UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CHIHUAHUA
FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS
MICROBIOLOGÍA INDUSTRIAL
Práctica No. 1: Esterilización de material, preparación de medios de cultivo y
asepsia.
Brenda Alicia Martinez Rodriguez 339137
Salma María Gutiérrez Pérez 339168
Alexa Marissa Yañez Lopez 339152
16/09/22
RESUMEN
La preparación de medios de cultivo microbiológico es la mezcla de nutrientes,
agentes amortiguadores y agentes destinados al mantenimiento del equilibrio
osmótico, para crear un agar o caldo que sustente el crecimiento y la diferenciación
de los microorganismos. Durante la realización de la práctica se prepararon 4 cajas
petri con agar nutritivo y un matraz de caldo YPD, con la finalidad de cultivar 4
distintas muestras y observar qué microorganismos se desarrollan y observarlos
posteriormente, se incubaron durante dos días en un autoclave. El caldo YPD del
matraz no fue utilizado en esta práctica, se preparó solamente para una sesión
posterior.
INTRODUCCIÓN
La microbiología industrial se refiere al uso de microorganismos para obtener bienes
y servicios que son controlados en una industria en condiciones muy particulares.
(Mendez, 2015) La esterilización es el proceso mediante el cual se destruyen todos
los microorganismos viables presentes en un objeto o superficie, incluidas las
esporas microbianas. La norma europea EN-556 (1995) establece como requisito
esencial, que para etiquetar un producto sanitario como “ESTERIL” se debe cumplir
lo siguiente: La probabilidad teórica de que exista un microorganismo viable
presente en el producto deberá ser igual o menor que 1 entre 1.000.000. Esta
expresión es lo que internacionalmente se conoce como Nivel SAL ( Security
Assurance Level ) de 10-6 . Los métodos que se utilizan para reducir la carga
microbiana, previa a la esterilización, son la LIMPIEZA y la DESINFECCIÓN (de
alto, medio o bajo nivel). (Arrufat, s.f.)
Una autoclave es un recipiente metálico de paredes gruesas con un cierre hermético
que permite trabajar a alta presión para realizar una reacción industrial, una cocción
o una esterilización con vapor de agua. Su construcción debe ser tal que resista la
presión y temperatura desarrollada en su interior. La presión elevada permite que el
agua alcance temperaturas superiores a su punto de ebullición. La acción conjunta
de la temperatura y el vapor produce la coagulación de las proteínas de los
microorganismos, entre ellas las esenciales para la vida y la reproducción de éstos,
cosa que lleva a su destrucción. (Equipos y Laboratorio de Colombia S.A.S)
La preparación de los medios de cultivo microbiológico es el proceso de mezcla de
nutrientes, agentes amortiguadores y agentes destinados al mantenimiento del
equilibrio osmótico, además de inhibidores o indicadores selectivos para crear un
agar o caldo que sustente el crecimiento y la diferenciación de los microorganismos.
La preparación de los medios de cultivo microbiológico es una tarea habitual en el
monitoreo regular de los microorganismos descomponedores y patógenos en las
muestras microbiológicas. Los medios de cultivo microbiológico deben proporcionar
condiciones de crecimiento óptimas para todos los microorganismos o para tipos
específicos de microorganismos. La composición precisa de un medio depende de
la especie que vaya a cultivarse y del objetivo de la aplicación. El pH del medio debe
ajustarse en función de los microorganismos. Los medios de cultivo microbiológico
se clasifican en función de diversos parámetros, como los componentes químicos,
su característica física y su función. (Mereck, s.f.) Asepsia es un conjunto de
procedimientos que tienen por objeto impedir la penetración de gérmenes en el sitio
que no los contenga. (Gomez, 2008)
HIPÓTESIS
“Se plantea que es posible preparar medios en los que sea posible cultivar
microorganismos”.
OBJETIVO
Conozca la esterilización por vapor de agua y presión (autoclave), la preparación de
medios de cultivo y la importancia de las condiciones de asepsia en el laboratorio.
MATERIALES Y MÉTODOS
El material de la práctica fue 3 matraces Erlenmeyer con deflectores de 250 mL , 10
tubos de ensayo de 10 mL, dos matraces de 500 mL, un mechero bunsen, una rejilla
de asbesto, 5 cajas petri y guantes resistentes al calor.
