TRABAJO PRÁCTICO Nº 10
MEMBRANAS INTERNAS 2
2020
OBJETIVO
Al finalizar el trabajo práctico se espera que el estudiante haya comprendido que los
procesos biomoleculares de la célula ocurren en compartimientos especializados que
se interrelacionan e interconectan directa e indirectamente generando en la célula un
sistema interno de continuidad estructural y funcional.
UNIDAD DE CONOCIMIENTO
TEMARIO
Transporte vesicular. Formación y fusión de vesículas. Cubiertas proteicas. Proteínas
Rab y efectores Rab. Proteínas Snare. Aparato de Golgi: estructura y funciones. O-
glicosilación de proteínas. Relación espacial y funcional entre el retículo endoplásmico
y el aparato de Golgi. Biogénesis y reciclaje de membrana. Lisosomas: estructura y
funciones en distintos tipos celulares. Origen de sus componentes. Enzimas y
digestión lisosómica. Receptor manosa- 6-fosfato. Mecanismos de endocitosis:
endocitosis mediada por receptor, pinocitosis y fagocitosis. Endosomas. Fagosomas.
Autofagosomas. Relación entre endo y exocitosis. Secreción celular, concepto y
mecanismos de la exocitosis. Secreción regulada y constitutiva. Formación de las
vesículas secretoras.
VOCABULARIO ESPECIFICO DEL TEMA
Compartimentalización – cisternas – lumen – hidrolasas ácidas – endosomas –
endocitosis – autofagia – exocitosis – vías endocíticas – vías secretoras
BIBLIOGRAFÍA
- Alberts, B. y otros. Biología molecular de la célula. Ed. Omega. Barcelona, (la edición
más actual que consiga, la última edición disponible es la 6ta).
-De Robertis, E.; Hib, J. y Ponzio, R. Fundamentos de Biología celular y molecular.
Editorial El Ateneo. 2004.
MATERIAL MULTIMEDIA
[Link] (endocitosis y exocitosis)
[Link] (lisosomas, endosomas y
transcitosis)
[Link] (vesículas transportadoras)
[Link] (formación de vesículas y transito
vesicular)
[Link] (endocitosis mediada por receptor)
UNIDAD DE ACCION
En su casa: el estudiante deberá investigar usando como base el temario
propuesto y contestar el cuestionario guía de estudio a los efectos de
autoevaluar si ha adquirido los conceptos fundamentales requeridos para el
abordaje del trabajo práctico. Utilizando los conocimientos teóricos adquiridos
intentará plantear una solución de los ejercicios de aplicación.
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Podrá además ejercitarse luego de la clase resolviendo los problemas
adicionales.
En clase: el estudiante deberá participar en la discusión del temario y resolver
con la ayuda del docente los problemas de aplicación, con el fin de reafirmar
los conceptos teóricos estudiados en su casa y evacuar las posibles dudas.
CUESTIONARIO GUIA DE ESTUDIO
1- Describa brevemente los mecanismos de formación y fusión de vesículas
involucradas en el transporte vesicular.
2- a) ¿Qué es una vesícula recubierta?
b) ¿Qué función tiene la cubierta?
c) ¿Qué vesículas adquieren cubierta de clatrina y cuáles se recubren de COP
1 y COP 2?
3- ¿Cómo regulan las proteínas v- SNARE y t- SNARE la correcta llegada a
destino de las vesículas?
4- ¿Qué papel juegan las proteínas que unen GTP en el tránsito vesicular?
5- ¿A qué se denomina flujo retrógrado?
6- Describa brevemente la estructura y funciones del aparato de Golgi. ¿Por
qué es considerado una estructura polarizada? ¿Cuál es la importancia
biológica de este fenómeno?
7- Describa las modificaciones que pueden sufrir las proteínas en el aparato de
Golgi
8- Los lisosomas contienen hidrolasas ácidas, un tipo de enzimas que tienen su
actividad óptima a pH 5, que es el pH del interior de estas organelas.
a) ¿Cómo se mantiene este pH?
b) ¿Cómo son transportadas al interior del lisosoma las hidrolasas?, ¿por
qué no escapan estas enzimas de la estructura que las contiene? Si esto
ocurriera, ¿cuáles serían las consecuencias?
