ACTIVIDAD No.
3 (Del 8 al 12 de agosto)
TEMA: SEMINARIO DE MEDIOS DE CULTIVOS y SIEMBRA DE MUESTRAS
BIOLÓGICAS
TEMARIO: Medios de cultivo, Constituyentes y clasificación Siembra y aislamiento.
OBJETIVOS:
1. Definir medios de cultivo.
2. Citar sus principales constituyentes habituales.
3. Mencionar las condiciones que deben reunir los medios de cultivo.
4. Clasificar los medios de cultivos y dar un ejemplo de cada uno de ellos.
5. Conocer los métodos de inoculación de las muestras biológicas.
PRIMERA PARTE: MEDIOS DE CULTIVO Y SIEMBRA:
Las tendencias actuales en microbiología clínica apuntan al desarrollo de métodos
rápidos (que no dependan del crecimiento microbiano) para determinar la presencia
de agentes infecciosos; sin embargo, el aislamiento y la identificación de patógenos con
métodos tradicionales (cultivo bacteriológico), son técnicas irremplazables para el
diagnóstico de las enfermedades infecciosas.
El medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros
componentes que crean las condiciones necesarias para el crecimiento y la
multiplicación de los microorganismos. El objetivo es aislar las diversas especies,
procede a identificarlos o llevar a cabo estudios complementarios. La diversidad
metabólica de los gérmenes es enorme; hay bacterias que pueden crecer
satisfactoriamente en cualquier medio de cultivo otras sin embargo requieren medios
especiales.
El crecimiento de los microorganismos dentro de un medio de cultivo o sobre él, se
denomina cultivo microbiano.
Las condiciones que debe reunir un medio de cultivo son los siguientes:
● Contener nutriente
● Humedad suficiente
● pH ajustado
● Inicialmente estar estéril
En el mercado existe una gran variedad de medios disponibles. La mayor parte de estos
medios vienen con sus componentes previamente mezclados y desecados o liofilizados
y solo requieren de la adición de agua destilada.
Los constituyentes habituales de los medios de cultivo son:
● Agua: útil para disolver los constituyentes del medio de cultivo.
● Extracto: ejemplo; carne, semillas, cerebro, etc. También proporcionan
carbohidratos, vitaminas y sales.
● Peptona: son fuentes de carbono, nitrógeno y energía.
● Glúcidos: igual que el caso anterior.
● ClNa: regula las propiedades osmóticas del medio con el fin de evitar los
fenómenos de plamólisis.}
● Líquidos corporales: aportan factores de crecimiento esenciales (sangre o
suero).
● Sistema amortiguador: regula la propiedad del medio manteniendo el pH
necesario para el crecimiento bacteriano.
● Indicadores de pH: dan pruebas visuales de las variaciones del pH.
● Agentes reductores: crean atmósferas óptimas para el crecimiento.
● Agar: para solidificar el medio
Clasificación de los medios de cultivos:
1. Por su estado Físico
a. Líquidos: “Caldos”, constituidos por nutrientes semejando a caldo casero
filtrado y esterilizado. Ejm: Caldo nutritivo, Infusión cerebro-corazón
(BHI), etc.
b.
c. Sólidos: “Agar”, a un medios líquido se le añade sustancias gelificantes.
Estos medios se colocan en platos petri o en tubo de ensayos. Ej: Agar
nutritivo.
d. Semisólidos: Contienen agar al 0,3 o 0,5%, Ej: Agar glucosado.
2. Por su origen:
a. Naturales Sustancias naturales animales ovegetales, Ej. Leche, orina,
papas, etc.
b. Sintéticos: Llamados también artificiales, sus componentes están
químicamente definidos. Ej. Agar nutritivo.
c. Semisintéticos: o complejos, se le agregan factores de crecimiento tales
como: carne vegetales, extracto de levaduras, ej. Agar o Caldo de BHI. c.
3. Por su utilidad o constitución:
a. Comunes: Tienen sustancias nutritivas mínimas para bacterias no
exigentes. Ej. Agar nutritivo.
b. Enriquecidos: Favorece el crecimiento de bacterias exigentes en cuanto a
sus requerimientos e inhiben parcialmente el resto de gérmenes, Ejm.
