PREPARACIÓN Y ESTERILIZACIÓN DE

Realizado por:
Aranda De Ita Andrea

MATERIAL Y MEDIOS DE CULTIVO

Jimenez Gutierrez
Fernanda Itzel

OBJETIVOS:
• Explicar el concepto de esterilización y su utilidad en microbiología. • Comprobar la efectividad del proceso de esterilización.
• Preparar correctamente el material que se someterá a esterilización. • Explicar el concepto de medio de cultivo en microbiología.
• Aplicar algunas metodologías para esterilizar material y medios de cultivo. • Eliminar adecuadamente los desechos biológicos.
RESULTADOS:
Tabla 1. Lavado y empaquetado de material

Tabla 2.
Esterilización
por calor seco
y húmedo

Tabla 3. Preparación de medios de cultivo

ANÁLISIS DE RESULTADOS:

Al término del lavado de material se debe verificar la ausencia de espuma y realizar una prueba de pH para ver que el material se
encuentra completamente limpio, esto se realiza para evitar que se afecte el resultado por las residuos químicos de un experimento
previo y si queda detergente este puede disolver las membranas de los microorganismos y provoca un pH alcalino que afecta las
condiciones óptimas de crecimiento ya que la mayoría de los microorganismos son neutrófilos.
Antes de una esterilización ya se por calor húmedo o calor seco el material se debe empacar con papel kraft de una forma
específica; los tubos de micropipetas y las cajas petri de vidrio se deben de envolver empleando una técnica similar a la de la
envoltura de regalo.Por otra parte los tubos de ensaye y el matraz se les debe realizar una torunda, lo tubos se introducen dentro de
un bote de metal,el matraz y el bote se cubren con una cachucha o gorrito de papel kraft para evitar que se humedezcan la torundas
y se sellan con masking, además de esto se debe colocar un poco de cinta testigo la cual es un indicador químico de esterilidad
(Imagen 18).El empacado sirve aislar su contenido interno y poder trabajar con los microorganismos,y conservar su esterilidad
aunque no se ocupe de inmediato.
Una esterilización es el proceso mediante el cual se eliminan todas las formas de vida de un objeto o superficie, de manera que un
producto estéril es aquel que está libre de microorganismos viables.Para que el proceso sea eficiente, los objetos o sustancias
deben ser acondicionados de tal forma que no puedan contaminarse nuevamente.
La esterilización con el uso de autoclave debe de realizarse de manera cuidadosa debido que es un recipiente de presión y posee un
cierre hermético el cual es el encargado de que trabaje a un alta presión para poder llevar su proceso con vapor de agua, las condiciones ideales del autoclave es a 15 ib/in2 por 15-20 minutos a 121°C; se debe verificar que al momento de emplear el autoclave el
volumen del agua cubra perfectamente las resistencias y sea el correcto (Imagen 9 y 10), al momento de cerrar el autoclave debe de realizarse de manera cuidadosa cerrando dos llaves al mismo tiempo en posición contraria empleando la misma fuerza (Imagen
11), por otra parte las válvulas deben de estar abiertas hasta que el autoclave alcance la temperatura ideal (purgado), una vez llegada a la temperatura se deben de cerrar (Imagen 12) y esperar que llegue a la presión adecuada (Imagen 13) para comenzar a
tomar el tiempo de esterilización. Los indicadores nos permiten evidenciar si los procesos de esterilización se realizan de manera adecuada. Existen indicadores físicos, químicos y biológicos; dentro del autoclave se emplean los 3: manometro y termometro, stim
clocx(Imagen 15,16 y 17) y cinta testigo (Imagen 18), y Geobacillus stearothermophilus (Imagen 19). En la esterilización con el horno se debe calentar a 180°C, ya a la temperatura adecuada con cuidado se introduce el material a esterilizar (Imagen 21) en este caso
fueron las pipetas perfectamente empaquetadas durante 1 hora, ya pasado el tiempo nuevamente con cuidado se retiró el material dejándolo enfriar por un momento (Imagen 22 y 23) y se desconecta el horno. En la esterilización por calor seco se puede utilizar
como indicador biológico las esporas de Bacillus subtilis y como físico se utiliza el termómetro (Imagen 14). Se tienen otros métodos de esterilización físicos como la incineración, filtración y radiaciones (Tabla 4) y otros que son químicos como con el óxido de etileno
