Laboratorio General de Química II
Práctica 1. Espectrofotometría molecular
1. OBJETIVOS
Que el alumno conozca y sepa utilizar un espectrofotómetro para obtener espectros de
absorción de compuestos. Que el alumno sepa realizar medidas cuantitativas de
absorbancia para la determinación de concentraciones de sustancias en mezclas:
determinación del coeficiente de absorción molar.
2. INTRODUCCIÓN
La Espectrofotometría es una de las técnicas experimentales más utilizadas para la
detección específica de moléculas. Se caracteriza por su sencillez de manejo, su
precisión, sensibilidad y su aplicabilidad a moléculas de distinta naturaleza
(contaminantes, biomoléculas, etc) y estados de agregación (sólido, líquido, gas).
2.1. Los fundamentos físico-químicos de la espectrofotometría
Las moléculas pueden absorber energía luminosa y almacenarla en forma de energía
interna. Esto permite que se inicien ciclos vitales de muchos organismos, entre ellos el
de la fotosíntesis en plantas y bacterias.
La luz es una radiación electromagnética formada por fotones cuya energía, Ef, viene
dada por la siguiente expresión:
Ef = h = h c [1]
donde c es la velocidad de la luz (2.999 108 m/s) , la frecuencia, la longitud de onda
y h la constante de Planck (6.6 10-34 Js).
El rango de frecuencias que puede presentar una radiación es muy variado (espectro
electromagnético), desde 1021 s-1 (radiación gamma) hasta 107 s-1(ondas de radio). A la
zona del espectro electromagnético comprendida entre los 5.1014 s-1 y los 1017 s-1 se le
denomina zona ultravioleta-visible, siendo la zona del visible la de menor frecuencia, la
que está comprendida entre los 800 y los 450 nm, aproximadamente.
Figura 1. Espectro electromagnético de la luz
visible
Figura 2. Esquema de un tránsito electrónico por
absorción de un fotón
Cuando una sustancia química absorbe un fotón de luz en la zona espectral UV-visible
se excita, pasando de un orbital de energía fundamental a otro excitado y almacenando,
1
por tanto, la energía de ese fotón. Para que pueda darse el tránsito entre un nivel de
energía electrónica, Em, y otro En, es absolutamente necesario que la energía del fotón
sea exactamente igual a la diferencia de energía entre los dos niveles electrónicos
(Figura 2, ecuación 2)
En-Em = h [2]
Puesto que la estructura electrónica de una molécula es propia y característica suya, el
espectro de absorción, es decir, la luz absorbida en función de la longitud de onda,
constituye una verdadera seña de identidad de cada sustancia o molécula.
2.2. Espectrofotómetros
Los espectros de absorción se miden mediante un instrumento denominado
espectrómetro. Existen en el mercado espectrofotómetros que ofrecen una amplia gama
de prestaciones según sean los requerimientos del experimento a realizar.
En este caso se utiliza un espectrofotómetro de doble rayo que permite medir en la zona
UV-visible. El instrumento consta de dos lámparas (deuterio y tungsteno) que permite
obtener un espectro de emisión continuo en un intervalo amplio de longitudes de onda
(UV de 200 a 350 nm, visible de 350 a 900 nm) y de un monocromador (red de
difracción) que actúa como filtro óptico transmitiendo un haz de luz de longitud de onda
fija e intensidad I0. La radiación seleccionada en el monocromador se bifurca, a través
de un dispositivo óptico, en dos rayos que incidirán en la cubeta de medida y la cubeta
de referencia. A partir de la señal recibida en los detectores 1 y 2 se puede obtener
información del espectro UV-vis de la sustancia disuelta en la cubeta de medida.
Figura 4. Esquema de la absorción y transmisión
de luz por una sustancia
Figura 3. Esquema de un espectrofotómetro
2.3. La ley de Lambert-Beer
Cuando un rayo de luz de intensidad I0, atraviesa una sustancia, el número de fotones
que se absorberán será proporcional al número de moléculas que choquen con el rayo en
su trayectoria rectilínea. En el caso concreto de una disolución, este número de
moléculas es proporcional a la concentración molar de la sustancia que absorbe y al
paso óptico, es decir a la distancia recorrida por el rayo de luz dentro de la muestra. En
el esquema de la figura 4 el paso óptico es l .
Se denomina Transmitancia de una muestra, T, al cociente I/I0, donde I0 es la intensidad
de la radiación incidente y I la intensidad de la radiación transmitida. Se denomina
Absorbancia, A, al logaritmo decimal de la inversa de la transmitancia (log(1/T)=-log
T), ecuación 3.
2
I
A= -log [3]
I0
Lo que se ha establecido anteriormente se recogen en la ley de Lambert-Beer (ecuación
4), que establece que la absorbancia de una sustancia a una longitud de onda, A, es
directamente proporcional a su concentración molar y al paso óptico.
