DESARROLLO DE LA Escherichia coli EN MEDIO LIQUIDO

OBJETIVO GENERAL

OBJETIVO ESPECIFICO

MARCO TEORICO

MEDIOS DE CULTIVO
Los microorganismos por lo general pueden vivir y multiplicarse sobre substratos
nutritivos preparados en el laboratorio, denominados medios de cultivo. Los Medios de
Cultivo son preparados estériles que contienen sustancias necesarias para el desarrollo
de los microorganismos.
Todos los microorganismos requieren agua, carbono, nitrógeno, hidrógeno, calcio,
fósforo y hierro como elementos vitales. Los microorganismos exigentes requieren
además factores de crecimiento como aminoácidos, vitaminas, purinas y otras sustancias
que no son capaces de sintetizar.
CONDICIONES DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
[Link] sustancias nutritivas necesarias para el desarrollo de los microorganismos
(tales como aminoácidos, carbohidratos, polialcoholes, vitaminas, minerales).
[Link] un pH que permita un desarrollo óptimo, por lo general las bacterias patógenos
necesitan un pH neutro o ligeramente alcalino (7.0 – 7.4), en cambio las levaduras y
hongos requieren un pH ácido (5.0).
[Link] previamente esterilizados o preparados en condiciones asépticas.
[Link] protegidos de la contaminación ambiental por tapones de algodón cardé, tapones
de goma, tapas metálicas o roscas.

UTILIDAD DE LOS MEDIOS DE CULTIVO

[Link] de bacterias desde una muestra o material patógeno (secreción purulenta,
orina, órgano, fecas, etc.) o de un alimento (leche, carne, etc.)
[Link] morfológico de las colonias.
[Link]ón de cepas identificadas (colección de cepas microbianas o cepario).
[Link]ón y tipificación de bacterias por estudio de sus propiedades bioquímicas en
medios diferenciales.
[Link]ón de toxinas o investigación de sus características.
[Link] y cosecha de bacterias para la elaboración de productos biológicos (vacunas,
antígenos, bacterinas, toxoides, etc.).

CLASIFICACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO:

SEGÚN SU ESTADO FÍSICO
1. Medios Líquidos: se utilizan preferentemente para favorecer el desarrollo bacteriano
de células estresadas. En determinadas ocasiones no se pueden sustituir por los medios
sólidos, por ejemplo en la síntesis de exotoxinas, pigmentos, enzimas, etc. - Ejemplo:
Agua peptonada, Caldo común, Caldo Cerebro Corazón, Caldo Saboureaud, etc.
2. Medios Sólidos: se utilizan para obtener bacterias aisladas por la formación de
colonias sobre la superficie del medio de cultivo y para el estudio de la morfología de
las colonias, lo que no permiten los medios líquidos. Se diferencian porque tienen una
sustancia de sostén, que puede ser agar-agar. - Ejemplo: Agar Común, Agar SS, Agar
Cerebro Corazón, Agar Saboureaud, etc.
3. Medios Semisólidos: se utilizan para estudiar la motilidad de las bacterias. Tienen un
menor porcentaje de agar, por lo que no solidifican totalmente a la temperatura
ambiente. - Ejemplo: Agar MIO, Agar SIM.
Los medios sólidos tienen generalmente agar–agar como agente solidificante, espesante
o gelificante. El agar-agar es una sustancia hidrofílica de carácter coloidal procedente de
diversas especies de algas marinas, especialmente del géneroGelidium, que tiene la
propiedad de formar un gel. Químicamente el agar-agar es un polisacárido de cadena
larga, dependiendo de su tamaño el poder gelificante.
agua fría, se disuelve solamente a temperatura de ebullición, se mantiene en forma
viscosa a 60–80 °C y solidifica en forma de un gel estable a 40–45 °C. Resiste
perfectamente la esterilización a 121 °C y por su capacidad de retener agua no se
deshidrata fácilmente, lo que permite almacenar los medios por un largo período de
tiempo a 5 °C.
La gelatina no puede reemplazar al agar en la preparación de medios sólidos, ya que
descompuesta por muchos tipos de bacterias. Se añade a los medios de cultivo para
estudiar si las bacterias son capaces de degradarla (presencia de enzimas gelatinasas).

