INVESTIGACION
Crecimiento Bacteriano
Equipo:
Patricio Antonio Alanís Gómez
Christopher Ortiz
Rosario Yamileth Mata Rico.
Abdías Guillermo Guerrero Martínez
Docente: Marco Iván Ordaz Sánchez
3er Semestre
MICROBIOLOGIA I
05 de Diciembre de 2020
Practica: Crecimiento bacteriano
Las bacterias realizan cambios en cuanto al número de población total, en el cual,
aumenta de manera continua. Bastantes veces se tiene que el inoculo contiene
miles de organismos y el crecimiento se hace remarcable en el aspecto del su
incremento de números de organismos o de masa total.
El método principal y más usado de reproducción bacteriana es la fisión binaria
transversal; una célula se divide en dos. Pero en esta ocasión solo sucede desde
una bacteria, la cual se divide a sí misma y así se causa el incremento de la
población, la cual crea una progresión geométrica.
También hay un concepto conocido como “Tiempo de generación” el cual se
refiere al intervalo de tiempo que se requiere para que una célula se divida, lo cual
cause que una población se duplique. Incluso varios estudios bacteriológicos
requieren la determinación de las presentes bacterias por unidad de volumen, en
el cual los recuentos se llevan a cabo vía diferentes métodos, los cuales se dividen
en contar células muertas y/o células vivas. A su vez la cantidad y tipo de
microorganismos que fueron sometido, además de ser el motivo para saber que
método de conteo elegir, ya que de esta manera se puede determinar la presencia
del microrganismo, así mismo el número de organismos presentes en el material
el cual se resaltara de un conteo total que establece la concentración de e
inóculos y sigue la dinámica poblacional de un cultivo puro.
Uno de los métodos cuantitativos y muy útiles es la turbidimetría; que se refiere a
La turbidimetría es una técnica analítica de medición que determina cuánto se
atenúa un haz de luz que se traslada a través de una suspensión. Esta atenuación
se produce gracias a los fenómenos de absorción y dispersión que experimenta la
luz debido a las partículas
Hipótesis
“Cuando un cultivo se duplica de manera regular durante un intervalo de tiempo, se
denomina crecimiento exponencial.” (Facultad Química)
Depende de que microrganismo sea usado para la práctica tendrás que usar
diferentes factores y que la temperatura afecta desde la velocidad de las
reacciones hasta la posibilidad de las mismas.
También tenemos que tener en cuenta a el pH, para lo cual, al igual que la
temperatura, es específica de cada microorganismo
Usemos por ejemplo al microorganismo “E. Coli”, si le damos un ambiente con una
temperatura de 20 a 40º y un pH de 4 realizando un cultivo de 1 mL de inoculo y 70
mL de caldo de cultivo y usando métodos de tubimetria quedaría una curva de
crecimiento algo así:
Mientras que en un crecimiento estandar y conteo con microscopio deberia de ser
identica o por lo meno parecida a la antes señalada.
MATERIALES Y MÉTODOS
A. Conteo directo de bacterias al microscopio
1. En un portaobjetos limpio y desengrasado, marque un área de 2 cm2
cuadrados.
Invierta la laminilla.
2. Deposite 0.01 ml de un cultivo y extiéndalos en el área marcada del
portaobjetos y deje secar a temperatura ambiente.
3. Fije con calor y tiña con azul de metileno de Löeffler.
4. Lave con agua de la llave. Deje secar a temperatura ambiente.
5. Coloque el objetivo micrométrico en la platina del microscopio y observe a 100
X.
6. Mida el diámetro del campo microscópico.
7. Cada división de la escala del objetivo micrométrico mide 10 mm, es decir
0.01 mm = 0.001 cm.
8. Determine la superficie del campo microscópico con la siguiente fórmula:
r2 en cm X 3. 1416 = Superficie de campo microscópico en cm.
9. Determine el número de campos microscópicos que existen en la preparación
con la fórmula:
Superficie de la preparación = número de campos microscópicos
Superficie del campo microscópico
10. Coloque en la platina del microscopio la preparación teñida de las bacterias y
cuente las bacterias en 10 campos. Obtenga el valor medio de organismos por
campo microscópico.