el cual se basa en un proceso de difusión de gases, el óxido de etileno que es capaz de esterilizar y dejar los productos libres de microorganismos viables. La esterilización se produce cuando una molécula de gas de OE reacciona con un ADN microbiano y lo
destruye. El proceso requiere controlar simultáneamente cuatro parámetros variables, aunque interdependientes: concentración de gas, temperatura, humedad relativa y tiempo de exposición(Tabla 5. En esta esterilización se usa como indicador químico las
esporas de Bacillus atrophaeus(Imagen 20).
En la preparación de medios cada medio de cultivo se prepara de acuerdo a las condiciones que requerimos, los medios se clasifican de acuerdo a su composición, su aplicación y su estado físico. De acuerdo a su composición encontramos medios Complejos en
estos no se conoce la composición exacta del medio mientras que en los Definidos se conoce perfectamente su composición. El medio es un conjunto de componentes que crean condiciones favorables y necesarias de pH, humedad y temperatura para el buen
desarrollo de microorganismos.
Para la preparación de un medio líquido (caldo), se emplea un medio comercial deshidratado en este caso “triptona-soya” en el cual se pesa los gramos a emplear para un determinado volumen, posteriormente se vierte el medio y se añade agua destilada para
prepararlos, este tipo de medio se emplea para el crecimiento de los microorganismos.
En la preparación del medio semisólido, es parecido al caldo ya que se usa de igual forma el medio comercial triptona soya y se agrega el porcentaje adecuado de agar (0.4-0.8%),el agar al se insoluble en frío se calentó a ebullición hasta disolverse quedando
traslúcido y brilloso (Imagen 24) para después verterlo en tubos para su posterior esterilización. Este medio sirve para observar la movilidad y los requerimientos de oxígeno del microorganismo.
Para la preparación de medio sólido se utiliza medio sólido comercial el cual ya contiene el 1.5-2.0% de agar, por lo que no se debe agregar más agar, solo se añade el medio en un matraz y se agrega determinada cantidad de agua destilada, después se calentó
a ebullición hasta que se disolviera quedando brillos y traslúcido(Imagen 25), cabe resaltar que se agrego un poco de agua extra por la pérdida que hay en la ebullición. Posteriormente se distribuyó en 2 tubos 7 ml cada uno de medio y el resto en el matraz para
mandar al autoclave y realizar la esterilización del medio, una vez que el medio se esteriliza se deja enfriar a 45°C para posteriormente verterlo en cajas petri previamente esterilizadas.El medio sólido sirve para aislar y cultivar microorganismos.
Después de la preparación de cada medio y de su respectiva esterilización se debe verificar que el medio esté completamente estéril, en el caso del medio líquido líquido y semisólido no debe tener turbidez ni el crecimiento de algún tipo, en el medio sólido no debe
tener el crecimiento de colonias.

CONCLUSIONES:
Antes de esterilizar el material es importante previamente lavarlo y que este se encuentre perfectamente seco y empaquetado , de igual forma es importante conocer el fundamento de cada método de esterilización para determinar el que se debe de seguir para
cada material y así tenga una correcta esterilización y no dañarlo, como apoyo se emplean controles fisicos, quimicos y biologicos para poder evidenciar si la técnica se realizó de manera satisfactoria. Igualmente es indispensable saber cómo preparar, saber para
que sirve y tener cuidado con en el manejo de nuestros medios y realizar el vertido con nuestras técnicas asepticas y zona asepticas correctas para evitar la contaminación de los medios.

REFERENCIAS:
-Presentación de la profesora Martha Giles “Esterilización y medios de cultivo”
-Presentaciones de la Profesora Beatriz Ruiz Villafan “Controlando Microbios”
 ANEXO
Tabla 4.Métodos físicos de esterilización

Tabla 5. Métodos químicos de esterilización

Autoclave

Tabla 6. Métodos Físico "Filtración" de esterilización

Tabla 6. Indicadores de esterilización

HORNO

Preparación de medios