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Instituto Tecnológico Superior de los

Ríos

Académica de Ingeniería Ambiental

Manual de prácticas

Análisis Instrumental

Dirigido a estudiantes del 4to semestre de Ing. Ambiental

Autor: Néstor Gregorio Campos Aquino

México, Tabasco, Balancán Abril 2022

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Índice

Normas generales en el laboratorio............................................................................................................iii

Introducción.................................................................................................................................................v
Práctica No. 1. Analisis de Agua. Determinacion de acidez y alcalinidad de aguas naturales, residuales y
residuales tratadas ....................................................................................................................................viii
Práctica No. 2. Dureza del Agua.....................................................................¡Error! Marcador no definido.
practica No 3. Absortividad y Ley de Beer………………………………………………………………………………………….iix

Practica No. 5 Ley de la Conservación de la Masa…………………………………………………………………………………….

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Normas generales en el laboratorio

Antes de iniciar la práctica

 Los usuarios deberán presentarse puntualmente el día de la práctica y registrar sus datos en la
bitácora de ingreso a los laboratorios.
 Todo usuario deberá portar correctamente la bata de laboratorio.
 Uso de calzado cerrado.
 Evitar el portar joyas en el laboratorio, por ejemplo: cadenas, esclavas, etc.
 Cuidar la disciplina, evitar sentarse sobre las mesas de trabajo, así como recargarse en las llaves
de agua y jugar con el material de laboratorio.
 No usar dispositivos que distraigan la atención al trabajo tales como: celulares, reproductores de
música, juegos electrónicos, computadoras, etc. (con autorización del profesor).
 El empleo y uso de materiales de laboratorio solo podrá efectuarse mediante la entrega del vale
respectivo.
 Se deben seguir a todo momento las indicaciones del profesor. No se comenzará a trabajar hasta
haber recibido las instrucciones necesarias. Consultar las dudas y dificultades.
 Es imprescindible leer por lo menos una vez la práctica antes de comenzar.
 Comprobar que esta todo el material necesario y en las condiciones adecuadas de conservación y
limpieza. Comunicar cualquier anomalía al profesor. Cada equipo será responsable de material
asignado.
 Por seguridad está terminantemente prohibido fumar dentro del laboratorio, así como ingerir
alimentos y bebidas.

Durante el trabajo

 Concentrarse únicamente al desarrollo de la práctica correspondiente.

 Se deberá registrar el uso del equipo y las condiciones de su operación en la bitácora del mismo.
 Cuando algún equipo no funcione o presente alguna anomalía reportarlo inmediatamente al
encargado del laboratorio.
 No debe probarse ninguna sustancia y debe evitarse el contacto con la piel. En caso de que algún
producto corrosivo caiga en la piel, se eliminará con abundante agua fría.
 Extremar los cuidados al trabajar con sustancias inflamables, tóxicas o corrosivas.
 Comunicar cualquier accidente, quemadura o corte, a tu profesor de laboratorio.
 La manipulación de productos sólidos se hará con ayuda de una espátula o cucharilla y para
transvasar líquidos se utilizará una varilla de vidrio en los casos que sean necesarios.
 Nunca viertas el ácido sulfúrico concentrado al agua, sino el ácido al agua teniendo cuidado.
 Tener cuidado al manejar ácidos y bases principalmente concentrados.
 Para oler algún producto no debe acercarse la cara al recipiente, si no que se arrastrará el vaso
hacia la nariz pasando la mano por encima de él.
 Con el fin de evitar contaminaciones, nunca se devolverá al frasco los restos de productos no
utilizados.
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 El material de vidrio es muy frágil, por lo que se evitara los golpes y cambios bruscos de
temperatura. Se deberá anotar en una hoja o cuaderno el material que se rompa y comunicarlo al
profesor de laboratorio.
 Cualquier experimento en el que se desprenda gas tóxico o inflamables en el que se utilicen
reactivos potencialmente nocivos deberá llevarse a cabo en las campanas extractoras del
laboratorio.
 Los restos sólidos no metálicos deben tirarse en cestos de basura, nunca en las fregaderas. Los
residuos metálicos se almacenarán en un recipiente especial.
 Para evitar la contaminación ambiental los desecho (reactivos, agares, sustancias toxicas, etc.)
deberán ser dispuestos en lugares específicos señalados en el laboratorio. No se debe tirar en el
lavabo.

Al terminar

 El lugar y el material de trabajo debe quedar limpio y ordenado, también se deben apagar y
desenchufar los aparatos.
 Si existe material dañado notificarlo al profesor.
 Lavarse las manos perfectamente para evitar intoxicaciones con algunos reactivos.
 Entregar para su revisión el reporte de la práctica elaborada.
 Hasta que el profesor no de su autorización no se considerara finalizada la práctica y, por lo tanto,
no podrás salir de laboratorio.
 Registrar en la bitácora la hora de salida.

Primeros auxilios en el laboratorio

En caso de ocurrir un accidente en el laboratorio, es importante tener en mente unas cuantas reglas
básicas, cuya aplicación adecuada, pueden ser esenciales para prevenir daños mayores a las afectadas.

1. Comunique al responsable de laboratorio inmediatamente cualquier accidente, por pequeño que

sea.
2. En caso de contacto con la piel u ojos de cualquier de estos productos lave en forma abundante
con agua corriente el área afectada, NO aplique ningún otro producto. Dependerá de la cantidad
de acido al quitar la ropa contaminada, usar regadera o lavar localmente.
3. En caso de inhalación deberá retirarse del lugar y respirar aire fresco.
4. En caso de ingestión de ácidos no deberá inducirse al vomito, podrá tomarse gel de hidróxido de
aluminio, posteriormente tomar leche o clara de huevo batido con agua y finalmente recibir
atención médica especializada.
5. Si se ingiere una base no deberá inducirse el vómito y podrá ingerirse vinagre diluido 1.4, ácido
cítrico al 1% o jugo de limón, posteriormente tomar leche o clara de huevo batido con agua y
finalmente recibir atención médica especializada.

OPERACIONES COMUNES EN EL LABORATORIO

1. Manejo de líquidos
a) Destapar cuidadosamente los frascos de reactivos y verter el líquido en vasos de
precipitados o probetas
b) Nunca introduzcas pipetas dentro de los frascos de reactivos; puede contaminar su
contenido.
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c) No devuelva excesos de reactivos a su frasco original.

2. Manejo de sólidos
a) Transferir el sólido a un vaso de precipitado o vidrio de reloj.
b) Con una espátula o cuchara perfectamente limpios, manejar la cantidad necesaria.

3. Pesadas
a) Para cualquier tipo de balanza, se recomienda las siguientes instrucciones:
b) Limpiar perfectamente la balanza
c) Nivelarla
d) Ajustar a cero
e) Tratar el objeto sobre el cual se hará la pesada
f) Colocar cuidadosamente sobre el platillo el objeto o sustancia por pesar
g) Efectuar la pesada
h) Si se derrama reactivo sólido o muestra sobre el platillo, limpiarlo con un pincel y repetir
la pesada
i) Al terminar, ajuste a cero, limpie la balanza y cúbrala

Recuerde, al estar pesando no debe haber:

a) Corrientes de aire
b) Vibraciones
c) Polvo
d) Alguna fuente de calor cercana
e) Exposición al sol

4. Mezclas de reactivos

a) Para diluir líquidos concentrados, éstos se vierten sobre el agua. Nunca, al contrario.
b) Cuando se mezclan sólidos y líquidos se debe colocar primero en el vaso de precipitado un
poco de líquido, luego se agrega el sólido y se disuelve con la ayuda de una varilla de vidrio.
c) Para prepara soluciones, se disuelve el sólido en un poco de solvente, en un vaso de
precipitados como se hizo en el inciso b), luego se traspasa con ayuda de un embudo a un
matraz volumétrico, asegurándonos de que la disolución sea completa, antes de aforar al
volumen deseado.

