UNIVERSIDAD NACIONAL DE BARRANCA
FACULTAD DE INGENIERÍA
ESCUELA PROFESIONAL ING. INDUSTRIAS
ALIMENTARIAS
GUÍA DE PRÁCTICA DE LABORATORIO
ASIGNATURA: MICROBIOLOGÍA GENERAL
ESTUDIANTES:
•
•
DOCENTE: Blgo. Ms. C. Ana Melva Contreras Contreras
CICLO ACADÉMICO: V SEMESTRE: 2022 - 1
BARRANCA – PERÚ
2022
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PRACTICA Nº 06
INMUNIDAD CELULAR
OBJETIVOS
• Que cada alumno y alumna del grupo conozca las células encargadas de nuestra defensa celular.
• Presenciar la técnica que se utiliza para la observación de las células de defensa.
• Adquirir destreza en la ejecución de la coloración de células hemáticas.
MATERIAL
• Laminas portaobjeto • Material biológico: Sangre capilar o venosa
• Colorante wrigth • Algodón
• Material punzante estéril • Alcohol yodado
TÉCNICA
1. Colocar una gota de sangre en la lámina portaobjeto, en el extremo derecho (parte interna) y con
la ayuda de otra lámina portaobjeto realizar un frótis (extendido).
2. Fijar la muestra a la lámina a temperatura ambiente (dejar secar).
3. Realizar la coloración wright
Procedimiento
• Colocar una o dos gotas del colorante
• Agregar doble cantidad de agua destilada.
• Dejar en reposo durante 05 minutos aproximadamente.
• Lavar con agua de caño.
• Secado al medio ambiente o calor moderado.
• Observación con el objetivo de mayor aumento o de inmersión.
FUNDAMENTO
LEUCOCITO
Los leucocitos (también llamados glóbulos blancos) son un conjunto heterogéneo de células
sanguíneas que son los efectores celulares de la respuesta inmune, así intervienen en la defensa del
organismo contra sustancias extrañas o agentes infecciosos (antígenos). Se originan en la médula
ósea y en el tejido linfático.
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Los leucocitos son células móviles que se encuentran en la sangre transitoriamente, así, forman la
fracción celular de los elementos figurados de la sangre. Son los representantes hemáticos de la
serie blanca.
A diferencia de los eritrocitos (glóbulos rojos -
hematies), no contienen pigmentos, por lo que se
les califica de glóbulos blancos.
Son células con núcleo, mitocondrias y otros
orgánulos celulares. Son capaces de moverse
libremente mediante seudópodos. Su tamaño
oscila entre los 8 y 20 μm (micrómetro). Su tiempo
de vida varía desde algunas horas, meses y hasta
años. Estas células pueden salir de los vasos
sanguíneos a través de un mecanismo llamado
diapédesis (prolongan su contenido
citoplasmático), esto les permite desplazarse fuera
del vaso sanguíneo y poder tener contacto con los
tejidos al interior del cuerpo.
Clasificación
Según la forma del núcleo se clasifican en:
• Polimorfonucleares: Su núcleo suele estar lobulado (generalmente en tres segmentos):
-Neutrófilos
-Eosinófilos
-Basófilos
• Monomorfonucleares: Presenta un núcleo compacto e individualizado:
-Linfocitos
-Monocitos
La observación a través del microscopio permite clasificarlos según sus características tintoriales en:
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• Granulocitos: presenta gránulos en su citoplasma, con núcleo redondeado y lobulado, formados
en las células madres de la médula ósea: eosinófilos, basófilos y neutrófilos.
Neutrófilo Eosinófilo Basófilo.
• Agranulocitos: No presenta gránulos en su citoplasma: linfocitos, monocitos y macrófagos.
Linfocito
Los leucocitos se relacionan con los mecanismos defensivos del organismo. Los granulocitos
y los monocitos destruyen a los microbios fagocitándolos mientras que los linfocitos producen
anticuerpos contra ellos.
ANÁLISIS DE LA SERIE BLANCA
El análisis de la serie blanca constituye el recuento de leucocitos, la fórmula leucocitaria
(Schilling) y las alteraciones cualitativas y cuantitativas en el frotis.
