Biosensores y

Biomarcadores

Dra. Priyanka
 CONTENIDO

Biomarcador

▪ Clasificación de los bomarcadores

▪ Como se obtienen los valores de los biomarcadores
▪ Características de un biomarcador ideal
▪ Usos de los Biomarcadores
▪ Pronostico y selección del tratamiento
▪ Uso en Pruebas de diagnóstico previo a la Medicina Personalizada.
 CONTENIDO

Biosensores

▪ Componentes básicos del biosensor

▪ Funcionamiento del biosensor
▪ Tipos de biosensores
▪ Aplicaciones del biosensor
▪ Conclusiónes
 Biomarcador

• La detección de un biomarcador (molécula biológica específica) en la sangre,

otros fluidos corporales o tejidos es un signo de un proceso normal o anormal,
o de una condición o enfermedad.

• La detección de un biomarcador se puede utilizar para evaluar qué tan bien

responde una persona (o animal) a un tratamiento para una enfermedad o
afección.

• También se le llama marcador molecular.

National Cancer Institute - NIH

 Clasificación de los biomarcadores

Historia natural de una información.

P.e. síntomas de la enfermedad

Marcador de actividad de un
medicamento / Intervención

Marcador sustituto (o
alternativo) (*)

(*) Es una medida de efecto de un tratamiento concreto que puede

relacionarse con el resultado clínico significativo pero no necesariamente
tiene una correlación garantizada
 Tipos de Biomarcadores

Basado en el estado Basado en una Basado en otro

de la enfermedad biomolécula criterio

Marcador de Marcador de ADN, Marcador de

predicción gen imágenes

Marcador de Marcador de ARN Marcador patológico-

detección célula, hormonas, etc

Marcador de Marcador protéico, Marcador in silico

diagnóstico enzima

Marcador de Marcador
pronóstico carbohidrato
Como se obtienen los valores de los
Biomarcadores?
Electrofisiológico
(EEG, ECG)
Fisiológico
Pruebas de laboratorio
(pulso cardíaco)
Biomarcador
Coductuales
Imágenes (Tomografía,
Resonancia magnética,.. etc) (desarrollo cognitivo)

Citológicos (examen Histológicos

de Papanicolaou) (inmuno-histoquímica)
 Características de un biomarcador ideal

• Tienen una gran sensibilidad, especificidad, precisión, alto valor

predictivo

• Seguro y fácil de medir

• Rentable para el monitoreo

• Modificable con el tratamiento

• Consistente en todos los géneros y grupos étnicos

 Ensayos clínicos • Desarrollo de drogas

Detección
• Evaluación del
Evaluación de riesgos estadío.
Usos • Evaluación del grado
Diagnósticos • Selección de la
(bio-marcadores terapéuticos) terapia inicial.
• Monitoreo de
Monitoreo
enfermedades
recurrentes
Selección de terapia adicional
Evaluación del riesgo:

• Presencia real o potencial de características de riesgo específicas.

• P. ej.: Evaluación del riesgo cardiovascular: enzima fosfolipasa A2
asociada a las lipoproteínas, vitamina B6, IL-6, proteína C reactiva.

Detección de enfermedades en el paciente:

• Discrimina el estado de salud de la enfermedad asintomática.

• Por ejemplo: la mamografía para el cáncer de mama, la prueba de
Papanicolaou para el carcinoma cervical.
Clasificación, evaluación del grado y del
estadío de la enfermedad

– La clasificación del tejido de origen es el primer paso para predecir la

supervivencia y elegir la terapia, por ejemplo: tecnologías de
microarreglos de ARN, proteínas y tejidos

– Cada lugar anatómico tiene su propio sistema de clasificación histológica,

por ejemplo: evaluacion de mamografías, tomografías computarizadas (TC)
y radiografías estándar

– Estadificación : clínica + patológica, por ejemplo: radiografía, TC,

RM, examen endoscópico, biopsia y exploración quirúrgica.
 Pronóstico y selección del tratamiento

• Necesario para la selección de la quimioterapia neoadyuvante o adyuvante.

