UNIVERSIDAD MARIANA

FACULTAD DE INGENIERÍA
INGENIERÍA DE PROCESOS
MICROBIOLOGIA

LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA

TECNICAS DE COLORACION
Fajardo Jojoa Kelly Stefania
Zambrano Vallejo Juan Ernesto
Andrade Barco Daniel Esteban
Eraso Solarte Jhovan Andrés

RESUMEN

Las técnicas de coloración o fijación nos permiten observar de manera correcta las
bacterias y sus diferentes estructuras celulares, la observación se hará a través del
microscopio con la suspensión de microrganismos extendidas en portaobjetos (frotis),
secadas y fijadas; la fijación de la muestra se puede hacer a temperatura ambiente o utilizando
el calor para poder teñirla.

Palabras Clave: Coloración, Técnicas, Observación, Bacterias, Coloración de

Gram.

1. INTRODUCCION microorganismos, pero no las estructuras

internas. La fijación química con agentes
La tinción es una técnica que permite
como etanol, formaldehido y ácido acético
incrementar el contraste entre la célula y su
entre otros, se utiliza para preservar las
entorno, contribuyendo a mejorar la
estructuras celulares.
imagen observada. En Microbiología
todas las tinciones se realizan a partir de la La fijación por calor es la más
suspensión de microrganismos extendidas utilizada para la observación de bacterias,
en portaobjetos (frotis), secadas y fijadas. consiste en pasar el portaobjetos, con la
suspensión bacteriana extendida y seca, a
La fijación por calor preserva la
través de la llama del mechero.
morfología externa de los
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TIPOS DE COLORACIONES  Colorantes de Gram.

 Azul de metileno.
. Simple: se utiliza un solo
 Nigrosina o tinta china.
colorante, y permute determinar la forma,
 Agua destilada.
tamaño y tipo.
 Microscopio.
. Diferencial: aplicación de dos  Mechero.
colorantes, las más utilizadas la de Gram y  Pinzas.
la de ácido alcohol resistencia.  Pipeta Pasteur.
 Botella lavadora.
. De estructuras: para colorear
 Recipiente con solución
estructuras como flagelos, capsulas.
desinfectante (hipoclorito de
sodio)
. Micro químicas: para detectar
compuestos químicos.  Lugol.
 Etanol-cetona 95%
. Negativa: lamina con fondo oscuro  Fucsina - Safrina
(tinta china y agua), las bacterias brillan.
En esta práctica se aplicarán dos
. De ácido resistencia: separa las técnicas de coloración: la coloración
bacterias que se decoloran de las que no se simple y la coloración diferencial (Tinción
dejan decolorar con el ácido. de Gram).

MATERIALES Y MÉTODOS Coloración simple

Coloración simple y diferencial Ponemos una gota de agua destilada

sobre un portaobjetos, calentamos un asa
 Cultivo de Staphylococcus
microbiológica hasta el rojo vivo para
aureus.
esterilizar, y la enfriamos en el medio de
 Cultivo de Escherichia Coli.
cultivo. Tomamos una muestra del
 Portaobjetos y cubreobjetos.
microorganismo y la extendemos sobre el
 Asas microbiológicas
portaobjetos, la homogenizamos;
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utilizando unas pinzas se coge el

portaobjetos y utilizando la llama del
mechero secamos el agua para fijar el
microorganismo, tenemos cuidado de no
quemar la muestra. Dejamos enfriar el
portaobjetos y añadimos una gota de azul
Figura 1 ASA AL ROJO VIVVO
de metileno por 5 minutos.

Transcurrido los 5 minutos, lavamos

el portaobjetos con agua destilada,
secamos la lámina y ponemos encima de la
muestra un cubreobjetos.

Observamos la muestra.

Figura 2 TOMA DE MUESTRA

Figura 3 SECADO DE MUESTRA

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Tinción de Gram

Tomamos muestra del cultivo a

observar, luego de haber calentando al rojo
vivo las asas microbiológicas,
posteriormente se enfrían en un costado
interno de la caja Petri y tomamos la
muestra, depositamos 2 gotas de agua
destilada en un portaobjetos y ponemos la
muestra obtenida y procedemos a secado
de la muestra.