El número normal de leucocitos en el adulto oscila entre 4.0 y 0.9 x 10 9/l. Número que no
varía significativamente con la edad y el sexo, salvo en etapas muy tempranas de la vida.
FÓRMULA LEUCOCITARIA
Corresponde al estudio diferencial de los diversos tipos de leucocitos. Ellos corresponden:
a) Polimorfonucleares (PMN) neutrófilos, eosinófilos y basófilos;
b) Mononucleares, representados por linfocitos, monocitos y plasmocitos.
Los neutrófilos maduros circulan en forma de segmentados y baciliformes. Ocasionalmente circula un
juvenil o un mielocito.
Basófilos Eosinófilos Mielocitos Juveniles Baciliformes Segmentados Linfocitos Monocitos
0-1 2-4 0 0-1 1-5 50-68 21-35 4-8
El valor de porcentaje de los leucocitos es el siguiente:
Neutrófilos: 60-70 %
Linfocitos. 25- 30%
Monocitos: 5-10%
Eosinófilos; 1-4%
Basófilos: 0.5 %
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En el recién nacido el porcentaje de neutrófilos oscila entre 45-85% y el de linfocitos 20-25%.
Posteriormente y hasta los 8 años o más se asiste a una inversión de la fórmula, estando los linfocitos
francamente elevados y con predominio sobre los granulocitos neutrófilos (niños hasta 5 años:
neutrófilos segmentados 30-40%; 5 años 40-50% para ambos, niños mayores, segmentados 50-60%,
linfocitos 20-35%).
ALTERACIONES EN LA SERIE BLANCA
Alteraciones de la serie blanca y ejemplos clínicos.
Leucocitosis. Corresponde al aumento de los leucocitos por encima de 11 x109/l. Habitualmente se
debe a un aumento de los neutrófilos, pero también puede deberse a eosinofilia, linfocitosis o
monocitosis. Cifras mayores de 25 x 109/ñ se denominan hiperleucocitosis, superior a 50 x 10 9/l y
acompañadas de células inmaduras corresponden a una reacción leucemoide o leucemia.
Leucocitosis sobre 100 x109/l generalmente son malignas. Siempre debemos verificar si estamos
frente a una leucocitosis relativa o absoluta.
Algunos ejemplos de leucocitosis fisiológica son ejercicio intenso, crisis convulsiva, adrenalina y
trastornos emocionales.
Leucopenia. Corresponde a la disminución de leucocitos por debajo de 4 x 10 9/l. Generalmente
obedece a disminución de los granulocitos neutrófilos, que si llega a menos de 0,5 x 109/l se
denomina severa.
Podemos encontrar leucopenia en enfermedad infecciosa tal como tifoidea, brucelosis, sepsis y en
cuadros bacterianos por Gram negativos, enfermedades hematológicas tales como anemia
perniciosa, cirrosis hepática, hipertensión portal y shock anafiláctico.
Basofilia y basopenia. Son cuadros raros, la basofilia se define por un recuento mayor a 0.05 x
109/l y la basopenia por menor a 0.02 x 109/l. La basofilia se relaciona con trastornos
mieloproliferativos y la basopenia puede estar asociada hipertiroidismo, síndrome de Cushing y
terapia esteroidal prolongada.
Eosinofilia. Todo aumento sobre la cifra límite de 0.45 x10 9/l se considera una eosinofilia. La antigua
práctica de referirse a los niveles de eosinófilos como porcentajes ha sido modificada por poco segura
y no informativa. Siempre deben usarse valores absolutos determinando el recuento de eosinófilos.
Un valor de eosinofilia menor a 1.5 x10 9/l se presenta en rinitis alérgicas, enfermedades parasitarias,
algunas enfermedades infecciosas, neoplasias y enfermedades dermatológicas.
Eosinofilias mayores a 1.5 x 109/l son frecuentes en: reacciones a drogas, eosinofilia pulmonar,
vasculitis, enfermedades granulomatosas, etc. Los cuadros parasitarios causan eosinofilias mayores
más que menores.
Las infecciones bacterianas y virales rara vez causan eosinofilia.
