INFORME 8. FOTOSÍNTESIS Y PIGMENTOS VEGETALES.
Tatiana Mora (222037007), Vanesa Mora (222035050) Francy Ortiz (222035013).
Grupo 5, Laboratorio de biología general, Departamento de biología, Facultad de
Ciencias Exactas y naturales, Universidad de Nariño
[email protected] 01/10/2022
RESUMEN
El tema a desarrollar es la extracción y separación de los pigmentos vegetales
presentes en una muestra de espinaca, empleando el método de cromatografía,
que es una técnica que permite la separación de las sustancias de una mezcla y
que tienen una afinidad diferente por el disolvente en que se encuentran. De tal
manera que al introducir una tira de papel en esa mezcla el disolvente éter etílico
que arrastra con distinta velocidad a los pigmentos según la solubilidad que tengan
y los separa, permitiendo identificarlos perfectamente según su color, dando lugar
a cuatro manchas verde oscuro, verde claro, amarillo y anaranjado.
OBJETIVOS
Determinar los distintos componentes de una sustancia
Reconocer los diferentes pigmentos en la tinta y la espinaca a través del método
de la cromatografía.
INTRODUCCIÓN
Los pigmentos se caracterizan por absorber luz y presentar color por el reflejo de
ciertos espectros de luz; en los vegetales las hojas, que es lo que se conoce
comúnmente como la fotosíntesis se lleva a cabo en los cloroplastos y a estos se
debe el color que tienen las plantas, sin embargo, lo que en realidad existe en los
cloroplastos es una mezcla de pigmentos representados principalmente pigmentos
con diferentes colores: clorofila-a (verde intenso), clorofila-b (verde), carotenos
(amarillo claro) y xantofilas (amarillo anaranjado) en diferentes proporciones.
Mancilla (2013). La cromatografía, como un método físico de separación mediante
el cual los componentes de una mezcla se separan por distribución entre dos fases:
una estacionaria (FE) y otra móvil (FM). El proceso de separación de cada sustancia
es el resultado de un equilibrio entre dos conjuntos de fuerzas contrapuestas: las de
propulsión, promovidas por el flujo de la fase móvil y las fuerzas de retención,
originadas por la fase estacionaria. De este modo, cada sustancia migra de forma
diferencial, conforme a sus propias características físicas y al tipo de fuerzas
intermoleculares que pueda establecer con ambas fases Baudino (2007).
MATERIALES
Agua destilada, mortero, tubo de ensayo de 50 ml con tapón de caucho, pipeta
Pasteur con bomba, papel de cromatografía o papel, Wattman No. 1 de 22 x 1.5 cm,
tubo capilar, hojas de Espinaca fresca, papel aluminio.
REACTIVOS
Solvente para la cromatografía: Acetona: éter de petróleo (10:90 por volumen),éter
de petróleo y acetona concentrada.
METODOLOGÍA
Experimento 1. Extracción y separación de pigmentos vegetales
Triturar por 10 segundos 1 g de espinaca
Pasar a un tubo de ensayo de tapón de 50 ml, agregar 4 ml de acetona, agitar
por 10 segundos.
Dejar reposar por 10 minutos, añadir 4 ml de agua destilada y agitar.
Agregar 3 ml de éter de petróleo y agitar por 5 segundos.
Dejar reposar hasta que los solventes se separen y los pigmentos hayan sido
extraídos. El tejido vegetal habrá quedado casi blanco.
Con una pipeta pasteur o gotero sacar la solución superior verde oscuro evitar
mezclar las dos capas. Esta será la muestra utilizada para correr la
cromatografía
Tomar una tira de papel de cromatografía medir 2 cm desde la parte inferior y
marcar un pequeño punto con lápiz.
Marcar un centímetro desde la parte inferior del tubo donde se va a montar la
cromatografía (a) Corte del papel, (b) Aplicación del extracto de pigmentos. (c)
Ubicación del papel en la probeta que contiene el disolvente para la separación
Con la ayuda del tubo capilar aplicar 3 gotas del extracto de pigmentos sobre el
punto marcado anteriormente sobre el papel de cromatografía, manteniendo un
diámetro de la mancha a 5 mm. Hasta conseguir una mancha verde oscura
después de la evaporación del solvente. No emplee secador.
Introducir el papel con la muestra en el tubo de 50 ml donde se marcó y se colocó
previamente la mezcla de solventes para cromatografía, y dejar correr el
cromatograma en la oscuridad o con luz difusa por el tiempo necesario, Después
de 10 o 20 minutos su cromatograma se habrá desarrollado. Los pigmentos
(clorofilas a y b, xantofila y caroteno) se separan uno de otro basado en su
relativa solubilidad al solvente. La solución contiene 2 solventes no polares, éter
de petróleo y acetona
RESULTADOS Y DISCUSIÓN
Luego de haber realizado el proceso descrito anteriormente se dio como resultado
la siguiente imagen dando lugar a cuatro manchas.
Ilustración 1 Cromatografía pigmentos vegetales.