5. Calentamiento de líquidos
Los líquidos generalmente se deben calentar en vaso de precipitados, con la ayuda de un mechero
Busen, un soporte y un anillo metálico, baño maría o chaqueta de calentamiento.
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a) Primero se instala el soporte con el anillo en su parte media.

b) Sobre el anillo, colocar una malla de alambre que en el centro tenga un círculo de asbesto,
sobre ésta irá el vaso que contiene el líquido por calentar. La malla sirve para mantener la
temperatura uniforme y proteger el fondo del recipiente.
c) Colocar el mechero debajo del anillo
d) para evitar una ebullición brusca se puede añadir perlas de vidrio o trocitos de agitador de
vidrio, dentro del líquido antes de calentarlo
e) para manipular el vaso caliente se recomienda utilizar pinzas o guantes de asbesto.

6. Limpieza del material volumétrico

La manera de comprobar la limpieza interna de las buretras o pipetas, es llenarlas de agua y
desaguarlas. Si se observa gotas de agua en las paredes, indica que no ha sido debidamente lavada,
para lo cual se recomienda las siguientes medidas:

a) Enjuagarlas con mezcla crámica, con permanganato de potasio o con solución de jabón
caliente.
b) Enjuagarlas con agua destilada
c) Verificar su limpieza interna

Recuerde:
Siempre que utilice material volumétrico, enjúguelo inmediatamente con agua de la llave y enseguida con
agua destilada. Si el material volumétrico no se va usar durante un tiempo se deberá guardar lleno de agua
destilada y perfectamente tapad

Introducción
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Práctica No. 1. ANÁLISIS DE AGUA - DETERMINACIÓN DE ACIDEZ Y ALCALINIDAD EN

AGUAS NATURALES, RESIDUALES Y RESIDUALES TRATADAS

Introducción
La acidez se refiere a la presencia de sustancias disociables en agua y que como producto de
disociación generan el ión hidronio (H3O+), como son los ácidos fuertes, ácidos débiles y de
fuerza media; también la presencia de ciertos cationes metálicos como el Fe (III) y el Al (III)
contribuyen a la acidez del medio.
La alcalinidad se refiere a la presencia de sustancias hidrolizables en agua y que como
producto de hidrólisis generan el ión hidroxilo (OH-), como son las bases fuertes, y los
hidróxidos de metales alcalinotérreos; contribuyen también en forma importante a la alcalinidad
los carbonatos y fosfatos. La presencia de boratos y silicatos en concentraciones altas también
contribuyen a la alcalinidad del medio.
Una medida de la acidez total del medio es la cantidad de base fuerte que es necesario añadir a
una muestra para llevar el pH a un valor predeterminado coincidente con el vire de la
fenolftaleína.
Objetivo
Determinación de acidez y alcalinidad en aguas naturales, residuales y residuales tratadas,
basados en la norma mexicana NMX-AA-036-SCFI-2001 por medio de una valoración de la
muestra empleando como disolución valorante un álcali o un ácido según sea el caso de
concentración perfectamente conocida.
Equipo, material y reactivos
Equipo
- Balanza analítica con precisión de 0,1 mg
- Estufa.

Materiales

- Matraz Elermeyer
- Bureta

Limpieza del material: Las botellas de polietileno para las muestras, deben lavarse con
detergente libre de fosfatos, enjuagarse con agua y secarse a temperatura ambiente.
Reactivos
-Agua: Debe entenderse agua que cumpla con las siguientes características:
a) Resistividad, megohm-cm a 25ºC: 0,2 min;
b) Conductividad, µS/cm a 25ºC: 5,0 máx, y
c) pH: 5,0 a 8,0. 5.1
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-Agua libre de CO2

Preparar todas las disoluciones con agua destilada o desionizada que ha sido hervida
recientemente durante 15 min y enfriar a temperatura ambiente. Al final el pH del agua debe ser
≥ 6 y su conductividad < 2 µS/cm.
o Biftalato de potasio (KHC8H4O4)
o Carbonato de sodio anhidro (Na2CO3) patrón primario
o Ácido sulfúrico concentrado (H2SO4), o ácido clorhídrico concentrado (HCl)
o Naranja de metilo
o Fenolftaleína
o Hidróxido de sodio (NaOH)
o Peróxido de hidrógeno al 30 % v/v (H2O2)
o Tiosulfato de sodio pentahidratado (Na2S2O3•5H2O)
o Etanol
o Cloroformo
o Disolución de ácido sulfúrico o ácido clorhídrico (0,1 N). Diluir 8,3 mL de ácido
clorhídrico concentrado ó 2,8 mL de ácido sulfúrico concentrado en 1L con agua libre de
CO2.
o Disolución de ácido sulfúrico o clorhídrico (0,02 N). Diluir 200 mL de ácido clorhídrico o
ácido sulfúrico 0,1 N a 1 L de agua.
o Disolución de hidróxido de sodio (0,1 N). Pesar aproximadamente y con precisión 4,0 g
de hidróxido de sodio disolver y diluir a 1 L con agua.
o Disolución de hidróxido de sodio (0,02 N). Transferir 200 mL de la solución de NaOH 0,1
N a un matraz volumétrico de 1L. Diluir a 1L con agua.
o Disolución de tiosulfato de sodio pentahidratado (0,1 M). Pesar aproximadamente y con
precisión 25,0 g de tiosulfato de sodio y diluir a 1 L con agua (agregar 5 mL de
cloroformo como preservador.
o Disolución indicadora de naranja de metilo. Pesar aproximadamente y con precisión 0,5
g del colorante naranja de metilo y aforar a 1L con agua. Filtrar la disolución fría para
remover cualquier precipitado que se forme. O bien, pesar aproximadamente y con
precisión 0,5 g de la sal de sodio y diluir a 1 L con agua, si es necesario filtrar cuando
esté fría la disolución.
o Disolución indicadora de fenolftaleína. Pesar aproximadamente y con precisión 5,0 g de
fenolftaleína y disolver en 500 mL de etanol, añadir 500 mL de agua con agitación
constante. Filtrar si hay formación de precipitado.
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Procedimiento
a) Toma de muestra
1. Recolectar por lo menos 500 mL de muestra en frascos de vidrio, polietileno o
polipropileno. Siempre debe enjuagarse el frasco con una porción de la muestra.

2. Identificar la muestra con numero de muestra, fecha y lugar del muestreo,

responsable o técnico.

3. Llenar las botellas completamente y tapar herméticamente, ya que las muestras de

aguas residuales pueden estar sujetas a la acción microbiana y a pérdidas o
ganancias de CO2 u otros gases cuando se exponen al aire. Evitar la agitación de la
muestra y su exposición prolongada al aire.

