ELISA directo e indirecto
¿Qué es el ELISA directo?
ELISA es una prueba de diagnóstico de enfermedad realizada para identificar la
presencia de antígenos o anticuerpos particulares en la sangre. Se realiza como un
ensayo en placa. Utiliza anticuerpos vinculados con enzimas fáciles de analizar. La
presencia de antígenos en la muestra de suero se une con anticuerpos específicos unidos
con enzimas. En el paso final, se agrega un sustrato específico para reaccionar con la
enzima. La enzima convierte el sustrato en un producto coloreado o que produce
señales. El cambio de color en el sustrato químico revela la presencia de un anticuerpo
particular en la muestra de suero. La prueba ELISA directa usa solo un anticuerpo
primario vinculado a la enzima. Al unirse al antígeno, cambia rápidamente el color, lo
que indica la presencia del agente infeccioso en la sangre. Sin embargo, la intensidad de
las señales es más débil en ELISA directo ya que los epítopos (determinante) se limitan
a la unión de los antígenos. Por lo tanto, el ELISA directo es menos sensible en
comparación con el ELISA indirecto (OMS, 2016).
¿Qué es el ELISA indirecto?
ELISA se puede realizar usando dos tipos de anticuerpos, a saber; anticuerpo primario y
anticuerpo secundario. La herramienta ELISA indirecta usa ambos tipos de anticuerpos
para amplificar las señales para una mejor detección. La técnica indirecta de ELISA se
realiza de la siguiente manera. (Loon, et all, 2014)
Las placas se incuban con antígenos y se lavan para bloquear la unión no
específica. Luego se añaden los anticuerpos primarios y se lavan. El anticuerpo
secundario ligado a la enzima se agrega y se lava. Se agrega un sustrato y se deja
reaccionar con enzimas. Se detectan señales y se identifica la presencia o
ausencia del antígeno específico en la muestra. (Loon, et all, 2014)
En la prueba ELISA indirecta, varios anticuerpos secundarios pueden unirse a un solo
anticuerpo primario. Los anticuerpos secundarios están vinculados con enzimas fáciles
de analizar. Por lo tanto, una unión puede hacer una señal fuerte debido a más de una
interacción. Por lo tanto, el ELISA indirecto es más sensible que el ELISA directo. Sin
embargo, el ELISA indirecto puede generar señales inespecíficas debido a reacciones
cruzadas de los anticuerpos secundarios. (Loon, et all, 2014)
ELISA DIRECTO INDIRECTO
SENSIBILIDAD es menos sensible es más sensible.
TIEMPO TOMADO es un proceso rápido. lleva mucho tiempo.
USO ANTICUERPOS Solo se usa un tipo de se usan los
anticuerpos anticuerpos primarios
(anticuerpos y secundarios
primarios)
ENLACE CON Los anticuerpos Los anticuerpos
ENZIMAS primarios están secundarios están
vinculados con unidos con enzimas.
enzimas.
REACTIVIDAD elimina la reactividad se ve afectado por la
CRUZADA DE cruzada de los reactividad cruzada
SEGUNDOS segundos anticuerpos. de segundos
ANTICUERPOS anticuerpos.
SEÑALES Las señales son Las señales se
débiles amplifican por lo
tanto es fácil detectar.
REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS
Organización Mundial de la Salud (2016). El ensayo inmunoabsorbente ligado a
enzimas (ELISA). Boletín de la OMS. Biblioteca Nacional de Medicina de EE.
UU.
Loon, A. M van, J. T Van Der Logt, FW Heessen y J. Van Der Veen (2014). Ensayo de
inmunosorbente ligado a enzima que utiliza antígeno marcado para la detección
de anticuerpos de inmunoglobulina M y A en toxoplasmosis: comparación con
inmunofluorescencia indirecta y ensayo de inmunosorbente ligado a enzima
doble Sadwich. Revista de Microbiología Clínica. Biblioteca Nacional de
Medicina de EE. UU.