A = c l [4]
donde es el llamado coeficiente de extinción molar, coeficiente de absorción molar o
absortividad molar, c es la concentración molar y l el paso óptico. Si l se mide en cm,
las unidades de son cm-1 l mol-1.
De acuerdo con la ecuación 4, si se conoce el valor de la absortividad molar de una
sustancia y se mide su absorbancia, puesto que el paso óptico es una variable conocida,
la estimación de la concentración molar es simplemente el cociente entre la absorbancia
y el producto .l. De aquí la gran potencialidad de esta técnica para la determinación
cuantitativa de las sustancias.
3. MATERIAL Y REACTIVOS
Material Reactivos
Pesasustancias Permanganato potásico, KMnO4
Espátula
Matraz aforado de 250 ml
5 Matraces aforados de 50 ml
Pipeta graduada de 5 ml
Vaso de precipitados de 100 ml
Vaso de precipitados de 50 ml
Pipetas Pasteur de plástico
Cubetas de metacrilato para
espectrofotómetro de 1.00 cm de paso
óptico
Aspirador para pipetas
Balanza
Espectrofotómetro
4. SEGURIDAD Y RIESGOS
Reactivo: Permanganato Pictogramas de seguridad R: 8-22-50/53
potásico
Fórmula: KMnO4 S: 2-60-61
Peso molecular: 158.03 g/mol
CAS: 7722-64-7 (O) (Xn) (N)
1
En muchas ocasiones la A se da en unidades de densidad óptica, DO (OD optical density en inglés), por
-1 -1
lo que las unidades de también se expresan como DO cm l mol
3
4.1. Riesgos específicos
R8: Peligro de fuego en contacto con materias combustibles.
R22: Nocivo por ingestión.
R50/53: Muy tóxico para organismos acuáticos, puede provocar a largo plazo efectos
negativos en el medio ambiente acuático.
4.2. Consejos de seguridad
S2: Manténgase fuera del alcance de los niños.
S60: Elimínese el producto y su recipiente como residuos peligrosos.
S61: Evítese la liberación al medio ambiente.
4.3. Manejo de residuos
Los residuos de la práctica viértanse en el recipiente de residuos de metales pesados.
5. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL
5.1. Preparación de la disolución madre
Pese, en el granatario, la cantidad de KMnO4 necesaria para preparar 250 ml de una
disolución en agua destilada de una concentración aproximada de 0.005 M.
De acuerdo con la cantidad pesada, recalcule la concentración molar de la disolución
madre preparada.
5.2. Preparación de disoluciones intermedias
A partir de la disolución madre inicial, prepare, también en agua destilada, otras cinco
disoluciones intermedias de concentraciones molares aproximadas: A) 1 10-4M; B) 2
10-4M; C) 3 10-4M; D) 4 10-4M; E) 5 10-4M.2
Recalcule la concentración molar de cada una de ellas de acuerdo con la
concentración de la disolución madre empleada3
5.3. Registro de un espectro de absorción
Las muestras para las medida de la absorbancia de líquidos se colocan en recipientes
específicos (cubetas) similares a los que se muestran en la figura 3, de los que se conoce
exactamente la distancia entre sus caras, es decir su paso óptico. Las paredes de estas
cubetas deben ser de un material totalmente transparente a la radiación de medida
utilizada (en nuestro caso radiación visible). En esta práctica se utilizarán cubetas de
metacrilato con un paso óptico de 1.00 cm.
La medida de la absorbancia se realiza con espectrofotómetros. Existen en el mercado
espectrofotómetros con prestaciones muy diversas, cuyos requerimientos están
condicionados por las características del experimento concreto que se quiera realizar.
En esta práctica se utilizará un espectrofotómetro simple de un solo rayo y con una
2
Recuerde que para preparar disoluciones de concentración conocida a partir de otra disolución madre es
necesario utilizar material aforado. Para medir el volumen necesario de la disolución madre se utilizará
una pipeta y para medir el volumen total de la disolución se utilizará un matraz aforado. Recuerde que
para el enrasado del matraz aforado la línea de enrase ha de quedar a la altura de sus ojos y que el
menisco de la disolución ha de quedar tangente a la línea de enrase.
3
Es absolutamente necesario que conozca, con la precisión que le permita el instrumental utilizado, la
concentración exacta de las disoluciones A), B), C), D) y E) preparadas.
4
fuente de radiación que emite sólo en el rango del visible, similar al que se muestra en la
figura 44.
Figura 5. Cubeta de metacrilato para medida Figura 6. Espectrofotómetro de doble rayo
de absorbancias de muestras líquidas.
