CITOLOGIA, HISTOLOGIA Y EMBRIOLOGIA

TECNICAS HISTOLOGICAS

Histología: Estudio de tejido a nivel morfológico y funcional

• Se define como la ciencia que estudia los tejidos de los seres vivos en su estado normal (como anatomía
macroscópica). Su principal objetivo es el análisis de cada una de las diversas asociaciones celulares, sus
características morfofuncionales y localización.
• Histo significa estudio y logos (de logia), significa estudio.
• biológicamente un tejido se define como una agrupación de células que son morfológicamente semejantes,
derivan de una misma hoja embrionaria (endo, ecto o meso) y cumplen una función similar.

Propiedades de los tejidos:

Capacidad de crecimiento (desarrollo) y/o regeneración

(tejidos maduros):
Regeneración de tejidos; Restauran partes del organismo que
están dañadas por otras iguales o semejantes. Es un proceso
regulado.
1) Hipertrofia: Incremento de tamaño de un órgano o parte de
uno debido al aumento del tamaño de células.
• Surge como respuesta a un incremento, ya sea en las
exigencias funcionales de un órgano o por estimulación por
factores de crecimiento o hormonas.
• Ejemplo: Exigencia funcional (Ejercicio físico permanente, hay
incremento en fibras musculares).
• No es lo mismo que un medio hipotónico donde solo entra
agua, ya que lo que ocurre en el medio en este caso es que la
cantidad de componente citoplasmático producido por la célula aumenta.

2) Hiperplasia: Aumento anormal del tamaño de un órgano o tejido orgánico debido al incremento del número
de culares anormales que los forman.
• Hiperplasia fisiológica, hay una de origen “hormonal” y otra de “compensación” en donde hay un incremento
en la masa del tejido después de una lesión o extracción de alguna porción de un órgano. La hiperplasia
prostática es patológica.
Hipertrofia e hiperplasia juntas: Miometrio (parte músculos del útero).
• Las fibras musculares tienen un tamaño, pero empiezan a recibir una serie de señales hormonales, que
indican que órgano tiene que aumentar su tamaño porque hay que darle cavidad al feto que va creciendo.
• Hacen “hipertrofia”, pero llegan a un punto en el que no pueden seguir aumentando tamaño, pero siguen
recibiendo señales de que debe ocurrir un aumento de tamaño del órgano, estas fibras ahora deciden
dividirse “hiperplasia”.
• Células mantienen ciertas porciones entre volumen y superficie, ciertos rangos para que la célula pueda
funcionar bien,
Capacidad de cultivo: Se relaciona con el hecho de que podemos mantener los tejidos fuera del organismo
que le dio origen, bajo ciertas condiciones.
1) Cultivo in vitro: Implica que tomemos nuestros tejidos, los llevemos al laboratorio, los colocamos en placa
Petri (con nutrientes, y condiciones ambientales), haciendo que crezcan en los laboratorios.
2) Injerto/ cultivo in vivo: Se transfiere material de un donador a un receptor y en este caso se transfieren
tejidos.
Trasplante/ injerto: En ambos se transfiere material de un donante a un receptor, a veces distintos o de mismas
personas. Trasplante es cuando el material es un órgano e injerto cuando el material transferido es un tejido.
❖ Los tejidos son específicos.

Clasificación de los tejidos

Según forma; Tejido epitelial; células muy juntas por uniones intercelulares que les permiten cubrir superficies
internas y externas, en forma de barrera.
Tejido conectivo; Células separadas entre ellas con harta matriz extracelular. Une los tejidos.
Según función; Tejido muscular; tiene como función principal la contracción con la cual generamos un
movimiento.
Tejido nervioso; Impulso nervioso.

Todas las células salvo aquellas que en su citoplasma poseen sustancias o partículas coloreadas como carotenos, melanina,
licopeno o exógeno (carbón); son incoloras. Es por eso por lo que se tiene que teñir, aprovechando su afinidad química
de los componentes estructurales de la célula con sustancias que tienen un color característico (colorantes), que
será transmitido a la estructura de estudio al producirse una reacción química.
Células aisladas o disociadas, o tejidos muy delgados como pleuras, peritoneo, pericardio, meninges y otras, no hay problema.

Cultivos:
❖ Cultivo de células: Células aisladas no organizadas en tejido
❖ Cultivo de tejido: Transferencia de un trozo de tejido embrionario
❖ Cultivo de órganos: Explante de órganos embrionarios o maduros.