9- a) ¿Cómo se clasifican los lisosomas?
b) Nombre distintos tipos de enzimas lisosomales e indique su función
específica.
10- a) ¿Qué es la endocitosis? Describa los distintos tipos de endocitosis.
b) ¿Cómo está formado y qué función cumple el complejo clatrina- adaptina?
11- ¿A qué se llama transitosis? Explique algún ejemplo de este proceso.
12- a) ¿A qué se llama exocitosis?
b) Describa y enumere sus etapas.
13- ¿Cuál es la diferencia entre secreción constitutiva y regulada? ¿Cuáles son
los elementos que determinan uno u otro tipo?
EJERCICIOS DE APLICACIÓN
1- Establezca cuáles son los lugares por donde transita una glicoproteína de
exportación, desde el inicio de la traducción hasta su destino final, indicando
todas las modificaciones que sufrirá en su estructura.
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2- En el curso de estudios enzimáticos del metabolismo de glúcidos en
homogenatos de hígado, se observaron algunas irregularidades en el ensayo
de la fosfatasa ácida, una enzima que se emplea como control. Se observó
que:
a) La actividad de la enzima era mayor en extractos preparados con agua
destilada que en aquellos elaborados con una solución osmóticamente
balanceada.
b) La actividad enzimática era mayor en preparaciones viejas que en
preparaciones frescas.
¿Cómo podría explicar estas observaciones?
3- Las siguientes imágenes corresponden a los esquemas de dos tipos
celulares observados con el microscopio electrónico. Se trata de un osteoclasto
(figura A) y de un macrófago (figura B).
Figura A
Figura B
Los osteoclastos son células del tejido óseo, multinucleadas y de gran
tamaño, que degradan el hueso. En este proceso de degradación, denominado
resorción ósea, los osteoclastos liberan enzimas hidrolíticas que digieren los
componentes orgánicos del hueso. Los osteoclastos además, son capaces de
fagocitar células y los detritos producidos en la degradación del hueso. La
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presencia de numerosas vacuolas en el citoplasma de estas células se
relaciona con las actividades recién mencionadas
Los macrófagos son células del tejido conectivo especializadas en la
captación de material particulado. Participan en procesos de defensa,
fagocitando activamente microorganismos, células dañadas o muertas, restos
celulares y partículas extrañas.
.
a) ¿Qué relación tienen los lisosomas con la actividad de los macrófagos y de
los osteoclastos?
b) Complete el siguiente esquema, identificando en el mismo un proceso de
defensa y un proceso de remodelación celular. Explique brevemente cada
uno de ellos.
4- La enfermedad de Tay Sachs es una enfermedad hereditaria, que podría
definirse como una encefalopatía metabólica de origen genético. Afecta
intensamente al sistema nervioso y produce muerte temprana. Los síntomas
comienzan a aparecer entre los 3 y 6 meses de edad. Clínicamente se
caracteriza por presentar pérdida de las habilidades motoras, sordera,
demencia, apatía, irritabilidad, ceguera, convulsiones, parálisis, disminución del
tono y la función muscular, retraso mental y crecimiento lento. La muerte se
produce generalmente a los 4 o 5 años de edad.
Al estudiar las neuronas de estos pacientes se encontró que en el citoplasma
de las mismas había vesículas rodeadas de membrana de forma irregular y
tamaño variable con altos niveles de gangliósidos, que se reconocieron como
lisosomas alterados.
Explique el desarrollo de la enfermedad desde el punto de vista celular
respondiendo a las siguientes preguntas:
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a) ¿A qué supone que se debe la acumulación de gangliósidos que se
menciona?
b) Explique en términos generales el proceso de degradación en el que
participan los lisosomas.
c) ¿Por qué no son degradados los gangliósidos por otras enzimas
lisosomales? ¿Puede el sistema ubiquitina-proteasoma contribuir con la
eliminación de esta sustancia? ¿Por qué?
d) ¿Qué alteraciones le parece que podría causar intracelularmente este
depósito de sustancias de desecho?