Eosinopenia. Corresponde a una disminución absoluta de eosinófilos por debajo de 0.05 x 10 9/l y
ocurre después de situaciones de stress, síndrome de Cushing, administración de corticoides. Otros
ejemplos son: fiebre tifoidea, quemaduras mayores, shock eléctrico, eclampsia y parto.
La aneosinofilia se observa en períodos agudos de enfermedades infecciosas, período más grave
de enfermedades hematológicos (anemia perniciosa) y período máximo de intoxicaciones; uremia,
diabetes.
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Neutrofilia. Se refiere a una concentración periférica de neutrófilos superior a 7.5 x 10 9/l. La
desviación a izquierda, designa un aumento de las formas neutrófilas jóvenes, aumento de los
baciliformes sobre 12%. Las desviaciones a izquierda más marcadas se ven en la fiebre tifoidea,
sepsis graves, gripe y enfermedades exantemáticas por virus.
En la denominada desviación a la derecha, aparecen neutrófilos con un número de segmentos mayor
que lo normal (neutrófilos hipersegmentados, polisegmentados). Se observan en las anemias
megaloblásticas y tienen el significado de alteración madurativa de por déficit de factores madurativos
(Vitamina B12 ó ácido fólico).
Granulación tóxica. Corresponde a una granulación primaria y es de tamaño muy superior al normal.
Se encuentra presente en casi todas las infecciones graves. La vacuolización citoplasmática
corresponde a vacuolas fagocíticas. Los cuerpos de Dohle son áreas basófilas circunscritas en el
citoplasma, presentes en la escarlatina, sepsis graves, quemaduras, trastornos del embarazo y uso
de ciclofosfamida.
La granulación tóxica también se observa en los síndromes mielodisplásicos
Neutropenia. Corresponde al descenso en la sangra periférica de los granulocitos neutrófilos, este
descenso puede ser leve o medianas cuando están comprendidas entre 1.5 y 3 x 109/l o severas
cuando son menores a 1.5 x109/l. La agranulocitosis son los recuentos por debajo de 0.05 x 109/l.
Linfocitosis. Es un aumento en el número absoluto de linfocitos circulantes mayor que 4.0 x 109/l en
adultos, mayor a 9.0 x 109/l en niños menores y mayor de 7.0 x 109/l en niños mayores.
Cuando se desarrolla una linfocitosis absoluta, el recuento linfocitario rara vez se eleva por encima
del rango normal. La excepción ocurre con la linfocitosis y leucocitosis que ocurre frecuentemente en
la mononucleosis infecciosa y leucemias linfocíticas entre otras. En infecciones virales aparece una
moderada linfocitosis, casi siempre relativa, con linfocitos atípicos. Las linfocitosis malignas pueden
ser relativas y absolutas.
Hay una serie de entidades que pueden cursar con linfocitos hiperbasófilos. Entre ellas debe
diferenciarse la mononucleosis infecciosa de los "síndromes mononucleósicos". Estos síndromes
habitualmente presentan menos de un 20% de linfocitos grandes hiperbasófilos.
Linfopenia. Es habitualmente relativa y por aumento de neutrófilos. La linfopenia absoluta marcada
es menor de 1.4 x 109/l en niños y menor de 1 x 109/l en los adultos y es un signo de mal pronóstico
espeiclamente en las infecciones graves. En el SIDA los hallazgos hematológicos más frecuentes son
anemias y leucopenia en base a linfopenia absoluta.
Monocitosis. Se habla de ella cuando el recuente absoluto excede 0.8 x 10 9/l. Es una alteración
frecuente, pero inespecífica. Una monocitosis absoluta superior a 1 x 109/l debe hacer sospechar un
síndrome mielodisplásico y si hay presencia de células atípicas de morfología intermedia entre
mielocitos y monocitos (células paramieloides), una leucemia mielomonocítica crónica.
Monocitopenia. Corresponde a un recuento absoluto menor de 0.2 x 109/l, y se observa en
infecciones agudas, leucemias agudas, terapia cortico esteroidal y citostáticos.
Plasmocitosis. Normalmente no se observan plasmocitos en sangre periférica, por lo tanto su
observación indica generalmente malignidad. Se presentan en mieloma múltiple, leucemia de células
plasmáticas, anemia aplástica, TBS e infecciones severas.
