Introducción a la biología celular y molecular 2022
Resolución Taller 6b. Aminoácidos y péptidos
Ejercicio 1.
Histidina
Con respecto a la Histidina:
a) Plantee la disociación de los protones
b) Realice la curva de titulación señalando que especies se encuentran en cada zona de
la curva.
c) Obtenga el punto isoeléctrico del aminoácido.
d) Determine que carga neta tendrá el aminoácido a pH 3.
Datos: pK1= 1.82, pK2 = 9,17 , pKR = 6.0
Esta especie de la histidina corresponde a pH 7.4
Respuesta:
a) La disociación del aminoácido se da según el orden creciente de sus valores de pKas. El
primer protón que se desprotona, es decir el de más bajo pKa es el pK1 (correspondiente al
grupo carboxilo unido al carbono alfa), la siguiente desprotonación en el caso de la histidina
corresponde a la del grupo R en la cadena lateral dado que en este caso el pKR tiene un valor
menor que el pK2. El último protón a desprotonarse corresponde por lo tanto, a la disociación
del protón del grupo amino unido al carbono alfa.
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b) Curva de titulación de la Histidina:
c)
Para determinar el punto isoeléctrico (pI) hay que identificar la especie del aminoácido con
carga neta igual cero, el cual corresponde con el zwitterion (marcado en rojo). Luego de
identificarlo, hay que observar cuales son los valores de pKa entre los que se encuentra. En
este caso sería pKR y pK2.
Por lo tanto matemáticamente se determina el pI como el promedio entre los pKas en el cual
se encuentra el zwitterion:
pI = ( pKR + pK2 ) / 2 = (6.0 + 9.17 ) / 2 = 7,58
d) A pH = 3 nos encontramos por debajo del punto isoeléctrico. Cuando los valores de pHs
son menores que el pI, el aminoácido se encuentra con carga positiva.
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Ejercicio 2.
a) Plantee la disociación de los protones de los siguientes aminoácidos (del mismo modo que
se plantea para la histidina en el ejercicio anterior). Indique la forma zwitterion para cada uno
de ellos. Calcule el pI de cada aminoácido.
b) Trace esquemáticamente las curvas de titulación, e indique en ellas:
● punto inicial y final de la titulación de cada uno de los protones disociables
● los pKs
● el pI
● en cada uno de estos puntos y en las zonas intermedias definidas por los mismos,
indique cuál o cuáles especies moleculares o iónicas están presentes y la relación de
concentraciones entre ellas (en términos de mayor, menor o igual).
Grupo 1
Aminoácido pK1 pK2 pKR
Fenilalanina (Phe) 2,58 9,24 -
Lisina (Lys) 2,18 9,95 10,53
Respuesta:
3
Grupo 2
Aminoácido pK1 pK2 pKR
Glicina (Gly) 2,34 9,60 -
Ácido glutámico (Glu) 2,19 9,66 4,28
Respuesta
4
Grupo 3
Aminoácido pK1 pK2 pKR
Alanina (Ala) 2,34 9,87 -
Arginina (Arg) 2,19 9,09 13,2
Respuesta
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c) Entre todos los grupos completen la siguiente tabla:
Aminoácido pI
Glicina (Gly) 6,0
Alanina (Ala) 6,1
Fenilalanina (Phe) 5,9
Lisina (Lys) 10,2
Arginina (Arg) 11,1
Glutamato (Glu) 3,2
d) Conociendo los valores de pI de los diferentes aminoácidos, indique cuál será la carga neta
de cada uno a pH 1, pH 7 y pH 12.
Aminoácido pI Carga neta Carga neta Carga neta
a pH 1 a pH 7 a pH 12
Glicina (Gly) 6,0 + - -
Alanina (Ala) 6,1 + - -
Fenilalanina (Phe) 5,9 + - -
Lisina (Lys) 10,2 + + -
Arginina (Arg) 11,1 + + -
Glutamato (Glu) 3,2 + - -
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Nota: por ejemplo en la glicina, a cualquier pH por encima de su pI, tiene una carga neta negativa. A
cualquier pH por debajo de su pI, la glicina tiene una carga neta positiva. Cuanto más alejado esté el
pH de una disolución de glicina de su pI, mayor será la carga eléctrica neta de la población de
moléculas de glicina. Por ejemplo, a pH 1,0 la glicina se encuentra casi enteramente en su forma: +H3N-
CH2-COOH con una carga positiva neta que equivale a + 1,0. A pH = 2,34 (valor de su pK1), en el que
existe una mezcla paritaria de: +H3N-CH2-COOH y +H3N-CH2-COO-, la carga positiva neta o promedio
es de + 0,5. De la misma forma se puede predecir el signo y la magnitud de la carga neta de cualquier
aminoácido a cualquier pH.
e) Se realiza una electroforesis sobre papel, a pH 6 de una mezcla de aminoácidos: glicina,
alanina, fenilalanina, lisina, arginina y glutamato. Indicar los aminoácidos que migran al
cátodo (polo negativo), al ánodo (polo positivo) o permanecen en el origen.
