Escuela Agrícola Panamericana, Zamorano

Departamento de Ciencia y Producción Agropecuaria

Ingeniería Agronómica

Proyecto Especial de Graduación

Multiplicación in vitro de plátano (Musa × paradisiaca L.)

Estudiantes
Elian Joel Gálvez López
Jaime Gabriel Elizalde Ochoa
Asesoras
María Alexandra Bravo, [Link].
Cinthya Martínez, MAE.

Honduras, julio 2021

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Autoridades

TANYA MÜLLER GARCÍA

Rectora

ANA MARGARITA MAIER ACOSTA

Vicepresidenta y Decana Académica

ROGEL CASTILLO
Director Departamento de Ciencia y Producción Agropecuaria

HUGO ZAVALA MEMBREÑO

Secretario General
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Contenido

Índice de Cuadros.................................................................................................................................... 5

Índice de Figuras ..................................................................................................................................... 6

Resumen ................................................................................................................................................. 7

Abstract ................................................................................................................................................... 8

Introducción ............................................................................................................................................ 9

Materiales y Métodos ........................................................................................................................... 12

Ubicación .............................................................................................................................................. 12

Obtención Del Material Vegetal a Utilizar ............................................................................................ 12

Establecimiento In Vitro De Meristemos Apicales ................................................................................ 12

Método De Desinfección ...................................................................................................................... 13

Preparación, Siembra Y Manejo Del Material Vegetal ......................................................................... 13

Medio de Cultivo Para La Etapa De Establecimiento ............................................................................ 14

Tratamientos ......................................................................................................................................... 15

Multiplicación ....................................................................................................................................... 16

Incubación ............................................................................................................................................. 16

Variable Evaluada.................................................................................................................................. 16

Diseño Experimental ............................................................................................................................. 17

Análisis Estadístico ................................................................................................................................ 17

Resultados y Discusión .......................................................................................................................... 18

Establecimiento .................................................................................................................................... 18

Fase De Multiplicación .......................................................................................................................... 19

Conclusiones ......................................................................................................................................... 22
 4

Recomendaciones ................................................................................................................................. 23

Referencias............................................................................................................................................ 24
 5

Índice de Cuadros

Cuadro 1 Medio de cultivo Murashige y Skoog (MS) para establecimiento de meristemos de plátano

Musa × paradisiaca L. ([Link] enano) ............................................................................................. 15

Cuadro 2 Tratamientos evaluados en el establecimiento in vitro de meristemos de plátano Musa ×

paradisiaca L. (variedad Curare enano) ................................................................................................ 16

Cuadro 3 Medio de cultivo Murashige y Skoog (MS) modificado para multiplicación in vitro de

meristemos de plátano Musa × paradisiaca L. ([Link] enano)....................................................... 17

Cuadro 4 Promedio de brotes por meristema de plátano establecido in vitro como respuesta a AIA y

BAP ........................................................................................................................................................ 20
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Índice de Figuras

Figura 1. Proceso de reducción: A) Cormo de plátano traído de campo, B) Primera reducción del cormo

previo su ingreso al laboratorio, C) Segunda reducción del cormo para realizar desinfección ........... 13

Figura 2. Cortes de reducción para Proceso de establecimiento: A) Última reducción del explante, B)

Explante listo para su establecimiento luego de la última reducción, C) Meristemo apical establecido

in vitro en medio de cultivo estéril ....................................................................................................... 14

Figura 3. Desarrollo según dosis: A) Tratamiento B4, B) Tratamiento A, C) Tratamiento T, D)

Tratamiento B7A ................................................................................................................................... 21

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Resumen

La propagación in vitro tiene una alta demanda hoy en día, exige una optimización de recursos a fin

de producir de manera eficiente. El objetivo del presente proyecto fue determinar la dosis adecuada

de auxinas y citoquininas o, su combinación en la etapa de establecimiento y su efecto en la

producción del número de brotes por explante durante la fase de multiplicación de plátano. La

variable evaluada fue el número de brotes por explante, se utilizó un diseño completamente al azar

(DCA). Para el experimento se establecieron meristemas de plátano en el medio de cultivo de

Murashige y Skoog (MS), suplementado con ácido indoleacético (AIA) y 6-bencilaminopurina (BAP).