Agar Sangre.
c.
d. Selectivo: Agregan sustancias inhibitorias para un grupo de bacterias
(colorantes, antibióticos, etc) y favorecen a otras. Ej Agar Shigellas-
Salmonelas (ASS).
e. Diferenciales: Permiten el crecimiento y diferenciación entre
microorganismos, Ejm. Agar Base Rojo de Fenol.
f. De Transporte: Aseguran la viabilidad de los microorganismos durante
su transporte.
g. Especiales: animales de experimentación, huevos embrionados y cultivo
celulares
Siembra
Sembrar un microorganismos es colocarlo en un ambiente artificial apropiado para
que lleve a cabo su metabolismo, su desarrollo y su reproducción. Las técnicas de
siembra varían según el estado físico del medio o las necesidades de los
microorganismos (anaerobios, aerobios, etc.) Una condición básica de la siembra es
que se realice bajo rigurosas reglas de asepsia, es indispensable evitar el crecimiento de
gérmenes del ambiente en el cultivo. Estos microorganismos se les denominan
contaminantes.
La siembra tiene como finalidad el cultivo, que es el crecimiento de poblaciones
microbianas en un medio de cultivo bajo condiciones de laboratorio. A partir del
cultivo es posible realizar el aislamiento.
Aislamiento
Por lo general las muestra clínicas al sembrarlas originan cultivos mixtos (más de una
clase de gérmenes), teniendo que separa los distintos tipos de colonias, ya que los
cultivos puros son los que permiten realizar estudios sobre las propiedades
bioquímicas pruebas de identificación o tipificación) y la sensibilidad a los
antimicrobianos (Antibiograma).
Por lo general al sembrar las muestras biológicas obtenidas de pacientes, de algunos
sitios anatómicos tales como; muestras vaginales, hisopados faríngeos, muestras de
heces; los cultivos obtenidos de esta siembra son mixtos, es decir que en el medio de
cultivo crece más de una bacteria, por lo cual es necesario separar los distintos tipos de
colonias, para obtener cultivos puros y poder decidir cuáles pueden ser las patógenas
que ameritan ser identificadas a través de una serie de pruebas bioquímicas y/o
serológicas, lográndose la tipificación de especie o variedades y estudio de la
susceptibilidad antimicrobiana.
Los métodos por aislamiento más frecuente son:
● Siembra por agotamiento en estrías
● Siembra por diseminación en superficie
● Siembra de diluciones seriadas.
NOTA: El estudiante debe buscar antes de venir al laboratorio en que consiste
cada método de aislamiento, sus ventajas y desventajas.
Pruebas de Susceptibilidad Antimicrobiana o Antibiograma
Hacia 1950, se empleaba una amplia variedad de métodos de susceptibilidad
antimicrobiana o Antibiograma que diferían entre los diferentes laboratorios. Pero la
OMS proporcionó las bases que condujeron al desarrollo de métodos estandarizados.
Una de las tareas del laboratorio de bacteriología, es el estudio de la susceptibilidad de
las bacterias a los antibióticos. Esta información permite conocer que antibióticos
pueden ser elegidos para ser utilizados en el paciente, de acuerdo al tipo y sitio de
infección teniendo mayores probabilidades de éxito terapéutico.
Sin embargo existen microorganismos que están desarrollando cada vez más
resistencia a los antimicrobianos. Esta resistencia es un fenómeno biológico natural.
Todos los agentes antimicrobianos tienen el potencial para seleccionar subpoblaciones
de microorganismos farmacoresistente.
Las principales clases de antibióticos ejercen su efecto al interferir con los siguientes
procesos bacterianos:
● Biosíntesis de la pared celular
● Síntesis de proteínas
● Reparación y replicación del ADN
● Síntesis de la membrana celular
La resistencia bacteriana a los antibióticos ocurre mediante los siguientes mecanismos:
● Acumulación de mutaciones
● Adquisición de nuevo material genético (plásmidos, transposones)
● Recombinación intragénica de genes cromosómicos específicos.