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Reacción leucoeritroblástica. Este término se utiliza para describir la presencia de células
inmaduras de las series mieloide y eritroide en sangre periférica, acompañadas de plaquetas gigantes
o bizarras con o sin anemia. El grado de eritroblastos circulantes es excesivo comparado con el grado
de anemia. En la mayoría de los casos, no se observa reticulocitosis.
Reacciones leucemoides. Constituyen varios síndromes caracterizados por cambios hematológicos
que semejan una leucemia. Se observan leucocitosis de 20-50 x 109/l con ocasional, moderada o
mínima inmadurez celular. La afección de otras series celulares orienta a una patología maligna.
Algunas enfermedades infecciosas que pueden simular una leucemia mieloide crónica o aguda son:
neumonía, meningitis meningocócica y TBC diseminada. Leucemia linfoide puede ser simulada por:
coqueluche y mononucleosis infecciosa.
OBSERVE Y DIBUJE CADA UNA DE LAS CÉLULAS DE LA SERIE BLANCA Y SERIE ROJA
Muestra biológica:
Observación:
Coloración:
Objetivo:
Aumento:
Muestra biológica:
Observación:
Coloración:
Objetivo:
Aumento:
Muestra biológica:
Observación:
Coloración:
Objetivo:
Aumento:
Muestra biológica:
Observación:
Coloración:
Objetivo:
Aumento:
Muestra biológica:
Observación:
Coloración:
Objetivo:
Aumento:
Muestra biológica:
Observación:
Coloración:
Objetivo:
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Aumento:
Muestra biológica:
Observación:
Coloración:
Objetivo:
Aumento:
CUESTIONARIO
1. ¿Cuáles son los mecanismos de defensa de un individuo, de 4 ejemplos en cada caso?
2. ¿Explique la defensa celular y como se origina?
3. ¿Explique que es un hemograma completo?
4. ¿Qué tipo de células se observan en un hemograma y cuál es la función de cada uno de ellas?
5. ¿Cuál es la importancia médica del hemograma y cuáles son los valores normales?
6. ¿Explique el significado de una eosinofilia, basofilia, linfopénia, trombocitopenia y en qué casos
se presenta?
7. Explique sobre: hematocrito y hemoglobina
8. ¿Qué forma tienen los glóbulos? ¿Presentan núcleo porque?
BLIOGRAFÍA UTILIZADA PAARA EL DESARROLLO DE LAS PREGUNTAS
………………………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………………………
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DETERMINACIÓN DE GRUPO SANGUÍNEO
Objetivos
• Determinar los grupos sanguíneos y el factor Rh por aglutinación de los glóbulos rojos al
enfrentarlos a los antisueros.
• Establecer su tipo sanguíneo y determinar la distribución del tipo de sangre de los alumnos.
• Interpretar dicha técnica.
Material
• Solución anti-A
• Material punzante estéril.
• Solución anti-B
• Algodón
• Solución anti-D (anti Rh)
• Alcohol yodado
Material biológico: sangre capilar o venosa.
Antes de realizar la práctica y el cuestionario observe los videos:
[Link]
[Link]
Fundamento
Grupo sanguíneo, es el sistema de clasificación de la sangre humana basado en los componentes
antigénicos de los glóbulos rojos. La tipificación de grupo es un requisito necesario para las
transfusiones de sangre.
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A principios del siglo XX, los médicos descubrieron que el fracaso frecuente de las transfusiones era
debido a la incompatibilidad entre la sangre del donante y la del receptor. En 1901, el patólogo
austriaco Karl Landsteiner estableció la clasificación de los grupos sanguíneos y descubrió que se
transmitían según el modelo de herencia mendeliano (en función de las leyes de Mendel).
El grupo sanguíneo ABO
El más importante de los diversos sistemas de clasificación de la sangre es el del grupo sanguíneo
ABO. Los cuatro tipos sanguíneos que se contemplan en esta clasificación son el A, el B, el AB y el O.
Las células sanguíneas del grupo A tienen el antígeno A en su superficie. Además, la sangre de este
grupo contiene anticuerpos contra el antígeno B presente en las células rojas de la sangre del grupo B.