Se evaluaron 12 tratamientos: Un tratamiento testigo (sin hormonas), cinco dosis de BAP (4, 5, 6, 7, 8

mg/L), cinco dosis de BAP (4, 5, 6, 7, 8 mg/L) combinadas con AIA 0.2 mg/L, y un tratamiento con AIA

0.2 mg/L, se realizaron 30 repeticiones por tratamiento. El medio de cultivo se refrescó cada 21 días

en todos los tratamientos por dos ocasiones en la misma formulación de establecimiento. Al día 63

todos los meristemas establecidos se transfirieron a medio de multiplicación MS suplementado con 4

mg/L BAP. Los mejores resultados se obtuvieron en el medio suplementado con 4 mg/L de BAP sin

AIA, con un promedio de 8.07 brotes por explante a los 147 días de haber iniciado la etapa de

multiplicación. Los tratamientos testigo con y 0.2 mg/L de AIA, mostraron una disminución en la

emisión de botes en cada subcutivo. Se concluye que el mayor número de brotes se obtuvo

suplementado el medio de establecimiento con 4 mg/L de BAP.

Palabras clave: Micropropagación, in vitro, auxinas, citoquininas, medio de cultivo.

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Abstract

In vitro propagation is in high demand today, it requires optimization of resources to produce

efficiently. The objective of this project was to determine the adequate dose of auxins and cytokinins,

or their combination in the establishment stage and their effect on the production of the number of

shoots per explant during the banana multiplication phase. The variable evaluated was the number of

shoots per explant, a completely randomized design (DCA) was used. For the experiment, banana

meristems were established in the culture medium of Murashige and Skoog (MS), supplemented with

indoleacetic acid (IAA) and 6-benzylaminopurine (BAP). Twelve treatments were evaluated: A control

treatment (without hormones), five doses of BAP (4, 5, 6, 7, 8 mg / L), five doses of BAP (4, 5, 6, 7, 8

mg / L) Combined with AIA 0.2 mg / L, and a treatment with AIA 0.2 mg / L, 30 repetitions were

performed per treatment. The culture medium was refreshed every 21 days in all treatments on two

occasions in the same establishment formulation. At day 63 all established meristems were

transferred to MS multiplication medium supplemented with 4 mg / L BAP. The best results were

obtained in the medium supplemented with 4 mg / L of BAP without IAA, with an average of 8.07

shoots per explant 147 days after starting the multiplication stage; The control treatments with and

0.2 mg / L of IAA, showed a decrease in the emission of cans in each subcutaneous. It is concluded

that the highest number of shoots was obtained by supplementing the establishment medium with 4

mg / L of BAP.

Keywords: Micropropagation, in vitro, auxins, cytokinins, culture media.

 9

Introducción

El origen de las musáceas es el sureste asiático. Se cree que el genoma Balbisiana se originó

en la costa este de la India y el genoma Acuminata en la costa este de lo que actualmente es Malasia,

Tailandia y Myanmar (Mejía Calderón 2018). El Musa x paradisiaca (plátano) (SIPSA 2014). Constituye

una importante fuente de carbohidratos y contribuye a la seguridad alimentaria de millones de

personas en África, el Caribe, Latinoamérica, Asia y el Pacífico (Roldán et al. 2002).

A nivel mundial, el plátano representa importantes rubros en términos económicos para la

mayoría de los países productores, puesto que generan ingresos de divisas y constituyen fuentes

permanentes y transitorias de trabajo para una parte de la población. Además, contribuyen con la

seguridad y soberanía alimentaria de países en vía de desarrollo, ya que son alimentos básicos en la

dieta diaria de millones de personas, tanto como alimento fresco, de cocción y procesado, ya que

junto a las raíces y tubérculos aportan alrededor del 40% de la oferta de alimentos ricos en energía

(Ormaza Rodríguez 2017).

El plátano se propaga por medio de material vegetativo denominado colinos, cormos, cepas

o hijos; es la principal vía de transmisión de las características genéticas deseables, sin embargo, este

también es el método más eficiente para la diseminación de plagas y enfermedades que hacen que el

cultivo pierda rentabilidad y calidad (Palencia et al. 2006). El ‘hijo’, separado de la planta madre, cuyo

punto de crecimiento central da lugar a la nueva planta y en el que todas las yemas axilares han sido

eliminadas (Robinson y Galán Saúco 2012).