Microscopia
Características del microscopio óptico:
Poder de aumento: Razón entre el tamaño de la imagen que produce el microscopio y el tamaño original del
objeto en observación.
Poder de definición: Capacidad de formar imágenes nítidas y de bordes definidos.
Poder de penetración: Capacidad para visualizar los diferentes planos de una preparación, y se da por el
ajuste de precisión que se logra con el tornillo micrométrico.
Poder de resolución: Capacidad de percibir dos puntos muy próximos entre sí. Esta capacidad esta
determinada por la apertura numérica (NA) de la lente, siendo directamente proporcional a esta, e inversamente
proporcional a la longitud de onda utilizada (𝜆). Mientras que el reciproco del poder de resolución corresponde
al limite de resolución, la distancia mínima que debe existir entre dos puntos para poder distinguirlos por
separado.

𝑁𝐴 0,61 𝑥 𝜆
𝑃𝑜𝑑𝑒𝑟 𝑑𝑒 𝑟𝑒𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖𝑜𝑛 = 𝐿𝑖𝑚𝑖𝑡𝑒 𝑑𝑒 𝑟𝑒𝑠𝑜𝑙𝑢𝑐𝑖𝑜𝑛 =
0,61 𝑥 𝜆 𝑁𝐴
Unidades:
• 1 (Mm) micrómetro es 0,001 milímetro (mm)
• 1 nanómetro es 0,001 micrómetro.
Datos:
• El ojo humano tiene un límite de resolución de 0,2 mm
• El microscopio óptico de 0,2 Mm
• El microscopio electrónico de barrido 2 nanómetros
• El microscopio electrónico de transmisión 1 nanómetro.

Microscopio óptico compuesto: Esta formado por 3 sistemas; mecánico, de iluminación y óptico
Instrumento formado por lentes ópticos (vidrios con diferentes curvaturas que permiten aumentar el tamaño de
la imagen). Usa luz blanca como fuente lumínica. Permite aumentar la imagen (1000x).
Partes ópticas:
• Ocular: Es la parte que contacta con el ojo. Amplia la imagen del lente objetivo. La imagen del microscopio
óptico es mayor que el objeto, virtual e invertida. Tiene un aumento predeterminado de 10
• Objetivo: Es el lente que se encuentra cerca del preparado. Amplia la imagen (4X,10x,40x, 100x) Y recoge
la luz que ha atravesado la muestra
• Aumento total: 10 ocular x aumento del objetivo
Iluminación:
• Fuente de luz: Ampolleta que emite luz.
• Condensador: Es una lente que concentra los rayos luminosos sobre el preparado
• Diafragma: regula la cantidad de luz en el condesado
Partes Mecánicas:
• Base o pie y columna
• Cabezal: contiene a él o los oculares
• Revolver: contiene a los objetivos
• Soporte: es la base y el brazo
• Platina: donde se apoya el preparado
• Tornillo macrométrico: asciende o
desciende verticalmente el tubo del
microscopio
• Tornillo micrometrico: moviliza el tubo
o la platina para lograr enfoque
exacto y nítido de la preparación
 Tipos de microscopios ópticos:

1. Microscopio de campo claro: la muestra se observa más oscura que el campo que la rodea

2. Microscopio de contraste de fases: Se añaden anillos ópticos en la lente condensadora y en lente

objetivo que cancela la amplitud del has refractada y da contraste a la imagen. Permite examinar tejidos
no teñidos y células vivas en cultivos. Las partes invisibles de una preparación son atravesadas por la
luz, sin que cambie su amplitud, pero produciendo un cambio en su fase. En este microscopio los
cambios de fase de la luz se traducen en cambios de amplitud,

3. microscopia de campo oscuro: Tienen un condensador especial que ilumina el preparado con mucha
intensidad, pero de Forma muy oblicua, así el campo se ve oscuro y sobre él se detectan pequeñas
partículas. De la muestra que refleja parte de la luz y aparecen brillantes. Así los rayos de luz no penetran
directamente en el objetivo. Solo los rayos de luz refractados por las estructuras, de la muestra pasaran
por el objetivo. Se utiliza para observar células móviles como la treponema Palladium.

