Bioquímica

Informe de Laboratorio
Práctica No. 01, 18/05/2022

Solución Buffer y Capacidad Amortiguadora

Danna Uyasán1, Daniela Ramírez, 2 Katerine Hoyos3.
Programa de Biología, Departamento de Biología y Química,
Universidad de los Llanos
Vereda Barcelona, km 12 vía a Puerto López, Villavicencio 500017, Meta, Colombia.
1 [Link]@[Link], 2 adramirez@[Link],3 jkhoyos@[Link]

I. OBJETIVOS
Tabla I
Los objetivos de ésta práctica son analizar las TABLA DEL PH OBTENIDO DE LA SOLUCIÓN BUFFER
características e importancia de las soluciones buffer en
sistemas biológicos; identificar la forma en la que un
sistema amortiguador mantiene el pH en los sistemas
biológicos; preparar las soluciones buffer a pH
determinado y por último evaluar la capacidad
amortiguadora de un sistema buffer fosfato mediante su
titulación con un ácido y una base fuerte.
B. Determinación de pH con ayuda de un indicador
II. RESULTADOS
Una vez se realizó la preparación de las soluciones,
En esta sección se encuentran los métodos usados se adicionó dos gotas del indicador de azul de
en cada uno de los procesos experimentales. bromotimol agitando vigorosamente cada tubo de
A. Preparación de una solución amortiguadora buffer ensayo como se observa en la fig 2. Revelando
coloraciones desde el tono azul que indica pH alcalinos
A cada tubo de ensayo enumerado del uno al siete se
hasta un tono amarillo verdoso que indica pH
adicionaron los volúmenes indicados en la tabla I y se
ligeramente ácidos, coincidiendo la escala con los pH y
midió con el potenciómetro el pH de cada solución buffer
color revelado por las soluciones buffer.
como se observa en la fig. 1, obteniendo resultados
exactamente al pH esperado. Solamente la primera
solución difiere en 0,3ml, sin embargo el valor obtenido
de pH corresponde al pH esperado.

Fig. 2. Soluciones buffer de K2HPO4 + KH2PO4 de izquierda a derecha

se encuentra: a. Indicador de azul de bromotimol con su respectiva
escala de colorimetría, b. colores desarrollados con su respectivo pH.

C. Medida de la capacidad amortiguadora de una

solución buffer
Usando el tubo de ensayo número cinco, con la
Fig. 1. De izquierda a derecha se encuentra: a. Montaje toma de pH, b.
Solución de K2HPO4, c. Solución de KH2PO4 y d. Soluciones buffer de solución preparada de pH 7,0 y un blanco (agua) de pH
K2HPO4 + KH2PO4 con los volúmenes indicados en la Tabla I. 6,1 se realizaron titulaciones con NaOH y HCl, tomando
la medida del pH cada que se agregaba 0,7ml del