SEGÚN SU UTILIDAD PRACTICA

1. Medios corrientes, comunes o básicos 2. Medios especiales - Medios mejorados -
Medios selectivos o de diagnóstico - Medios diferenciales o indicadores
1. MEDIOS CORRIENTES: son aquellos medios apropiados para el cultivo y
mantención de la mayoría de las bacterias. Sirven de base para la preparación de los
medios especiales. - Ejemplo: Caldo común, Agua peptonada, Agar nutritivo, etc.
2. MEDIOS ESPECIALES: son aquellos medios de cultivo que por su riqueza nutritiva,
sirven para el cultivo de bacterias muy exigentes. Contienen en su formulación
sustancias inhibidoras para ciertas bacterias, que permiten el aislamiento y diagnóstico
precoz de aquellas bacterias que nos interesan por ser los agentes etiológicos de las
enfermedades infecciosas. También pertenecen a este grupo aquellos medios que por
adicción de sustancias químicas determinadas, facilitan el diagnóstico por características
bioquímicas de algunas especies microbianas.
Los medios especiales se clasifican en:
2.1. Medios Mejorados: se obtienen añadiendo a los medios corrientes sustancias de
mayor valor nutritivo, que tienen el efecto de proporcionar condiciones favorables para
el cultivo de bacterias exigentes (Ej. Estreptococos, Corynebacterium).
Las sustancias añadidas pueden ser: sangre desfibrinada (conejo, cordero o caballo),
suero sanguíneo (equino), suero fetal bovino, huevo, cerebro, corazón, trozos o extracto
de hígado, carne o levadura, etc.
La mayoría de estas sustancias por ser proteicas coagulan con el calor, lo cual impide
que sean esterilizadas en autoclave. Deben por lo tanto ser esterilizadas por filtración o
ser agregadas a los medios previamente esterilizados, en condiciones de rigurosa
asepsia. Ejemplo: Agar Sangre, Agar Cerebro Corazón, etc.
2.2 Medios Selectivos: generalmente el microorganismo patógeno causante del cuadro
infeccioso que se desea aislar a partir de la muestra, no se encuentra puro sino que
convive con otras especies sin interés diagnóstico. Así por ejemplo es frecuente que las
fecas, orina, exudados, alimentos, agua, etc. estén altamente contaminadas con bacterias
saprófitas que por su desarrollo exuberante en los medios de cultivo corrientes, inhiben
el crecimiento o enmascaran la presencia del agente patógeno buscado.
Los medios selectivos se caracterizan por estimular el desarrollo de ciertas especies
bacterianas y a la vez inhibir el desarrollo de otras especies, lo que permite es
aislamiento y diagnóstico de las bacterias con facilidad y rapidez. Estas características
se obtienen por la adición de sustancias tales como colorantes de anilinas, sales biliares,
antibióticos, etc. Ejemplo: Agar Brucella, Caldo Selenito Cistina, etc.

2.3 Medios Indicadores o Diferenciales: son medios comunes o mejorados, con adicción
de ciertas sustancias que ponen de manifiesto determinadas propiedades bioquímicas,
inherentes a algunas especies bacterianas, como por ejemplo: producción de gas, H2S,
de ácidos, de sustancias alcalinas, acción proteolítica, acción lipolítica, etc.
Estas sustancias o indicadores permiten diferenciar rápidamente una especie microbiana
de otra semejante; por este motivo se denominan medios indicadores o diferenciales.
Ejemplo: Agar Baird Parker, Agar Rambach, etc.
a) El agar Mac Conckey se utiliza para el aislamiento e identificación de
Escherichiacoli. Es un medio mejorado ya que tiene Cristal Violeta y Sales Biliares que
inhiben el desarrollo bacterias Gram positivas.
b) El Caldo Tripticasa Soya es un medio corriente, ya que permite el desarrollo de una
amplia variedad de bacterias. Puede hacerse más selectivo para el desarrollo de
Staphylococcusaureus, si se le agrega un 10% de NaCl, lo que no permite el crecimiento
de otras bacterias saprófitas.
SEGÚN SU ORIGEN
1. Origen animal ( Caldo Cerebro Corazón) 2. Origen vegetal ( Caldo papa, Caldo
Levadura ) 3. Sintéticos ( Medios deshidratados )
Los medios de cultivo comerciales deshidratados son productos a los cuales se le ha
eliminado el agua y todas las interferencias de tipo químico, con un pH ajustado, que se
han controlado física, química y bacteriológicamente. Es decir es un producto
estandarizado.
COMPOSICIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO
Según la finalidad, los medios de cultivo pueden tener en su composición los siguientes
ingredientes:
1) Aminoácidos, hidrolizado de proteínas ( peptonas ) 2) Extractos 3) Productos biliados
4) Carbohidratos 5) Productos bioquímicos 6) Colorantes e indicadores
1) Productos Bioquímicos A los medios de cultivo se les agrega generalmente una
diversa variedad de sustancias bioquímicas, que pueden tener el efecto de estimular el
desarrollo bacteriano o ser agentes selectivos, como es el caso de los antibióticos.
2) Colorantes e indicadores Estas sustancias se utilizan en los medios selectivos y
diferenciales. Los colorantes actúan como agentes bacteriostáticos o como inhibidores
del crecimiento. Se utilizan principalmente: Fucsina básica, Verde brillante, Verde de
Malaquita, Cristal Violeta, Eosina, Azul de Metileno, Tionina, etc.
Los indicadores son sustancias químicas que varían de color según el pH del medio. Se
utilizan en los medios diferenciales y permiten visualizar, por cambios de color del
medio de cultivo o de las colonias, la ocurrencia de distintas reacciones bioquímicas.