4. Microscopia de fluorescencia: Aprovecha la capacidad de ciertas moléculas para emitir fluorescencia

(emiten parte de la luz que absorben a longitudes de onda mayores a las que reciben) al ser iluminadas
(pasa con clorofilas). Estas moléculas deben ser marcadas previamente con fluorocromos (moléculas
que emiten fluorescencia). La luz usada es de corta longitud de onda, y se logra por el uso de lámparas
de mercurio. Esta luz incide en la muestra y se ve la fluorescencia proveniente de ella. Se utiliza para
observar antígenos y anticuerpos en Inmunohistoquímica, trayecto de fibras nerviosas o uniones
intercelulares.

Microscopia electrónica:
Nace en 1936. El adelanto de la microscopia electrónica en comparación con la óptica es que la longitud de
onda del haz de electrones es de es una 2000 veces menor que el haz de luz con lo que aumenta la resolución.
Consta de un tubo de rayos catódicos. Utiliza un haz de electrones, no un haz de luz como el óptico.
Microscopio electrónico de transmisión (MET): utiliza la interacción de un haz de electrones dirigidos por
electroimanes, con la muestra para producir una imagen. Como los electrones tienen una longitud de onda
mucho menor que la luz se van a poder ver estructuras mucho más pequeñas. Un filamento de tungsteno
calentado emite electrones (cátodo) que son atraídos por el ánodo. Una diferencia eléctrica entre el ánodo y el
cátodo imparte aceleración a los electrones que forman un haz, la lente condensadora da forma al haz de
electrones que alcanza el plano de la muestra y cambia su diámetro. El haz que ha atravesado la muestra es
enfocado y aumentado por un lente objetivo, luego vuelve a ser aumentado por una lente proyectora y la imagen
se mira en una pantalla.
Las partes de la muestra que han sido atravesadas por los electrones aparecen claras (electrolucidas) y las
partes que han absorbido y dispersado electrones por su densidad o adición de metales pesados aparecerán
oscuras (electrodensas). Aumenta la imagen hasta 200.000 veces (puedo ver el interior de una mitocondria, por
ejemplo). Las imágenes son bidimensionales, las muestras deben ser de grosor mínimo.
Microscopio electrónico de barrido (MEB): el haz de electrones no atraviesa la muestra, sino que barre su
superficie. Los electrones reflejados por la superficie y los electrones que son expulsados desde la superficie
son recogidos por un detector o más y reprocesados para formar una imagen tridimensional en un Tubo de
rayos catódicos de alta resolución. Aumenta 100.000 veces la imagen (puedo ver glóbulos rojos en 3d y a color),
no importa el grosor de la muestra. Se pueden tomar fotografías o grabarse la imagen. Obtiene imágenes 3D.
TECNICAS DE ESTUDIO HISTOLOGICO

Se estudia una capa muy delgada de la muestra de un tejido, se busca estudiar de tal manera que se asemejen su
estado natural.
¿Cuál es el objetivo de las técnicas histológicas? Hay que destacar las distintas estructuras de los tejidos, que se
mantengan lo mas parecido a lo real. Se busca conservar lo más exacto posible la forma y tamaño, además de la
estructura de las células y tejidos. La técnica mas habitual es la inclusión en parafina.
Examen inmediato o in vitro: Tejidos y células vivas. En estos casos para evitar la desecación y prolongar la posibilidad
de observación, se agregan líquidos como suero sanguíneo o fisiológico.
Examen mediato o de post mortem: Tejidos y células muertas.

Etapas de la técnica histológica:

(1) Extracción:
Obtener la muestra a analizar, puede ser de distintas formas;
• Biopsia (muestra de un ser vivo) (Es la pequeña muestra de tejido para hacer un análisis, por ejemplo,
extracción de la medula ósea).
• Necropsia: Muestra de material muerto, post muerte.
• Por obtención del órgano completo (caso de animales de laboratorio).
• De muestras de cultivos, frotis o extendidos.
• Se corta la pieza en pequeños trozos de 1 a 3 cm.
La muestra se coloca en cajitas de plástico cassett, con unas ranuras. Una vez que este ahí no manipulamos
mas la muestra, solo con pinzas para mover los cassettes.
La extracción tiene que ser rápida para prevenir procesos de autolisis de la célula, porque cuando las células
sientes que no reciben nutrientes, ni O2, entran en proceso de muerte celular. También se busca prevenir la
alteración en las estructuras.
Tipos de biopsias:
1. Incisiones: Se extrae parte de la lesión, solo con el propósito de hacer diagnóstico, se recomienda en
lesiones de gran tamaño.
2. Excisional: Exceresis= Extirpación de una lesión completa, en un solo tiempo incluyendo el tejido normal
adyacente para tener un margen de seguridad, sirve para lesiones pequeñas.
3. Sacabocado: Se usa en piel buscando enfermedades cutáneas.
4. Por punción: Se usa en lesiones pequeñas y grandes, no se usa en forma indiscriminada, para evitar
errores diagnósticos.
a. Percutánea: A través de la piel.
b. Endoscópicas: El tejido se obtiene mediante instrumento
5. Por absorción: Punzar y absorber medula ósea.
6. Por trepanación: Agujerear el cráneo y se emplea para acceder quirúrgicamente a algunas operaciones en
neurocirugía.
7. Raspado: Se hace en la piel, donde se extraen las capas principales.
(2) Fijación:

Objetivos: Preservar la estructura de los tejidos, impedir la autolisis (acción lisosomal), abolir el metabolismo celular
(como que sigan procesos de degradación, ya que importan al querer estudiar lo presente en la célula).
• Como uno quiere estudiar la célula bien, lo mas importante es la mantención de estructuras, y esto
normalmente es difícil ya que, como consecuencia a la muerte celular, las enzimas de los lisosomas se
liberan y se produce la autolisis. La fijación lo que hace es mediante compuestos químicos penetrar
rápidamente la membrana plasmática y provocar la coagulación de las proteínas citoplasmáticas o la
formación de compuestos proteicos complejos que se mantienen en la célula.
• También permite destruir patógenos
• Endurece el tejido (solo ocurre en algunos casos), lo que facilita cortes delgados.

Fijador más habitual: FORMALINA, es líquida, translucida, tiene un efecto agua en soluciones al 4%, tiene
olor desagradable.
• Recordar: Tiene que ser muestra pequeña en gran volumen de fijador. Tiene que ser 10 a 20 veces el
volumen fijador respecto la muestra y ser fijado por 6 a 24 horas. Si se llena un frasco con harta, muestra y
poca fijación, la muestra se fijará por fuera y por dentro las células estarán haciendo autolisis.
• La mejor fijación es cuando a transcurrido menos tiempo entre la muerte del tejido y la fijación.
• La fijación se puede hacer por:
o Perfusión: Consiste en paso de la solución fijadora a través del sistema circulatorio.
o Inmersión: Consiste en sumergir completamente el material en la solución fijadora.

Clasificación de fijadores:
Físicos:
• Desecación: Procedimiento en que se reduce la proporción de agua del producto, evitando así la
proliferación bacteriana. (Se usa en frotis o extendidos, como en frotis de sangre periférica o de material
aspirado de medula ósea).
• Desecación por calor: No es frecuente porque deteriora los tejidos, coagula proteínas y disuelve lípidos.
Puede ser:
o Calor seco: En bacteriología sobre extendidos desecados. No en histología.
o Calor húmedo: En algunas investigaciones macroquímicas o para fijar invertebrados.
• Congelación rápida: Se consigue hundiendo la pieza en isopreno a menos de 170°c y enfriándola con
nitrógeno líquido. En histología se usa la congelación cuando se quiere identificar lípidos con técnicas
especiales como el sudan III o estudios histoquímicos. No es un verdadero fijador, pero detiene los procesos
vitales y los de necrosis y autolisis.
Químicos:
Simples:
• Formol: Formaldehido al 10% (mas usado), al ser efectivo, bajo costo y tener poca retracción tisular. Aunque
es un mal fijador de membranas y disuelve el glucógeno. En el comercio se encuentra como solución de
formaldehido al 40%.
• Glutaraldehído y tetróxido de osmio: Se utilizan en microscopia electrónica ya que preservan estructuras
finas.
• Alcohol etílico absoluto y a 95%; son malos fijadores, se usan para observar componentes celulares como
mucina y glucógeno. Frotis.
• Alcohol metílico: Para fijar extendidos de sangre y líquidos de punción.
Complejos:
• Liquido de Flemming (cromo-osmio-ácido acético).
• Liquido de Zenker (Bicromato sublimado- ácido acético).
• Liquido de Helly (Zenker- Formol).
• Liquido de bovin (Formol- acido pícrico- ácido acético).