La micropropagación o propagación clonal in vitro, que se realiza a través del cultivo en

ambiente controlado de un fragmento de una planta madre llamado explante. Con este

procedimiento se obtiene una descendencia uniforme, es decir, plantas genéticamente idénticas, a

las cuales se les denominada clones (Quintanilla Moreno 2014). La propagación in vitro de plátano

generalmente se la realiza mediante meristemos apicales extraídos de los cormos, debido a que estos
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tienen un crecimiento longitudinal y también por su totipotencia. Los meristemos se establecen en un

medio de cultivo adecuado donde puede crecer una nueva planta (Ortega et al. 2010).

La composición básica de los medios de cultivo incluye sales minerales, una fuente de

carbohidratos, un suplemento vitamínico y la dosis específica de reguladores de crecimiento que

requiera cada fase del proceso y método de micropropagación empleado y, en caso necesario, un

agente gelificante que proporcione un soporte físico al material vegetal en cultivo (Galan et al. 2018).

Para el caso específico del género Musa se han investigado varios medios. Sin embargo, el de mejores

resultados es el basal de Murashige y Skoog, en ocasiones modificado. Algunos investigadores

incluyen antioxidantes como cisteína, ácido cítrico o ácido ascórbico. Además, se usan

frecuentemente los medios de consistencia semisólida en vez de líquidos. Habitualmente se incluyen

los reguladores de crecimiento tipo auxinas y citocininas (Sandoval et al. 1991).

Los reguladores de crecimiento vegetal son compuestos sintetizados químicamente u

obtenidos de otros organismos, son similares a las fitohormonas y cumplen un papel importante en la

regulación de diferentes procesos bioquímicos a nivel celular en los organismos vegetales (Alcantara

Cortes et al. 2019). Las auxinas participan en todos los procesos de desarrollo de las plantas y, a nivel

celular, intervienen en los procesos de división, elongación y diferenciación celular. Una de las

características más sobresalientes de esta fitohormona es que está distribuida diferencialmente entre

células y tejidos; en algunos casos se acumula localmente en una célula o un grupo de células, en otros

cambia su distribución entre células y, finalmente, también puede tener una distribución diferencial

en los tejidos vegetales (Garay-Arroyo et al. 2014).

Las citoquininas fueron descubiertas en la década de 1950 como factores que promueven la

proliferación celular y mantienen el crecimiento de tejidos vegetales cultivados in vitro. Poco después

de su descubrimiento Skoog y Miller propusieron que la formación de órganos en las plantas se debe

al balance existente entre las citoquininas y las auxinas. Usando cultivos de tabaco, demostraron que

un balance alto de auxinas favorecía la formación de raíces, mientras que un balance alto de
 11

citoquininas favorecía la formación de tallos (Mok D y Mok M 2001). El objetivo del estudio fue

determinar la dosis adecuada de auxinas y citoquininas o su combinación en la etapa de

establecimiento y su efecto en el número de brotes por explante durante la fase de multiplicación.

 12

Materiales y Método

Ubicación

El estudio se realizó en el Laboratorio de Cultivo de Tejidos Vegetales, del Departamento de

Ciencia y Producción Agropecuaria, Escuela Agrícola Panamericana, Zamorano, situado en el kilómetro

30 carretera Tegucigalpa Danlí, Valle del Yeguare, municipio de San Antonio del Oriente, Francisco

Morazán, Tegucigalpa, Honduras.

Obtención Del Material Vegetal a Utilizar

Para este estudio se utilizó la variedad Curaré enano, el cual tiene mayor aceptación en el

mercado y, tiene mayores rendimientos en campo en comparación a otras variedades, los meristemos

apicales fueron extraídos de cormos de hijuelos de la plantación de plátano, ubicada en el lote Zorrales

de la Escuela Agrícola Panamericana, Zamorano.

Establecimiento In Vitro De Meristemos Apicales

Se seleccionaron 360 cormos utilizando como criterio, una altura de 30 cm y 20 cm de

diámetro, que no presentaran daño mecánico, ni síntomas de enfermedades. Una vez clasificados, se

procedió a la reducción, este procedimiento consistió en realizar cortes longitudinales y transversales

de hojas superficiales y raíces, hasta conseguir aproximadamente un explante de 5 cm de ancho y 9

cm de altura, eliminando material muy expuesto al ambiente y acercándose a un material más sano,

previo su ingreso al laboratorio (Figura 1).