4. Conservar a una temperatura de 0°C a 4 ºC hasta su análisis.

5. El tiempo máximo de almacenamiento previo al análisis es de 24 h.

b) Experimento en laboratorio

Valoración de las disoluciones

Valoración del ácido sulfúrico o ácido clorhídrico (0,02 N).

o Pesar aproximadamente y con precisión 0,026 5 g del patrón primario de carbonato
de sodio, secado 105°C.
o Añadir unos 25 mL de agua y unas gotas de la disolución de naranja de metilo.
o Valorar con el ácido hasta el vire del indicador (de canela a amarillo).
o Calcular la normalidad del ácido con la siguiente fórmula:

donde:

N es la normalidad del ácido usado, equivalentes/L.;

A son los gramos de carbonato de sodio;
B son los mL de ácido utilizados, y
53 son los gramos por equivalente de carbonato de sodio.

Valoración del hidróxido de sodio (0,02 N).

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o Pesar aproximadamente y con precisión 0,102 g de biftalato de potasio secado a

105°C,
o Añadir unos 25 mL de agua y unas gotas de la disolución de fenolftaleína
o Titular con la disolución de hidróxido de sodio hasta el vire del indicador (de incoloro
a rosa).
o Calcular la normalidad del hidróxido con la siguiente fórmula:

donde:
N es la normalidad del hidróxido de sodio, equivalentes/L;
A son los gramos de biftalato de potasio;
B son los mL de hidróxido de sodio utilizados, y
204,2 son los gramos por equivalente de biftalato de potasio.

Acidez
Pretratamiento de la muestra
En caso de detectarse la presencia de cloro residual, eliminar la interferencia añadiendo 0,1 mL
de la disolución de tiosulfato de sodio 0,1 M.
Si la muestra se encuentra libre de iones metálicos hidrolizables y cationes polivalentes en su
forma reducida, proceder como se indica a partir del inciso A).
Las muestras de desechos industriales y drenajes que contengan concentraciones mayores a 1
mg/L de iones metálicos, tales como hierro, aluminio, manganeso, deben tratarse con peróxido
de hidrógeno caliente. Este tratamiento con peróxido caliente consiste en pasar 100 mL de
muestra a un matraz Erlenmeyer de 250 mL. Medir el pH, si el pH está alrededor de 4,0
adicionar alícuotas de 5,0 mL de ácido sulfúrico (0,02 N) valorada hasta reducir el pH a menos
de 4. Adicionar 5 gotas de peróxido de hidrógeno al 30 % y hervir la muestra de 2 min a 5 min.
Registrar el volumen total de ácido sulfúrico (0,02 N) agregado. Enfriar a temperatura ambiente
y titular de acuerdo al procedimiento descrito a continuación:
A. Transferir 100 mL de muestra en un matraz Erlenmeyer de 250 mL. Adicionar 2 gotas de
disolución indicadora de fenolftaleína e introducir la barra magnética. Titular con
disolución de hidróxido de sodio valorada hasta el vire del indicador (de incoloro a rosa),
registrar el volumen empleado en la titulación (acidez total).

B. Transferir 100 mL de muestra en un matraz Erlenmeyer de 250 mL. Adicionar 2 gotas de

disolución indicadora de naranja de metilo e introducir la barra magnética. Iniciar la
agitación y titular con disolución de hidróxido de sodio valorada hasta el vire del
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indicador, registrar el volumen empleado en la titulación. Calcular la acidez, tomando en

cuenta el vire del indicador (de amarillo a canela) (acidez al anaranjado de metilo).

Alcalinidad
 Transferir 100 mL de muestra en un matraz Erlenmeyer de 250 mL. 9.3.2 Adicionar 2
gotas de disolución indicadora de fenolftaleína.
 Titular con la disolución valorada de ácido (0,02 N) hasta el vire de la fenolftaleína (de
rosa a incoloro), registrar los mililitros gastados (alcalinidad a la fenolftaleína). Adicionar
2 gotas de la disolución indicadora de naranja de metilo.
 Continuar con la titulación hasta alcanzar el vire del naranja de metilo. (de canela a
amarillo), alcalinidad total.
 Registrar los volúmenes para ambos puntos finales.
 Calcular la alcalinidad, tomando en cuenta el vire de los indicadores.

Cálculos
Calcular la acidez total como CaCO3 en mg /L mediante la siguiente fórmula:
Ecuación 1:
Acidez total como CaCO3 en mg /L = [(A x B) - (C x D)] (50) (1 000)
100
donde:
100 es el volumen de la muestra en mL; A es el volumen de NaOH utilizado al vire de la
fenolftaleína;
B es la normalidad de la disolución de NaOH;
C son los mL de H2SO4 utilizados en el tratamiento con peróxido;
D es la normalidad del H2SO4 utilizado;
50 es el factor para convertir eq/L a mg CaCO3/L, y
1 000 es el factor para convertir mL a L. 10.2

Calcular la alcalinidad total como CaCO3 en mg /L, mediante la siguiente fórmula:

Ecuación 2:
Alcalinidad total como CaCO3 en mg /L = AXN (50) (1 000)
100
donde:
A es el volumen total gastado de ácido en la titulación al vire del anaranjado de metilo en mL;
N es la normalidad de la disolución de ácido;
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100 es el volumen de la muestra en mL;

50 es el factor para convertir eq/L a mg CaCO3/L, y
1 000 es el factor para convertir mL a L.

Cuestionario
1. Qué relación tiene el ph de las muestras con la calidad del agua.
2. Puede consumirse un aguan tratada o solo regresar a los sistemas
3. ¿Cuál es la muestra más ácida, y la más básica que obtuviste? ¿a qué crees que se
debe?
4. ¿Los desechos de los ácidos se deben neutralizar, antes de ser vertidos en el sistema
de drenajes?
5. ¿Cómo se combate un pH bajo en las aguas naturales?

Reporte de la práctica

Reportar la acidez y/o alcalinidad en mg CaCO3/L con la precisión correspondiente.

Bibliografía
Adoni Garritz, Santiago Capella Vizcaino. (1991). Prácticas de Química. Prisma Editorial.
México, D.F.
NOM-001-ECOL-1996 Que establece los límites máximos permisibles de contaminantes en las
descargas de aguas residuales en aguas y bienes nacionales, publicada en el Diario Oficial de
la Federación el 6 de enero de 1997.
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Práctica No. 2. DUREZA DEL AGUA

Introducción
El agua es el líquido más importante para el hombre. La temperatura del cuerpo humano, la
acidez del jugo gástrico, la densidad de la sangre y la protección del cerebro en el cráneo son,
entre otros muchos, factores esenciales para la vida que depende de las propiedades del agua.
Pero el hombre utiliza el agua en incontables formas más y, en general trata de usarla en la
forma en que le es accesible a partir de pozos, ríos, deshielos, lluvia, etc. Normalmente, en
cada una de estas fuentes, el agua contiene cantidades variables de sustancias diversas y sus
usos están determinados tanto por la naturaleza como por la cantidad de estas substancias.
Nuestra preocupación principal es la potabilidad del agua, es decir, su carencia de organismos
patógenos y sustancias toxicas.
Para otros usos, en que el agua se requiere para calefacción, para generar vapor o para mover
maquinaria industrial, la presencia de agentes patógenos puede ser irrelevante, pero la
presencia de sales puede ser crucial ya que estas pueden acelerar la corrosión de compuestos
metálicos o puede formar incrustaciones hasta el punto de obstruir los ductos.
Industrialmente es importante distinguir entre un agua dura que contiene una cantidad
relativamente elevada de sales de calcio Ca que conoce como incrustarse y agua dura rica en
sales de magnesio Mg conocida como agua agresiva que acelera la corrosión metálica.
Objetivo

 Determinar de modo cuantitativo la dureza relativa de diversa muestra de aguas

(domesticas, naturales o residuales).
 Construir un conjunto patrón para la determinación de propiedades por comparación.