Figura 5 LAVADO CON AGUA

DESTILADA

Agregamos dos gotas de lugol,

esperamos 1 minuto y lavamos con agua
destilada.
Figura 4 SECADO

Luego del secado y reposo de la

muestra adicionamos dos gotas de violeta
de genciana y la dejamos un minuto,
después del minuto lavamos con agua
destilada. Figura 6 ADICION DE LUGOL

Lavamos la muestra con etanol por

30 segundos (s), lavamos nuevamente con
agua destilada.
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RESULTADOS: Observe todas las

bacterias con las diferentes coloraciones,
determine su morfología y determine si
son bacterias Gram positivas o bacterias
Gram negativas. Dibuje lo observado.

Figura 7 LAVADO CON ETANOL

El dibujo representa al
Añadimos safranina dejamos actuar Staphylococcus en un lente 4X. Sin forma
por un minuto, lavamos con agua destilada definida, bacteria Gram +.
y secamos el exceso de líquido con una
toalla absorbente, ponemos el
cubreobjetos y observamos en el
microscopio.

Figura 9 STAPHYLOCOCCUS EN UN
LENTE 4X.

Figura 8 ADICION DE FUCSINA O Escherichia coli, lente de 4X sin

SAFRINA forma definida. Bacteria Gram - al
observar en microscopio.

Figura 10 E. COLI - 40X

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Microorganismos vistos en 2. ¿Cuál es el fundamento de la

microscopio. coloración de Gram?

Tinción de Gram Esta tinción

diferencial fue propuesta por el medico
danés Christian Gram, que examinando
tejido pulmonar de enfermos fallecidos por
neumonía observó que la bacteria
Streptococcus pneumoniae, presente en
FIGURA 11 . ESCHERICHIA COLI los pulmones, retenía el colorante
40X conocido como marrón Bismark
(sustituido posteriormente por el cristal
violeta), mientras que el tejido pulmonar
no era capaz de retener el colorante.

Es la tinción diferencial más

utilizada de forma rutinaria y
prácticamente la primera prueba a la que
se someten las muestras de cualquier
FIGURA 12 STAPHYLOCOCCUS
AUREUS 40X origen antes de su estudio. Proporciona
una información esencial, sobre la forma,
tamaño y agrupación celular, como del
tipo y composición de la pared que
presentan las bacterias. La tinción
de Gram divide a las bacterias con pared
del Dominio Bacteria en dos grandes
grupos: bacterias con pared de tipo Gram
positiva y bacterias con pared de tipo
FIGURA 13 STAPHYLOCOCCUS
AUREUS 100X Gram negativa.
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La diferente estructura y de los microorganismos a esta tinción,

organización de la pared celular en estos parece que la diferencia se debe tanto a la
dos tipos de organismos hace que ambos estructura física como a la composición de
grupos respondan de manera distinta, así la pared celular, en bacterias Gram
mientras las bacterias Gram positivas positivas la gruesa capa de péptidoglucano
mantienen y conservan el complejo cristal con abundantes entrecruzamientos parece
violeta-iodo, las bacterias Gram negativas contribuirá la retención del colorante
se decoloran rápidamente con la aplicación fundamental, cristal violeta, mientras que
del alcohol, admitiendo el colorante de en bacterias Gram negativas la delgada
contraste que proporciona un color entre capa de peptidoglucano junto con la
rosa y rojo que contrasta con el intenso abundancia de lípidos en la membrana
color violeta. externa de la pared celular incrementan la
porosidad y por ello, contribuyen a la
Se han propuesto diferentes
pérdida del colorante fundamental después
explicaciones para justificar la respuesta
de la decoloración con alcohol.
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LOS HONGOS