Para la preparación del caldo YPD (Yeast extract Peptone Dextrose) se pesaron 5
gr de extracto de levadura, 10 gr de peptona de carne y 10 gr de dextrosa, los
cuales se agregaron a un matraz Erlenmeyer de 500 mL al que previamente se le
agregó 500 mL de agua destilada y se llevó a calentar hasta hervir o hasta que la
solución se vea translúcida.
Para la preparación del agar nutritivo se pesaron 7.75 gr de la mezcla de polvos y
se agregaron a un matraz Erlenmeyer de 500 mL y se calentó hasta que la solución
se observó translúcida.
Una vez que las soluciones alcanzaron el punto deseado, se comenzó con poner en
3 matraces Erlenmeyer con deflectores de 250 mL, 150 mL de YPD a cada uno,
cada uno de los cuales se tapó con un tapón de algodón, gasa y aluminio, luego se
realizó 5 mL de YPD para 5 tubos de ensayo con tapa medio cerrada Mientras que
para el agar nutritivo se llenaron 5 tubos de ensayo y 5 cajas petri. Una vez
solidificado el agar se realizaron las pruebas, la primera hablando hacia el agar, la
segunda de los dedos de la mano, la tercera dejándolo abierto en la mesa de
trabajo, la cuarta dejándolo abierto en un lugar alejado de la mesa y la quinta donde
no se abrió la caja petri y de esta manera observar si había algún crecimiento y
confirmar que no se contaminó la muestra en la manipulación de las muestras. Se
etiquetaron y se metieron al autoclave por dos días aproximadamente, y se
observaron los resultados para determinar si había presencia de microorganismos.
RESULTADOS
Tabla 1. Preparación de medios de Cultivo
Caldo YPD
Agar Nutritivo
Tabla 1. Crecimiento de diferentes muestras en agar nutritivo.
Muestra Resultado de crecimiento
Dedos
Boca
Mesa de experimentos
A un lado de la tarja
Cerrada
DISCUSIÓN
En la tabla 1 se puede observar la preparación de medios de cultivo, nutritivo y YPD,
con las cuales se llenaron las cajas petri y tubos de ensayo. En la tabla 2 podemos
observar que hubo crecimiento en todas las muestras menos en la cerrada, en la
muestra bucal podemos ver distintos tipos de colonias. La cavidad bucal alberga un
complejo ecosistema con diferentes microambientes (mejillas, paladar, lengua,
superficie de los dientes, encías y saliva), está compuesto por cientos de especies
de microorganismos diferentes, la mayoría de los cuales son bacterias y solo cerca
del 50% de estas especies se pueden cultivar. (Barroso, 2009). En la muestra de los
dedos se pueden observar las distintas colonias de cada uno de estos, La media de
bacterias que pueden vivir en estas extremidades es de 3.200, pertenecientes a 150
especies distintas. Las muestras de la mesa y de la tarja nos muestran que a pesar
de no tener un aparente contacto directo con algo crecieron microorganismos esto
debido a que se dispersan con facilidad mientras que con la muestra cerrada
sabemos que al no abrir no hubo ninguna contaminación.
CONCLUSIONES
Mediante los métodos puestos en práctica fue posible conocer la esterilización por
vapor de agua y presión además de lograr preparar los medios de cultivo que
posteriormente se utilizaron,se logró apreciar el crecimiento de microorganismos en
cada una de las muestras y la ausencia de estos en la muestra que no fue expuesta.
BIBLIOGRAFÍA
1. Barroso, E. (2009). “Interacciones de los polifenoles del vino con la microbiota
de la cavidad bucal humana”. Instituto de Investigación en Ciencias de la
Alimentación.
2. (DE LA ROSA et al., 2002) (2002). El aire: hábitat y medio de transmisión de
microorganismos. Observatorio Medioambiental, Vol 5.
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Tecnología. Recuperado 16 de septiembre de 2022, de
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5. Mereck. (s. f.). Recuperado 16 de septiembre de 2022, de
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6. Gomez L. (s. f.). Recuperado 16 de septiembre de 2022, de
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7. Equipos y Laboratorio de Colombia S.A.S. (s. f.). QUE ES UN AUTOCLAVE.
Equipos y laboratorio de Colombia. Recuperado 16 de septiembre de 2022,
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autoclave