Potencial para informar de las decisiones de tratamiento y llevar la medicina
personalizada a la práctica clínica.

• Por ejemplo: la positividad de CD20 (proteína/antígeno) para

el tratamiento de los linfomas con rituximab (anticuerpo)

• Positividad de HER2/NEU (proteína/antígeno) para el tratamiento

del cáncer de mama con trastuzumab (anticuerpo)

• Translocación BCR-ABL para el tratamiento de la leucemia

mielógena crónica (LMC) con imatinib (inhibidor)
 MEDICINA PERSONALIZADA
Biomarcadores predictivos

Proyecto Genoma Humano :

- comprensión de la genética humana y la biología asociada a esta.

Los pacientes con distinta composición genética manifiestan las

enfermedades de forma diferente y responden a la medicación de
forma distinta, tanto en términos de eficacia como de seguridad.

"Población adecuada, medicamentos adecuados,

m o m e n t o adecuado, dosis adecuada, precio adecuado"
MEDICINA PERSONALIZADA Y PRUEBAS DE
DIAGNÓSTICO
• Basados en avances recientes en la investigación sobre el cáncer
enfocados en centrados en fármacos candidatos con moléculas blanco
específicas que incluyen genes mutados en las células cancerosas.

• Pruebas de diagnóstico in vitro (PDIv)- Para lograr el mayor beneficio de

este tipo de agentes terapéuticos

• El PDIv puede ser una prueba existente para un biomarcador:- calificado

por la FDA como "válido conocido"
• Por ejemplo, LDL-c (colesterol "malo"), HbA1c y CYP2C19.

• Si el biomarcador parece tener valor predictivo, pero aún no se ha

replicado o aún no es ampliamente aceptado: - es clasificado por la
FDA como "probablemente válido".
• Este enfoque exige el co-desarrollo de un PDIv adicional para
evaluar la utilización de un farmaco, un diagnóstico
complementario.

• La prueba que se utiliza para evaluar si un paciente puede

recibir un fármaco o una terapia específica. Por ejemplo, una
prueba de diagnóstico complementaria puede identificar si el
tumor de un paciente tiene un cambio genético específico o
el biomarcador hacia el que se dirige el fármaco. Esto ayuda
a determinar si el paciente debe recibir el medicamento o no.
• El codesarrollo puede darse en cualquier fase del desarrollo de
un fármaco.

• Lo ideal es que se integren en una fase temprana del programa

de desarrollo del fármaco para que los datos de los ensayos
respalden tanto la aprobación del fármaco como la de las
pruebas.

• La prueba con el biomarcador debe ser validado analíticamemte

antes de analizar muestras clínicas
 BIOSENSOR

• Un biosensor es un dispositivo de detección compuesto por una

combinación de un elemento biológico específico y un transductor.

• Un "elemento biológico específico" reconoce un analito concreto y

los cambios en la biomolécula suelen convertirse en una señal
eléctrica (que a su vez se calibra a una escala específica) mediante
un transductor.

• Detecta, registra y transmite información sobre un cambio o proceso

fisiológico.
 DEFINICIÓN ACTUAL

Sensor que integra un elemento biológico con un

transductor fisicoquímico para producir una señal
electrónica proporcional a un solo analito que se transmite
a un detector.
Ø Cualquierdispositivo que tenga reacciones bioquímicas
específicas para detectar compuestos químicos en
muestras biológicas.

PADRE DEL BIOSENSOR.

Profesor Leland C Clark Jnr
(1918–2005)
 BIO-ELEMENTO

▪ Es un sistema químico típicamente complejo que suele extraerse

o derivarse directamente de un organismo biológico.

Tipos :

• Enzimas • Tejido
• Anticuerpos • Ácido nucleico
• Oxidasa
• Polisacárido
 BIO-ELEMENTO

▪ Función :-
Interactuar específicamente con un compuesto objetivo, es decir, con
el compuesto que debe detectarse.