A continuación, se ingresó el material al laboratorio para hacer una segunda reducción, se

utilizó una solución de cloro durante el proceso desinfectar superficialmente el material vegetal, a

medida que se fue eliminando tejido superficial no deseado, hasta conseguir un explante de 2 cm × 5

cm. Ffinalmente, se colocó en el medio de cultivo estéril un meristema apical con forma cilíndrica con

tejido blanco e ileso (Figura 1).

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Figura 1

Proceso de reducción: A) Cormo de plátano traído de campo, B) Primera reducción del cormo previo

su ingreso al laboratorio, C) Segunda reducción del cormo para realizar desinfección

A B C

Método De Desinfección

Para la desinfección del material vegetal en el laboratorio se realizó un lavado con una

solución de agua y jabón durante un minuto, después se hizo una desinfección con una solución de

cloro comercial al 0.50% v/v (NaOCl 4.72% de ingrediente activo), más 2 gotas del surfactante Tween®

80 por cada 100 ml de solución, durante 15 minutos siguiendo el protocolo detallado por Cronauer y

Krikorian (1984).

Preparación, Siembra Y Manejo Del Material Vegetal

El proceso de siembra comenzó con la desinfección del material vegetal, para luego ingresar

a las cámaras de flujo laminar. La cámara y el esterilizador de calor seco fueron encendidos 30 minutos

antes de iniciar el trabajo, la superficie del mesón de la cámara de flujo laminar se desinfectó con

alcohol al 70%. Además, se esterilizaron los instrumentos a utilizar, un par de pinzas y bisturí,

insertándolos 30 - 60 segundos en el esterilizador de calor seco a una temperatura de 250 - 300 °C.

A continuación, se ingresó el material vegetal sumergido en la solución desinfectante a la

cámara de flujo laminar, la solución se decantó y se realizó tres enjuagues con agua destilada estéril

para remover los restos de la solución desinfectante. Se utilizó papel estéril como base en el proceso
 14

de corte para evitar cualquier tipo de contaminación por contacto con el mesón de la cámara. Se hizo

una última reducción de los explantes, haciendo cortes alrededor del mismo hasta conseguir un

explante de 0.5 cm ancho y 1cm de altura, conteniendo el meristemo apical (Figura 2). Se colocaron

los meristemos en el medio de cultivo estéril, uno por contenedor.

Figura 2

Cortes de reducción para Proceso de establecimiento: A) Última reducción del explante, B) Explante

listo para su establecimiento luego de la última reducción, C) Meristemo apical establecido in vitro en

medio de cultivo estéril

A B C

Medio de Cultivo Para La Etapa De Establecimiento

Se utilizó medio de cultivo base de Murashige y Skoog (MS) (Cuadro 1). Además, se

adicionaron la auxina, ácido indoleacético (AIA) y la citoquinina, 6-bencilaminopurina (BAP) según el

tratamiento evaluado. Se utilizó el equipo pHep® para medir el pH y se ajustó hasta 5.8 con el uso de

hidróxido de potasio (KOH 1M) y ácido clorhídrico (HCL 1N). Como agente gelificante se utilizó

Phytagel® 1.8 g/L. Se colocó 20 mL de medio de cultivo por frasco de 100 mL, se tapó con papel

aluminio y se esterilizó en el autoclave a 1 Kg/cm², durante 20 minutos a 121°C. Los meristemas

permanecieron en medio de establecimiento durante 63 días. Cada 21 días se realizó refrescamiento

de medio de cultivo y se eliminó el tejido fenolizado, al medio de refrescamiento se le adicionó glicina

2 mg/L y L-cisteína 2 mg/L como antioxidante.