Pasos de la fijación:
Después de la fijación hay que infiltrar o incluir la muestra con parafina con la finalidad de permitir cortes
delgados.
Se utiliza la parafina por su penetrabilidad y consistencia, pero antes al retirar la muestra de la solución fijadora
se debe lavar y deshidratar de manera lenta y progresiva en soluciones alcohólicas de concentración creciente
alcohol al 70%,80%, 90% hasta llegar al alcohol absoluto. Si se pasa directamente al alcohol 100% se pueden
generar artefactos.
El alcohol reemplaza al agua en las células y tejidos de la muestra, pero como la parafina no es visible ni en
agua ni en alcohol se procederá en un segundo tiempo al aclaramiento o diafanizacion utilizando un solvente
orgánico como el xileno el cual es visible tanto en parafina como el alcohol al cual reemplaza. No se usa
directamente porque no es miscible en agua.
Finalmente infiltramos la muestra en parafina líquida la cual ha sido fundida en estufa a 60 grados. La parafina
penetra en todos los espacios de tejidos y células de la muestra desplazando al solvente. Al retirar de la estufa
la parafina fundida se enfría y endurece formando un bloque al que se le dará un tamaño adecuado y al cual se
denomina taco.
(3) Realización de cortes:
El tejido ya deshidratado y aclarad, debe ser endurecido para cortarse. El taco se coloca en un micro (aparato
de gran precisión) que tiene una cuchilla de acero que hará finos cortes de la muestra sin las secciones del
preparado, lo suficientemente delgadas de aproximadamente 5 a 10 micrómetros de espesor que permitirán el
paso de la luz a través de ellas
(4) Montaje:
Cada corte obtenido se monta sobre un portón objeto de vidrio provisto de una pequeña cantidad de albúmina
para que sirva de adhesivo y se procede a desparafinar la muestra.
Desparafinar: extraer y disolver a la parafina por acción del Xileno y posteriormente rehidratar la muestra
mediante el uso de soluciones alcohólicas de concentración decreciente alcohol al cien por ciento al 90% hasta
llegar al 70%
Recordemos que se realiza este procedimiento porque el paso siguiente será colorear la muestra y se lo hace
con coloraciones hidrosolubles
(5) Coloración:
Los cortes se colorean con la técnica más corriente que es la de Hematoxilina y eosina. El tejido colocado sobre
el portaobjeto se tiñe primero con hematoxilina en agua. El colorante de contraste es la Eosina que es más
soluble en alcohol que el agua por lo que se vuelve a deshidratar la muestra en soluciones alcohólicas de
concentraciones crecientes y después se tiñe con Eosina en alcohol
Realizado estos pasos se coloca o monta un cubreobjeto de vidrio sobre la muestra adhiriéndolo con bálsamo
de Canadá como consecuencia de la acción de fijadores, alcoholes y solventes en las fases de la técnica
histológica hay macromoléculas que se disuelven y se pierden tales como glucógeno, proteoglicanos,
glucosaminoglicanos y lípidos, por lo tanto, no se tiñen.
Principales tipos de tinción:
• Hematoxilina: Que en realidad es una sal neutra de carga catiónica
• Eosina: Que es un colorante ácido de carga negativa aniónico.
• Azul de toluidina: Tiñe de azul los tejidos, pero al enfrentarse a sustancias como glucosaminoglicanos
sulfatados o heparina, cambia su coloración (metacromasia) y va de azul a púrpura.
• Técnicas como Orceína, Aldehído-fucsina, Verhoff, Weigert: Destinadas a identificar la proteína elastina
que identifica a las fibras y membranas elásticas
• Paz o técnica del ácido periódico y reactivo de shift: identificar carbohidratos
• Wright o su variante May grunwald Giemsa: Identificar sangre y frotis de médula ósea
• Luxol fast blue: Se utiliza para teñir de color celeste verdoso la mielina ósea la lipoproteína que conforma
la vaina de envoltura de las fibras nerviosas
• Impregnación argéntica: reacción con sales metálicas especialmente con sales de plata. Es un precipitado
de sales frente a un agente reductor y se utiliza para identificar fibras reticulares del conectivo y también
para identificar elementos del tejido nervioso como son neuronas fibras, nerviosas, elementos de la glía.
• Técnicas tri-cromicas: tres o más colorantes
Mallory, Mallory-Azan, Gomori, Azan de Heidenhain, Masson, Masson-Goldner, Van Gieson.

