Protocolo para diagnóstico de salmonelosis en cuyes
Resumen
El objetivo del presente trabajo es detallar el procedimiento a seguir para
diagnosticar, utilizando distintos métodos microbiológicos, salmonelosis en
cuyes en el Laboratorio de Bacteriología de la Facultad de Medicina Veterinaria
de la Universidad Nacional Mayor de San Marcos.
Antecedentes
La Salmonella es un bacilo gram negativo anaerobio facultativo no esporulado
que pertenece a la familia Enterobacteriaceae (Collins, s.f.).
El principal agente causante de salmonelosis en cuyes es Salmonella
typhimurium. Asimismo, la vía principal de contaminación es oral, a través de la
ingesta de forraje o agua infectada (Solorzano, 2014).
Estas bacterias suelen ocasionar un proceso séptico debido a que se
diseminan en varios tejidos después de infectar el tracto intestinal, hígado y
bazo. De estos órganos, el hígado es el que presenta lesiones
anatomopatológicas más notorias (Layme A et al., 2011)
Salmonella typhimurium es causa de infecciones agudas. Entre sus síntomas
se pueden presentar debilidad intensa, temperatura elevada, diarrea grave
(Carter G, 1985).
Materiales y Métodos
● Procedencia de la muestra
El espécimen fue proporcionado por el Laboratorio de Bacteriología de la
Facultad de Medicina Veterinaria de la Universidad Nacional Mayor de
San Marcos, se presume salmonelosis.
● Animal de estudio
El cuy es un animal susceptible a infecciones microbianas usualmente
debido a factores externos como alimentos infectados, humedad, cambio
de temperatura, falta de higiene de las instalaciones, etc (Chauca,
1997).
Se sigue el protocolo de necropsia, se registran los datos de
identificación, historia clínica, se realiza una evaluación externa y se
procede a la evaluación interna.
● Necropsia
Se procede a incidir sobre la línea media hasta la sínfisis pélvica, se
disecciona la piel hacia el dorso, se abre la cavidad torácica y
abdominal. A continuación se realiza el reconocimiento de los órganos.
Se espera reconocer el hígado agrandado con presencia de zonas
necróticas, el bazo con mayor tamaño y focos purulentos. El tracto
intestinal congestionado y hemorrágico (Chauca, 1997).
● Toma de muestra
En el laboratorio de necropsia de la Facultad de Medicina Veterinaria de
la Facultad de Medicina Veterinaria de la Universidad Nacional Mayor de
San Marcos se realizará el reconocimiento del espécimen. La muestra
se tomará de una parte del intestino delgado seccionado con una hoja
de bisturí. A continuación se limpiara la serosa con suero estéril.
Después con un hisopo estéril se frotara la parénquima y se colocará la
muestra en un tubo Stuart y se remitirá al laboratorio para realizar el
cultivo.
● Aislamiento e identificación bacteriana
Según Merchant y Parker (1980) “Las Salmonellas son bacilos no
esporulados, Gram negativos, estrechamente relacionados morfológica y
fisiológicamente con los otros géneros de Enterobacteriaceae.
Generalmente son móviles, aunque existen especies inmóviles.
Producen ácido y gas de la glucosa, maltosa, manitol y sorbitol. No
fermentan la lactosa, sacarosa ni salicina. No forman indol ni coagulan la
leche ni licuan la gelatina.” Estas características nos permite escoger el
medio de cultivo más adecuado para el crecimiento de colonias de
Salmonella.
Pre enriquecimiento
Permite que las muestras con escaso numero de bacterias se
multipliquen.
● Agua Peptonada
Enriquecimiento selectivo
Debido a que en el tracto intestinal existe una gran variedad de bacterias
es necesario escoger un medio de cultivo que permita el desarrollo de
salmonella. Entre la literatura revisada se encontró que el caldo selenito
y el caldo tetrationato son los más utilizados para el crecimiento de
salmonella (Merchant y Parker, 1980; Carter, 1985).
Caldo Tetrationato
En el caldo tetrationato la mayoría de coliformes no crecen pero las
salmonellas si, esto se debe a que estas bacterias poseen tetrationato
reductasa. Asimismo, las sales biliares afectan la mayoría de bacterias
gram positivas y algunas gram negativas. Según Merchant y Parker
(1980) este caldo es un medio de enriquecimiento para aislamiento de
salmonella de heces y contenido intestinal.
Peptona proteosa (5gr)
Bacto-sales biliares (1 gr)
Carbonato cálcico (10 gr)
Tiosulfato sódico (30 gr)
Agua destilada (1000 ml)
Para su preparación se disuelven todos los ingredientes en agua
destilada caliente. Se enfría a 45°C. Se agrega 20 ml de solución
yodurada y se distribuye en tubos estériles de 10 ml. Merchant y Parker
(1980)
Solución yodurada
Yodo (6 g)
Yoduro de potasio (5 g)
Agua (20 ml)
El contenido del hisopo se siembra en el tubo de 10 ml con caldo
tetrationato por 18 a 24 horas a 37°C. Luego el CT se repica en placas
diferenciales para la selección e identificación definitiva.