▪ Debe ser capaz de detectar la presencia de un compuesto objetivo

en la solución de prueba..

▪ La capacidad de un bioelemento para interactuar específicamente con

el compuesto objetivo (especificidad) es la base del biosensor.
 RESPUESTA DEL BIOELEMENTO

■ Calor absorbido (o liberado) durante la interacción.

■ Movimiento de electrones producido en una reacción

redox.

■ Luz absorbida (o liberada) durante la interacción.

■ Efecto debido a la masa de reactivos o productos.

 TRANSDUCTOR

Función :
Convertir la respuesta biológica en una señal eléctrica.

Tipos :

• Electroquímico
• Óptico
• Piezoeléctrico
COMPONENTES

Detector
ELEMENTOS DE LOS BIOSENSORES
 BIOSENSOR.

Analito
Respuest
a

Señal de Manipulación/prepar
Análisis
detección ación de muestras
FUNCIONAMIENTO DEL BIOSENSOR

Figura:- Diagrama esquemático de un Biosensor

 EL ANALITO
(¿Qué quiere detectar?)

Molécula
Proteínas, toxinas, péptidos, vitaminas, azúcares, iones metálico

Toxina del cólera Glucosa

MANIPULACIÓN DE MUESTRAS.
(¿Cómo llevar el analito a la región sensible?)

• (Micro) fluidos
• Concentración (aumento/disminución)
• Filtración/selección
DETECCIÓN/RECONOCIMIENTO.
(¿Cómo se reconoce específicamente el analito?)

Fab

Sitio Receptores de
activo membrana Vinculación
competitiva

Fc

Anticuerpo Enzima Celda Polímero/Hidrogel

 SEÑAL
(¿Cómo sabemos que hubo una detección?)

¿Reconocimiento Tipos de señales comunes

específico?
Óptica(SPR,ELM,IR).
Eléctricos (voltametría, potenciometría,
conductividad).
Electromecánica (QCM).
Térmico.
Magnético.
Presión.

A menudo, el detector se inmoviliza en un soporte/sensor sólido. (La inmovilización

permite la reutilización de los costosos sensores biológicos).
 PRINCIPIO DE FUNCIONAMIENTO

• El analito se difunde desde la solución hasta la superficie

del biosensor.
• El analito reacciona específica y eficazmente con el
componente biológico del biosensor.
• Esta reacción modifica las propiedades fisicoquímicas
de la superficie del transductor.
• Esto provoca un cambio en las propiedades
ópticas/electrónicas de la superficie del transductor.
• El cambio en las propiedades ópticas/electrónicas se
mide/convierte en señal eléctrica, que se detecta.
 CARACTERÍSTICAS BÁSICAS

• LINEARIDAD - Debe ser alta - Para la detección de alta

concentración de sustrato.

• SENSIBILIDAD - Valor de la respuesta del electrodo por

concentración de sustrato.

• SELECTIVIDAD - La interferencia química debe ser minimizada

para obtener un resultado correcto.

• TIEMPO DE RESPUESTA - Tiempo necesario para tener el

95% de la respuesta.
 VENTAJAS

• Muy específico.
• Independiente de factores como la agitación, el pH, etc.
• Respuesta lineal, diminuta y biocompatible.
• Fácil de usar, duradero.

• Requiere sólo un pequeño volumen de muestra.

• Rápido, preciso, estable y esterilizable.

 TÉCNICAS TÍPICAS DE DETECCIÓN

● Fluorescencia.
● Microarray de ADN.
● SPR (Resonancia de Plasmón de Superficie).
● Espectroscopia de impedancia.
● SPM (Microscopía de Sonda de Barrido, AFM, STM).
● QCM (microbalanza de cristal de cuarzo).
● SERS (Espectroscopia Raman de superficie).
● Electroquímica.
 TIPOS DE BIOSENSORES

Ø Biosensores de detección calorimétrica/térmica.