Equipo, material y reactivos

Material
• 1 agitador de vidrio
• 1 embudo de filtración de 9 cm de diámetro
• 1 pipeta de 1 ml
• 15 tubos de ensayo de 80 ml
• 1 vaso de precipitado de 150 ml
• 1 vaso de preciopitado de 50 ml
• 2 vaso de precipitado de 200 ml
• 1 anillo para soporte de 5 cm de diámetro
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• 1 balanza analítica
• 1 gotero
• 1 gradilla para 15 tubos de ensayo
• 1 papel filtro de 18 cm
• 1 mechero
• 1 propipeta
• 1 soporte universal
• 1 tapón de hule

Reactivos
• 2 l de Agua destilada y hervida (H2O)
• 100 ml Alcohol etilico (C2H5OH)
• 0.15 g Cloruro de calcio (CaCl2)
• 1 kg Jabón puro de aceite vegetal
• Muestras (domesticas, embotellada, cuerpos de agua, drenaje)

Procedimiento
Como reactivo en esta practica se utiliza una solución alcohólica de jabón. Para preparar esta
solución, disuelva cerca de un gramo de jabón puro de aceite vegetal, es decir sin aditivo
alguno, en aproximadamente 100 ml de etanol (C3H5OH), agitando por lo menos durante 10
minutos y filtre para obtener una solución transparente.
Por otro lado, se requiere también un conjunto de muestras patrón con las cuales comparar los
resultados de las muestras de agua bajo estudio. Para preparar estos patrones, pese
aproximadamente 0.1 g de cloruro de calcio y disuélvalos con 100 ml de agua recientemente
destilada y hervida en un vaso de precipitado de 150 ml. De esta solución transfiera, usando
una pipeta de 1 ml, a seis tubos de ensayo, 2, 1.66, 1.33, 1, 0.66 y 0.33 ml respectivamente. A
continuación, lleve el volumen de cada tubo a 2 ml, excepto para el primer tubo que contiene ya
2 ml. De este modo usted obtendrá 6 tubos de ensayo en los que la concentración de la sal de
calcio será 0.25, 0.50, 0.75, 1, 1.25 y 1.50 g/l respectivamente.
En un séptimo tubo de ensayo ponga agua destilada para completar el conjunto de muestra
patrón. A continuación, con cada uno de los tubos de ensayo realice la siguiente operación:
agregue dos gotas de la solución alcohólica de jabón, y agite vigorosamente el tubo tapado,
entre 10 a 15 veces. Observe los cambios ocurridos y anótelos. Continue añadiendo, gota a
gota, contando el numero de gotas añadidas, solución de jabón, hasta que tenga una columna
de espuma de cerca de 2 cm de altura y que persista por alrededor de un minuto. Con esto
obtendrá una relación aproximada entre el contenido de calcio y la cantidad de solución de
jabón necesaria para obtener una columna de espuma preestablecida.
a) Experimento en laboratorio

Dureza directa
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Ponga 2 ml de cada una de las muestras de agua a estudiar n tubos de ensayo y proceda como
antes, contando las gotas de solución alcohólica de jabón, necesarias para obtener una
columna de espuma equivalente a la obtenida al preparar las soluciones patrón.
Pretratamiento y dureza
Repita el experimento anterior, pero esta vez llévelo a cabo después de haber mantenido en
ebullición, en un vaso de precipitado, cada una de las muestras de agua durante cinco minutos
y haberlas enfriado hasta temperatura ambiente.
Con los datos de concentración y numero de gotas de solución alcohólica de jabón para las
soluciones patrón, construya una grafica en los siguientes ejes:
Numero de gotas

0 .25 .50 .75 1 1.25 1.50

CONCENTRACIÓN

Usando la grafica anterior, determine la concentración aparente de iones Ca2+ en las muestras
estudiadas, registrando sus datos en el formato siguiente:

CENTRAL DE LABORATORIOS DEL ITSR

Origen de la muestra Concentración aparente Observaciones

Nombre: Fecha:

Cuestionario
1. ¿Qué características debe tener el agua para considerarse potable?
2. ¿Qué diferencia existen entre el agua potable y el agua dulce?
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3. Casi todas las industrias eliminan las sales inorgánicas del agua antes de usarla.
Comente alguna de las razones para hacer esto. ¿Cuál es el procedimiento mediante el
cual se elimina la dureza para su uso industrial?

Reporte de la práctica

Elabora un reporte de practica de acuerdo al anexo A

Bibliografía
ADONI GARRITZ, SANTIAGO CAPELLA VIZCAINO. (1991). PRÁCTICAS DE QUÍMICA.
PRISMA EDITORIAL. MÉXICO, D.F.

PRÁCTICA NO. 3. ABSORTIVIDAD DEL SULFATO DE COBRE Y LEY DE BEER

Introducción
Espectrofotometría ultravioleta visible. Ley de Lambert-Beer.

Los métodos espectroscópicos de análisis están basados en la medida de la radiación

electromagnética que es absorbida o emitida por una sustancia. En función de ello se clasifican
fundamentalmente en:

 Métodos de absorción: Se basan en la disminución de la potencia de un haz de

radiación electromagnética al interaccionar con una sustancia.

 Métodos de emisión: Se basan en la radiación que emite una sustancia cuando es

excitada previamente por medio de otro tipo de energía (térmica, eléctrica…).

 Métodos de fluorescencia: Se basan en la radiación que emite la sustancia cuando es

excitada previamente por un haz de radiación electromagnética.

Otras clasificaciones de los métodos espectroscópicos se establecen en función de la región del

espectro electromagnético que interviene en la técnica. Así, pueden utilizarse regiones como
rayos X, ultravioleta, visible, infrarrojo, microondas, etc. En la Figura 1 pueden verse las
regiones del espectro electromagnético, en función de los valores de la longitud de onda (λ) de
cada radiación:
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En esta figura puede también observarse como la luz visible para el ojo humano constituye
únicamente una pequeña parte del espectro electromagnético.

Dado que los primeros métodos espectroscópicos desarrollados corresponden a la región del
visible recibieron la denominación de métodos ópticos, la cual se utiliza todavía con frecuencia.

A continuación, se ofrece una breve información sobre la ley de Lambert-Beer y la

espectrofotometría de absorción en la región visible del espectro.

Si se considera que se dispone de una fuente de radiación que hace llegar a la muestra un haz
de radiación, de longitud de onda previamente seleccionada, cuya potencia es P 0, la muestra de
espesor b absorbe una parte de esa radiación incidente, de forma que la potencia del haz
disminuye después de atravesar la muestra siendo su nueva potencia P. El cociente entre la
potencia de la radiación que sale de la muestra y la de la que incidió sobre ella, se define como
transmitancia:
T=P/P0.

La transmitancia también puede expresarse en tanto por ciento, multiplicando el cociente

anterior por 100. Es más frecuente utilizar el concepto de absorbancia, o densidad óptica,
que se define como el logaritmo de la transmitancia cambiado de signo:
A = log (P0/P) = - log T

De acuerdo con estas expresiones, si la muestra no absorbe radiación, P y P 0 coinciden, por lo

tanto A=0, y se transmite toda la radiación T=1 (100% de transmitancia). Si, en otro caso, se
transmite solo un 1% de radiación (T=0.01), P=P 0/100, la absorción de radiación que ha tenido
lugar corresponde a A=2.