11. Calcule el número de bacterias que hay en la preparación (0.01 ml) y en 1 ml
del cultivo, con la fórmula: # de bacterias x # de campos = # de bacterias x 100 = #
bacterias/ml por campo microscópicos en la preparación de cultivo.
B. Conteo de bacterias por el método de las diluciones y vaciado en
placa.
1. Prepare 7 tubos de ensayo de 16 x 150 mm con 9 ml de diluyente estéril cada
uno (agua peptonada al 0.1 % o una solución salina isotónica). Márquelos con las
diluciones a partir de 1 x 10-2 hasta 1 x 10-8.
2. Marque 7 cajas de Petri vacías estériles con los mismos números de las
diluciones. Realice duplicados con otras 7 cajas.
3. En condiciones estériles tome 10 ml de una suspensión bacteriana (puede ser
E. coli), con una pipeta estéril y deposítelos en el tarro con diluyente. Descarte la
pipeta y colóquela en un tarro con antiséptico.
4. Tape el tarro con la muestra y agite vigorosamente, alrededor 25 veces. Esta va
a ser la dilución 1:10.
5. Con una totalmente nueva pipeta estéril tome 1 ml y transfiera al tubo de la
dilución 1:100, mezclando en igual forma y descartando la pipeta.
6. Con una totalmente nueva pipeta distribuya alícuotas de 1 ml al tubo de la
dilución 1:1000 y a las 2 cajas de Petri que corresponden marcadas. Descarte la
pipeta.
7. Repita el método mezclando bien la dilución 1:1000 y con una totalmente nueva
pipeta distribuya alícuotas al tubo de la siguiente dilución y sus 2 cajas que
corresponden y de esta forma sucesivamente con las próximas diluciones.
8. Enseguida adicione a cada caja alrededor 20 mL de medio de cultivo
anteriormente fundido y mantenido a 50°C. Al tapar cada caja, vaya mezclando el
contenido bastante cuidadosamente, rotando la caja delicadamente sobre la mesa,
para que no se derrame el líquido.
9. Deje solidificar a temperatura ambiente e incube 24 horas a 37°C.
10. Cuente las colonias elaboradas bajo la cámara cuentacolonias. El número
válido del conteo es entre 20 y 200 / caja. El número de colonias por caja (UFC)
equivale a 1 mL de la muestra inoculada. Calcule la proporción de colonias por mL
y por gr de muestra, por medio de la siguiente fórmula:
Promedio de colonias contadas x mutuo de la dilución = UFC / ml.
Evaluacion del alumno
El alumno es 1 2 3 4 5
capaz de
Contar en el
microscópico
correctamente
Realizar una
siembra
correcta
Realizar la
curva de
crecimiento y
calcule el
tiempo de
generación.
Llevar a cabo
correctamente
el
procedimiento
Colaborar en
equipo durante la
practica
Evaluación de la práctica:
1. Describe el Conteo microscópico directo por el método de Breed
2. ¿Qué es el Conteo microscópico directo en cámara de Petroff-Hauser?
3. ¿Qué es Conteo turbidimétrico?
4. Describe el método de conteo en medio de cultivo
5. ¿Qué es una Curva de crecimiento por determinación tubidimétrica?
6. ¿Qué es una Curva de crecimiento por el método de las diluciones y vaciado
en placa?
Referencias:
D. (s. f.-a). Crecimiento bacteriano. Modelos predictivos de ComBase.
Modelos predictivos de ComBase. Recuperado 5 de diciembre de 2020, de
http://coli.usal.es/web/demos/demo_alteracion/FactoresCrecimiento/Factore
sCrecimiento.html
Brock, T. & M. Madigan. 1993. MICROBIOLOGÍA. 6ta Edición. Prentice Hall
Hispanoamérica S. A. México.Ranea, F. 2002.
http://www.microbiologia.com.ar/fisiologia/crecimiento.html
