Laboratorio N°3
Microcopia
Integrantes: Paloma Garrido, Francisca
Batías y Rocío Silva
1 Sección: 310 /NRC: 1716
Docentes: Romina Lara, Victoria Devia
Fecha de entrega: 13 de mayo de 2022
Introducción
El ser humano es imperfecto, aunque cueste creerlo posee límites, si bien muchos son mentales, la mayoría son
físicos y entre ellos podemos destacar la visión, está puede variar de persona en persona, pero algo que en definitiva
podemos decir es que somos incapaces de ver más allá de cierta distancia o cierto tamaño, no importa que tan buena
sea la visión de alguien en particular, hay cosas indistinguibles que jamás podremos ver al ojo desnudo, como un
átomo por ejemplo, es por esto que herramientas como el microscopio son indispensables para apoyar nuestras
facultades.
El microscopio inició como un tubo con 2 lentes convexas ubicada una sobre la otra creado por una familia de
fabricantes de anteojos, Hans y Zacharias Janssen para luego de muchos ensayos y errores de diferentes científicos
e inventores a lo largo del tiempo, llega al primer microscopio compuesto mejorado, aquel que permitió ver células
y catalogarlas como tales por primera vez, el responsable fue Robert Hooke en el año 1665, personaje que
transcendió a la historia por tal hazaña al visualizar material biológico como el corcho a través de su propio invento,
el cual a día de hoy ha evolucionado no solo en una sino varias formas distintas de microscopía(2).
Algunas ejemplos de microscopia son: el microscopio compuesto es el más conocido y tiene como característica
particular una estructura con lentes oculares y lentes objetivos que forman el sistema óptico apoyado por un haz de
luz que atraviesa la muestra desde abajo con la ayuda de un condensador; por otro lado está el microscopio de
fluorescencia en dónde los elementos brillan debido a su unión con colorantes fluorescentes específicos apoyados
por una onda de luz específica; también está el microscopio electrónico, el más refinado de todos gracias a su gran
aumento y resolución de imagen, en este no hay incidencia de luz ya que es remplazada por un haz de electrones
que atraviesan la muestra para formar una imagen en el caso de la microscopía de trasmisión o la rodean con ayuda
de imanes para crear una imagen tridimensional de la muestra, que es el caso de la microscopía de barrido(1).
La microscopía es la práctica que permite al ser humano comprender la relación entre estructura y función (3), es
por esto que nuestra hipótesis consiste en que para obtener mayor resolución en muestras biológicas celulares se
necesita usar los objetivos de aumento 40x para observar mejores detalles
Objetivos
- Analizar y comprender de mejor manera el funcionamiento del microscopio óptico.
- Analizar qué contienen las muestras o que se puede observar tras el microscopio.
- Analizar e indagar sobre diferentes muestras ya sean permanentes o temporales.
- Analizar las muestras a través de diferentes aumentos lo que nos permitirá observar más detallado en cada una
de ellas.
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Materiales y métodos
Lo primero que se hizo fue encender la luz del microscopio, luego se colocó la letra “e” en el portaobjetos
(actividad 2), después este se sitúa en la platina y se asegura con las pinzas. Posteriormente, mirando a través del
ocular y con el tornillo macrométrico se enfoca el objeto, el cual se observó con el objetivo de aumento 10x,
ubicado en el revolver.
Para la siguiente actividad, el Frotis sanguíneo se prepara a través del método de fijación, el cual se utiliza para
preservar la morfología y la composición química de las células y luego esta se tiñe para contrarrestar las distintas
estructuras celulares. A continuación, se repite el mismo proceso de la actividad 2 en el microscopio, solo que
en este caso se usara el objetivo de aumento 40x, para esto el revolver se gira, enfocando en cada objetivo distinto,
hasta llegar al que se requiere. Después para enfocar el Frotis sanguíneo se usa el tornillo micrométrico, ya que
este acerca y aleja la platina del objetivo de manera muy sutil, obteniendo un enfoque más preciso, a diferencia
del macrométrico que mueve la platina notoriamente, por lo que para este tipo de aumento no se logra un enfoque
exacto.
A continuación para para la actividad 4 el catafilo de cebolla se obtuvo de un corte fino de un pedazo de cebolla
el cual fue preparado, puesto que se coloca una gota de agua en un portaobjetos, y en ella se ubica la lámina
cortada, la cual queda cubierta por el agua, luego este se tiñe y se cubre con un cubreobjeto para posteriormente
utilizarlo en el microscopio, donde la muestra se coloca en la platina para ser observado con el objetivo de
aumento 40x, por lo que se debe mover el revolver enfocando en cada objetivo, utilizando los tronillos
macrométrico y micrométrico
Luego se observa al microscopio una hoja de Elodea y en otra muestra un Protozoo, ambos se colocan en un
cubreobjetos para luego ser observadas en el microscopio con el objetivo de aumento 40x, para esto se repite el
mismo proceso mencionado anteriormente.