La sangre de este último grupo (grupo B) tiene la composición inversa al grupo A.
En el suero del grupo AB no existe ninguno de los dos anticuerpos previos, pero los glóbulos rojos
contienen los antígenos A y B.
El grupo O carece de estos antígenos en los eritrocitos, pero este suero es capaz de producir
anticuerpos contra los hematíes que los contengan.
Si se transfunde sangre del grupo A a una persona del grupo B, los anticuerpos anti-A del receptor
destruirán los glóbulos rojos de la sangre transfundida. Como los eritrocitos de la sangre del grupo O
no contienen ningún antígeno en su superficie, la sangre de este grupo puede ser empleada con éxito
en cualquier receptor.
Las personas del grupo AB no producen anticuerpos, y pueden por tanto recibir transfusiones de
cualquiera de los cuatro grupos. Así, los grupos O y AB se denominan donante universal y receptor
universal respectivamente.
Factor sanguíneo Rh
Este sistema se basa en la existencia o no de diversos aglutinógenos, los factores Rh, en los glóbulos
rojos.
Es otro grupo sanguíneo de transmisión hereditaria que tiene gran importancia en obstetricia y que
también hay que tener muy en cuenta en las transfusiones sanguíneas.
Al igual que en el sistema ABO, también está implicado un antígeno que se localiza en la superficie de
los eritrocitos. El grupo Rh+ posee este antígeno en su superficie; el Rh- no lo posee y es capaz de
generar anticuerpos frente a él, por tanto, se puede desencadenar una respuesta inmune cuando se
hace una transfusión de sangre de un individuo Rh+ a uno Rh-, aunque no al contrario.
También puede aparecer respuesta inmune entre la madre y el feto: la madre Rh- se inmuniza por vía
placentaria contra los antígenos del hijo Rh+.
La inmunización resulta del paso de los glóbulos rojos fetales a la madre, y, al igual que en el caso de
las transfusiones, no ocurre cuando la madre es Rh+, de ahí su importancia en obstetricia.
La inmunidad en la madre se mantiene durante toda la vida. En posteriores embarazos, si el feto es
Rh+, se genera la denominada incompatibilidad feto - materna, de forma que los anticuerpos
maternos atraviesan la placenta y se fijan a los antígenos que portan los glóbulos rojos fetales. El
resultado es una enfermedad denominada eritroblastosis fetal o anemia hemolítica del recién nacido.
El "centro" de esta práctica se encuentra en los glóbulos rojos. Los glóbulos rojos o hematíes son
células sanguíneas, por lo tanto todos los tenemos. Sin embargo, en la membrana de los glóbulos
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rojos pueden existir unas proteínas especiales: son las glucoproteínas A y B. Así, un glóbulo rojo
puede tener proteína A, proteína B, tener ambas o no tener ninguna. De manera que un individuo
tendrá grupo sanguíneo A si sus glóbulos rojos tienen la glucoproteína A en su membrana,
siguiendo el mismo criterio para el resto de los grupos (si no existe proteína, entonces será de grupo
sanguíneo O).
Estas proteínas corresponderían a lo que denominan antígenos. Ahora bien, en el plasma sanguíneo
tenemos anticuerpos. Evidentemente, un individuo del grupo A no podrá tener anticuerpos anti-A,
pues esto no sería viable (la sangre coagularía). Así:
• Los individuos A tendrán anticuerpos anti-B
• Los individuos B tendrán anticuerpos anti-A
• Los individuos AB no tendrán anticuerpos de este tipo
• Los individuos O tienen los dos tipos de anticuerpos.
Grupo sanguíneo A B AB O
Glóbulos rojos
En la membrana Antígeno B No antígenos
Antígeno A Antígenos A y B
Anti-A y
En el plasma Anti-B Anti-A No anticuerpos
Anti-B
Grupos sanguíneos
ANTICUERPOS
A B AB O
Tipo de anticuerpos Anti-B Anti-A Ninguno Anti-A y anti-B
COMPATIBILIDAD ENTRE TRANSFUSIONES
Donante Receptor
A B AB1 O
A Sí No Sí No
B No Sí Sí No
AB No No Sí No
O2 Sí Sí Sí Sí
Sí: compatible
No: incompatible
1 Receptor universal
2 Donante universal
El factor Rh es otra proteína que existe en los glóbulos rojos de algunas personas. Su nombre viene
del mono en el que fue descubierta, el Macacco rhesus. El factor Rh positivo es un factor hereditario
dominante. Este asunto tiene especial importancia en donaciones de sangre.