1
 Tabla II
TABLA DEL PH EN CADA VOLUMEN AGREAGDO A LAS SOLUCIONES
TITULADAS CON NAOH Y HCL

Concentraciones con titulante NaOH

Tubo 1:
0.15 𝑀𝑁𝑎𝑂𝐻 𝑥 5.0 𝑚 𝐵𝑢𝑓𝑓𝑒𝑟
= 0.131 𝑀 𝑁𝑎𝑂𝐻
5.7 𝑚𝑙 𝐵𝑢𝑓𝑓𝑒𝑟 + 𝑁𝑎𝑂𝐻

Tubo 2:
0.15 𝑀 𝑁𝑎𝑂𝐻 𝑥 5.0 𝑚𝑙 𝐵𝑢𝑓𝑓𝑒𝑟
= 0.117 𝑀𝑁𝑎𝑂𝐻
6.4 𝑚𝑙 𝐵𝑢𝑓𝑓𝑒𝑟 + 𝑁𝑎𝑂𝐻

Tubo 3:
0.15 𝑀 𝑁𝑎𝑂𝐻 𝑥 5.0 𝑚𝑙 𝐵𝑢𝑓𝑓𝑒𝑟
= 0.105 𝑀 𝑁𝑎𝑂𝐻
7.1 𝑚𝑙 𝐵𝑢𝑓𝑓𝑒𝑟 + 𝑁𝑎𝑂𝐻

Tubo 4:
0.15 𝑀 𝑁𝑎𝑂𝐻𝑥 5.0 𝑚𝑙 𝐵𝑢𝑓𝑓𝑒𝑟
= 0.096𝑀 𝑁𝑎𝑂𝐻
7.8 𝑚𝑙 𝐵𝑢𝑓𝑓𝑒𝑟 + 𝑁𝑎𝑂𝐻

Fig. 3. Titulación, de arriba hacia debajo, de izquierda a derecha, a. Tubo 5:

Medición del pH con el potenciómetro, b. Soluciones titulantes, c. 0.15 𝑀𝑁𝑎𝑂𝐻 𝑥 5.0 𝑚𝑙 𝐵𝑢𝑓𝑓𝑒𝑟
coloración inicial del agua y solución buffer con el indicador, d. = 0.088 𝑀𝑁𝑎𝑂𝐻
8.5 𝑚𝑙 𝐵𝑢𝑓𝑓𝑒𝑟 + 𝑁𝑎𝑂𝐻
titulando y e coloración final del agua y solución buffer después de la
titulación.
Tubo 6:
titulante como se observas en la Tabla II, se obtuvieron 0.15 𝑀𝑁𝑎𝑂𝐻 𝑥 5.0 𝑚𝑙 𝐵𝑢𝑓𝑓𝑒𝑟
= 0.081 𝑀𝑁𝑎𝑂𝐻
los resultados del cambio de color del blanco A y B, 9.2 𝑚𝑙 𝐵𝑢𝑓𝑓𝑒𝑟 + 𝑁𝑎𝑂𝐻
coloreados al principio de amarillo indicando la acidez
leve del agua y la solución buffer A y B coloreados de Tubo 7:
azul verdoso indicando la neutralidad de la solución, el 0.15 𝑀𝑁𝑎𝑂𝐻 𝑥 5.0 𝑚𝑙 𝐵𝑢𝑓𝑓𝑒𝑟
pH muy alcalino del NaOH y muy ácido del HCl como se = 0.075 𝑀𝑁𝑎𝑂𝐻
9.9 𝑚𝑙 𝐵𝑢𝑓𝑓𝑒𝑟 + 𝑁𝑎𝑂𝐻
observa en la fig.3, después de la titulación, se observa
como el agua titulada con NaOH se colorea de azul Tubo 8:
intenso con un pH de 12,58 muy básico y con HCl se 0.15 𝑀 𝑁𝑎𝑂𝐻𝑥 5.0 𝑚𝑙 𝐵𝑢𝑓𝑓𝑒𝑟
colorea de amarillo pálido con un pH final de 1,43 muy = 0.070 𝑀𝑁𝑎𝑂𝐻
10.6 𝑚𝑙 𝐵𝑢𝑓𝑓𝑒𝑟 + 𝑁𝑎𝑂𝐻
ácido. En el caso de la solución buffer número cinco con
pH neutro al ser titulada con NaOH se coloreó de azul
Tubo 9:
intenso con un pH final de 11,8 y con HCl se coloreó de 0.15 𝑀 𝑁𝑎𝑂𝐻𝑥 5.0 𝑚𝑙 𝐵𝑢𝑓𝑓𝑒𝑟
amarillo pálido con un pH de 2,18 indicando la acidez, = 0.066 𝑀 𝑁𝑎𝑂𝐻
este comportamiento se observa en el Gráfico 1. 11.3 𝑚𝑙 𝐵𝑢𝑓𝑓𝑒𝑟 + 𝑁𝑎𝑂𝐻

Para la realización del gráfico del comportamiento de Tubo 10:

la capacidad amortiguadora del buffer se realizaron los 0.15 𝑀 𝑁𝑎𝑂𝐻 𝑥 5.0 𝑚𝑙 𝐵𝑢𝑓𝑓𝑒𝑟
= 0.062 𝑀 𝑁𝑎𝑂𝐻
siguientes procesos: 12.0 𝑚𝑙 𝐵𝑢𝑓𝑓𝑒𝑟 + 𝑁𝑎𝑂𝐻
𝑉1 𝐶1 = 𝑉2 𝐶2 (𝐸𝑐𝑢𝑎𝑐𝑖ó𝑛 1)

