Reporte del Laboratorio de Operaciones Unitarias II
Práctica 3. ‘’Lisis celular’’
Jesus Yarely Milagros Hernandez Solorio.| Andreé Velázquez Maro.| Michel Teresa Gutierrez Osuna.|
Jazmin Alejandra Gonzalez Martinez.| Anna Maria Rivera Borbon.| Melanie Guadalupe Posada
Esquer.| Lluvia Irene Calvillo Flores.| Vannia Jocelyn Figueroa Cadena.| Roxana Gabriela Samaniego
Flores. | Julia Joanna Díaz Palma.
Instituto Tecnológico de Sonora. Cd. Obregón, Sonora, México.
Introducción. La lisis celular es la rotura colocó la suspensión celular en forma de
de la membrana celular. El cual todas las pasta, previamente separadas del caldo y
células contienen una membrana que está resuspendidas en 5 ml de SDS en un tubo
compuesta de fosfolípidos que separan el de vidrio, se puso en agitación durante 30
contenido celular del ambiente extracelular. minutos, cada 5 minutos se observó al
Los fosfolípidos son anfipáticos y tienen microscopio para verificar el grado de
embebidas las proteínas de membrana. La ruptura celular y se tomaron fotografías
naturaleza de los lípidos y las proteínas como evidencia de resultados.
varía dependiendo del tipo de célula.La
técnica escogida para la ruptura celular
tiene que considerar el origen del tejido Resultados y discusión. En la figura 1 y 2
para evaluar su facilidad o dificultad de se observan los frotis en fresco de las
destrucción. Además el método debe ser suspensiones de levaduras para la lisis
compatible con la cantidad de material que celular con detergente, en la figura 2 está
será procesado y las aplicaciones de este. suspendida en SDS. En la figura 3 y 4 se
(Durán. et al., 2003). observan los frotis frescos de la suspensión
Objetivo. Evaluar los métodos físicos, en la tanto de lisis con detergente y con perlas a
eficiencia de rompimiento celular para la los 10 minutos. En la figura 5 y 6 se
extracción de metabolitos intracelulares de observan los frotis frescos de la suspensión
interés. tanto de lisis con detergente y con perlas a
los 15 minutos. En la figura 7 y 8 se
muestran los frotis frescos de la suspensión
Metodología. La metodología se realizó en tanto de lisis con detergente como con
base a el manual de prácticas del perlas a los 15 minutos. En la figura 9 y 10
Laboratorio de Operaciones Unitarias II del se presentan los frotis frescos de lisis con
Instituto Tecnológico de Sonora; se preparó detergente y con perlas a los 20 minutos. En
una suspensión de levadura, en la cual se la figura 11 y 12 se presentan los frotis de
vertió un sobre de levadura liofilizada en un las lisis con detergente y con perlas a los 25
matraz Erlenmeyer con 250 ml de agua minutos. En la figura 13 y 14 se observan
destilada y 1 g de sacarosa, a una los frotis frescos de la suspensión tanto de
temperatura de 26 a 30 °C. Para el lisis con detergente como con perlas a los
rompimiento con perlas de vidrio, se 30 minutos. Se observa en la lisis con
preparó un frotis fresco de la suspensión de detergente y en la lisis con perlas que con el
células y se observó que todas las células paso del tiempo más células presentan
estuvieran completas. Se adiciono 1 ruptura en su membrana celular.
volumen de bolas de vidrio al tubo y se
adiciono 1 volumen de células de levadura
a desintegrar (en forma de pasta,
previamente separadas del caldo por
filtrado en papel filtro. Se adiciono 0.5
volumen de buffer y se agitó fuertemente en
un vortex, durante 30 minutos, observando
las células cada 5 minutos. Para el
rompimiento celular con agente surfactante
se preparó un frotis fresco de la suspensión
de células y se observó al microscopio. Se
Figura 1. Frotis fresco de la suspensión 40X para Figura 4. Frotis fresco de la suspensión; lisis con
lisis con detergente. perlas a los 5 minutos.
Figura 5. Frotis fresco de la suspensión; lisis con
Figura 2. Frotis fresco de la suspensión 40X con detergente a los 10 minutos.
SDS.
Figura 3. Frotis fresco de la suspensión; lisis con Figura 6. Frotis fresco de la suspensión; lisis con
detergente a los 5 minutos. perlas a los 10 minutos.
Figura 7. Frotis fresco de la suspensión; lisis con
Figura 10. Frotis fresco de la suspensión; lisis con
detergente a los 15 minutos.
perlas a los 20 minutos.
Figura 8. Frotis fresco de la suspensión; lisis con
perlas a los 15 minutos. Figura 11. Frotis fresco de la suspensión; lisis con
detergente a los 25 minutos.
Figura 9. Frotis fresco de la suspensión; lisis con
detergente a los 20 minutos. Figura 12. Frotis fresco de la suspensión; lisis con
perlas a los 25 minutos.
Conclusión. La comparación entre la
suspensión de levadura sin someterse a los
métodos de rompimiento celular y la que sí
fue tratada nos permite ver cómo al exponer
a las células a un estrés físico estas se
rompen liberando así los contenidos
intracelulares, también es posible la
liberación de orgánulos celulares. Es
importante estudiar los métodos de ruptura
celular porque es necesario seleccionar el
adecuado de acuerdo a nuestro
microorganismo y el producto que
deseamos obtener de la lisis.
Figura 13. Frotis fresco de la suspensión; lisis con
Referencias bibliográficas.
detergente a los 30 minutos.
Aras S., A. Duran y G. Yenilmez. 2003.
Isolation of DNA for RAPD analysis from
dry Leaf material of some Hesperis L.
Specimens. Plant Molecular Biology.
Relat, J. M. (2010). Introducción a la
investigación básica. Centro de
investigación biométrica, 221, 227.
López Sánchez, M. F., & Ureña Búrquez, L.
A. (2016). Estudio de la cinética de
rompimiento de E-coli para recuperación de
plásmido en un molino de perlas.
Universidad de Sonora.
Figura 14. Frotis fresco de la suspensión; lisis con
perlas a los 30 minutos.
Los medios de lisis que contienen
detergentes suaves facilitan la disrupción de
la membrana celular e inhibidores de
proteasas lo cual previene la degradación de
proteínas de interés (Relat, 2010). Si
hablamos de métodos mecánicos se ha
demostrado que, con algunos equipos, tales
como el molino de perlas, se puede llegar a
obtener hasta un 90% de liberación (López
Sánchez & Ureña Búrquez, 2016).