El permanganato potásico y sus disoluciones son de un fuerte color púrpura, lo cual
indica que absorben luz en la zona del visible.
Para registrar el espectro de absorción del permanganato utilice una de las disoluciones
preparadas en el punto anterior, por ejemplo la que tenga la concentración más próxima
a 3 10-4M.
Llene una de las cubetas con la disolución de muestra (cubeta de muestra) y otra con el
disolvente, en este caso concreto el disolvente es agua destilada (cubeta de referencia) y
realice el espectro de absorción de la disolución muestra entre 750 nm y 400 nm.
Registre el espectro realizado y analice los datos y determine cual es el valor de la
longitud de onda para la que se obtiene la máxima absorción (max).
5.4. Determinación de un coeficiente de absorción molar. Recta de Calibrado
Una vez determinado el valor de max debe realizar, a esa longitud de onda, la medida
de las absorbancias de las 4 disoluciones restantes preparadas en el apartado 2.
5.5. Determinación de la concentración de permanganato en una muestra
problema.
El profesor tutor le dará una muestra problema, que es una disolución de permanganato
potásico en agua de concentración desconocida.
Realice una primera lectura de la absorbancia de esta disolución a max. Si la disolución
resulta demasiado concentrada para poder realizar esta lectura (saturación del detector),
realice las diluciones que sean necesarias hasta que consiga una dilución final cuya
absorbancia, (Amax)f, se encuentre en el rango óptimo de medida del espectrofotómetro
(ente 100 y 1500 mDO).
Determine la concentración del MnO4- en la muestra problema5, a partir de la ecuación
[4]. Debe tener en cuenta las diluciones intermedias realizadas para que en la dilución
final se cumpla la relación [4]
4
El modo de funcionamiento concreto del modelo de espectrofotómetro que se utilizará en la práctica
será explicado por el profesorado del laboratorio.
5
El profesor le indicará si el valor de concentración obtenido es el correcto.
5
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Práctica 1. Espectrofotometría molecular
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PRESENTACIÓN DE RESULTADOS
1. Represente Absorbancia frente a longitud de onda () para la disolución 3·10-4 M de
permanganato ¿Cual es el valor de la longitud de onda para la que se obtiene la
máxima absorción (max) de las disoluciones de permanganato?
2. Construya una tabla en la que se recojan los valores de concentración de las
disoluciones de permanganato preparadas y sus absorbancia a max. Realice la
representación de Lambert-Beer con los datos anteriores. En el eje de ordenadas (Y)
se representan los valores de la absorbancia y en el eje de abscisas (X) se representan
los valores de la concentración. Con la ayuda de una hoja de cálculo, realice la
representación gráfica y el ajuste de los resultados a la ecuación de una línea recta.
El valor calculado de la pendiente de la recta debe coincidir con max l. Puesto que
l=1 cm, el valor calculado de la pendiente es el coeficiente de absorción molar
buscado6. Compare los valores obtenidos de max y de max para el permanganato con
valores bibliográficos (Handbooks, bases de datos o tablas de libros de texto).
3. ¿Cuál es la concentración de la disolución problema de permanganato potásico?
6
Recuerde que el número de cifras significativas con las que podrá dar sus resultados, estará
condicionada por la precisión de la pesada inicial y la de los volúmenes medidos.
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CUESTIONES
1. Si el permanganato muestra un color púrpura ¿de qué color es la radiación
electromagnética absorbida que produce los tránsitos electrónicos?
2. ¿Por qué debe registrar la absorción de la referencia (“blanco”) si quiere realizar una
buena medida cuantitativa de la absorbancia de un compuesto en disolución?
3. ¿Por qué se elige siempre la longitud de onda de máxima absorción espectral para
realizar las medidas cuantitativas para la determinación de las concentraciones del
soluto?
4. La ley de Lambert-Beer establece que la variación de la absorbancia con la
concentración es una relación lineal ¿Cómo es la relación entre la transmitancia y la
concentración? Establece la ecuación matemática que relaciona ambas magnitudes.
5. Un procedimiento habitual para determinar Mn en diversos tipos de muestras
ambientales, en las que es un componente minoritario, consiste en provocar la
oxidación en medio ácido del Mn2+ a permanganato, MnO4-, con peryodato IO4- que
se reduce a yodato, IO3-, según la reacción:
2 Mn2+ + 5 IO4- + 3 H2O = 2 MnO4 - + 5 IO3 - + 6 H+
Una muestra de 0.100 g fue analizada por dicho procedimiento; se disolvió, se oxidó
y se diluyó a 100 ml y el valor de la absorbancia de esta disolución a 520 nm fue
0.520. Utiliza el valor del coeficiente de absorción molar determinado por ti en esta
práctica y calcula cual es la concentración del manganeso en la muestra problema (%
en peso).