Ø Biosensores ópticos.
Ø Biosensores resonantes.
Ø Biosensores piezoeléctricos.
Ø Biosensores sensibles a los iones.
Ø Biosensores electroquímicos.
§ Sensores conductimétricos.
§ Sensores amperométricos
§ Sensores potenciométricos
 BIOSENSORES ELECTROQUÍMICOS

▪ Principio
Muchas reacciones químicas producen o consumen iones o
electrones que, a su vez, provocan algún cambio en las propiedades
eléctricas de la solución que puede detectarse y utilizarse como
parámetro de medición.

▪ Clasificación
(1) Biosensores amperométricos
(2) Biosensores conductimétricos
(3) Biosensores potenciométricos
 BIOSENSORES AMPEROMÉTRICOS

▪ Este biosensor de alta sensibilidad puede detectar las especies

electroactivas presentes en las muestras biológicas de ensayo.

▪ El parámetro medido es la corriente.

▪ Dado que las muestras biológicas de ensayo pueden no ser

intrínsecamente electroactivas, se necesitan enzimas para catalizar
la producción de especies electroactivas.
 BIOSENSORES CONDUCTIMÉTRICOS

■ El parámetro medido es la conductancia/resistencia eléctrica de

la solución.

■ Cuando las reacciones electroquímicas producen iones o

electrones, la conductividad o resistividad global de la solución
cambia. Este cambio se mide y se calibra en una escala adecuada
(las mediciones de conductividad tienen una sensibilidad
relativamente baja).

■ Usualmente el campo eléctrico se genera utilizando una tensión

sinusoidal (AC) que ayuda a minimizar los efectos indeseables
como la polarización por concentración de la muestra.
 BIOSENSORES POTENCIOMÉTRICOS

• En este tipo de sensor el parámetro medido es el potencial de

oxidación o reducción de una reacción electroquímica.

• El principio de funcionamiento se basa en el hecho de que

cuando se aplica una tensión de rampa a un electrodo en solución,
se produce un flujo de corriente debido a las reacciones
electroquímicas.

• La tensión a la que se producen estas reacciones indica

una reacción particular y una especie particular.
 BIOSENSORES DE DETECCIÓN ÓPTICA
• La señal transducida de salida que se mide es la luz para este tipo de
biosensor.

• El biosensor se puede fabricar basándose en la difracción óptica. En los

dispositivos basados en la difracción óptica, se recubre una oblea de
silicio con una proteína mediante enlaces covalentes. La oblea se
expone a la luz ultravioleta a través de una fotomáscara y los
anticuerpos se vuelven inactivos en las regiones expuestas.

• Cuando los trozos de oblea se incuban en un analito, se forman enlaces

antígeno- anticuerpo en las regiones activas, creando así una rejilla de
difracción. Esta rejilla produce una señal de difracción cuando se
ilumina con una fuente de luz como el láser.
 BIOSENSORES DE DETECCIÓN TÉRMICA

■ Este tipo de biosensores funcionan sobre las propiedades fundamentales

de las reacciones biológicas, sobre la absorción o producción de calor,
que a su vez modifica la temperatura del medio en el que se produce la
reacción.
■ Se construyen combinando moléculas enzimáticas inmovilizadas con
sensores de temperatura.

■ Cuando el analito entra en contacto con la enzima, se mide la reacción

térmica de la enzima y se calibra con la concentración de analito.

■ El calor total producido o absorbido es proporcional a la entalpía molar

y al número total de moléculas en la reacción.
 BIOSENSORES RESONANTES

• Utiliza cristales que sufren una deformación elástica cuando se les aplica
un potencial eléctrico (el potencial alterno (C.A.) produce una onda
estacionaria en el cristal a una frecuencia característica).

• En este tipo de biosensor, un transductor de ondas acústicas se

acopla a un anticuerpo (bioelemento).

