UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE YUCATÁN

CAMPUS DE QUÍMICA
FACULTAD DE QUÍMICA

DIAGNÓSTICO Y MONITOREO AMBIENTAL

M. EN I. JAZMÍN SALETT NOVELO CASTILLA

INTEGRANTES:
-CHULIN GONGÓRA JOSÉ ALEJANDRO
- GÓMEZ MANZANILLA SHIRLEY
-GONZÁLEZ ORTIZ MARTHA MARÍA
-LÓPEZ COUHO DANIEL
-PARRALES MÉNDEZ DIEGO
-RAMOS QUERO ALONDRA

FECHA
LUNES 24 DE ENERO DE 2022
Muestreo de agua clara y determinación de
parámetros in situ.
Determinación de bacterias coliformes fecales.

TÉCNICA DEL NÚMERO MÁS PROBABLE (NMP).

A G U A P O TA B L E
Objetivo del Elaborar un plan de monitoreo para
determinar la concentración de

monitoreo
bacterias coliformes fecales en aguas
claras (agua potable) del zoológico "El
Centenario".
Sitio del monitoreo
Zoológico "El centenario",
Mérida, Yucatán México.

-Se ignauró el 18 de septiembre de 1910.

-Originalmente funcionó como jardín botánico.
-Funge como zoológico.
-Cuenta con un aviario de 2500 m2 de superficie.
-Zona de primates al aire libre de 400 m2.
-Zona de mamíferos.
-Número de animales: 623
-Número de especies: 92
Bacterias Coliformes
Grupo de especies bacterianas que tienen características bioquímicas en
común e importancia como indicadores de contaminantes del agua y los
alimentos. Son capaces de crecer a 35 °C en medio líquido de lactosa, con
producción de ácido y gas en un período de 48 h.

Coliformes fecales
Organismos coliformes los cuales tienen
las mismas propiedades fermentativas en
un periodo de 24 h a 44,5 °C ± 0,2 °C.
Figura No.1 Escherichia coli.
Ubicación de la zona de muestreo

Figura No.2 Ubicación de la zona de muestreo zoológico " El centenario“.

6
 Puntos de muestreo

Figura No.3 Puntos de muestreo en el zoológico "El centenario“.

7
Selección de parámetros
químicos, físicos,
y microbiológicos
que se medirán.

8
 Metodología del multiparámetro

1. Encender el equipo.
2. Limpiar el electrodo.
3. Sumergir el electrodo en la muestra. Agitar levemente y esperar que se
estabilice.

Consideraciones:

● Se deben registrar los datos de 3 lecturas sucesivas independientes.

● Se debe de enjuagar el electrodo después de cada medición y secar con
papel.
● La variación en las lecturas no debe pasar los 0.03 unidades de pH. Figura No.4 Multiparámetro.
● Realizar el procedimeinto para cada parámetro.

9
 Parámetros

Los parámetros se medirán con el multiparámetro inmediatamente y se deben de

registrar los siguientes datos:
Tabla No.1 Registro de lectura de las muestras

Muestra Hora de Cloro

Color pH Temperatura Conductividad
No. muestreo residual

10
 Coliformes Fecales

El grupo de microorganismos coliformes es adecuado

como indicador de contaminación bacteriana ya que los
coliformes:
● Son contaminantes del tracto gastrointestinal tanto del
hombre como de algunos animales.
● Están presentes en el tracto gastrointestinal en grandes
cantidades.
● Permanecen por más tiempo en el agua que las
bacterias patógenas.
Figura No.5 Coliforme fecal en microscopio.
● Se comportan de igual manera que los patógenos en
los sistemas de desinfección.

11
Toma de muestra,
preservación y
transporte.

12
 Para un análisis bacteriológico.
Se debe cubrir el tapón del frasco con papel resistente.
La esterilización de los frascos de muestreo en la
estufa por 170°C durante 60 minutos o en autoclave a
120°C durante 15 minutos.
Pueden usarse bolsas estériles.
Preparación
del envase Para un análisis fisicoquímico.

para la toma Se lava el recipiente y la tapa con solución muy

diluida de detergente y agua.
de muestra. Se enjuaga la tapa con agua.
Se enjuaga sucesivamente, dos veces, con agua
miliQ.
Drenar y poner la tapa.

13
 v La recolecta es en frascos o bolsas estériles, de
mínimo 100 mL de muestra. Éstas deben tener
Recolección, tiosulfato de sodio sólido (10 mg/envase de 100
almacenamiento mL).

y preservación de v En el caso del traslado debe mantenerse una

temperatura de 4°C ± 2°C.
muestras para un
v Se conserva en el laboratorio a la misma
análisis temperatura indicada anteriormente, no se
bacteriológico. deben exceder 24 hrs después de la toma
demuestra. Se puede analizar 48 h rs después si
se conserva a 2°C ± 1°C.

14
 Toma de muestra en grifos

El procedimiento se debe
Dejar correr el agua durante Para el enjuague del envase
realizar de manera
3 minutos o hasta que se debe tomar el agua que
cuidadosa, evitando la
la temperatura de se analizará, cerrar y agitar
contaminación del tapón,
la muestra sea estable. fuertemente.
boca e interior del envase.