Los mecanismos de resistencia a los antibióticos pueden ser detectados por
laboratorios clínico y de investigación científica por métodos de biología molecular
tales como:
● Inhibición enzimática
● Alteraciones en la permeabilidad de la membrana
● Bombas de flujo - Alteración de los sitios blanco en los ribosomas
● Alteraciones de los precursores de la pared
● Alteración de enzimas blanco
● Sobrepaso a la inhibición del antibiótico
Métodos de Diagnóstico de Resistencia y Estudio de la
Susceptibilidad bacteriana
El Antibiograma consiste en una técnica para evaluar la capacidad de los antibióticos
seleccionados, de inhibir el crecimiento bacteriano in vitro a través de diferentes
métodos, como son:
● Difusión en disco (Método de Kirby Bauer)
○ Es el método más utilizado, por ser más barato, fácil de realizar y da la
posibilidad de evaluar varios antimicrobianos al mismo tiempo. El
antibiótico se encuentra contenido en un disco de papel filtro de celulosa
a una concentración establecida; una vez sembrado el microorganismo
identificado en un medio de cultivo, se colocan los discos, se incuban
durante 18 a 24 horas, posterior se mide la zona de inhibición, que
corresponde al área alrededor del disco en el que la bacteria no creció, ya
que este se correlaciona inversamente con la concentración inhibitoria
mínima (CIM) del antibiótico que inhibe el crecimiento del
microorganismo. Ventajas: técnica que proporciona un resultado
cualitativo a una concentración fija del antibiótico.
● Dilución en caldo:
○ Se realiza en forma manual por macrodilución en tubo o placa y
automatizada por microdilución. Se colocan varias concentraciones del
antibiótico en tubos o microplatos que contienen un medio líquido con
un inóculo estándar de los microorganismos. Luego de 18 a 24 horas de
incubación para la mayor parte de bacterias aeróbicas, la concentración
más baja del medicamento a la cual no es visible el agente infeccioso es
determinada y establecida como concentración mínima inhibitoria, CIM.
Ventaja: Permite conocer la concentración inhibitoria mínima de forma
cuantitativa, por diferentes concentraciones del antibiótico.
● Dilución en agar:
○ Este método también proporciona valores de CIM, a diferencia del
anterior, el antibiótico es incorporado a diferentes concentraciones en un
medio sólido de agar y el microorganismo es inoculado en puntos sobre
su superficie. La ausencia de crecimiento del germen indica que éste es
susceptible a la concentración de fármaco presente en el medio. Ventaja:
Se puede realizar con varias cepas simultáneamente.
● Difusión en gradiente:
○ Esta es la técnica más recientemente desarrollada, se coloca una tira
recubierta de plástico que trae incorporado un gradiente progresivo de
concentración del antibiótico en un medio sólido de agar, sobre cuya
superficie ha sido sembrado el microorganismo uniformemente. Después
de 18 a 24 horas, la intersección del punto más bajo de la zona elíptica de
inhibición del crecimiento y el gradiente es asumido como la CIM.
MATERIALES Y METODOS:
● Medios Sólidos (Agar nutritivo, agar SS, Agar EMB y agar Müller-Hinton)
● Medios líquidos (Caldo de Tioglicolato y caldo Müller-Hinton)
● Medios Semisólidos (SIM)
● Platos Petri
● Tubos de ensayo con tapón de rosca
● Gradillas
● Balanza
● Beaker o Erlenmeyer
● Papel de aluminio
● Agua destilada
● Autoclave
● Cocina de gas o eléctrica
● Mecheros de Bunsen
● Pipetas de vidrio de 2 y 5 cc
● Lápiz de cera
Alex
Ly
Fati
PROCEDIMIENTO:
1. En el medio de cultivo suministrado, inocule la muestra biológica seleccionada
y de acuerdo a ésta, proceda a sembrarla por el método de estría. Consulte a su
profesor (a) el procedimiento a realizar.
2. Ubique el medio de cultivo inoculado en una incubadora que tenga una
temperatura de 37°C por 24 horas.