Al incidir radiación electromagnética visible sobre la materia puede ser totalmente absorbida o
totalmente reflejada. En el primer caso el objeto aparecerá de color negro y en el segundo de
color blanco. Puesto que nosotros percibimos los objetos por medio de la luz reflejada, si
hacemos incidir un haz de luz blanca (que contiene todas las longitudes de onda) sobre un
objeto, éste absorberá ciertas longitudes de onda y reflejará otras, siendo éstas últimas las
responsables del color. Se dice que este color (observado) es complementario del que se
percibiría si la luz absorbida se pudiera detectar. Dado que en la parte experimental de esta
práctica las medidas van a realizarse con espectrofotometría visible, es conveniente conocer
para qué longitud de onda tiene cada color su máxima absorción, lo que se muestra en la tabla
siguiente:
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Para medir los valores de absorbancia y transmitancia de una disolución se utilizan

espectrofotómetros UV-Vis, que, como puede verse en la Figura 2, se componen de cinco
elementos principales:

 Una fuente de radiación que suele ser una lámpara de filamento de wolframio
 Un monocromador que permite seleccionar una longitud de onda determinada
originando un haz monocromático.
 Un recipiente para contener la muestra denominado cubeta fabricado con un material
que permite el paso de la radiación en la región del espectro de interés. Suelen ser de
vidrio, plástico o cuarzo. El espesor de la cubeta más habitual es 1 cm.
 Un detector que convierte la energía radiante en una señal eléctrica.
 Una pantalla de visualización

La absorbancia está relacionada con la concentración de la sustancia, c, por la ley de Lambert-

Beer, que se resume con la ecuación: A = ε b c , donde c se expresa en mol/L, b es la longitud
del camino óptico (anchura de la célula que contiene la disolución de la sustancia) y se expresa
en cm, y ε es la absortividad molar, propiedad característica de cada sustancia correspondiente
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a la cantidad de radiación que absorbe a una longitud de onda determinada por unidad de
concentración, siendo sus unidades L mol-1cm-1 (téngase en cuenta que la absorbancia no tiene
unidades).

Para poder aplicar la ley de Lambert-Beer es necesario seleccionar previamente una longitud
de onda puesto que tanto A como ε varían con ella. Para ello se obtiene previamente el
espectro de absorción de la sustancia, que consiste en una representación de los valores de
absorbancia frente a la longitud de onda expresada en nanometros (nm). Del espectro de
absorción puede seleccionarse el valor de longitud de onda para el cual la absorbancia es
máxima.

Objetivo
Adquirir los conocimientos básicos sobre espectrofotometría de absorción visible, mediante la
Ley de Lambert-Beer y sus aplicaciones en Química. Para ello se realizará un experimento en el
laboratorio que muestre cómo utilizar un espectrofotómetro para llevar a cabo la determinación
cuantitativa del sulfato de cobre.

Equipo, material y reactivos

Material
1 vaso de precipitados de 50 mL
4 matraces aforados de 50 mL (4)
1 pipeta graduada de 5 mL
1 pipeta graduada de 10 mL
10 frascos de polipropileno
1 frasco lavador
1 espectrofotómetro
Cubetas espectrofotométricas.

Reactivos
Sulfato de cobre 0.1000 M
Amoniaco (Dispensador 10 mL)

Procedimiento
a) Experimento en laboratorio

En el manejo del espectrofotómetro han de observarse una serie de precauciones:

 No dejar huellas en las paredes de la cubeta espectrofotométrica.

 Enjuagar cuidadosamente la cubeta espectrofotométrica con la disolución que va a ser
medida, antes de llenarla definitivamente.
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 Realizar las medidas empezando por la disolución más diluida y acabando por la más
concentrada.

Construcción de la recta de calibrado

1. Coger 50 mL de una disolución patrón 0.1000 M de sulfato de cobre.
2. A partir de la disolución anterior y de una disolución de amoniaco preparar varias
disoluciones del complejo Cu(NH3)42+ de concentración conocida. En concreto, estas
disoluciones se prepararán mezclando 5.0 mL de amoniaco con 1.0, 2.5, 3.5, 5.0, 6.0,
7.5, 8.5 y 10.0 mL respectivamente de la disolución patrón de sulfato de cobre y
enrasando en un matraz aforado de 50 mL con agua destilada. Las disoluciones se
guardarán en frascos de polipropileno y se etiquetarán hasta el momento de medir la
absorbancia.

3. Preparar la disolución que será utilizada como blanco. Para ello se pondrán 5.0 mL de
amoniaco en un matraz aforado de 50 mL y se enrasará con agua destilada.

4. Elegir la longitud de onda a la cual se realizará posteriormente la medida de la

absorbancia. Esa longitud de onda es la correspondiente al máximo de absorción, pues
es ahí donde la sensibilidad es máxima. Además, las medidas de absorbancia en esa
zona implican un menor error frente a pequeñas variaciones en la longitud de onda que
las realizadas en cualquier otra zona de la banda de absorción. Para elegir la longitud de
onda de medida se ha obtenido el espectro de absorbancia de una de las disoluciones
preparadas anteriormente (la obtenida mezclando 5.0 mL de amoniaco y 8.5 mL de
disolución patrón de cobre) entre 550 y 650 nm.

Dicho espectro se muestra a continuación:

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5. Medir la absorbancia de cada una de las disoluciones preparadas (a la longitud de onda

determinada en el apartado anterior).

6. Representar la recta de calibrado.

Determinación de la cantidad de cobre en una muestra problema.

1. Medir la absorbancia (a la longitud de onda de máxima absorción) de una muestra problema

que contiene cobre. Dicha muestra es suministrada por el profesor y ha sido preparada
mezclando una cantidad desconocida de disolución patrón de cobre con 5.0 mL de amoniaco.
Esta determinación se realizará por duplicado.

Cuestionario
1. Comentar el espectro de absorción del complejo amoniacal y explicar cuál ha sido la
longitud de onda elegida para medir la absorbancia.

2. Calcular la concentración exacta de la disolución patrón de CuSO4 preparada a partir de

la masa pesada. ¿Con qué instrumento se realizó la pesada? ¿Se enrasó en probeta o
en matraz aforado? ¿Por qué?

3. Completar la siguiente tabla:

Disolución V amoniaco V CuSO4 (mL) Cu(NH3)42+ (M) Absorbancia

(mL) medida
PATRÓN 1
PATRÓN 2
PATRÓN 3
PATRÓN 4
PATRÓN 5
PATRÓN 6
PATRÓN 7
PATRÓN 8
PATRÓN 9
PROBLEMA

4. Representar gráficamente la absorbancia frente a la concentración.

5. Hallar la concentración (mol/L) de la disolución problema a partir de la recta de

calibrado.
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6. Hallar la concentración de la disolución problema a partir de la expresión algebraica de

la ley de Lambert-Beer. Para ello, es necesario obtener previamente el valor del
coeficiente de absorción molar a partir de la pendiente de la recta de calibrado.