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Cuadro 1

Medio de cultivo Murashige y Skoog (MS) para establecimiento de meristemos de plátano Musa ×

paradisiaca L. ([Link] enano)

Componentes Fórmula Nombre común mg/L

Macroelementos NH4NO3 Nitrato de amonio 1650
KNO3 Nitrato de potasio 1900
MgSO4.7H2O Sulfato de magnesio heptahidratado 370
CaCl₂.2H2O Cloruro de calcio bihidratado 440
KH2PO4 Fosfato monobásico de potasio 170
Microelementos H3BO3 Ácido bórico 6.2
CoCl2.6H2O Cloruro de cobalto hexahidratado 0.025
CuSO4.5H2O Sulfato de cobre pentahidratado 0.025
KI Yoduro de potasio 0.83
MnSO4.4H2O Sulfato de manganeso tetrahidratado 22.3
Na2MoO4.2H2O Molibdato de sodio bihidratado 0.25
ZnSO4.7H20 Sulfato de zinc heptahidratado 8.6
FeNa EDTA Hierro Sodio Etilendiaminotetraacético 50
Vitaminas Inositol 100
Tiamina 0.1
Piridoxina 0.5
Ácido Nicotínico 0.5
Carbohidratos Sacarosa 30000
Nota. Tabla obtenida en (Hoyos et al. 2008)

Tratamientos

Se establecieron 12 tratamientos combinando la citoquinina BAP (6-bencilaminopurina) que

promueven la proliferación celular y crecimiento de tejido vegetal, y la auxina AIA (ácido indolacético)

producen un alargamiento y crecimiento celular, un tratamiento sin hormonas y otro con 0.2mg/L de

AIA (Cuadro 2). La formación de órganos se debe a un balance adecuado entre ambas hormonas, por

lo que, se busca la efectividad en el método de propagación evaluando diferentes concentraciones

para la inducción y obtención de altas tasas de brotes viables.

 16

Cuadro 2

Tratamientos evaluados en el establecimiento in vitro de meristemos de plátano Musa × paradisiaca

L. (variedad Curare enano)

6-bencilaminupurina (BAP) Ácido indolacético (AIA)

Tratamientos mg/L mg/L
T 0 0
B4 4 0
B5 5 0
B6 6 0
B7 7 0
B8 8 0
A 0 0.2
B4A 4 0.2
B5A 5 0.2
B6A 6 0.2
B7A 7 0.2
B8A 8 0.2

Multiplicación

A los 63 días del establecimiento, los meristemos fueron transferidos a medio de

multiplicación (Cuadro 3). Se separaron los brotes axilares formados de los tejidos meristemáticos, y

se colocaron individualmente en frascos. Cada 21 días se realizó refrescamiento de medio de cultivo,

se eliminó el tejido fenolizado y se separaron los brotes axilares formados

Incubación

En las fases de establecimiento y multiplicación los cultivos se colocaron en el cuarto de

crecimiento a 25 °C, con una intensidad lumínica de 2000 Lux por lámparas fluorescentes, radiación

fotosintéticamente activa de 40 µmol/m2/segundo, foto periodo de 16 horas luz y una humedad

relativa del 50%, los cuales fueron mantenidas en todo momento hasta finalizar el experimento.

Variable Evaluada

La variable evaluada en el experimento fue el número de brotes por meristemo.

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Cuadro 3

Medio de cultivo Murashige y Skoog (MS) modificado para multiplicación in vitro de meristemos de

plátano Musa × paradisiaca L. ([Link] enano)

Componentes Fórmula Nombre común mg/L

Macroelementos NH4NO3 Nitrato de amonio 1650
KNO3 Nitrato de potasio 1900
MgSO4.7H2O Sulfato de magnesio heptahidratado 370
CaCl₂.2H2O Cloruro de calcio bihidratado 440
KH2PO4 Fosfato monobásico de potasio 170
Microelementos H3BO3 Ácido bórico 6.2
CoCl2.6H2O Cloruro de cobalto hexahidratado 0.025
CuSO4.5H2O Sulfato de cobre pentahidratado 0.025
KI Yoduro de potasio 0.83
MnSO4.4H2O Sulfato de manganeso tetrahidratado 22.3
Na2MoO4.2H2O Molibdato de sodio bihidratado 0.25
ZnSO4.7H20 Sulfato de zinc heptahidratado 8.6
FeNa EDTA Hierro Sodio Etilendiaminotetraacético 50
Vitaminas Inositol 100
Tiamina 0.5
Piridoxina 0.5
Ácido Nicotínico 0.5
Aminoácidos Glicina 2
Antioxidante L-Cisteína 2
Reguladores Citoquinina Bencialminopurina 4
Carbohidratos Sacarosa 30000
Nota. Tabla obtenida en (Hoyos et al. 2008)

Diseño Experimental

Se usó un diseño completamente al azar (DCA) los tratamientos evaluados fueron 12, seis

dosis de BAP (0, 4, 5, 6, 7, 8 mg/L) combinadas con AIA 0.2 mg/L o sin AIA. Se evaluaron 12

tratamientos con 30 repeticiones por tratamiento, para un total de 360 unidades observacionales.

