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GUIA DE PRÁCTICA DE LABORATORIO DE BIOQUÍMICA
PRÁCTICA N°3
EVALUACIÓN DE GLUCOSA: GLUCOSA BASAL Y POSTPRANDIAL
Integrantes:
NRC : 1.- …………………………………………………………………………….
Docente : Mg. Beatriz Rafael Peña 2.- …………………………………………………………………………….
Fecha : ……………………… Duración: 90 min 3.- …………………………………………………………………………….
Tipo de práctica: Individual ( ) Grupal ( ) 4.- …………………………………………………………………………….
5.- …………………………………………………………………………….
1. PROPÓSITO:
❖ Interpretar el fundamento del método.
❖ Conocer los valores normales de glucosa basal y postprandial.
❖ Determinar cuantitativamente la glucosa presente en una muestra.
❖ Resolver e interpretar los resultados de los casos clínicos para su posible diagnóstico.
2. SIGNIFICACIÓN CLÍNICA
La patología más común relacionada con el metabolismo de los hidratos de carbono es la diabetes
mellitus. El diagnóstico precoz y el control de los pacientes diabéticos, tienen por objeto evitar la
cetoacidosis y las complicaciones de los síntomas resultantes de la hiperglicemia, mediante el
tratamiento adecuado. Dado que existen múltiples factores causales de hiper o hipoglicemia, debe
considerarse en cada caso la condición fisiológica y/o la patología presente en el paciente en cuestión.
3. FUNDAMENTO TEÓRICO
GLUCOSA:
La insulina segregada por el páncreas controla la concentración en la sangre del azúcar glucosa, necesaria
como combustibles en numerosas reacciones químicas, en una persona sana la digestión del alimento
induce al aumento de la glucosa en la sangre. El páncreas libera insulina, que estimula la absorción de
glucosa por parte de las células, también contribuye a transformar la glucosa en glucógeno, que se
almacena en el hígado y en los músculos como reserva energética. Las hormonas regulan la liberación
de insulina estimulando la disminución de la concentración de azúcar en la sangre, lo que a su vez frena
la secreción pancreática. En una persona con diabetes mellitus el páncreas no produce insulina
suficiente, el organismo se ve obligado a descomponer las grasas, pues no puede utilizar la glucosa para
obtener energía, como consecuencia se eliminan con la orina unos compuestos tóxicos llamados cetonas,
que también se acumulan en la sangre y provocan acidosis cetónica, un cuadro grave que puede
degenerar en coma o muerte. Si el organismo no es capaz de utilizar la insulina, la glucosa se acumula
fuera de las células y circula sin ser absorbida. Las concentraciones elevadas de este azúcar en la sangre
y orina deterioran la capacidad del organismo para combatir las infecciones y pueden provocar también
acidosis cetónica.
4. FUNDAMENTO DEL MÉTODO:
El esquema de reacción es el siguiente:
GOD
glucosa + O2 + H2O ácido glucónico + H2O2
POD
2 H2O2 + 4-AF + fenol quinonaimina coloreada + 4 H2O
5. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:
MUESTRA BIOLÓGICA:
La muestra a utilizar puede ser tanto suero como plasma, líquido cerebro espinal, orina y/o otros fluidos
biológicos. La muestra debe tomarse con el paciente en ayunas y
Separar el suero o plasma a la brevedad posible de las células para evitar una disminución de la glucosa
debido al glucolisis.
En caso de utilizar plasma, utilizar como anticoagulante fluoruro de sodio que actúa como inhibidor del
glucolisis.
La glucosa se establece en suero o plasma 5 horas a 30 ͦC y 24 horas a 4 ͦC
Para periodos más prolongados congelar a -20 ͦC
Una muestra es estable por una semana a temperatura ambiente, y 1 mes a 4 ͦC evitando la
contaminación bacteriana y la evaporación.
a. TECNICA MANUAL:
1. Llevar el reactivo a temperatura que indique el ensayo.
2. Las micro pipetas a utilizar deben estar bien limpias
3. Tabla de volúmenes, tres tubos de ensayo.
BLANCO CALIBRADOR DESCONOCIDO
1er Tubo 2do Tubo 3er Tubo
0.02 mL
MUESTRA (mL) (20 uL)
0.02 mL
MUESTRA ESTANDAR (mL) (20 uL)
2.0 mL 2.0 mL 2.0 mL
REACTIVO MUESTRA (mL) (2000 uL) (2000 uL) (2000 uL)
4. Homogenizar cada tubo y llevar a incubar durante 5 minutos a temperatura ambiente (20 ͦC a
25 ͦC )
5. Leer las absorbancias a 505 nm, llevando a cero el espectrofotómetro con el blanco de reactivo.
6. El color resultante es estable por lo menos 30 min.
ABSORBANCIA DE LA MUESTRA
CONCENTRACIÓN GLUCOSA = ------------------------------------------- X 100
ABSORBANCIA ESTANDAR
100 mg/dL
FACTOR = ------------------
ESTANDAR
CONCENTRACIÓN GLUCOSA = DESCONOCIDO X FACTOR
Pág. …
RANGO REFERENCIAL:
Cada laboratorio debe establecer sus propios rangos de referencia en función de la población de
pacientes. Los rangos de referencia que se enumeran a continuación están tomados de bibliografías
existentes.
GLUCOSA BASAL (ayunas) GLUCOSA POSTPRANDIAL
< 140 mg/dL
NORMAL 70 – 110 mg/dL NORMAL (70 – 140 mg/dL)
INTOLERANCIA A LA
PREDIABETES 110 – 125 mg/dL GLUCOSA 140 – 199 mg/dL
DIABETES MELLITUS > 126 mg/dL DIABETES MELLITUS > 200 mg/dL
5.1. RESOLVER EL SIGUIENTE EJERCICIO APLICATIVO (explicado y/o resuelto por la docente)
➢ Haciendo uso de la fórmula; realizar el cálculo de la concentración de glucosa leídos a 505 nm de
longitud de onda, siendo: B = 0,000 S = 0,333 D = 0,692
- ¿cuál será la concentración de glucosa?
- A partir de la concentración de glucosa, ¿cómo describiríamos el resultado con respecto
al espectrofotómetro?
- ¿Cómo se interpretaría el resultado obtenido?
- ¿Cuál sería el posible diagnóstico qué puede presentar el paciente?
6. HIPÓTESIS:
La glucosa en plasma se determina por el método espectrofotométrico, donde se reconoce los niveles
de azúcar y así dar a conocer la importancia del control de los niveles glucosa en sangre.
7. CONCLUSIONES
9. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS Y/O ENLACES RECOMENDADOS
http://www.who.int/csr/resources/publications/biosafety/CDS_CSR_LYO_2004_11SP.pdf
- “Bioquímica ilustrada de Harper” MURRAY, R.; DARYL K, GRANNER, RODWELL, VICTOR W.: 17ava
edición; editorial “EL MANUAL MODERNO”, México 2008.
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