Reporte de la práctica

Elaborar un reporte de practica de acuerdo al anexo A

Bibliografía
 Harris, D. C. Análisis Químico Cuantitativo. 3ª ed. Capítulo 18. Ed. Reverté, 2007.
 Higson, S. P. J. Química Analítica. 1ª ed. Capítulo 5. Ed. Mc Graw Hill. 2007.
 Martínez Urreaga, J.; Narros Sierra, A.; De La Fuente García-Soto, M.M.; Pozas
Requejo, F.; Díaz Lorente, V.M. Experimentación en Química General. Capítulo 5. Ed.
Thomson Paraninfo, 2006.
 Hernández-Hernández, L.; González-Pérez, C. Introducción al análisis instrumental.
Capítulo 3. Ed. Ariel Ciencia, 2002.

Práctica No. 4. Ley de la conservación de la materia

Introducción
Objetivo
Llevar a cabo una serie de reacciones químicas para entender que la masa no se crea ni se
destruye, sino que solo se transforma.
Equipo, material y reactivos
Material
• Vaso de precipitado de 250 ml
• Embudo de filtración
• Papel filtro
• Agitador con gendarme
• Tripié y tela de asbesto
• Mechero

Equipo
• Balanza digital con precisión 0.01 g
• Estufa

Reactivos
• Nitrato de cobre II trihidratado
• Cobre
• Acido sulfúrico
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• Zinc
• Hidróxido de sodio 6M

Procedimiento
PROBLEMA A SOLUCIONAR
¿Qué masa de cobre reacciono con HNO3 de acuerdo a la siguiente ecuación?
Cu + 4HNO3 → Cu(NO3)2 + 2NO2 + 2H2O
1. Mida con la mayor precisión y exactitud 10 ml de la disolución problema de nitrato de
cobre, obtenida de la reacción de cobre con ácido nítrico concentrado, y colóquelos en
un vaso de precipitado de 250 mL.
2. Añada aproximadamente 90 mL de agua y 5 mL de NaOH 6 M}
3. Permita que el precipitado se asiente y observe el color de la disolución. Si todavía
muestra color, continue agregando sosa hasta que la precipitación sea completa.
Registre en la tabla 2 el volumen utilizado.
4. Caliente la muestra hasta observare un cambio completo de color.
5. Filtre el precipitado tres veces con 10 mL de agua destilada.
6. Añada sobre el papel filtro H2SO4 3M hasta que todo el precipitado reaccione y se
disuelva. Reciba el filtrado en un vaso de precipitado. Registre en la tabla 2, el volumen
de ácido sulfúrico utilizado.
7. Finalmente añada a la disolución una o dos granallas de zinc previamente pesadas y
permita que la reacción sea completa. Si la disolución sigue presentando color, añada
un poco mas de zinc. Registre en la tabla 2, la cantidad de zinc utilizado.
8. Filtre sobre un papel o un embudo poroso previamente pesado; el cobre obtenido lávelo
varias veces con agua destilada y finalmente con 5 mL de una mezcla de alcohol y
acetona.
9. Seque en la estufa hasta que se registre un peso constante
10. Registre la masa de cobre obtenida en lqa tabla 1
11. Repita el experimento por lo menos tres veces.

TABLA 1

Muestra 1 Muestra 2 Muestra 3

Masa del precipitado
(cantidad del Cu en 10 mL
de disolución problema)

Cuestionario
1. Complete las ecuaciones que corresponden a las reacciones sucesivas que se llevaron
a cabo y escriba las características físicas de los compuestos de cobre formados.
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Cu + 4NHO3 →
Cu(NO3)2 + 2NaOH →
Cu(OH)2 →
CuO + H2SO4 →
CuSO4 + Zn →
Zn + H2SO4 →

2. Calcule la cantidad de reactivos que se requerirían en el caso de que la masa inicial de

cobre fuera de 0.5 gramos y compárelas con las que se utilizaron en el experimento.
Registre sus datos en la tabla 2.

TABLA 2

Reactivo Cantidad teórica Cantidad experimental

HNO3 conc. 14 M
(mL)
NaOH 6 M (mL)
H2SO4 3M (mL)
Zn (g)
Cu (g)

3. ¿Qué pasa si se agrega una cantidad de reactivo mayor a la que se necesita

estequiométricamente, para llevar a cabo las transformaciones de los compuestos de
cobre?

4. Calcule el porcentaje de error una vez conocida la cantidad de cobre inicial.

Reporte de la práctica

Elabore un reporte de practica de acuerdo al anexo A

Bibliografía
• Burriel G. (1989). Química Analítica Cualitativa. Editorial Paraninfo, Madrid, España.
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Práctica No. 4. La Química en los Alimentos

Además del costo y valor nutritivo, la calidad es un tercer factor importante que decide el valor
comercial de un producto alimenticio. En los productos alimenticios que han sido objetos de un
proceso de elaboración, la calidad indica el grado de éxito al conservar las propiedades
deseables del material bruto y las características especificas deseadas para el producto
elaborado.
El aspecto y color depende principalmente de los pigmentos presentes, de los caracteres físicos
de la superficie y del tamaño de sus partículas.
Entre los pigmentos vegetales más importantes se encuentran, las clorofilas, antocianinas, los
carotenoides y las flavonas la química de estos pigmentos se conoce bastante bien y muchos
de ellos han sido sintetizados.
La textura y consistencia varían muchísimos en los productos alimenticios vegetales.
El sabor es el factor más difícil de medir, entre los que se relacionan con la calidad. Para
evaluarlos suele recurrirse a las pruebas organolépticas.
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La naturaleza química de los compuestos que comunican sabor y olor, solo se han determinado
completamente en unos cuantos productos vegetales.
Objetivo

 Comparar las características de los vegetales cuando son conocidos por varios
métodos.
 Comparar los efectos producidos por estos métodos de conocimientos de vegetales que
contienen varios pigmentos y sobre otros como coliflor y cebollas que tienen problemas
especiales de sabor.
 Apreciar los efectos conocidos por la concentración de ion de hidrogeno en el color de
algunos vegetales.

Equipo, material y reactivos

Material
 1 agitador de vidrio
 1 embudo de filtración
 4 goteros
 1 mortero
 7 pipetas graduadas de 5 ml
 1 probeta de 10 ml
 2 probetas de 50 ml
 14 tubos de ensayo
 5 vasos de precipitados de 250 ml
 1 anillo
 1 espatula
 1 gradilla
 1 mechero
 1 soporte
 1 tela de alambre con asbesto
 1 papel filtro

Reactivos
 Acetona 10 mL
 Acido clorhídrico 10% vv 2 mL
 Bicarbonato de sodio 1 g
 Hidróxido de sodio 10% PV 2 mL
 Solución a pH=3 10 mL
 Solución a pH=5 10 mL
 Solución a pH=7 10 mL
 Solución a pH= 9 10 mL
 Agua
Muestras
 Habas verdes
 Col roja o betabel
 Cebolla
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 Espinacas
 Vinagre

Procedimiento
b) Toma de muestra
c) Experimento en laboratorio

En la preparación de alimentos (ya sea de origen vegetal o animal) frecuentemente

degradamos algunas sustancias con valor nutritivo., disminuyendo la calidad de dicho alimento.
Los efectos producidos por la concentración de ión hidrógeno sobre los colores de varios
pigmentos vegetales, son estudiados mediante la experimentación con extractos y vegetales
previamente cocinados, para conocer el grado de alteración en la calidad de vegetales ya
procesados. Para ello, siga las instrucciones dadas a continuación:
Experimento 1. Preparación de extractos vegetales.
a) Mezcle perfectamente 10 g de betabel finamente cortado en 10 mL de agua destilada y
caliente a ebullición. Si es necesario puede agregar un poco más de agua, procurando
que la solución quede lo más concentrada posible.