Se recomienda el cultivo en agar Mac Conkey, agar verde brillante o
agar SS. (Carter, 1985)
Caldo Rappaport Vassilladis
24 horas a 37°
Medios selectivo en placas
En la identificación bacteriana es necesario diferenciar la Salmonella (colonia
sospechosa) de otras bacterias. Los medios de cultivo presenta sustancias
inhibitorias que permiten seleccionar microorganismos deteniendo el desarrollo
de otros. Las sustancias inhibitorias pueden ser antibióticos, sales biliares o
desoxicolato dependiendo del medio de cultivo.
Los medios de cultivo más empleados para la identificación de Salmonella el
agar MacConkey, agar entérico Hektoen, agar Salmonella-Shigella y el agar
verde brillante.
Cultivos selectivos
● Agar MacConkey
Este medio sirve para la identificación de bacilos Gram negativos, aerobios y
anaerobios facultativos como la Salmonella utilizando sales biliares y cristal
violeta que inhiben las bacterias Gram Positivas. Se logra identificar las
bacterias Gram Negativas fermentadoras de lactosa que se tiñen de rojo y las
no fermentadoras de lactosa que son incoloras.
Cultivos selectivos y diferenciales
● Agar entérico de Hektoen
Este medio es considerado medianamente selectivo y se usa para el
aislamiento de bacterias intestinales patógenas como la Salmonella spp. y
Shigella spp. En este medio de cultivo se usa la proteasa peptona y extracto de
levadura que brindan los nutrientes para el desarrollo de la bacteria y que
compensan los efectos de las sales biliares que causan la inhibición del
desarrollo de la flora bacteriana Gram Positiva, reduciendo también el
crecimiento de algunos microorganismos Gram negativos y manifestando
escasa inhibición en las dos bacterias Gram Negativas mencionadas
anteriormente.
Se incluyen lactosa, sacarosa y salicina para una realizar la diferenciación
según el color de las colonias.
La Salmonella y la Shigella no fermentan estos compuestos de carbono y, por
tanto, no ocasionan un cambio de color en el sistema indicador del pH,
mientras que las bacterias que fermentan uno o más compuestos hasta
convertirlos en ácidos, causan un cambio de color a amarillo o anaranjado. El
citrato férrico de amonio y el tiosulfato sódico del medio permite detectar la
producción de sulfuro de hidrógeno por la Salmonella. El sistema indicador del
pH consta de fucsina ácida y azul de bromotimol.
● Agar Salmonella-Shigella (SS)
Es un medio altamente selectivo donde la diferenciación de los organismos se
logra mediante la incorporación de lactosa en el medio. Las bacterias
fermentadoras de lactosa se muestran de color rojo. Los organismos no
fermentadores de lactosa forman colonias incoloras. Este último grupo incluye
la mayoría de los patógenos intestinales, incluidas Salmonella y Shigella.
El tiosulfato sódico y el citrato férrico permiten la detección de las bacterias que
producen ácido sulfhídrico, como la Salmonella sp, que desarrolla colonias
translúcidas con centro negro, debido a este ácido. En el caso de las colonias
de Shigella se muestran planas, incoloras y sin ennegrecimiento.
● Agar verde brillante
Es un medio altamente selectivo porque es bastante inhóspito para la mayoría
de bacterias, permitiendo así el desarrollo de la Salmonella. Este crecimiento
también depende las pluripeptonas y extracto de levadura usados como fuente
de nitrógeno, vitaminas y minerales.
Permite identificar la Salmonella sp. A excepción de la S. typhi y parathyphi. Se
utiliza la lactosa y sacarosa para identificar las bacterias que fermentan o no
estos hidratos de carbono, si hay fermentación de estos azúcares la colonia se
forma de color amarillenta verdosa, pero si las colonias no fermentan como la
Salmonella la colonia crece de un color rosado.
El verde brillante es la sustancia inhibidora que impide el desarrollo de las
bacterias Gram positivas y un gran número de microorganismos Gram
negativos, mientras que el cloruro de sodio brinda estabilidad al medio y el rojo
fenol es el indicador de pH.
Si se desea aislar la S. typhi y parathyphi se deben usar otros medios, como el
agar XLD.
Pruebas bioquímicas
TSI
LIA
Urea
Citrato
ONPG
Referencia bibliográficas
Collins C. 1964. Métodos Microbiológicos. En: Enterobacterias. 6ª ed. España:
Editorial Zaragoza. p 205-221.
Carter G. 1985. Bacteriologia y Micologia Veterinaria: Aspectos Esenciales. En:
Enterobacteriaceae. México: Editorial El Manual Moderno. p 180- 189
Merchant I, Packer R. 1980. Bacteriologia y Virologia Veterinarias. En: Género
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Chauca L. 1997. Producción de cuyes (Cavia porcellus). En: Sanidad en
cuyes. Peru: Organización de la Naciones Unidas para la Agricultura y la
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Sanidad. 1ª ed. Peru: Editorial Macro. p 114-122.
Layme A, Perales R, Chavera A, Gavidia C, Calle S. 2011. Lesiones
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Marcos. p 30-35.
[Link]
pdf
Departamento de Laboratorio Clínico Hospital de Clínicas. 2004. Manual de
toma de muestras para estudio bacteriológico, parasitológico y micológico.
Uruguay. 69 p