Análisis Estadístico

Se utilizó un análisis de varianza con separación de medias por el método Duncan, con una

probabilidad ≤ 0.05.
 18

Resultados y Discusión

Establecimiento

A los 29 días de establecido el cultivo se observó el primer frasco contaminado, según

Hernández y González (2010), la contaminación en los cultivos in vitro puede tener dos orígenes:

microorganismos que colonizan la superficie o el interior del explante (endófitos) y, microorganismos

introducidos durante la manipulación en el laboratorio. Al finalizar el experimento se tuvo una tasa

de contaminación del 7.5% y, una tasa de mortalidad del 3.3%. La contaminación microbiana es uno

de los problemas más graves en la micropropagación de especies vegetales a nivel mundial, produce

cuantiosas pérdidas de material, tanto en los trabajos de investigación como en la micropropagación

comercial. Existen varios factores involucrados en la contaminación del material, por lo que se debe

obtener un material que no se encuentre expuesto a un ambiente totalmente vulnerable a

enfermedades y contaminaciones o extraído de campo, siendo este un factor que compromete a la

sanidad del cultivo al establecerlo en in vitro, ya que su trazabilidad va a repercutir en la sobrevivencia

y tasa de contaminación, representando una pérdida de material en el proceso de la investigación.

En algunos casos el porcentaje de mortalidad está relacionado a errores que comete el

operario, tales como, el mal seguimiento de los protocolos durante el establecimiento, refrescamiento

y multiplicación. Los cortes realizados en los explantes provocan la liberación de compuestos

fitotóxicos, oxidando el medio de cultivo en donde se desarrolla el tejido (Chavarría Castillo y López

Montenegro 2010). Al momento de extraer los ápices como material vegetativo, existe un incremento

en la liberación fenólica, según Chavarría Castillo y López Montenegro (2010) mencionan que los

ápices provenientes de campo incrementan la producción de fenol en la fase de establecimiento.

Como es el caso del plátano, los taninos y otros hidroxifenoles se encuentra naturalmente en esta

planta, influyendo en la senescencia del este cultivo (Castro Sobalvarro y Maradiaga Sarantes 2015).

Además, en los resultados de Caldera Caldera y López Ruiz (2002) , reflejaron que, en el medio de

cultivo sin reguladores de crecimiento, los tejidos segregaron fenoles, pero no se difundieron en el
 19

medio; mientras que a las variantes que contenían combinaciones de AIA y BAP, la producción de los

ápices incrementó. Durante la fase de establecimiento no se observó formación de brotes axilares en

ninguno de los tratamientos .

Fase De Multiplicación

Se observó formación de brotes en todos los tratamientos a los 63 días de haber iniciado la

etapa de multiplicación, sin embargo, no hubo diferencia entre ellos, ya que hubo una similar emisión

de brotes entre ellos, y una baja formación de brotes axilares debido a que recién estaban expresando

la formación de brotes axilares con relación a las concentraciones de hormonas a las que fueron

establecidas.

Después de 105 días del inicio de la fase de multiplicación, el tratamiento con 6 mg/L de BAP

presentó el mayor número de brotes por explante. Además, la media de brotes en el tratamiento 5

mg/L de BAP disminuyó de 1.86 a 0.90 brotes por explante, esto se lo podemos atribuir a la

contaminación del material y a la muerte de explantes por el mal seguimiento del protocolo al realizar

un refrescamiento de medio, inclusive a consecuencia de la oxidación del cultivo.

