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PRÁCTICA
INTRODUCCIÓN
Los ácidos nucleicos son grandes polímeros formados por la repetición de monómeros
denominados nucleótidos, unidos mediante enlaces fosfodiéster. Se forman largas
cadenas; algunas moléculas de ácidos nucleicos llegan a alcanzar tamaños gigantescos, de
millones de nucleótidos.
Existen dos tipos de ácidos nucleicos química y estructuralmente distintos:
el ácido desoxirribonucleico (ADN) y el ácido ribonucleico (ARN); ambos se
encuentran en todas las células procariotas, eucariotas y virus.
El ADN está formado por dos cadenas de nucleótidos complementarias que forman
una doble hélice. ... En el ADN hay cuatro tipos de nucleótidos que se diferencian
por la base nitrogenada que tienen: adenina (A), guanina (G), citosina (C) y timina
(T). Estas moléculas se ponen una detrás de otra y forman una cadena muy larga.
Estas 4 letras se alternan entre sí formando largas secuencias de ADN como si de un
collar de perlas se tratara. Esta combinación de letras no se produce al azar sino de
una forma precisa ya que los seres vivos han codificado en estas 4 letras las
instrucciones (genes) para sintetizar todas sus proteínas, las moléculas encargadas
de controlar y ejecutar todos los procesos que tienen lugar en nuestro organismo.
Esta información es altamente valiosa y los seres vivos la preservan almacenándola en el
núcleo de nuestras células. El ADN no sale en ningún momento del núcleo y sólo se envían
copias (ARN mensajero) en forma de instrucciones individuales. Si esta secuencia de
letras se ve alterada (mutaciones genéticas), puede dar lugar a proteínas no funcionales
que conducen en muchos casos al desarrollo de enfermedades de origen hereditario. De
ahí, la gran relevancia que ha supuesto la secuenciación del genoma humano, pues ha
desvelado el libro de instrucciones completo que es nuestro ADN, nuestro genoma, y ha
supuesto el punto de partida de una gran revolución en la biomedicina.
La función principal de la molécula de ADN es el almacenamiento a largo plazo de
información para construir otros componentes de las células, como las proteínas y las
moléculas de ARN. ... Una vez procesadas en el núcleo celular, las moléculas de ARN
pueden salir al citoplasma para su utilización posterior.
OBJETIVOS:
• Aprender a usar una técnica sencilla para extraer ADN de tejidos vegetales.
• Confirmar la estructura fibrilar a nivel macroscópica y relacionarla con la
geometría presente a nivel microscópico
PRELABORATORIO. Estas preguntas debes traerlas respondidas desde la casa
1. ¿Qué elementos forman parte de la molécula de ADN?
2. ¿Cuáles son las propiedades de ADN?
3. ¿Cuál es la fuente de ADN de la sangre?
4. ¿Cuál es la función de los siguientes compuestos en el proceso de extracción?: detergente,
Cloruro de sodio, Etanol.
5. ¿Cuál es la importancia del ADN en el ser humano?
6. ¿Qué exámenes se pudieran realizar con el ADN extraído de un paciente?
MATERIALES (por grupo)-
1 Banano maduro, te puede servir también una papaya, fresas, tomate, zapote. Debes
traerlo triturado de la casa, de preferencia en licuadora con muy poca cantidad de
agua
PROCEDIMIENTO
En el laboratorio:
- Preparar el tampón con los siguientes ingredientes y mantener en la nevera o en un baño
de hielo triturado:
120 ml de agua destilada o mineral
1,5 g de sal de mesa (*)
5 g de bicarbonato sódico (*)
5 ml de detergente líquido o champú (*)
(*) materiales que debes traer al menos 24 horas antes de la práctica
- Cortar la muestra vegetal en cuadritos.
- Triturar la muestra con un poco de agua destilada en una licuadora a impulsos de 10
segundos.
Así se romperán células y otras quedarán expuestas a la acción del detergente.
- Mezclar en un recipiente limpio 5 ml del triturado celular con 10 ml del tampón frío
y agitar vigorosamente durante al menos 2 minutos. Separar después los restos vegetales
más grandes del caldo molecular haciéndolo pasar por un colador lo más fino posible. Lo
ideal es centrifugar a baja velocidad 5 minutos y después pipetear el sobrenadante.
- Retirar 5 ml del caldo molecular a un tubo de ensayo y añadir con pipeta 10 ml de
alcohol etano l enfriado a 0°C. Se debe dejar escurrir lentamente el alcohol por la cara
interna del recipiente, teniendo éste inclinado. El alcohol quedará flotando sobre el
tampón.
- Se introduce la punta de una varilla estrecha hasta justo debajo de la separación entre
el alcohol y el tampón. Remover la varilla hacia delante y hacia atrás y poco a poco se irán
enrollando los fragmentos de mayor tamaño de ADN. Pasando un minuto retirar la varilla
atravesando la capa del alcohol con lo cual el ADN quedará adherido s su extremo con
el aspecto de un copo de algodón mojado.
HAZLO EN CASA o EN EL LABORATORIO
Paso 1: Rompimiento de las células de banana
Maceramos el banano con un poco de agua usando un tenedor o licuadora. Este paso
lograra que las células se rompan y empiece la liberación de ADN.
“Lisis celular es el proceso de ruptura de la membrana celular de las células que
produce la salida del material celular”. Las células están recubiertas por una doble
bicapa de lípidos.
Paso 2: Preparación de la solución de lisis
Para romper la membrana y poder sacar al ADN, en el segundo paso haremos una
solución con el detergente y agua mineral filtrada. El detergente arrastrara a los
lípidos y proteínas.
También agregamos una pizca de sal y bicarbonato para para extraer las proteínas
asociadas al ADN.
Paso 3: Mezclar las células con la solución de lisis
A la solución de lisis adicionamos 2 cucharadas de muestra de material biológico, es
decir del licuado de banana y lo revolvemos durante 5 minutos.
En el vaso de vidrio filtrar el contenido de la mezcla con la ayuda de papel filtro o un
colador fino. Separando de esta manera los restos de célula que hayan quedado. Lo que
interesa es obtener una fase mas acuosa donde encontraremos ADN, ARN y proteínas
solubles en agua. (SI ESTAS EN EL LABORATORIO PUEDES CENTRIFUGAR PARA SEPARAR)
Paso 4. Método de separación físico
Ahora usaremos unos 5 ml de la solución filtrada y agregaremos el triple del volumen en
alcohol frío, es decir, 15 ml.
Paso 5: Método de separación química
El ADN no es soluble en alcohol, al contrario del resto de moléculas que quedaron, la nueva
solución contiene alcohol. El ADN comienza a precipitar y se separa del resto de la solución,
aglomerándose y formando una nube fácilmente reconocible. Finalmente intenta sacar el
ADN con la ayuda de un palillo de chuzo. Lo podemos guardar por muchos años.
Resultados y Análisis
1. ¿Qué observas en el tubo? ¿Es posible observar la estructura del ADN que
describieron Watson y Crick?
CONCLUSIONES (Recuerda que deben responder a tus objetivos)
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