Recuerde que para saber la carga del aminoácido a pH 6 debe conocer el pI del aminoácido. Los
aminoácidos presentan carga neta (+) a pH menores de su pI y carga neta (-) a pH mayores a su pI,
siendo su carga neta 0 cuando el pH coincide con el valor de su pI.
Respuesta
Aminoácido pI Carga a pH 6 Migración en electroforesis
Permanece en el punto de
Glicina (Gly) 6,0 carga cero
aplicación de la muestra
Permanece en el punto de
Alanina (Ala) 6,1 !"#$"%!&#'!
aplicación de la muestra!"
Permanece en el punto de
Fenilalanina (Phe) 5,9 !"#$"%!&#'!
aplicación de la muestra!"
Se desplaza hacia el polo
Lisina (Lys) 10,2 carga positiva
negativo (cátodo)
Se desplaza hacia el polo
Arginina (Arg) 11,1 carga positiva
negativo (cátodo)
Se desplaza hacia el polo
Glutamato (Glu) 3,2 carga negativa
positivo (ánodo)
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Para cualquier aminoácido, cuando el valor de pH es menor que su pI, tiene una carga neta
positiva y en una electroforesis, cuando se coloque en un campo eléctrico, se desplazará
hacia el electrodo negativo (cátodo). Cuando el valor de pH es mayor que su pI, tiene una
carga neta negativa y en una electroforesis se desplazará hacia el electrodo positivo (ánodo).
Cuanto más alejado se encuentre el pH del valor del pI de un aminoácido, mayor será la carga
eléctrica neta de la población de moléculas del aminoácido.
Ejercicio 3.
La figura representa un péptido.
a) Indique cuántos aminoácidos componen el péptido.
El péptido contiene 6 residuos de aminoácidos
b) Marque los enlaces peptídicos, los grupos R de los aminoácidos (identifique qué
aminoácidos son), los extremos amino y carboxilo terminal.
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c) Plantee a qué pH podría encontrar el péptido tal cual se representa en la figura.
En cada grupo indicamos qué valor tiene que tener el pH para que ese grupo esté en esa
forma. Sabemos que para cada grupo la forma desprototonada la encontramos
mayoritariamente cuando el pH es mayor al pKa. Por lo tanto, para que todo eso se cumpla
el pH debe ser mayor a 10.5 (el valor de pKa más alto).
d) Dibuje el péptido a pH 1, a pH 7 y a pH 12. ¿Cuál es la carga neta a cada uno de esos
pH?
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En suma:
• Este péptido a pH 1,0 presenta los carboxilos protonados (COOH) y aminos protonados
(NH3+): Carga neta +2
-
• Este péptido a pH 7,0 presenta los carboxilos desprotonados (COO ) y aminos
protonados (NH3+): Carga neta 0
-
• Este péptido a pH 12,0 presenta los carboxilos desprotonados (COO ) y aminos
desprotonados (NH2): Carga neta -2
e) Indique cuál de los grupos R pueden formar interacciones iónicas a pH 7. Identificar
cuáles átomos de la cadena principal pueden formar enlaces de hidrógeno.
Los átomos que forman parte de la cadena principal son los que incluyen los enlaces
peptídicos, y los carbonos alfa pero no los átomos del grupos R.
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Anexo: Electroforesis
La electroforesis es una técnica para la separación de moléculas según su movilidad en un
campo eléctrico (que depende de la carga eléctrica de las moléculas). La separación puede
realizarse sobre la superficie hidratada de un soporte sólido (por ejemplo electroforesis en papel
o acetato de celulosa), o bien a través de una matriz porosa como en el caso de la electroforesis
en gel.
La electroforesis se aplica a la separación de moléculas que poseen grupos ionizables
(aminoácidos, proteínas, péptidos, ácidos nucleicos) teniendo en cuenta que la carga neta de
estas moléculas depende del pH en el que se encuentren.
En la figura (a) se observa una cuba de electroforesis y el papel soporte de la corrida, indicando
el punto donde se siembra la mezcla con una flecha roja; la muestra se desplaza al ánodo o al
cátodo según su carga al pH determinado de la corrida electroforética (b).
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