Después de 126 días, el mayor número de brotes se obtuvo en el tratamiento 5mg/L BAP con

0.2mg/L AIA. Estudios realizados por Hoyos et al. (2008), indican que al establecer una dosis de 5 mg/L

de BAP y 0.2 mg/L de AIA obtuvieron una media de brotes de 5.50, el cual se relaciona con la cantidad

obtenida en el tratamiento de 5 mg/L de BAP + 0.2 mg/L de AIA con un resultado de 5.79, dando a

justificar y superando la cantidad de brotes obtenida con relación al experimento antes mencionado.
 20

Cuadro 4

Promedio de brotes por meristema de plátano establecido in vitro como respuesta a AIA y BAP

Días en multiplicación
Tratamiento
63 105 126 147
n.s. d¥ d
T 1.57 1.00 1.33 1.50b
B4 1.80 1.29cd 4.87abc 8.07a
d abcd
B5 1.86 0.90 2.73 5.36ab
B6 1.54 2.12a 3.00abcd 4.75ab
B7 1.25 1.40bcd 2.22bcd 4.50ab
B8 1.81 1.07d 3.47abcd 7.21a
d d
A 1.00 1.14 1.14 1.00b
B4A 1.60 1.29cd 5.25ab 7.30a
B5A 1.67 1.51bcd 5.79a 7.31a
B6A 1.59 1.28cd 2.13bcd 5.00ab
abc abcd
B7A 2.20 1.87 3.10 7.60a
B8A 1.50 1.89ab 1.88cd 4.75ab
% CV 3.95 3.04 10.21 13.18
Probabilidad 0.5465 < 0.0001 0.0027 0.0169

A los 147 días, el tratamiento con 4mg/L BAP presentó el mayor número de brotes (8.07 brotes

por explante), además el tratamiento testigo presento una disminución en el número de brotes debido

a la perdida por contaminación y muerte de material. El balance auxinas-citoquininas es determinante

en el coeficiente de multiplicación, por lo que al lograr un balance adecuado es posible alcanzar

elevadas tasas de proliferación aumentando la efectividad del método de micropropagación (Téllez et

al. 2011), como es el caso del tratamiento de 7 mg/L de BAP con 0.2 mg/L de AIA, que tiene un

promedio de 7.60 brotes por explante, siendo este un buen balance entre hormonas para lograr

mejores resultados, a pesar de que no es el mejor tratamiento (Cuadro 4).

Los tratamientos testigo (sin fitohormonas) y 0.2 mg/L AIA presentaron el menor número de

brotes entre todos los tratamientos, además, fue evidente que la emisión de brotes disminuyó en

cada subcultivo en el medio de cultivo sin adición de AIA y BAP, debido a la ausencia, insuficiencia en

la síntesis endógena de reguladores de crecimiento o, ineficiencia en el suministro de fitohormonas

que promuevan el crecimiento, elongación y formación de brotes, siendo así, fundamental el

 21

requerimiento de hormonas para la obtención de un alto coeficiente de multiplicación, un alto

contenido de citoquininas puede generar un incremento en la formación de brotes y, acompañado

con auxinas para un incremento y desarrollo de tejido vegetal, al suministrar una concentración ideal

entre ambas hormonas en un medio de cultivo se podría acelerar y mejorar el crecimiento vegetal.

Figura 3

Desarrollo según dosis: A) Tratamiento B4, B) Tratamiento A, C) Tratamiento T, D) Tratamiento B7A

A B C D
 22

Conclusión

Se determinó que para obtener el mayor número de brotes por explante en la fase de

multiplicación, se debe suplementar al medio de establecimiento con 4 mg/L de BAP, siendo esta una

concentración que excluye el uso de otras hormonas y obteniendo el mayor número de brotes

axilares, con relación a los tratamientos que presentaron resultados estadísticamente similares, pero

haciendo uso de las AIA y BAP.

 23

Recomendaciones

Se recomienda continuar con las fases de enraizamiento, aclimatación y llevar las plantas a

campo. Así mismo, se recomienda tomar en consideración el origen del material vegetal, ya que,

podría ser un factor que influye en la contaminación y pérdida de tejido durante el experimento.

Además, se recomienda evaluar la disminución del uso de hormonas al suplementarlo en el medio de

cultivo, con el fin de minimizar costos en la producción de plantas por medio de la propagación in vitro

y obteniendo altas tasas de proliferación.

 24

Referencias

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