RESUMEN
La observación macroscópica y microscópica de los hongos nos permiten establecer
características de este tipo de microorganismos a simple vista y con imágenes aumentadas
para distinguir las estructuras que los componentes como hifas, conidias, esporas y
esporangios.
Palabras Clave: Microorganismos, Hongos, Características, Observación, Mohos.
Son capaces de crecer en condiciones
extremas y llegar a formar micro toxinas.
INTRODUCCIÓN
Los hongos tienen una gran importancia
Los hongos son microorganismos económica: las levaduras son las
eucarióticos (tienen el núcleo rodeado por responsables de la fermentación de
una membrana) unicelulares o la cerveza y el pan, y el cultivo
pluricelulares que no forman tejidos y sus de setas como las trufas. Desde 1940 se
células se agrupan formando un cuerpo han empleado para producir
filamentoso muy ramificado. El conjunto industrialmente antibióticos, así
de filamentos de un hongo se llama como enzimas (especialmente proteasas).
micelio.
Los hongos se dividen en mohos y
Los hongos tienen alimentación levaduras.
heterótrofa, puesto que no pueden realizar
la fotosíntesis porque no tienen clorofila. Mohos
Su forma de reproducción puede ser Los mohos son microorganismos
asexual, por esporas, y sexual. eucariotas no fotosintéticos, que se
Pueden tener forma redonda, ovalada o en caracterizan por formar un entramado
forma de fibras. Las fibras pueden formar filamentoso conocido como micelio.
un entramado o red, visible a simple vista,
como por ejemplo los mohos en los  Morfología. A partir de las esporas
alimentos. o células reproductoras, se
desarrolla una agrupación celular
Los hongos viven en lugares húmedos, con en forma de filamentos llamados
abundante materia orgánica en hifas, que se agrupan formando el
descomposición y en ausencia de luz sola micelio o cuerpo vegetativo.
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El micelio se desarrolla de forma radial,

colonizando el sustrato de forma
superficial o por el interior, tomando
distintos aspectos: algodonoso, seco,
húmedo.

 Los mohos invaden con rapidez

cualquier sustrato, gracias a su
eficacia en la diseminación, a un Clasificación de los Hongos: existen
crecimiento rápido y a que poseen varias clasificaciones de los Hongos, las
una rica carga enzimática. más actualizadas las simplifican y les da a
los hongos cinco divisiones
La mayoría de los mohos se desarrollan
entre 15 y 30 °C con un óptimo de
 Basidiomicetos
crecimiento alrededor de 20-25 °C,
 Ascomicetos
 Glomeromicetos
 Zigomicetos
 Quitridiomicetos

Por las características de las esporas

sexuales:

Los filamentos de los cuales están  Aspergillus es un hongo

compuestos los mohos se llaman Hifas y filamentoso hialino ubicuo,
presentan 3 formas: productor de enfermedades.
1. Septadas o cenocíticas
2. Sepatadas con células
mononucleadas
3. Septadas con células
plurinucleadas.
Fusarium:
Extenso género de micro hongos
filamentosos ampliamente
distribuido en el suelo y en
asociación con plantas.

Las levaduras son unicelulares, esféricas y

ovales, no forman hifas, ni micelio.
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➔ Fruta con hongos.

Penicillium ➔ Cinta pegante transparente y
Es un hongo filamentoso hialino, tijeras.
saprófito perteneciente al filo
Ascomycota.
PROCEDIMIENTO:

La práctica de hongos se limitó a realizar

en nuestro caso con los hongos presentes
en la papaya.

A simple vista el hongo tenía una forma

ovalada con zonas negras y blancas y en la
periferia gris oscuros, con textura
aterciopelada y suave.
Mucor
Hongo filamentoso, hifas largas, En un portaobjetos extendimos la muestra
no septadas y curvas. que obtuvimos de la papaya, luego de que
el estilete estuvo al rojo vivo y fue enfriado
y previamente se adiciono una gota de azul
de lactofenol en el portaobjetos, cubrimos
la muestra con un cubreobjetos y
procedemos a observar la muestra en el
microscopio.
MATERIALES Y MÉTODOS Observamos la muestra.
➔ Cajas con hongos filamentosos RESULTADOS:
(Penicillium, Aspergillus,
Fusarium) 1. Dibuje lo que observa en los
➔ Azul de lactofenol. diferentes objetivos y señale principales
➔ Portaobjetos y cubreobjetos. estructuras observadas.
➔ Estiletes.
➔ Porta y cubreobjetos. Las estructuras que se observan son
➔ Mechero. filamentosas, alargadas y otras curvas.
➔ Microsocopio.
➔ Beaker con solución desinfectante Unas colonias con estructuras circulares.
(hipoclorito de sodio 1%).
➔ Pan con hongos.
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2. Identifique el tipo de hifa y órganos

de reproducción del hongo.

En la muestra pudimos observar: Hifas

septadas con células poli nucleadas,
esporangios y esporangiosporas.