15
• Las muestras tomadas deben colocarse en una hielera con bolsas
refrigerantes o bolsas de hielo cerradas para su transporte al laboratorio,
a una temperatura entre 4 y 10ºC.
• El periodo máximo que debe transcurrir entre la toma de muestra y el
inicio del análisis depende de la preservación empleada para cada
parámetro, como se indica en la tabla:

Manejo de muestras
16
Tabla No.2 Preservación de las muestras.

Material de Volumen Tiempo máximo en

Determinación envase mínimo (mL) Preservaación almacenamiento
Cloro residual p, v 50 Analizar inmediatamente Inmediatamente

Cloruros p, v 200 Refrigerar de 4 a 10°C y en la 48 horas

oscuridad.
Color p, v 500 Refrigerar de 4 a 10° y en la 48 horas
oscuridad.
Dureza total p, v 100 Adicionar HNO3 o H2SO4 a 14 días
pH < 2
Nitratos p, v 100 Refrigerar de 4 a 10°C y en la 48 horas
oscuridad.
Nitritos p, v 100 Refrigerar de 4 a 10°C 48 horas
y en la oscuridad.
Nitrógeno p, v 500 Adicionar H2SO4 a pH < 2 y 7 días
amoniacal refrigerar de 4 a 10°C

17
Tabla No.3 Preservación de muestra.

Material de Volumen Tiempo máximo en

Determinación envase mínimo (mL) Preservaación almacenamiento

pH p, v 50 Analizar inmediatamente Inmediatamente

Sólidos p, v 200 Refrigerar de 4 a 10°C 7 días

y en la oscuridad.
Sodio p, v 100 Refrigerar de 4 a 10°C 18 días
y en la oscuridad.
Sulfatos p, v 100 Refrigerar de 4 a 10°C 28 días
y en la oscuridad.
Temperatura p, v Determinar inmediatamente Inmediatamente

18
Análisis de
laboratorio
P R U E B A P R E S U N T I VA Y P R U E B A
C O N F I R M AT I VA

19
Determinación de
bacterias coliformes
fecales.
Método del número más
probable.

20
 Fundamento
• Las bacterias coliformes producen gas, de ahí podemos inferir la presencia de los
mismos, por lo cual se realizan pruebas confirmativas solo después de su
incubación.

• E. Coli produce indol, el cual es fácil de confirmar por medio de una prueba
bioquímica denotando una coloración roja.

• De igual forma la prueba oxidasa nos puede confirmar la presencia de coliformes

(únicamente confirmativa).

• Cualquiera de las pruebas anteriores indicará si existe la presencia de

contaminación fecal en el agua.

21
 Preparación de medios (antes del análisis)
Para caldo de agua triptosa Para caldo verde brillante

1. Diluir 35.6 g de caldo lauril triptosa 1. Diluir 40 g de medio de cultivo verde

Preparaciónen 1L de agua destilada brillante en 1L de agua destilada

2. Dividir en porciones de 20 mL en tubos de 2. Dividir en porciones de 10 ml en tubos de

ensayo con tubo de fermentación invertido 16 X 160 mm con campana de
(tubo de Durham) fermentación.

3. Tapar y esterilizar a 121° C durante 15 3. Esterilizar 15 minutos a 121 °C

minutos.
4. Ajustar el pH 7,2 a 25 °C
* Para caldo doble usar doble de lauril triptosa

22
 Condiciones necesarias
• Inoculación de la muestra y medio esteril.
• Examenes de 24 a 48 h máx.
• Manener en incubación a 35°C (± 0.5°).
• Controles positivos (E. Coli ) y negativos (Staphylococcus aureus o gran positivo) para C.T.
• Controles positivos (E. Coli ) y negativos (Enterobacter aerogenes) para C.F.
• Controles positivos (Pseudomonasaeruginosa) y una reacción negativa (E. coli) oxidasa.
• Expresar los resultados como micro/100ml de muestra.

23
 Procedimiento analítico (prueba presuntiva)

• Agitar la muestra
• Preparar diluciones de 10< tubos de doble capacidad
• 3 diluciones recomendadas: 10 mL, 1,0 mL y 0,1 mL o apoyarse en la
tabla 2 (diapositiva 30 y 31)
• Incubar por 24hrs a 48hrs a 35° y revisar
• Para los que no presenten rasgos positivos incubar 24hrs más

24
 Procedimiento analítico (prueba confirmativa)
C.F. C.T.
1. Realizar prueba C.T. a 44.5°C. 1. Incubar los tubos con caldo lactosa
bilis verde brillante a 35 ºC ± 2.
2. Adicionalmente se puede determinar
[Link] por incubación con agua triptona 2. Examinar la producción de gas en
o agua peptonada por 24hrs a 44.5°C. un periodo de 24 h a 48 h.
3. Agregar de 0.2 a 0.3 mL de Kovac .
4. Si se muestra una coloración roja la
prueba es positiva.