Tinciones fundamentos:
Los colorantes son sales, que están formadas por un catión y un anión. La formación de una sal es el resultado
de la reacción de un ácido con una base. El ácido entrega un anión a la sal y la base va a proveer el catión.
La parte de la sal (colorante) que importa es la anilina que es la porción coloreada y lo que tiñe.
Colorantes básicos: Sales cuyas bases es coloreada y el acido es incoloro. (Cl – y anilina +)
• Ejemplo: Verde de metilo, azul de metileno, pironina G, azures, Azul de toluidina, hematoxilina.
Estructuras basófilas: Afinidad de algunos componentes tisulares con los colorantes básicos. Núcleo (ácidos
nucleicos, fosfato), cuerpos de Nissl, algunos gránulos.

Colorantes ácidos: Sales cuyo acido es coloreado y la base incolora. La anilina tiene carga negativa por lo que
tiñe. (Na+ y anilina -).
• Ejemplo: Fucsina acida, azul de anilina, eosina, naranja G.
Estructuras acidófilas o eosinofilas: Afinidad por colorantes ácidos.
Neutros: Acido y base son coloreados.

Hematoxilina y eosina
• Es una técnica dicromica.
• La eosina es precisamente un colorante ACIDO de carga negativa es decir aniónica, reacciona con grupos
catiónico y proteínas básicas del citoplasma. Tiñe de color rosado a estructuras que por lo tanto tienen
ácidofilia.
• La hematoxilina es un colorante básico de carga positiva es decir catiónica, que reacciona con grupos
catiónicos, como fosfatos de los ácidos nucleicos, Sulfato de los GAGS y carboxilos de las proteínas. Tiñe
de color azul a violeta a estructuras que por lo tanto tienen basófila.
• cabe recordar o aclarar nuevamente que la hematoxilina en realidad es una sal neutra y se le denomina
colorante básico ya que el componente cromógeno reside en el complejo catiónico básico de la misma.
Microfotografía de un órgano la glándula páncreas, específicamente el tejido secretor exocrino y estamos viendo
las dos tonalidades. Estamos viendo que sus células
cuentan con su región basal cada una de sus células de
color azul violáceo por la presencia del núcleo con su
característica de forma esférica y del retículo
endoplasmático rugoso que si bien se observa sólo a
microscopía electrónica aquí se puede ver con una
coloración violácea porque es el responsable de sintetizar
proteínas ya que el producto de secreción de estas
unidades exocrinas, son enzimas digestivas, las cuales
son proteínas que a través de una serie de conductos se
terminarán liberando en la luz del intestino delgado para
ejercer su función digestiva Mientras que el tono rosado
porque ha reconocido a la eosina se observa en la región
apical de cada célula es decir supranuclear mente ahí
están contenidos los gránulos de secreción envueltos por
membrana conteniendo el producto producido por estas
células y es la región provista de proteínas básicas que
por lo tanto cuenta con ácido filia y reacciona con la eosina

Microfotografía de
duodeno segmento
del intestino delgado,
el cual se encuentra
teñido con la técnica
de Hematoxilina y
eosina. si
observamos bien se
ven dos tonalidades
el rosado que
corresponde a la
eosina y las
estructuras que lo
han tomado son
estructuras acidófilas
y el azul violáceo que corresponde fundamentalmente a núcleos de las distintas tipologías de células que
evidentemente por su contenido en ácidos son estructuras que han tomado al colorante básico o sea se
comportan como basófilas.
También se observan en color rosado dentro de un vaso sanguíneo y señalizado con la letra E, los glóbulos
rojos O eritrocitos. Con tc señalamos teñido con eosina, a todo sitio donde encontramos tejido conectivo. Los
núcleos tanto del tejido de las células del tejido conectivo como de las células de las estructuras glandular es
están teñidos de azul violáceo con la hematoxilina.

Azul de toluidina
• Es un colorante básico de carga positiva es decir es catiónico tiene todos los tejidos de color azul a eso lo
denominamos Ortocromasia. Pero cuando se expone a estructuras ricas en heparina y glucosaminoglicanos
sulfatados cambia color rojo púrpura y a eso lo denominamos Metacromasia.
Microfotografía; TIMO, es un órgano linfoide y en él hay un agrupamiento de células grandes cargadas de
gránulos que precisamente son ricos en heparina derivada esta sustancia anticoagulante de un
glucosaminoglicano sulfatado como es el heparán sulfato y por lo tanto se produce esta reacción de
metacromasia. Es contrastante el color púrpura de los gránulos de estos mastocitos si los comparamos con el
resto de los núcleos ortocromáticos azules y más pequeños de forma esférica que corresponden a linfocitos.