Después de calentar, filtre y conserve el extracto en un tubo de ensayo.

b) Pese 5 g de espinacas cortadas en trozos pequeños y muélalos en el mortero,
adicionando 10 mL de acetona. Filtre recibiendo el extracto en un tubo de ensayo.
c) Corte muy finamente 10 g de cebolla y colóquelos en un vaso de precipitados que
contenga 20 mL agua. Caliente a ebullición y filtre. Consérvese el extracto en un tubo de
ensayo.

Experimento 2 Efecto del pH en el color de varios pigmentos.

a) Batalainas
Coloque 5 mL de soluciones de pH 3,5,7 y 9 en tubos de ensayo. Adicione de 5 a 10
gotas del extracto de betabel a cada tubo (el mismo número de gotas para cada tubo) y
observe el color en cada uno de ellos después de 15 minutos.
Anote sus resultados

b) Clorofila

Repita el procedimiento anterior, utilizando el extracto de espinacas.

c) Taninos

Coloque 5 mL de extractos de cebolla en 3 tubos de ensayo y numérelos.

Al tubo num. 1 agregue 2 mL de NaOH al 10% (P/V)
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Al tubo num. 2 agregue 2 mL de HCl al 10% (V/V)

Al tubo num. 3 le servirá de control. Si después de 15 minutos no hay un cambio de color,
caliente el tubo en baño María. Anote los cambios de color.
Experimento 3 Efecto del pH en el calentamiento de vegetales.
a) Habas

Pese aproximadamente 30 g de habas verdes y córtelas en trocitos. Divida en tres partes y

coloque cada una de ellas en un vaso de precipitados numerados que contengan 25 mL de
agua.
Al vaso num.1 adicione 0.5 g de NaOH3, al num. 2 vierta 0.5 mL de vinagre y el tercero servirá
de control.
Caliente los vasos a ebullición por 10 minutos cubriendo los vasos con papel aluminio.
Determine el pH de la solución y decante los trozos de haba. Anote todas las características
observadas en las habas, calentadas bajo diferentes condiciones.
b) Betabel

Corte 30 g de betabel en trozos pequeños, divídalos en 3 porciones y proceda como en el paso

anterior, sólo que esta vez caliente por 20 minutos.
Registro y análisis de resultados
Para el experimento 2 describa el color de cada extracto, compare el color en los diferentes
valores de pH e indique los rangos de pH en que cambian de color los extractos.
En el experimento 3 indique que los resultados finales de color, textura de cada vegetal y sabor
usando una escala apropiada.
Cuestionario
1. Explique si se obtienen los mismos resultados para vegetales verdes diferentes a la
espinaca.
2. Indique cómo influye el pH en el color de las anotaciones.
3. Compare el efecto del bicarbonato de sodio y el vinagre sobre el color de los vegetales
cocinados con los resultados del experimento 1 y explique el fenómeno.
4. ¿Como afecta el ácido y el álcali en la textura de los vegetales procesados?
5. ¿Qué factores alteran la textura y el sabor de los vegetales al cocinarlo?

Reporte de la práctica

Bibliografía
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Práctica No. 2. Determinar la acidez de aguas residuales y domesticas

Introducción
Objetivo
Equipo, material y reactivos
Procedimiento
d) Toma de muestra
e) Experimento en laboratorio

Cuestionario
Reporte de la práctica

Bibliografía

Practica No. 3 métodos de separación I. Cromatografía.

