UNIVERSIDAD NACIONAL AUTÓNOMA DE NICARAGUA.
(UNAN-LEÓN)
DEPARTAMENTO DE ACUÍCOLA
CARRERA DE INGENIERÍA ACUÍCOLA
LABORATORIO MICROBIOLOGIA
TÍTULO DE LA PRÁCTICA: laboratorio de Tinción Gram.
INTEGRANTES DEL EQUIPO
Felipa Del Socorro Ordeñana Cubillo.
Martha
Moisés Samuel Ruiz Chavarría.
ING. ACUICOLA
Fecha:
Docente:
Grupo:
Componente de microbiología
“A La Libertad Por La Universidad”
Tinción Gram_ Microbiología
I. INTRODUCCIÓN.
La Tinción de Gram es un tipo de tinción diferencial empleado en microbiología para la
visualización de bacterias. Se utiliza tanto para poder referirse a la morfología celular
bacteriana como para poder realizar una primera aproximación a la diferenciación bacteriana,
considerándose Bacteria Gram positiva a las bacterias que se visualizan de color violeta y
Bacteria Gram negativa a las que se visualizan de color rosa.
Las bacterias grampositivas y las gramnegativas se tiñen de forma distinta porque sus
paredes celulares son diferentes. Algunas bacterias grampositivas causan enfermedades.
Según la distribución del peptidoglicano de la pared celular que las envuelve, se tiñen de una
forma u otra. Así, las bacterias que no se tiñen mediante esta técnica se denominan Gram
negativas.
La tinción de Gram es la técnica de coloración más sencilla y más útil en microbiología para
la visualización para identificar bacterias.
OBJETIVO DE LABORATORIO
Objetivo General.
Utilizar la técnica de Tinción de Gram sencillas para la observación de
microorganismos.
Objetivo específico.
Conocer la morfología de las baterías sometidas a Tinción de Gram.
Identificar el tipo de bacterias (Grampositivas o Gramnegativas)
Observar las colonias bacterianas.
Observar la morfología de la célula bacteriana.
Identificar si las bacterias son Gram (+) o Gram (-).
Reconocer los distintos modelos de pared bacteriana.
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II. METODO EXPERIMENTAL
LA TINCION DE GRAM
La técnica de Tinción de Gram, permite separar a las bacterias en dos grandes grupos: Gram
positivas y Gramnegativas, Los organismos que retienen el cristal violeta luego de la adición
del agente decolorante, el alcohol, aparecen como azul oscuro o violeta, y se designan como
Grampositivos; aquellos que pierden el cristal violeta y se tiñen con el colorante secundario,
la safranina, aparecen como rojos y se designan como Gram negativos.
El laboratorio practico nos permite conocer la morfología de estas, ya sean: bacilos
(alargadas), cocos (de formas esféricas o redondas como un coco), espirilos (con forma
onduladas). Haciendo uso del microscopio se observa la morfología de estas.}
Elaboración de la muestra.
Esterilizamos el área de desarrollo de laboratorio. Organizamos los materiales de laboratorio
y empezamos con la Tinción de Gram de las bacterias.
Tomando un portaobjetos, disolvimos una gotita de solución salina sobre la superficie del
cubre. Luego se realizó la toma de muestra bacteriana con el asar recto del cultivo de
bacterias que nos facilitó el docente; homogenizamos movimientos suaves con el asar para
depositar la muestra sobre el cubre con la gota de solución salina.
Seguido de eso, con el secado listo. con una caja de fósforos se prendió el mechero, con
contenido de alcohol al 100%. Para luego empezar con el calentado de la muestra; posando
en la parte superior de la llama del mechero ya encendido. Se procedió a exponer la muestra
de manera continua y retirada de la llama para evitar que se calentara demasiado.
Pasado unos 4 minutos y posterior secado, la muestra para la Tinción estuvo lista y para
sellar la pasamos sobre el mechero 4 veces de manera continua y rápida, marcamos el
resultado de la muestra sobre el porta objetos con un marcador y esperar a que se enfrié a
temperatura ambiente.