3. Observe los resultados y anótalos en su cuaderno de trabajo.
PREGUNTAS PARA DISCUSIÓN
1. ¿En microbiología a qué le llamamos medio de cultivo?
El medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros
componentes que crean las condiciones necesarias para el crecimiento y la
multiplicación de los microorganismo. El objetivo es aislar las diversas especies,
procede a identificarlos o llevar a cabo estudios complementarios.
2. ¿Qué condiciones debe reunir un medio de cultivo bacteriológico?
Las condiciones que debe reunir un medio de cultivo son los siguientes:
● Contener nutriente
● Humedad suficiente
● pH ajustado
● Inicialmente estar estéril
3. ¿Cuáles son los principales constituyentes de los medios de cultivo y su
utilidad para cada uno?
Los constituyentes habituales de los medios de cultivo son:
● Agua: útil para disolver los constituyentes del medio de cultivo.
● Extracto: ejemplo; carne, semillas, cerebro, etc. También proporcionan
carbohidratos, vitaminas y sales.
● Peptona: son fuentes de carbono, nitrógeno y energía.
● Glúcidos: igual que el caso anterior.
● ClNa: regula las propiedades osmóticas del medio con el fin de evitar los
fenómenos de plamólisis.}
● Líquidos corporales: aportan factores de crecimiento esenciales (sangre o
suero).
● Sistema amortiguador: regula la propiedad del medio manteniendo el pH
necesario para el crecimiento bacteriano.
● Indicadores de pH: dan pruebas visuales de las variaciones del pH.
● Agentes reductores: crean atmósferas óptimas para el crecimiento.
● Agar: para solidificar el medio
4. ¿Cómo se clasifican los medios de cultivo de acuerdo a su estado Físico?
a. Líquidos: “Caldos”, constituidos por nutrientes semejando a caldo casero
filtrado y esterilizado. Ejm: Caldo nutritivo, Infusión cerebro-corazón
(BHI), etc.
b. Sólidos: “Agar”, a un medios líquido se le añade sustancias gelificantes.
Estos medios se colocan en platos petri o en tubo de ensayos. Ej: Agar
nutritivo.
c. Semisólidos: Contienen agar al 0,3 o 0,5%, Ej: Agar glucosado.
5. ¿Cómo se clasifican los medios de cultivo de acuerdo a su origen?
a. Naturales Sustancias naturales animales ovegetales, Ej. Leche, orina,
papas, etc.
b. Sintéticos: Llamados también artificiales, sus componentes están
químicamente definidos. Ej. Agar nutritivo.
c. Semisintéticos: o complejos, se le agregan factores de crecimiento tales
como: carne vegetales, extracto de levaduras, ej. Agar o Caldo de BHI. c.
6. ¿Cómo se clasifican los medios de cultivo de acuerdo a su utilidad o
constitución?
a. Comunes: Tienen sustancias nutritivas mínimas para bacterias no
exigentes. Ej. Agar nutritivo.
b. Enriquecidos: Favorece el crecimiento de bacterias exigentes en cuanto a
sus requerimientos e inhiben parcialmente el resto de gérmenes, Ejm.
Agar Sangre.
c. Selectivo: Agregan sustancias inhibitorias para un grupo de bacterias
(colorantes, antibióticos, etc) y favorecen a otras. Ej Agar Shigellas-
Salmonelas (ASS).
d. Diferenciales: Permiten el crecimiento y diferenciación entre
microorganismos, Ejm. Agar Base Rojo de Fenol.
e. De Transporte: Aseguran la viabilidad de los microorganismos durante
su transporte.
f. Especiales: animales de experimentación, huevos embrionados y cultivo
celulares
7. ¿Cuál es la diferencia entre siembra y aislamiento?
Sembrar un microorganismos es colocarlo en un ambiente artificial apropiado para
que lleve a cabo su metabolismo, su desarrollo y su reproducción. Las técnicas de
siembra varían según el estado físico del medio o las necesidades de los
microorganismos (anaeróbios, aerobios, etc.) Una condición básica de la siembra es
que se realice bajo rigurosas reglas de asepsia, es indispensable evitar el crecimiento de
gérmenes del ambiente en el cultivo. Estos microorganismos se les denominan
contaminantes. La siembra tiene como finalidad el cultivo, que es el crecimiento de
poblaciones microbianas en un medio de cultivo bajo condiciones de laboratorio. A
partir del cultivo es posible realizar el aislamiento.