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I. Objetivos
1. Realizar separaciones de mezclas complejas por cromatografía en columna y en papel
2. Mostrar como los productos naturales y los fabricados por el hombre son en general mezclas de
sustancias.
3. Aplicar la cromatografía en papel para la identificación de los componentes de una mezcla.
II. Introducción
Separar es sin duda un concepto obvio para todos nosotros. Sin embargo, desde el punto de vista químico
es difícil dar una definición precisa y completa. En la síntesis y el análisis, las dos grandes vertientes de la
química, las técnicas de separación son piedras angulares y se utilizan con diversidad de fines: purificar,
concentrar o aislar sustancias. Quizás la mejor definición sea: separar, es una operación por medio de que
una mezcla se divide en dos o más fracciones de composición diferente.
Podemos encontrar procesos de separación tanto en la evolución natural del universo, como en las
actividades del hombre. La vida misma depende de la ejecución oportuna y eficiente de separaciones
selectivas como la respiración, la absorción de nutrientes ola eliminación de sustancias toxicas. El
desarrollo de la industria química, petroquímica y farmacéutica está fincando en métodos eficientes de
separación y, gracias al desarrollo de mejores técnicas, la ciencia a podido desentrañar algunos de los
misterios químicos de la naturaleza.
El uso de procesos de separación por el hombre para beneficiarse del medio que lo rodea no es nuevo, en
el desarrollo de la técnica y del conocimiento a lo largo de la historia de la civilización han jugado un
papel fundamental. Por citar algunos ejemplos que han marcado el curso de la historia podemos
mencionar los procesos metalúrgicos, la obtención de productos farmacéuticos, la extracción de colorantes
y el enriquecimiento del uranio. Aun en los textos mas antiguos hay ejemplos del uso de técnicas de
separación, bien podría ser que el endulzamiento del agua echo por Moisés, tal como lo describe la Biblia,
fuera la primera referencia escrita de un proceso de intercambio iónico.
La tecnología, en forma paralela a los beneficios, han generado problemas que obscurecen en horizonte a
la civilización. La contaminación, uno de los más graves, tendrá solución con el desarrollo de métodos de
separación más económicos y eficientes.
Existe una gran variedad de métodos, basados en propiedades diferentes como la presión de vapor, la
solubilidad, la carga eléctrica, el tamaño molecular, etc; y que se explotan en forma de operación muy
diversas. Podríamos enlistar mas de veinte procedimientos de separación, de los cuales cerca de una
docena son operaciones usuales en el laboratorio y la industria química.
Seria imposible presentar en una sesión de laboratorio todos los métodos, en esta ocasión no limitaremos a
ilustrar algunas técnicas cromatográficas que son cada día más importantes en el laboratorio químico, pues
permiten separar, aislar, purificar e identificar en forma muy sencilla los componentes de mezclas muy
complejas.
La cromatografía puede definirse como una técnica de separación basada en el movimiento diferencial de
las sustancias individuales, en un medio poroso y por el transporte de un fluido móvil. Esto quiere decir
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que tenemos un sistema constituido por dos fases, una estacionaria y otra móvil que fluye a través de ella.
Al introducir una mezcla de sustancias en el sistema, individualmente cada una interacciona con ambas
fases y avanza en el sistema empujada por la fase móvil a una velocidad determinada por la magnitud de
las interacciones.
Aun cuando las posibilidades del método fueron apreciadas desde el principio del siglo por el botánico
tswett, se encuentra todavía en un pujante desarrollo sujeta a continuas innovaciones. Podemos ilustrar la
importancia de la cromatografía en la ciencia indicando que dos premios Nobel, A. Tiselius en 1984 y
A.J.P. Martin y L.R.M. Synrge en 1952, fueron concedidos por el desarrollo de procedimientos
cromatográficos y que en mas de una docena de veces la cromatografía ha jugado un papel vital en
trabajos distinguidos con este premio.
Adicionalmente al uso de algunas técnicas cromatográficas para la separación, aislamiento e identificación
de sustancias, en esta practica se ilustra como, tanto los productos naturales y los manufacturados por el
hombre son, las mas de las veces, mezclas mas o menos complejas donde la presencia de los diversos
componentes cumple una función determinada.
V. Prevención y seguridad en el laboratorio
Antes de iniciar el trabajo experimental lea cuidadosamente lo relativo a seguridad anotado a continuación
y en el procedimiento, donde se hace énfasis sobre ella. Si tuviera alguna duda, recurra a su profesor.
Debido a que su seguridad y la de sus compañeros es el factor mas importante en su trabajo experimental,
no olvide observar todas las precauciones señaladas.
CLOROFORMO (CHCI3)
Es un líquido muy volátil no inflamable, de olor característico. Es irritante de la piel y por inhalación
puede provocar hipotensión, depresión respiratoria y del miocardio; en dosis altas puede provocar la
muerte. Ha sido catalogado como carcinogénico potencial.
Evite inhalar los vapores, úselo en lugares con buena ventilación.
N-BUTANOL (CH3-(CH2)3-OH)
Líquido inflamable, de olor característico. Sus vapores son irritantes de las membranas mucosas y puede
causar dermatitis por contacto; la inhalación puede provocar dolor de cabeza y aturdimiento.
No lo use cerca de la flama y trabaje en lugares bien ventilados.
CLORURO MERCURICO (HgCl2)
Altamente toxico, evite ingerirlo y el contacto con la piel. La ingestión de 1 a 2 g es con frecuencia fatal.
VI. Procedimiento
Separación de pigmentos vegetales
Cromatografía en columna
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El primer experimento se hará con una columna cromatográfica. La cromatográfica en columna permite el
manejo de cantidades relativamente grandes de muestras (del orden de gramos), dependiendo de las
dimensiones del sistema. Esto hace que sea una técnica útil para aislar y justificar sustancias.
Para logar una separación adecuada es necesario que la columna se encuentre bien empacada con el
material de relleno, libre de fracturas e inhomogeneidades.
Preparación de la columna cromatográfica
Con un soporte y unas pinzas de tres dedos fije la columna en posición vertical, a una altura tal que pueda
colocar debajo de un vaso de precipitado de 500 ml. Con la llave de paso cerrada vierta un poco de
cloroformo en la columna, añada un poco de algodón y ayudándose con la varilla de vidrio forme un tapón
en el fondo de la columna, procure expulsar todo el aire atrapado y evite comprimir demasiado el tapón.
En un matraz Erlenmeyer de 125 ml ponga 12 g de silica y 50 ml de cloroformo, con un movimiento
circular agite hasta formar una suspensión con todo el material. Vierta la suspensión poco a poco en el
interior de la columna dejando que sedimente el solido y abriendo la llave para drenar el exceso de
disolventes. NO PERMITA QUE EL SOLIDO QUEDE DESCUBIERTO POR DISOLVENTE, esto
provocaría factores en el empaque y un funcionamiento inadecuado de la columna.
Cuando haya añadido todo el material o la altura del lecho este un par de centímetros debajo del bulbo
suspenda la adicion del adsorbente. Ayudándose con la varilla de vidrio y sin alterar la superficie del
lecho, coloque un tapo de algodón de 0.5 cm expulsando el aire atrapado. Abra la llave de paso y ajuste la
altura del disolvente al ras del lecho empacado. RECUERDE QUE NO DEBE DEJAR SECAR EL
RELLENO DE LA COLUMNA. Cierre la llave de paso y la columna estará lista para recibir la muestra.
Deseche el disolvente del vaso colector en la forma que le indique el instructor y vuelva a colocar elvaso
debajo de la columna.
Preparación de la muestra
En un mortero ponga 3 o 4 g de la hoja de espinaca finamente picada, agregue una cantidad semejante de
vidrio pulverizado y muela la muestra 30 o 40 segundos. Ponga la pasta formada en el frasco de 50 ml,
añada 50 ml de cloroformo, tape el frasco y agite vigorosamente durante un minuto. Deje reposar hasta
que sedimenten los solidos y con una pipeta Pasteur transfiera un poco de la solución verde en un tubo de
ensayo.
Desarrollo del cromatograma
En la columna empacada ponga, con la pipeta Pasteur, de 5 a 10 gotas del extracto obtenido. Agréguelo
directamente sobre el algodón evitando escurrir las paredes de la columna. Deje drenar lentamente la
columna hasta que la muestra penetre en la parte superior del lecho, cierre la llave. Complete el volumen
del tubo con cloroformo y con la llave de paso ajuste el flujo a una gota por segundo aproximadamente.
Observe cuidadosamente lo que ocurre y anote sus observaciones. Mantenga el flujo de la columna hasta
que hayan eluido unos 300 ml del disolvente, añada cloroformo tantas veces como sea necesario
procurando mantener el nivel.
Este pendiente del componente que migra mas rápidamente, intente colectarlo a la salida de la columna en
un matraz de 125 ml. Anote cuantos pigmentos distintos observa, en que orden eluyen y de qué color son.
Cromatografía en papel
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En los siguientes dos experimentos utilizaran otra técnica cromatográfica, la cromatografía en papel. Por
sus características es de menor capacidad de la columna, se debe usar menor cantidad de muestra, pero
tiene mayor eficiencia y el grado de separación que se obtiene es mayor. Así, su principal aplicación es, en
el análisis químico.
Preparación de la cámara de desarrollo
En estos ejemplos utilizaremos la técnica ascendente para el desarrollo de los cromatogramas y la
preparación de la cámara es muy simple.
Vierta en el interior de la cámara una cantidad suficiente del disolvente para tener un nivel de unos 2 cm.
Sobre una de las paredes ponga una hoja de papel filtro e inclinando la cámara imprégnelo con el
disolvente, una vez húmedo ayúdese con la varilla de vidrio para que quede adherido a la pared. Si es
necesario reajuste el nivel de disolvente para tener una profundidad de 2 cm, tape la cámara y deje que se
sature con los vapores del líquido.
Preparación del papel cromatográfico
Tome una hoja de papel filtro y en el extremo opuesto al de las perforaciones, trace suavemente con un
lápiz una paralela al borde a unos de 3 cm de distancia. Sobre esta recta trace pequeñas marcas a
intervalos de aproximadamente 1.5 cm. Sobre cada una de estas puede aplicar una muestra, para ello
sumerja la punta de un tubo capilar en la muestra y luego toque con el capilar la muestra sobre el papel.
Procure que la gota que se deposita no se extienda demasiado y deje secar las muestras aplicadas.
Separación de tintas.
Siguiendo el procedimiento descrito aplique sobre un papel cromatográfico muestras de tinta de distinto
color. Repita alternadamente la aplicación hasta utilizar todas las marcas, anote con un lápiz a que tinta
corresponde cada muestra. Desarrolle el cromatograma en una cámara que contenga la mezcla butanol-
etanol-amoniaco como fase móvil.
Desde la línea de aplicación de muestra mida la distancia recorrida por el disolvente y por cada uno de los
componentes separados (mida la distancia al centro de las manchas).
Separación de cationes metálicos
Sobre un papel cromatográfico aplique en las primeras cuatro marcas, muestra de las soluciones del
bismuto, cadmio, cobre y mercurio; en las dos siguientes aplique la muestra problema y en las que restan
repita las muestras de los cationes.
Anote la cantidad de cada muestra. Deje secar las muestras y desarrolle el cromatograma en una cámara
con n-butanol saturado con acido clorhidrico 3N.
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