Tinción de la muestra
1. Una vez que el frotis esté listo, lo cubrimos con el primer liquido de tinción (cristal
violeta). Reposamos el frotis por un minuto, retiramos el exceso con un ligero chorro
de agua y dejamos escurrir.
2. Lo siguiente será cubrirlo con lugol, lo dejamos reposar por un minuto y repetimos el
lavado del exceso y dejamos escurrir.
3. Después del proceso anterior, aplicamos alcohol acetona durante 30 segundo y
retiramos el exceso y repetimos el lavado.
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4. La safranina será el último liquido de tinción, dejamos por 30 seg. Repetimos el
lavado y escurrimos hasta que seque.
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III. RESULTADOS Y PROCESAMIENTO DE LOS DATOS EXPERIMENTALES
La muestra ya elaborada mantenía un aspecto incoloro. Esto antes de teñirse.
Luego del paso de procesos de inserción de los líquidos de Tincion, la variación de colores se
mantenía a medida que le aplicaba diferentes soluciones; y como resultado final fue la lámina
de vidrio con una coloración muy ligera de violeta un poco claro.
Cuando el proceso de Tinción se da por finalizado, procedemos al análisis de resultados. Los
resultados bajo el microscopio contrastaban con la coloración principal de espacio de la
muestra, sobre la muestra diluimos aceite de inmersión y con ayuda del lente de microscopio
procedemos a observar los resultados del proceso de tinción de las bacterias sobre la placa.
Como resultado de los procesos experimentales se obtienen una vista, desde el lente de 40x
el conjunto de bacterias y la coloración, como resultado de la tinción de las bacterias
sometidas a la prueba. Con el lente de 100x se obtuvieron imágenes más claras y concisas
de la morfología de las bacterias sometidas a la prueba. fueron una gran cantidad de puntos
y “varillas” que se observaron con lente del microscopio, muchas de ellas tenían una forma
variada y se asemejaban mucho a bacterias cocos y bacilos.
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IV. DISCUSIÓN DE RESULTADOS.
En los resultados de nuestra muestra no se encontró cantidad excesiva de bacterias
sometidas a la Tinción realizada en el laboratorio.
Los resultados comparados al resto de nuestros compañeros mostraban la cantidad de
bacterias teñidas por los colores característicos como resultados de la Tinción (violeta y la
otros rosas).
Durante el proceso de análisis, solo pudimos identificar en la muestra Gram positivas, estos
deben a una manipulación defectuosa que altero en los pasos de elaboración una propiedad
del cultivo contenido en la lámina. El aceite de inmersión es utilizado en la posición 100xpara
ver a más detalles y resolución la muestra. El aceite se debe pegar al objetivo para crear un
vacío que permita la visualización correcta de la muestra.
Las características de las muestras observadas por el grupo, según morfología y tinción,
pertenecían al coco gramnegativos; que como ya sabemos, son de coloración roja o rosa y
de forma circular.
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VI. CONCLUSIONES
Concluimos como grupo de laboratorio de Tinción de Gram, de que los protocolos
establecidos para un resultado óptimo y aceptable, a la hora de desarrollar un laboratorio de
tinción de Gram, se debe ser meticuloso; puesto que en cualquier parte del procedimiento
hacemos una acción errónea, como por ejemplo, calentar de más la muestra, esta alterara la
forma de las bacterias y su análisis será mucho más complejo y en muchas ocasiones la
muestra pierde su valor por esto, al igual que lavar la muestra con agua de manera horizontal
(hacer que el agua choque encima de la lámina), provocando que en muchas ocasiones las
bacterias se remuevan de la lámina de vidrio y como consecuencia perderemos el objetivo de
análisis
Por otro lado. La tinción de Gram es uno de los colorantes más útil que se usa en los
procedimientos de microbiología, para poder clasificar las bacterias en dos grupos,
Gramnegativas y Grampositivas. Y que este es claramente el primer paso para determinar
qué tipo de bacteria está creciendo, esto provee una información muy importante sobre la
caracterización morfológica e identificación de la muestra. Por ejemplo, una reacción positiva
o negativa a la Tinción de Gram es sumamente importante como medio primario de
clasificación.
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