2
 Concentraciones con titulante HCl III. ANÁLISIS DE RESULTADOS

Tubo 1: A. Preparación de una solución amortiguadora buffer

0.15 𝑀 𝐻𝐶𝑙𝑥 5.0 𝑚 𝐵𝑢𝑓𝑓𝑒𝑟
= 0.131 𝑀 𝐻𝐶𝑙 En la medida que se adiciona las soluciones de fosfato
5.7 𝑚𝑙 𝐵𝑢𝑓𝑓𝑒𝑟 + 𝐻𝐶𝑙
dibásico de potasio y fosfato monbásico de potasio, lo
Tubo 2: que esta sucedeinto es la siguiente reacción:
0.15 𝑀 𝐻𝐶𝑙 𝑥 5.0 𝑚𝑙 𝐵𝑢𝑓𝑓𝑒𝑟
= 0.117 𝑀 𝐻𝐶𝑙 𝐾𝐻2 𝑃𝑂4 + 𝐻2 ↔ 𝐾2 𝐻𝑃𝑂4 + 𝐻3 𝑂
6.4 𝑚𝑙 𝐵𝑢𝑓𝑓𝑒𝑟 + 𝐻𝐶𝑙
𝐾𝐻2 𝑃𝑂4 → 𝐻2 𝑃𝑂4− + 𝐾 +
Tubo 2:
0.15 𝑀 𝐻𝐶𝑙 𝑥 5.0 𝑚𝑙 𝐵𝑢𝑓𝑓𝑒𝑟
= 0.105 𝑀 𝐻𝐶𝑙 𝐾2 𝐻𝑃𝑂4 → 𝐻𝑃𝑂42− + 2𝐾 +
7.1 𝑚𝑙 𝐵𝑢𝑓𝑓𝑒𝑟 + 𝐻𝐶𝑙
𝐻2 𝑃𝑂4− ↔ 𝐻𝑃𝑂42− + 𝐻 +
Tubo 3:
0.15 𝑀 𝐻𝐶𝑙 𝑥 5.0 𝑚𝑙 𝐵𝑢𝑓𝑓𝑒𝑟
= 0.096𝑀 𝐻𝐶𝑙 Su acción se basa principalmente en la absorción de
7.8 𝑚𝑙 𝐵𝑢𝑓𝑓𝑒𝑟 + 𝐻𝐶𝑙 hidrogeniones [𝐻 + ] o iones hidróxilo [𝑂𝐻 − ].
Tubo 4: B. Determinación de pH con ayuda de un indicador
0.15 𝑀 𝐻𝐶𝑙𝑥 5.0 𝑚𝑙 𝐵𝑢𝑓𝑓𝑒𝑟
= 0.088 𝑀 𝐻𝐶𝑙
8.5 𝑚𝑙 𝐵𝑢𝑓𝑓𝑒𝑟 + 𝐻𝐶𝑙