• Cuando la molécula de analito (o antígeno) se adhiere a la membrana, la

masa de ésta cambia. El cambio de masa resultante modifica la
frecuencia de resonancia del transductor, la cual se mide.
 BIOSENSORES SENSIBLES A LOS IONES

• Se trata de transistor de efecto de campo (semiconductor FET) con

una superficie sensible a los iones.

• El potencial eléctrico de la superficie cambia cuando los iones y el

semiconductor interactúan. (Este cambio de potencial puede medirse
posteriormente).

• El transistor de efecto de campo sensible a los iones (ISFET) puede

construirse cubriendo el electrodo del sensor con una capa de polímero.
Esta capa de polímero es selectivamente permeable a los iones del analito.
Los iones se difunden a través de la capa de polímero y, a su vez, provocan
un cambio en el potencial de la superficie del FET.

• Este tipo de biosensor también se denomina ENFET

 BIOSENSORES DE GLUCOSA

§ La glucosa reacciona con la glucosa

oxidasa (GOD) para formar
gluconolactona y H2O2. Finalmente se
producen electrones.
 APLICACIONES DE LOS BIOSENSORES

▪ En la industria alimentaria, los biosensores se utilizan para

controlar la frescura de los alimentos.

▪ Descubrimiento de fármacos y evaluación de la actividad

biológica de nuevos compuestos.

▪ Los biosensores potenciométricos están destinados principalmente a

controlar los niveles de dióxido de carbono, amoníaco y otros gases
disueltos en la sangre y otros líquidos.

▪ Aplicaciones medioambientales, por ejemplo, la detección de

plaguicidas y contaminantes del agua de los ríos.
 APLICACIONES DE LOS BIOSENSORES

▪ Control de la glucosa en pacientes con diabetes.

▪ Medición analítica de ácido fólico, biotina, vitamina B12 y ácido

pantoténico.

▪ Los biosensores de base enzimática se utilizan para el control

continuo de compuestos como el metanol, el acetonitrilo y los fenoles
en las corrientes de proceso, los efluentes y las aguas subterráneas.
APLICACIONES
 OTRAS APLICACIONES

• Análisis de alimentos.
• Estudio de las biomoléculas y su interacción.
• Desarrollo de fármacos.
• Detección de delitos.
• Diagnóstico médico (Clin&Lab).
• Monitoreo Ambiental de Campo.
• Control de calidad.
• Control de procesos industriales.
• Sistemas de detección de agentes de guerra biológica.
 BIOSENSOR PARA LA INDUSTRIA
AGRÍCOLA Y ALIMENTARIA.
• Detección de enfermedades víricas, fúngicas y bacterianas de las
plantas.
• En la industria alimentaria, detección de microbios totales y
cuantificación de alimentos en bebidas no alcohólicas.
• Determinación la frescura de otros pescados, carnes y otros
alimentos.
El instrumento de Glucómetro:
detección de ADN para para medir la
las enfermedades glucosa en
hereditarias sangre.
Prueba de Embarazo Biosensor de enfermedades
• Detecta la proteina hCG en la orina. • La interpretación de datos e interpretación
• Interpretación y análisis de los datos por es realizado por un microprocesador.
parte del usuario.
Plataforma de Biosensores Biacore

General y flexible, buena herramienta para el

desarrollo de biosensores específicos.
BIOSENSOR PARA LA DETECCIÓN DE LA
CONTAMINACIÓN Y DE LAS SUSTANCIAS
QUÍMICAS PRESENTES EN EL MEDIO
AMBIENTE.
DESARROLLO DE BIOSENSORES EN PERÚ
DESARROLLO DE BIOSENSORES EN PERÚ
 CONCLUSIÓN

• Los biosensores pueden servir esencialmente como dispositivos

de bajo costo y gran eficacia para detectar diferentes compuestos
en el medio ambiente, alimentos, etc.

• Los biosensores se conocen como: inmunosensores, optrodos, canarios

químicos, espejos resonantes, glucómetros biochips, bioordenadores,
etc.