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Un individuo A tiene en su plasma anticuerpos anti-B, así que no podrá recibir sangre de un individuo
B, pues estos anticuerpos provocarían la coagulación de la sangre del donante en los vasos
sanguíneos de la persona receptora.
En la siguiente tabla vemos las compatibilidades a la hora de donar y recibir sangre. Como vemos, el
grupo AB puede recibir de cualquier otro grupo y de sí mismo, así que se llama "receptor universal".
El grupo O, sin embargo, puede donar a cualquier grupo, así que se conoce como "donante
universal"
RECEPTOR
D grupo A grupo B grupo AB grupo O
O
grupo A SI NO SI NO
N
A grupo B NO SI SI NO
N
grupo AB NO NO SI NO
T
E grupo O SI SI SI SI
Observe el video:
[Link]
ESQUEMATICE LO OBSERVADO EN LA PRÁCTICA
TABLA 1 GRUPO SANGUÍNEO
TIPO DE ANTÍGENO (Ag) ANTICUERPO (Ac) Su tipo Distribución en la Porcentaje
SANGRE (grupo) clase
A A b
B B a
AB AB ----
O ---- ab
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CUESTIONARIO
1. ¿Porque al plasma sanguíneo no se le designa un tipo?
2. ¿Quién y cómo se determinó el sistema de grupo sanguíneo? ¿Además, indique como se llama
este sistema utilizado?
3. ¿Explique porque al grupo “O” se le considera donador universal?
4. ¿Explique porque al grupo “AB” se le considera receptor universal?
5. ¿Qué contienen cada uno de los de los “reactivos” del set de grupo sanguíneo?
6. ¿Qué tipos de reacciones inmunológicas conoce Ud.?
7. ¿Explique qué reacción inmunológica se dio al determinar el grupo sanguíneo?
BLIOGRAFÍA UTILIZADA PARA EL DESARROLLO DE LAS PREGUNTAS
………………………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………………………
………………………………………………………………………………………………………………………
BIBLIOGRAFÍA
1- Aquiahualt Ramos, M. Pérez Chabela, 2004. M. Manual de prácticas del laboratorio de
microbiología. 1era edición. Editorial Universidad Autónoma Metropolitana. México.
2- Botero, D., Restrepo, M. Parasitosis Humana.2013. 5ta ed. Medellín Colombia: Fondo CIB.
3- Brooks y Geo F. Microbiología Médica. 25 edición. Mc Graw Hill.
4- Centro de control y prevención de enfermedades. Bioseguridad en laboratorios de
microbiología y biomedicina. 2008. 4ta edición. Editorial: CDC.
5- Ciencias Biológicas. 2008. Manual de Microbiología General. Dpto. Microbiología.
6- Instituto Nacional de Salud. Manual de procedimientos de laboratorio para el diagnóstico de
parásitos intestinales del hombre. 2003. Serie de Normas Técnicas N° 37. Lima.
7- Instrumentación Científico Técnica. CULTIMED. Manual Básica de Microbiología.
8- Jawetz, Melnick y Adelberg. Microbiología Médica. 2010. 25 edición. Editorial el Manual
Moderno.
9- Madrid, V. Manual de Parasitología Humana. 2012. 1 ed. Chile: Universidad de Concepción;
2012.
10- Romero, A. Parasitología Humana. 2011.1era edición. Editorial: Mc Graw Hill. 2013
11- Romero, R. Microbiología y parasitología humana. 2007. 3 ed. México: Médica Panamericana.
12- Tortora G. J, 2001. Introducción a la microbiología. Editorial Acribia SA Zaragoza España
INTERNET
[Link]
[Link]
DOCENTE: Blgo. Ms. C. ANA MELVA CONTRERAS CONTRERAS ASIGNATURA: MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA HUMANA