Tubo 5:
0.15 𝑀𝐻𝐶𝑙 𝑥 5.0 𝑚𝑙 𝐵𝑢𝑓𝑓𝑒𝑟
= 0.081 𝑀𝐻𝐶𝑙
9.2 𝑚𝑙 𝐵𝑢𝑓𝑓𝑒𝑟 + 𝐻𝐶𝑙

Tubo 6:
0.15 𝑀 𝐻𝐶𝑙 𝑥 5.0 𝑚𝑙 𝐵𝑢𝑓𝑓𝑒𝑟
= 0.075 𝑀 𝐻𝐶𝑙
9.9 𝑚𝑙 𝐵𝑢𝑓𝑓𝑒𝑟 + 𝐻𝐶𝑙

Tubo 7:
0.15 𝑀𝐻𝐶𝑙 𝑥 5.0 𝑚𝑙 𝐵𝑢𝑓𝑓𝑒𝑟
= 0.070 𝑀𝐻𝐶𝑙
10.6 𝑚𝑙 𝐵𝑢𝑓𝑓𝑒𝑟 + 𝐻𝐶𝑙 El indicador rojo de bromotimol, es un indicador de pH el
cual cambia su color dependiendo el medio en el que se
Tubo 8: encuentre, si la sustancia toma un color amarillo es que
0.15 𝑀 𝐻𝐶𝑙𝑥 5.0 𝑚𝑙 𝐵𝑢𝑓𝑓𝑒𝑟
= 0.066 𝑀𝐻𝐶𝑙 el indicador se encuentra protonado mientras que si toma
11.3 𝑚𝑙 𝐵𝑢𝑓𝑓𝑒𝑟 + 𝐻𝐶𝑙 un color azul el indicador esta desprotonado; en un pH
por debajo de 7 se encuentra el grupo hidroxilo, si el pH
Tubo 9: se convierte en básico se forma un enlace doble
0.15 𝑀𝐻𝐶𝑙 𝑥 5.0 𝑚𝑙 𝐵𝑢𝑓𝑓𝑒𝑟 convirtiéndose en cetona. Este indicador funciona de la
= 0.062 𝑀 𝐻𝐶𝑙
12 𝑚𝑙 𝐵𝑢𝑓𝑓𝑒𝑟 + 𝐻𝐶𝑙 siguiente forma si la sustancia se torna amarilla es una
solución acida, si se torna azul es básica, si se torna
verde es neutra ya que al aproximarse a un pH neutro
una pequeña porción pierde protones desprendiéndose
un color azul que al mezclarse con el amarillo forman el
color verde. (Merck)
En los tubos del 1-4 se observa una coloración azul
dando a notar que la solución es básica y que el indicador
esta desprotonado, en los tubos 5-7 se puede observar
una coloración verde lo cual indica que su pH es neutro.
El tubo 5B junto con el blanco B se puede observar una
coloración amarilla lo que denota que la solución es
acida y que el indicador se encuentra protonado, por otro
lado el tubo 5 A y el blanco A muestran una coloración
azul dando como resultado una solución básica.

Gráfico 1: Curva titulación de Buffer y blanco con NaOH y HCl.

3
C. Medida de la capacidad amortiguadora de una
solución buffer
Cuando reaccionan las soluciones buffer con el titulante
NaOH, sucede lo siguiente:
Ecuación molecular del fosfato monobásico de potasio:
𝐾𝐻2 𝑃𝑂4 (𝑎𝑐) + 𝑁𝑎𝑂𝐻 (𝑎𝑐) ↔ 𝑁𝑎𝐾𝐻𝑃𝑂4 (𝑎𝑐) + 𝐻2 𝑂 (𝑙)
Ecuación iónica neta:
𝐻2 𝑃𝑂4− (𝑎𝑐) + 𝑂𝐻 − (𝑎𝑐) ↔ 𝐻𝑃𝑂42− (𝑎𝑐) + 𝐻2 𝑂
Cuando reaccionan las soluciones buffer con el titulante
HCl, sucede lo siguiente:
Ecuación molecular del fosfato dibásico de potasio:
𝐾2 𝐻𝑃𝑂4 (𝑎𝑐) + 𝐻𝐶𝑙(𝑎𝑐 ↔ 𝐾𝐻2 𝑃𝑂4 (𝑎𝑐) + 𝐾𝐶𝑙
Ecuación iónica neta:
𝐻𝑃𝑂42− (𝑎𝑐) + 𝐻 + (𝑎𝑐) ↔ 𝐻2 𝑃𝑂4− (𝑎𝑐)

Obteniendo exitosamente el cambio de color por las

propiedades del indicador debido a la protonación y
desprotonación.

REFERENCIAS

[1] R. R. Alzamora, FUNDAMENTOS DE BIOQUIMICA

GENERAL: Disoluciones, Propiedades coligativas y
Gases ideales, Primera ed., Ecuador: UPSE, 2017,
p. 1.
[2] D. A. Skoog, D. M. West, F. J. Holler y S. R. Crouch,
Fundamentos de Quìmica Analìtica, Novena ed.,
Mèxico D.F., 2015.