En cambio, aislar, es separar los distintos tipos de colonias. Por lo general las muestra
clínicas al sembrarlas originan cultivos mixtos (más de una clase de gérmenes),
teniendo que separar los distintos tipos de colonias, ya que los cultivos puros son los
que permiten realizar estudios sobre las propiedades bioquímicas pruebas de
identificación o tipificación) y la sensibilidad a los antimicrobianos (Antibiograma).
Por lo general al sembrar las muestras biológicas obtenidas de pacientes, de algunos
sitios anatómicos tales como; muestras vaginales, hisopados faríngeos, muestras de
heces; los cultivos obtenidos de esta siembra son mixtos, es decir que en el medio de
cultivo crece más de una bacteria, por lo cual es necesario separar los distintos tipos de
colonias, para obtener cultivos puros y poder decidir cuáles pueden ser las patógenas
que ameritan ser identificadas a través de una serie de pruebas bioquímicas y/o
serológicas, lográndose la tipificación de especie o variedades y estudio de la
susceptibilidad antimicrobiana.
8. ¿Cuáles son los métodos de aislamiento más frecuente? Explique.
Los métodos por aislamiento más frecuente son:
● Siembra por agotamiento en estrías
● Siembra por diseminación en superficie
● Siembra de diluciones seriadas.
NOTA: El estudiante debe buscar antes de venir al laboratorio en que consiste
cada método de aislamiento, sus ventajas y desventajas.
Los métodos por aislamiento más frecuente son:
● Siembra por agotamiento en estrías
La siembra por estría escocesa es un método cualitativo de
aislamiento de microorganismos por agotamiento en placa a
partir de una muestra natural o de un cultivo de laboratorio.
Este método está basado en arrastrar, mediante un asa de
siembra, un número cada vez más pequeño de individuos. Es
un método rápido y simple de agotamiento progresivo y
continuo del inóculo sobre un medio sólido contenido en
una placa de Petri. El objetivo es obtener, a partir de un
elevado número de bacterias, un número reducido de ellas
distribuidas individualmente sobre la superficie de la placa.
Al incubar la placa, y dejar crecer las bacterias distribuidas
sobre ella, cada una de las bacterias originará una colonia.
En palabras simples, se basa en coger una vez una cantidad representativa de muestra
y extenderla por toda la placa petri en cuatro zonas de tal forma, que cada vez que
pasamos de una zona a otra la cantidad de microorganismo se reduce mucho. De esta
manera, conseguimos que en la ultima zona de extensión, solo haya bacterias aisladas,
que formen colonias independientes y distinguidas unas de otras.
Ventajas
-
Desventajas
- .
2º de BIOLOGÍA PRÁCTICAS DE MICROBIOLOGÍA 2009-2010
Siembra por agotamiento en estría – JFLAbclinico
file:///C:/Users/fatim/Downloads/Dialnet-PracticasDeMicrobiologia-100835.pdf (si.
puse una descarga . period)
cara de popo
¿la tuya?
la de masita
la de toby
entonces sos horrorosa
no te proyectes amor
oila, quien te manda a decir q tenes cara de popo
● Siembra por diseminación en superficie
Con un ansa de siembra, calentada al rojo vivo en el mechero y enfriada cerca del
mismo, se toma una muestra del cultivo de microorganismos y se extiende sobre la
superficie de la placa con el medio agarizado, pero sin hacer presión para no dañar el
agar. Se extiende con espátula de Drigalsky hacia adelante y hacia atrás, mientras se
gira la placa, se lleva la placa a incubar a la temperatura adecuada, siempre en posición
invertida lo que evitará que el agua de condensación se deposite sobre la superficie del
medio, dificultando la obtención de colonias aisladas.
Ventajas:
-
Desventajas:
-
● Siembra de diluciones seriadas