Siendo la mancha d de beta carotenos de color verde-anaranjado ubicados en la
parte superior, las xantofilas la mancha c color amarillo, y mancha b la banda más
superior verde-azul es clorofila a y mancha a es la banda inferior verde oliva es
clorofila b.
En la siguiente tabla se calculó la relación entre las distancias recorridas por el
soluto y por el solvente desde el origen de la placa.
Tabla 8.1 Registro de las distancias recorridas por los pigmentos.
Pigmento Medición (mm) Valores de Rf (mm)
Beta-carotenos 141 0,8812
Xantofilas 88 0,55
Clorofila a 27 0,1687
Clorofila b 13 0,0081
En la separación de pigmentos presentes en las hojas de espinaca, la acetona por
arrastre a través de la evaporación de este líquido en gas, dio como resultado la
división de fluidos color verde, pues al conectar con la fase móvil los pigmentos
recorren el papel de forma degradante y así a medida que va subiendo el solvente
lleva consigo los diversos matices correspondientes a los cloroplastos. Como no
todos fueron arrastrados a la misma velocidad, al cabo de unos minutos se vieron
franjas de distintos colores. En este método de cromatografía hay dos tipos de
fases, una móvil, que es el disolvente que se coloca en la cámara; y otra estacionaria
que es donde se agregan las muestras. La separación se logra porque algunas
sustancias son más fuertemente retenidas por la fase estacionaria, mientras que
otras se desplazan mejor en la fase móvil (Bolaños, Herrera & Lust, 2003).
¿Indique cuál fue el pigmento más no polar es decir cuál tiene más afinidad por
el solvente no polar?
El pigmento más no polar fue el caroteno, nos indica una coloración amarilla clara,
de acuerdo a su polaridad tiene más afinidad con el solvente (éter de petróleo), por
ende, la distancia recorrida fue la más alta.
¿Sus resultados sugieren que las características químicas de estos pigmentos
pueden diferir de acuerdo a su color?
Las características químicas de estos pigmentos si pueden diferir de acuerdo al
color, ya que los carotenoides son los pigmentos responsables de la mayoría de los
colores amarillos, anaranjados presentes en la mayoría de frutos rojos y verduras,
debido a la presencia en su molécula de un cromóforo consistente total o
principalmente en una cadena de dobles enlaces conjugados. (Martínez)
Explicación de las diferencias de solubilidad de los diferentes pigmentos.
El pigmento clorofila b, a, tienen un mayor nivel de solubilidad y los pigmentos
carotenos y xantofilas tienen una menor. Los pigmentos clorofílicos son insolubles
en el solvente universal llamado agua. Pero sí son solubles (afinidad química) en
solventes orgánicos como por ejemplo alcohol etílico y acetona. A los solventes que
extraen simultáneamente todos los pigmentos de la hoja se los suele llamar
extractantes. (González,2002).
Explicación del color verde de las hojas.
La mayoría de las plantas contienen cloroplastos, que son los orgánulos que
contienen la molécula de clorofila, que es la responsable de captar los fotones de
luz para realizar la fotosíntesis y del color verde de las plantas. Estos pigmentos
absorben el espectro solar correspondiente a la luz más abundante, la roja, y a la
más energética, la azul, mientras que refleja la luz de color verde. Por este motivo,
nosotros percibimos a los tallos y las hojas de las plantas de color verde. Ecología
verde (2020).
CONCLUSIONES
Aunque hay muchas y variadas técnicas cromatográficas, el objetivo de todas es
separar las sustancias que forman una mezcla. Llevada a cabo esta práctica se
pudo comprender que la cromatografía ascendente en papel, es una técnica de
separación muy versátil; además de que presenta características tales como es
sencilla, rápida y principalmente no requiere del uso de aparatos complicados. A
través de esta se obtuvieron los distintos pigmentos de la clorofila los cuales fueron
a, b, carotenos y Xantofilas, estos son los que dan color a las hojas; la práctica nos
permitió ver los cambios de tonalidades de estos. Los pigmentos más solubles
sufrieron mayor desplazamiento a mayor velocidad y los de menor solubilidad
sufrieron menor desplazamiento a menor velocidad, estos contienen más peso. La
movilidad de los pigmentos que se desean separar depende de la afinidad que tenga
la fase móvil y el grado de polaridad presente.
BIBLIOGRAFÍA
Mancilla, C., Castrejon, C., Rosas, T., Blanco, E., & Perez, S. (2013). Extracción y
separación de pigmentos vegetales.
Baudino (2007) Una experiencia sencilla con fundamentos complejos 2007 [En
línea].file:///C:UnaExperienciaSencillaConFundamentosComplejos-
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Herrera, C.; Bolaños, N.; Lutz, G. (2003) Química de Alimentos: Manual de
Laboratorio. Editorial Universidad de Costa Rica, 1ª edición, San José, Costa Rica,
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Gonzales, C. (2002, agosto). Pigmentos fotosinteticos. Biología. Recuperado 1 de
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Ecología verde (2020) Por qué las plantas son verdes
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