¿Qué es la cromatografía?
Consiste en depositar una pequeña cantidad de muestra en el extremo de una tira
de papel de filtro, que se deja evaporar, luego se introduce la tira en una cubeta
que contenga el disolvente, de manera que éste Àuya por la tira por capilaridad;
cuando el disolvente deja de ascender o ha llegado al extremo, se retira el papel y
seca.
Química 2; formación básica. Libro sonará. Lyrva Yolanda Almada Ruíz, José Alberto
Marroquín Jiménez Pp.51.
Cromatografía líquida
La técnica que es empleada con el propósito de separar los diversos componentes
de una mezcla se conoce como cromatografía HPLC (cromatografía líquida de alta
eficacia) o líquida, utilizada en análisis químicos con la cual se permite separar
mezclas, purificar y cuantificar sus componentes, así como realizar otros estudios.
Así pues, como su mismo nombre señala, funciona manipulando líquidos. Estos
consisten en una mezcla compuesta por el analito o la muestra de interés, y uno o
más solventes que actúan como la fase móvil; es decir, la que arrastra al analito
por todo el equipo del HPLC y la columna.
La fase estacionaria de la cromatografía se caracteriza por ser sílica, siendo
tratada con RMe2SiCl, mientras que la fase móvil actúa como un portador de la
muestra.
La cromatografía HPLC no se ve limitada por causa de la volatilidad o la
estabilidad térmica que tenga la muestra. Esta clase de cromatografía permite
separar macromoléculas y especies iónicas, así como materiales poliméricos,
productos naturales lábiles y una gran diversidad de otros grupos poli funcionales
que tengan alto peso molecular.
La columna cromatográfica se ubica dentro un horno que permite regularizar la
temperatura. Así, para distintas muestras se tienen temperaturas adecuadas para
conseguir separaciones de alto rendimiento, así como también se tiene un amplio
catálogo de columnas y tipo de rellenos o fases estacionarias para análisis en
específicos.
La fase móvil con el analito disuelto ingresa a la columna, y de ella eluyen primero
las moléculas que “sienten” menos afinidad por la fase estacionaria, mientras que
eluyen después las que son más retenidas por ella. Cada molécula eluida genera
una señal visualizada en el cromatograma, donde se observan los tiempos de
retención de las moléculas separadas.
Y por otro lado, la fase móvil después de pasar por el detector termina en un
recipiente de desecho.
Fase estacionaria
Sustancia que se fija a la columna o en el panel, sobre cuya superficie se separan
las sustancias.
El objetivo de la fase estacionaria es retrasar el paso de los componentes de la
muestra. Cuando los componentes pasan a través del sistema a diferentes
velocidades, estos se separan en determinados tiempos. Cada componente tiene
un tiempo de paso característico a través del sistema, llamado tiempo de
retención. La separación cromatografía se logra cuando el tiempo de retención del
analito difiere del resto de componentes de la muestra.
Fase móvil
Fase que se está moviendo en una dirección determinada. Puede ser un líquido o
gas. La fase móvil se mueve a través de una columna que lleva la muestra a
separar.
La principal diferencia entre la fase móvil y la fase estacionaria es que la fase
móvil es el disolvente que se mueve a través de la columna, mientras que la fase
estacionaria es la sustancia, que permanece fija dentro de la columna. Además, la
fase móvil puede ser líquida o gaseosa, mientras que la fase estacionaria es sólida
o líquida soportada sobre un sólido
Cromatografía de gases
La cromatografía de gases (CG) es una técnica analítica instrumental que sirve
para separar y analizar los componentes de una mezcla. También se le conoce
con el nombre de cromatografía de partición gas-líquido.
Como su nombre lo indica, emplea gases en el desarrollo de sus funciones; más
exactamente, son la fase móvil que arrastra los componentes de la mezcla.
Este gas acarreador, que en la mayoría de los casos es el helio, recorre el interior
de una columna cromatografía, mientras que al mismo tiempo terminan
separándose todos los componentes.
Otros gases acarreadores utilizados para este fin son nitrógeno, hidrógeno, argón
y metano. La selección de estos dependerá del análisis y del detector acoplado al
sistema.
La fase móvil, cuya máxima composición es la del gas acarreador, arrastra la
muestra por el interior de la columna cromatografía. La muestra líquida necesita
vaporizarse, y para garantizar esto, sus componentes deben tener presiones de
vapor altas.
Así, el gas acarreador y la muestra gaseosa, volatilizada de la mezcla líquida
original, constituyen la fase móvil. Pero, ¿cuál es la fase estacionaria?
La respuesta depende del tipo de columna con que trabaje el equipo o demande el
análisis; y de hecho, esta fase estacionaria define el tipo de CG considerado.
HORIZONTAL
Separación
En la imagen central se representa de manera simple el funcionamiento de
separación de los componentes dentro de una columna en CG.
La fase estacionaria, aunque pareciera ser las esferas anaranjadas, es en realidad
una delgada película de líquido que moja las paredes internas de la columna.
Cada molécula se disolverá o repartirá de manera distinta en dicho líquido; las que
más interaccionen con él se van quedando atrás, y las que no, avanzan con mayor
rapidez.
Consecuentemente, ocurre la separación de las moléculas, tal y como se aprecia
con los puntos coloridos. Se dice entonces que los puntos o moléculas
morados eludirán primero, mientras que los azules, saldrán de último.
Otra forma de decir lo anterior es la siguiente: la molécula que elude primero tiene
el menor tiempo de retención (TR).
Detección
Finalizada la separación tal y como se observa en la imagen, los puntos eludirán y
serán detectados. Para ello, el detector debe ser sensible a la perturbación o
cambios físicos o químicos que ocasionen estas moléculas; y tras esto,
responderá con una señal la cual se amplifica y representa a través de un
cromatograma.
Es entonces en los cromatogramas donde se pueden analizar las señales, sus
formas y alturas en función del tiempo. El ejemplo de los puntos coloridos deben
originar cuatro señales: una para las moléculas moradas, una para las verdes, otra
para las de color mostaza, y una última señal, con mayor T R, para las azuladas.
Supóngase que la columna es deficiente y no puede separar las moléculas de
color azuladas y las de color mostazas adecuadamente. ¿Qué ocurriría? En tal
caso, no se obtendrían cuatro bandas de elución, sino tres, ya que las últimas dos
se sobreponen.
Esto también puede ocurrir si la cromatografía se realiza a una temperatura
demasiado elevada. ¿Por qué? Porque a mayor temperatura, mayor será la
rapidez de migración de las moléculas gaseosas, y menor será su solubilidad; y
por lo tanto, sus interacciones con la fase estacionaria.
Bolívar, G. (2020, January 18). Cromatografía líquida de alta eficacia (HPLC): fundamento, equipo,
tipos. Retrieved March 25, 2022, from Lifeder website: [Link]
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