Para fijar aún más el concepto de Ortocromasia y metacromasia con respecto al azul de toluidina la imagen
presenta dos microfotografías. A la izquierda; tejido nervioso sistema nervioso central todos sus componentes
se han teñido de azul con el azul de toluidina fenómeno de ortocromática, con mayor intensidad el nucleolo y el
retículo endoplasmático rugoso en el citoplasma de estas células del tejido nervioso que llamaremos neuronas.
A la derecha un grupo de mastocitos o células cebadas del conectivo donde si bien es ortocromática la tinción
de su núcleo, el citoplasma cargado de gránulos que contienen estos glucosaminoglicanos sulfatados en
particular heparina han virado y por el fenómeno de metacromasia se ve un puntillazo de color púrpura
Tecnica de PAS (Reacción del pas; acido periódico- reactivo de Schiff):
• La capacidad de la fucsina ácida de reaccionar con los grupos
aldehídos y provocar una coloración rojo púrpura determina la
presencia de carbohidratos y glucoproteínas, así como
macromoléculas como es el caso del glucógeno, por lo tanto,
identifica con una coloración rojo púrpura a glucosaminoglicanos,
mucina, a glucógeno, a membranas basales y también a fibras
reticulares.
Microfotografía de glándula endocrina, su región anterior, estamos frente
a la hipófisis y estamos viendo su región anterior o pars distalis. Las
células que producen hormonas y las vuelcan al torrente sanguíneo o sea
que cumplen una función endocrina, se agrupan formando cordones
celulares. Esos cordones celulares de estas células secretoras se están
apoyando en una lámina o membrana basal que obviamente presenta
hidratos de carbono y es identificada con la técnica de paz como un trazo
lineal rojo.
Células caliciformes, que son secretoras de mucoproteina, lo que contiene carbohidratos
Tricomico de Azan:
• Emplea tres colorantes
• Azocarmin que es un colorante ácido y tiñe de color rojo los núcleos celulares
• Azul de anilina que es un colorante básico y tiñe de color azul al tejido conectivo y en particular a sus fibras
colágenas
• Naranja G que es un colorante ácido que tiene de un color rojo amarillento; citoplasma, eritrocitos y tejido
muscular
• Existe una variante Mallory, el Mallory-Azan que reemplaza azocarmin por fucsina ácida

Tricomico de Gomori (3 colorantes):

• Verde luz que tiñe de color verde el tejido conectivo y en particular sus fibras colágenas
• Cromotropo que tiñe de color rojo pardo al tejido muscular, eritrocitos y citoplasmas
• Hematoxilina que tiñe de color azul a los núcleos

Tricomico de Masson (3 a 4 colorantes):

• Hematoxilina férrica de Weigert que tiene de color azul negro los núcleos
• Fucsina ácida que tiñe de color rojo intenso a rosado todo lo que sea eritrocitos, citoplasma y tejido muscular
• Azul de anilina que tiñe de azul celeste todo lo que sea tejido conectivo y sus fibras colágenas y a veces
utiliza también la verde luz y entonces la coloración obtenida es un azul verdoso para el tejido conectivo y
las fibras colágenas.
Tricomico de Goldner (Variante de Masson, es Masson- Goldner):
• Hematoxilina de Groat que tiñe de color pardo negruzco los núcleos
• Fucsina ácida punzo que tiñe de rojo pero que combinada con el naranja G se da una coloración rojo-
anaranjada
• Verde luz que tiñe de color verde o azul verdoso el conectivo y sus fibras colágenas así también como la
matriz del cartílago.

Tinción de Van Gieson: Identificar tejido conectivo de muscular

• Hematoxilina férrica de Wiegert, colorea de color negro azulado a los núcleos
• Acido pícrico que colorea de amarillo anaranjado el citoplasma y tejido muscular
• Fucsina ácida que tiñe de color rojo al tejido conectivo y a sus fibras colágenas
Técnica de orceína (identifica fibras elásticas) Tiñe de color pardo a estas fibras
Técnica Aldehído Fucsina: Identifica fibras elásticas, colorea con una tonalidad violácea
Técnica de Vergoff: identifica la presencia de las fibras elásticas con color negro nuevamente

Técnica Azul Luxol (Luxol fast blue):