5- La insulina, hormona proteica clave en la homeostasis del organismo, es
sintetizada por las células β del páncreas endócrino. El precursor biosintético
de la insulina se denomina preproinsulina. El ARNm humano para este
precursor codifica para una proteína de aproximadamente 11.500 Da de peso
molecular. Esta molécula incluye una cadena adicional de 24 aminoácidos no
polares, localizados en su extremo amino terminal. Su vida media es tan solo
de 1 a 2 minutos, antes de ser convertida en proinsulina.
Por otra parte, al analizar los productos de secreción de las células β, se
encuentra un 2–5% de una molécula de 9000 Da, un 95 - 98% de otra molécula
de 5000 Da y una secuencia adicional de 31 aminoácidos.
Basándose en los datos aportados por el ejercicio y el esquema de la
preproinsulina aquí brindado:
a) ¿Cuál cree que es la historia natural de la insulina, desde que se sintetiza
hasta que adquiere su estructura final funcional y es secretada? Realice un
esquema de una célula donde pueda graficar los conceptos empleados en
su respuesta, sin olvidar mencionar la ubicación subcelular de cada
proceso.
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b) ¿Qué podría decir sobre la molécula de 11.500 Da y su secuencia de
aminoácidos no polares? ¿Cómo explicaría la breve vida media de este
producto celular?
c) ¿Cómo explicaría el origen y la proporción porcentual de los distintos
productos de secreción encontrados? ¿Cuál es la relación molar entre la
secuencia de 31 aminoácidos y la molécula de 5.000 Da? ¿A qué
corresponde esta última?
d) Mediante técnicas de ingeniería genética se seccionó el segmento de ADN
que codifica para la preproinsulina humana. Este segmento se introdujo en
el genoma de una bacteria empleando para ello un vector.
¿Cree Ud. que este organismo producirá insulina funcional como si fuese la
célula β? Justifique.
e) Se estudió el efecto que ejercen distintos compuestos sobre la secreción de
insulina, encontrándose los resultados que se expresan en el siguiente
gráfico de barras:
¿Qué podría decir acerca del
proceso de secreción de
insulina?
¿Se trata de un proceso
regulado o constitutivo?
Justifique.
6- Recibe un paciente en la guardia. Después de interrogarlo y examinarlo
concluye que el individuo presenta náuseas, vómitos, fiebre, taquicardia y un
abdomen extremadamente tenso y doloroso a la palpación. Solicita un análisis
de sangre.
Los resultados evidencian niveles altos de las enzimas pancreáticas amilasa y
lipasa en sangre y leucocitosis (elevado número de leucocitos en sangre).
Solicita más estudios, entre los que se cuentan diagnósticos por imágenes.
Reúne toda la información y confirma sus sospechas: el paciente presenta una
pancreatitis aguda (inflamación del páncreas).
Usted sabe que la pancreatitis es el resultado de la activación de las enzimas
pancreáticas que participan en la digestión en forma inadecuada dentro del
propio parénquima de la glándula, degradando no solo a la propia glándula sino
también a tejidos vecinos.
a) ¿Qué vía siguen las enzimas pancreáticas desde que comienza su síntesis
hasta que son secretadas?
b) ¿Qué tipo de vesículas transportarán a estas enzimas?
c) ¿Qué mecanismos presentan las células pancreáticas para controlar la
actividad de las enzimas digestivas que sintetizan?
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d) ¿Cómo se producirá la activación normal de estas enzimas? ¿Y en este
caso, qué le parece que ha ocurrido?
7- El siguiente esquema representa una de las etapas de la vía biosintética
secretora:
a) Seleccione los términos correctos de la lista y colóquelos en el esquema en
los espacios en blanco correspondientes (indicados con una línea continua).
Cada término puede usarse una vez, dos veces o ninguna.
-Vesícula endocítica. -Lisosoma.
-Proteínas SNARE. -Receptor de membrana.
-T-SNARE. -Proteína de transporte (carga)
-Vesícula de Secreción. soluble.
-V- SNARE. -Vesícula recubierta de clatrina.
-Vesícula recubierta de COPI. -Proteína de transporte
-Transporte retrógrado. transmembrana.
-Vesícula recubierta de COPII. -Transporte anterógrado.
b) Explique brevemente el proceso representado siguiendo el flujo de pasos
numerados y utilizando los términos escogidos en el inciso (a).