25
Procedimiento analítico (prueba confirmativa oxidasa opcional)
1. Tomar muestra (subcultivo) de un agar nutritivo (de casos ya presuntamente
confirmados)
2. Tomar una caja petri y papel filtro estéril.
3. Dejar caer 2 o 3 gotas de reactivo oxidasa en el papel.
4. Con un asa redonda tomar muestra y “sembrarla” en las partes humedecidas del papel
filtro.
5. La prueba es positiva si pinta azul-morado después de 10 s.

26
 Aseguramiento de la calidad
▪Garantiza que la medición cumple con normas definidas y apropiadas de calidad
con un determinado nivel de confianza.
▪Actividades diseñadas para obtener datos fiables y precisos.

▪Para el procedimiento analítico se empleó:

NMX-AA-042-SCFI-2015 ANÁLISIS DE AGUA - ENUMERACIÓN DE ORGANISMOS
COLIFORMES TOTALES, ORGANISMOS COLIFORMES FECALES
(TERMOLATENTES) Y Escherichia coli - MÉTODO DEL NÚMERO MÁS PROBABLE
EN TUBOS MÚLTIPLES.

27
Aseguramiento de la calidad
Establecer y mantener condiciones adecuadas para el almacenamiento, el alojamiento, la
manipulación y mantenimiento de los sistemas de pruebas microbiológicas.

Verificar que las condiciones y funcionamiento de los equipos y materiales sean

adecuados:

Preparación de medios de cultivo Pruebas presuntiva y confirmativa

Balanza analítica, autoclave,

tubos de ensayo y tubos Durham. Pipetas esterilizadas, incubadora .

Documentos de apoyo: bitácoras, fichas técnicas, normatividad

28
Análisis de datos

29
 Tabla No.4 Valores de NMP por cada 100 mL de muestra y 95% de límite
de confianza (para diversas combinaciones de resultados positivos
cuando se utilizan tres alícuotas de muestra 10 mL, tres de 1 mL y tres de
0,1 mL.
De acuerdo al número
de tubos de las pruebas
confirmativas que
hayan dado reacciones
positivas, se calcula el
NMP de organismos
coliformes en 100 mL
de muestra.

30
Tabla No.4 (Concluye)

31
Cuando la combinación de resultados obtenidos no se encuentre en tablas se
aplicará la siguiente fórmula:

32
MODIFICACIÓN A LA NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-127-SSA1-1994, SALUD AMBIENTAL. AGUA PARA USO Y CONSUMO HUMANO.

LÍMITES PERMISIBLES DE CALIDAD Y TRATAMIENTOS A QUE DEBE SOMETERSE EL AGUA PARA SU POTABILIZACIÓN

•Límites permisibles de características microbiológicas.

Tabla No.5 Límites permisibles de características microbiológicas.

33
 Indicadores de la
calidad de
agua subterránea
(CONAGUA)

Figura No.6 Indicadores de la calidad de agua subterránea (CONAGUA).

34
Tabla No.4 Indicadores de la calidad de agua subterránea (CONAGUA).

Indicadores de la calidad de
agua subterránea (CONAGUA)

35
 Referencias
1. SECRETARÍA DE ECONOMÍA. (2015). ANÁLISIS DE AGUA - ENUMERACIÓN DE ORGANISMOS COLIFORMES TOTALES,
ORGANISMOS COLIFORMES FECALES (TERMOTOLERANTES) Y Escherichia coli – MÉTODO DEL NÚMERO MÁS PROBABLE EN
TUBOS MÚLTIPLES (CANCELA A LA NMX-AA-42-1987). NMX-AA-042-SCFI-2015.
[Link]
calidad/#:~:text=Para%20citar%20un%20est%C3%A1ndar%2C%20una,est%C3%A1ndar%20entre%20par%C3%A9ntesis%20sin%20cursiv
a.&text=(Organizaci%C3%B3n%20que%20hizo%20el%20est%C3%A1ndar%2C%20a%C3%B1o).
2. Fernandez, Gustavo. (1994). "SALUD AMBIENTAL, AGUA PARA USO Y CONSUMO HUMANO-LIMITES PERMISIBLES DE CALIDAD Y
TRATAMIENTOS A QUE DEBE SOMETERSE EL AGUA PARA SU POTABILIZACION".. NOM-127-SSA1-
1994. [Link]
[Link]ón Nacional del Agua. RED NACIONAL DE MEDICIÓN DE LA CALIDAD DEL AGUA (REMA,ECA),, Indicadores de la calidad del
agua superficial y subterránea, México.
4. Sandoval, A. M., & Carlos, G. (1991). ADIESTRAMIENTO PARA LA PREVENCIÓN Y CONTROL DE LAS ENFERMEDADES
GASTROINTESTINALES EN EL SECTOR AGUA (B. Jimenez, Ed.). IMTA. [Link]
5. Barreto, P. (2010, febrero). PROTOCOLO DE MONITOREO DE AGUA (G. Espinoza, Ed.; RM-001). FACULTAD DE CIENCIAS DEL
AMBIENTE DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL.
[Link]
7. Determinación de bacterias coliformes fecales, técnica del numero más probable. Diagnostico y monitoreo Ambiental. UADY. Consultado
el 24/01/22 disponible en
[Link]

36