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Facultad de Ciencias de la Vida Departamento
de Ciencias Biológicas
Plantilla de Resultados Práctico “Microscopía”
Actividad 1
Tabla N° 1
Aumento (X) Apertura Numérica (NA)
4x 0,10
10x 0,25
40x 0,65
100x 1,25
Tabla N° 2
Aumento (X) Apertura Numérica (NA)
10x 18
Apertura numérica del condensador:
Apertura Numérica (NA)
1,25
La resolución máxima de su microscopio depende de la apertura numérica efectiva máxima que posea. Este
valor máximo corresponde normalmente al lente 100X o lente de inmersión. Observe ahora los siguientes
valores:
Apertura del lente 100X: 1,25
Apertura numérica del condensador: 1,25
Apertura numérica de la interfase de aire: 1,0
Apertura numérica de la interfase de aceite: 1,3 - 1,5
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La apertura numérica efectiva máxima es el valor más bajo de los anteriores. Utilizando este valor menor
de apertura numérica de trabajo y considerando λ=400 nm, calcule:
a) límite de resolución: 0,61 x 0,4 um = 0,20 um
1,25
b) Poder de resolución: 1,25 = 5,12 um
0,61 x 0,4 um
Actividad 2.
Título: Letra “e”
Dibujo N°: uno
Nombre: letra “e”
Tipo de muestra: permanente
Tinción: sin tinción
Aumento del objetivo: 10x
Aumento Total: 100x
Observaciones:
1) Se observan las fibras del papel, las cuales son alargadas y de
forma desordenada por todo el papel.
Letra “e” invertida
con tinta
2) Se visualiza relieve en la zona del papel con coloración
negra. Fibras del papel
3) La letra se observa invertida, esto como consecuencia del lente utilizado.
* Compare la orientación de la letra en su portaobjetos (preparación) y en su campo visual (lo que observa
a través del ocular del microscopio).
Se observa en el campo visual que la orientación de la imagen es al revés respecto a la posición real, esto debido
a que los objetivos (lentes) muestran una imagen real (invertida), ya que estos tienes una distancia focal muy
corta y además los rayos de luz reflejados por el objeto que se sitúa fuera de la distancia focal de lente, al pasar
por el objeto son refractados y enfocados en un plano que se ubica más allá de la cara opuesta del lente.
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Pregunta 1: ¿Hay algún cambio en la orientación de la letra al observar la muestra con el objetivo 40X?
No se observa un cambio en la orientación de la letra, sino que presenta un cambio en la resolución.
Actividad 3.
Dibujo N°: dos
Nombre: Frotis sanguíneo
Tipo de muestra: permanente
Tinción: Hematoxilina y eosina
Aumento del objetivo: 40x
Aumento Total: 400x
Observaciones:
1) Se observan diferencias en el tamaño de los
glóbulos rojos y glóbulos blancos ya que estos
son de mayor tamaño que los eritrocitos.
2) Se visualizan los glóbulos rojos y blancos con una
Glóbulos blancos
forma circular. con sus núcleos
3) Los glóbulos blancos son los únicos glóbulos con
núcleo. Glóbulos rojos
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Actividad 4.
Título: Muestras temporales
Dibujo N°: uno
Nombre: Catafilo de cebolla
Tipo de muestra: temporal
Tinción: con Lugol
Aumento del objetivo: 40x
Célula
Aumento Total: 400x
Observaciones:
1) En la imagen se observa varios núcleos en los
bordes de las paredes celulares.
2) Se visualiza que las células tienen forma de
paralelepípedos irregulares unidos uno al lado de otro.
Núcleo
3) Gracias a la tinción con Lugol se puede apreciar de
mejor manera los núcleos
Pared celular
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Dibujo N°: dos
Nombre: Elodea
Tipo de muestra: temporal
Tinción: sin tinción
Aumento del objetivo: 40x
Aumento Total: 400x
Observaciones:
1) Se visualiza que los cloroplastos se encuentran la mayoría
en los bordes de cada célula.
2) Las células tienen forma de rectángulos irregulares.
célula
3) No se visualiza el núcleo.
cloroplastos
Pared celular
Dibujo N°: tres
Nombre: Protozoo
Tipo de muestra: temporal
Tinción: sin tinción
Aumento del objetivo: 40x
Aumento Total: 400x
Observaciones:
1) Se visualiza la estructura intracelular con formas
circulares que parecen vesículas.
2) Tiene forma ovalada y alargada con un color verde
(sin tinción).
4) El organismo está vivo y presenta movilidad.
Organelos
Membrana plasmática
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Bibliografía
1. Alfaro, J. et al. (2004). Laboratorio de microbiología instrumentación y principios básicos (1.a ed.).
Ciencias medicas
2. Lera, S. R. M. (2015). Historia del microscopio y su repercusión en la Microbiología. Scielo.
http://scielo.sld.cu/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1727-81202015000200010
3. Gartner y Hiatt. (2015). Histología básica (1.a ed.). Elsevier Saunders.