Indicador Ácido Neutro Alcalino

Rojo Fenol Amarillo (6.8) Rojo Fucsia (8.4) Rojo Neutro Amarillo (6.8) Rojo Amarillo
(8.0) Rojo de Metilo Rojo fuerte (4.4) Rojo Amarillo (6.0) Azul Bromotimol Amarillo
(6.0) Verde Azul (7.7) Púrpura BC Amarillo (5.2) Azul Púrpura (6.8) Fenolftaleína
Incoloro (8.3) Rosado Fucsia (10)

La célula bacteriana es esencialmente una máquina sintética capaz de duplicarse a sí

misma, los procesos de síntesis parta el desarrollo de una célula bacteriana incluye
miles de reacciones químicas de una amplia variedad de tipos. Algunos de estas
reacciones incluyen transformaciones de energía. Otras reacciones incluyen la
biosíntesis de moléculas pequeñas.

En lo general, los microorganismos, el crecimiento continua hasta que la célula se

divide en dos nuevas células, proceso denominado fisión binaria (binario para expresar
el hecho de que de una surgen dos células). En la E colí, por ejemplo, se observa que
las células se alargan a aproximadamente el doble de la longitud de una célula promedio
y entonces se da una partición que finalmente separa la célula en dos células hijas.

A esta partición se le conoce como septo y es el resultado del crecimiento hacia adentro
de la membrana plasmática y la pared celular a partir de direcciones opuestas hasta que
las dos células hijas se separan.

Durante el ciclo de crecimiento celular todos los constituyentes de la célula aumentan

en cantidad de modo que cada una de las células hijas recibe un cromosoma completo y
suficientes copias de todas las otras moléculas, monómeras e iones inorgánicos para
existir como una célula independiente. La repetición de la molécula de DNA replicada
entre las dos células hijas depende del DNA remanente fijado a la membrana celular
durante la división.

El tiempo requerido para un ciclo de crecimiento completo en las bacterias es muy

variable y depende de diversos factores, tanto de nutrición como genéticos.

Bajo las mejores condiciones de nutrición la bacteria E coli puede completar el ciclo en
20 minutos. El control de la división celular es un proceso complejo y parece estar muy
ligado a los eventos de la replicación cromosómica. La medición de la absorbancia de
un cultivo a distintos intervalos de tiempo, la curva que relaciona estos parámetros
representa la multiplicación de la bacteria con sus distintas fases. La primera fase se
denomina fase de latencia, en la que la bacteria se adapta al medio de cultivo y el
número de células no aumenta, después de este periodo las bacterias comienzan una
fase de crecimiento exponencial, en la que la reproducción celular alcanza una
actividad máxima y el tiempo de duplicación es constante.

La fase de crecimiento se inhibe por la presencia de un factor limitante, por ello, la

velocidad de multiplicación disminuye y la población comienza un periodo de equilibrio
que se denomina fase estacionaria. Por último, si se mantiene el cultivo durante más
tiempo en esta situación, puede comenzar un proceso de muerte, en el que el número
de células disminuye fase de muerte.

La aplicación de la turbidimetria nos permite relacionar la absorbancia con el número de

células viables del cultivo.
PROCEDIMIENTO

Preparación del medio líquido LB

o Extracto de levadura 5g
o Tripteina soya caldo 30 g
o Cloruro de sodio 10 g
o Agua destilada csp 1000 ml
o Ajustar el pH a 7.0

Autoclavar a 1 atmósfera de presión y a 121 ºC

Prepare un volumen de 80 ml y distribuir en dos erlenmeyers cada uno de 40 ml.

ESQUEMA DE LA PRACTICA

CONCLUSION

BIBLIOGRAFIA