos; el primer reactivo que agregamos es el acetato
de sodio, el acetato de sodio se agrega en un volumen de 8 mL, el segundo
reactivo es el cloruro de hidroxilamina que se agrega 1 mL y el último
reactivo es la 1, 10 fenantrolina, (antes de aforar deben agregarse los
reactivos).
Finalmente, cada uno de los recipientes de los balones aforados se lleva a
su respectivo aforo y una vez se termina el aforo incluyendo el análisis de
la muestra sintética y el análisis de la muestra real. Una vez que tenemos el
aforo completo tanto de estándares de trabajo, blanco y muestras lo que
hacemos es esperar 10 minutos, ya que es el tiempo necesario para que la
reacción que se lleve aquí sea suficiente, esta reacción es una reacción de
formación de color.
E) De las lecturas del barrido espectral realizado, graficar en papel milimétrico e
identificar a que longitud de onda se observa la máxima absorción.
Grafica 1. Lectura de barrido espectral.
Grafica 2. Lectura de barrido espectral.
F) De la curva de calibración obtenida completar la Tabla 2. Curva de calibración
Estándar Valicuota (mL) (mg/L) Absorbancia
1 ppm = 1 mg/L
1 1 0.12 0.011
2 5 0.6 0.102
3 10 1.2 0.217
4 25 3.0 0.555
5 50 6.0 1.131
6 75 7.8 1.704
MS 1.773 0.334
MR 0.8455 1.197
Tabla 2. Curva de calibración
G) Obtener la gráfica correspondiente y calcular el valor de: m, b y r.
m=0.2124
b=-0.0426
r= 0.9953
Grafica 3. Curva de calibración.
H) Calcular la concentración de las muestras Ms y Mr.
𝑦 = 𝑚𝑥 + 𝑏
𝑦−𝑏
𝑥=
𝑚
0.334 + 0.0426 𝑚𝑔
𝑥𝑚𝑠 = = 1.7730
0.2124 𝐿
0.137 + 0.0426 𝑚𝑔
𝑥𝑚𝑟 = = 0.8455
0.2124 𝐿
5. DISCUSION DE RESULTADOS
La espectroscopia UV-Vis es una espectroscopia de emisión de fotones que utiliza
radiación electromagnética (luz); su uso es de manera general en la determinación
cuantitativa de los componentes de soluciones de iones de metales de transición y
compuestos orgánicos altamente conjugados. Se llevo a cabo el procedimiento
experimental descrito en el manual, aplicando la teoría vista en clase con el propósito
de obtener los resultados de una manera muy precisa; como tal de los resultados del
video no se puede discutir mucho puesto que los encargados de realizarlo fueron
personas externas, sin embargo, al realizar nuestros cálculos fue notorio que existe
una pequeña variación respecto a los decimales los cuales no afectan, por otro lado,
lo visto en clase fue de mucha ayuda para conocer a detalle el tema.
6. CONCLUSIONES
El video del manejo del espectrofotómetro virtual nos ayudó para comprender el
funcionamiento de uno real como lo sería la calibración correcta que se debe realizar.
Se obtuvo la habilidad de reconocer el material necesario para una espectroscopia en
la determinación de hierro en una muestra de agua. Se afirmo conocimientos sobre el
cálculo de la curva obteniendo que la longitud de 510 nm y el porcentaje de
absorbancia llega a 0.219. por lo que entre 500 y 520 nm hay un decaimiento
concluyendo que en este intervalo se encuentra la mayor absorbancia. Teniendo un
seguimiento correcto de la metodología presente, así como del manejo del
espectrofotómetro UV-VIS, logramos la determinación de hierro en la muestra de
agua y junto con ello se cumplió el objetivo deseado con eficacia. De igual manera, el
realizar esta práctica nos ayudó a comprender más sobre el tema y el manejo de
equipos.
7. CUESTIONARIO
1) ¿Al filtrar la muestra original de agua, se elimina el hierro presente?
No, porque queremos la parte de hierro soluble y en esta parte solo se van a
eliminar las interferencias partículas ajenas que la muestra pudiera tener y así
quedar únicamente con la muestra original con la que vamos a trabajar.
2) ¿Qué condiciones se deben considerar para la toma de muestra original de agua?
• Debe tomarse un mínimo de 500 mL de muestra en un envase de polietileno o
polipropileno.
• La muestra debe conservarse en refrigeración a 4°C.
• Tiempo máximo de almacenamiento previo al análisis es de 28 días.
3) ¿Por qué se utiliza el sulfato ferroso amoniacal (FES) como estándar primario y
que características debe cumplir este reactivo?
Se utiliza porque es el reactivo de más alta pureza. Debe tener una pureza de
99.5% de concentración.
4) ¿Qué función tiene agregar H2SO4 concentrado a la disolución patrón o stock?
Sirve para formar el complejo Se adiciona para mantener las condiciones de
acidez necesarias para la reacción de formación de color.
5) ¿De qué materiales y que características debe tener la celda para leer en el
espectrofotómetro UV Vis?
Son celdas en forma rectangular de vidrio óptico especial o cuarzo, las cuales
tienen una parte transparente y una parte esmerilada. Por la parte transparente se
colocan las celdas fotométricas, donde se contiene la disolución, en la parte
superior estarán las especificaciones para el tipo de campo de aplicación,
generalmente deben ser pares y tener características idénticas.
6) ¿Qué finalidad tiene analizar una muestra sintética dentro de un análisis dado?
Obtener lo que se pide y conocer el procedimiento de análisis dado y verificar si
estos cumplen con los parámetros establecidos que inciden en el análisis.
7) ¿Cuál es la reacción que involucra al complejo formado?
Reacción de formación de color o reacción complejo-métrica Un complejo se
forma por M + L= ML. M metal libre. L ligando.
8) ¿Cuál es el objeto de realizar un barrido espectral?
Construir una curva bidimensional espectral que permitirá conocer el valor máximo
de absorbancia a través del valor de longitud de onda, es decir, el valor máximo
donde el analito absorbe más luz.
9) ¿Cómo se determina la precisión y exactitud en el análisis y cuál es su
relevancia?
• Precisión: La precisión normalmente se mide en términos de coeficiente de
variación o desviación típica relativa de los resultados analíticos obtenidos
con patrones de control preparados independientemente. La precisión
depende de la concentración y debe medirse con concentraciones
diferentes dentro del rango aceptado, normalmente en la parte baja, media
y alta de éste. Una precisión aceptable en el nivel inferior de concentración
es del 20%. Con concentraciones más altas la precisión debe ser mayor. La
relevancia de la precisión es que mide el grado de acuerdo entre los
resultados analíticos obtenidos de una serie de mediciones repetidas del
mismo analito realizadas en las condiciones previstas en el método y refleja
los errores aleatorios que se producen cuando se utiliza un método.
• Exactitud: La exactitud se determina teóricamente utilizando material de
referencia certificado (MRC) si es posible, métodos de referencia, estudios
en colaboración o mediante comparación con otros métodos. Lo normal es
estimar la exactitud analizando muestras añadidas con tres concentraciones
distintas (baja, media y alta) que abarquen la totalidad del rango de trabajo.
La concentración de estas adiciones estándar debe ser distinta de la utilizada
para preparar las curvas de calibración y debe prepararse con una solución
estándar de trabajo distinta. La exactitud determina el error total del análisis.
8. REFERENCIAS CONSULTADAS
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