• Cerebelo tiene dos componentes la sustancia gris y la sustancia blanca. Recordando que las células del
sistema nervioso son capaces de reaccionar ante diferentes estímulos y provocar una respuesta. Solo
llamamos neuronas a las que están presentes en la sustancia gris mientras que la sustancia blanca está
formada fundamentalmente por el paso de fibras nerviosas.
• El Luxol fast blue está destinado a teñir de color azul las fibras nerviosas
• Identifica la presencia de lipoproteína conformando la vaina de mielina (una vaina que protege y rodea las
fibras nerviosas)
El violeta de Cresilo (colorante básico), tiñe las estructuras acidas como la sustancia de Nissl, el núcleo
y nucleolo de las neuronas y el núcleo de la glía.
Existen diferentes técnicas para identificar la celularidad en la sangre periférica y en los frotis de médula
ósea; Técnica de May Grunwald Giemsa (Azul de metileno-eosina-azur de metileno (forma oxidada del
azul de metileno)
En la imagen de frotis de sangre periférica se identifican tres leucocitos o glóbulos blancos con la M identificamos
un monocito, con la N un neutrófilo, con la L un linfocito. El resto de los elementos de fondo y son la población
mayoritaria son glóbulos rojos identificados con la letra E y son teñidos con la eosina. Frotis medula osea:

Técnica de impregnación argéntica

• Los tejidos son tratados con sales de plata se produce un precipitado al enfrentar las sales a un agente
reductor con estas técnicas de impregnación argéntica se identifican fibras reticulares y elementos del tejido
nervioso como fibras nerviosas y células de la neuroglia (SNC) e incluso neuronas
• impregnación argéntica con técnica de Golgi: lo que estamos viendo es el cerebelo, su corteza o sustancia
gris que es donde encontramos cuerpos neuronales y precisamente la imagen muestra las neuronas más
grandes que son las células de Purkinje de este sector con aspecto piriforme es decir con forma de pera.
En este caso el precipitado consiste en depósitos opacos intracelulares de cromato argéntico que es el
producto de la reacción entre el dicromato de potasio y el nitrato de plata
• técnica de Cajal
Las células adiposas o adipocitos pertenecientes al tejido conectivo propiamente y que también habíamos visto en
médula ósea son almacenadoras de lípidos. Estos lípidos en el proceso de la técnica histológica al producirse la
deshidratación pasando por alcoholes de diferente graduación y posteriormente con el aclaramiento usando el
solvente orgánico Xileno, estas sustancias estos lípidos se disuelven por lo tanto la célula queda vacía, no se tiñe
de manera tal que con las técnicas convencionales como la hematoxilina o los tricromicos, el citoplasma ocupado
por lípidos de dichas células aparece en blanco no se tiñe porque el material se ha disuelto de manera tal que se
necesitan técnicas de tinción muy especiales para poder teñir la grasa.

Sudan 3, el sudan 4 (escarlata R) y el sudan negro

• El sudan es un colorante indiferente sin afinidad por estructuras ni ácidas ni básicas.
• Es insoluble en agua, son más solubles en los líquidos que en el medio en el que están disueltos
• Van en solución alcohólica o en una mezcla de alcohol acetona o de alcohol agua
• El mejor fijador para estas muestras será el formol y los cortes normalmente son por congelación
• Los reactivos son Hematoxilina o carmín para hacer el contraste y teñir los núcleos en color azul
• El escarlata tiñe la grasa de color rojo en el Sudán 3, el escarlata R tiñe la grasa de un rojo más intenso en
el Sudán 4 y el negro tiñe la grasa de color negro

Técnicas de inmunohistoquímica, se trata de un método que se fundamenta en la reacción específica entre

un antígeno (componente químico determinado) y su anticuerpo (inmunoglobulina específica). El corte de tejidos
donde se demostrará la presencia del antígeno se incuba con una solución que contiene un anticuerpo
específico contra el antígeno buscado la reacción se puede visualizar de dos modos el anticuerpo puede
marcarse con una sustancia fluorescente (fluoresceína) o al anticuerpo se le adosa una enzima, la enzima
peroxidasa y se detecta la reacción antígeno anticuerpo por histoquímica enzimática
Técnicas de histoquímica enzimática: método que evidencia la actividad enzimática en algunos tejidos tras
el proceso de fijación. La reacción enzimática convierte a unos sustratos solubles e incoloros en productos
insolubles y coloreados poniéndose de manifiesto la enzima y el tejido que la posee