MINISTERIO EDUCACION NACIONAL
UNIVERSIDAD DE LA AMAZONIA
Nit. 891.190.346-1
Diagnóstico Microbiológico de Hongos
Objetivos:
1. Describir adecuadamente un cultivo de mohos.
2. Reconocer e identificar en el microscopio la estructura de algunos
mohos importantes en la industria de alimentos.
3. Identificar el género de un hongo basándose en sus características
macroscópicas y microscópicas.
Fundamentos:
Los hongos se caracterizan por ser: organismos eucariotas y heterótrofos.
Pueden ser unicelulares o filamentosos, macroscópicos o microscópicos.
Basándose en la apariencia macroscópica de la colonia se pueden diferenciar
dos tipos de hongos. Si producen colonias opacas, cremosas o pastosas se
denominan levaduras; si producen crecimientos aéreos, velludos,
algodonosos se llaman mohos u hongos filamentosos. Existe un tercer grupo
que se desarrolla como levaduras cuando crece a 37ºC y como hongo
filamentoso a 25ºC. Este fenómeno se denomina dimorfismo.
Las hifas son tubos que contienen núcleos y citoplasma. Pueden presentar
septos (micelio tabicado) o no (cenocítico). Los septos se desarrollan por
crecimiento centrípeto y presentan poros que conectan los distintos
segmentos de la hifa permitiendo el pasaje de núcleo y organelos. Su tamaño
varía desde 0,05-0,5mm.
Además se debe identificar la estructura de reproducción del hongo, esta
puede ser:
1. Esporangiosporas: esporas producidas endógenamente dentro de un
esporangio. A veces, como en Mucor sp., el esporangio puede
presentar una columela. La columela es una vesícula o parte central
del esporangio que es continua con el esporangióforo (hifa que genera
el esporangio)
Laboratorio de Biotecnología y control de calidad microbiológico
Email: gbiotecnologiaccm@[Link] Tel: 3002821190
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2. Conidios: formados en el conidioforo
3. Ascosporas. contenidas en un asca que se forma frecuentemente por
cariogamia (fusión) de 2 núcleos distintos. Generalmente se forman 8
aunque pueden formarse 2 o 4 esporas. Las ascas pueden estar
incluidas o no dentro de un ascocarpo.
Materiales: (por grupo de trabajo)
Materiales Cantidad
Microscopio óptico 1
Lamina 5
Laminilla 5
Aguja de disección recta 2
Cajas de Petri con agar Saboarud 4
Tubos tapa rosca con agar saboraud 4
Caja de Petri con lámina y laminilla 2
estéril
Pinza de disección sin garra 1
Pipeta estéril de 1ml 1
Pipeteador de 2 ml 1
Gradilla 1
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Insumos Cantidad
Muestra de alimento con crecimiento Mínimo 1
de hongos *
Reactivos Cantidad
Jabón líquido* 100ml
Alcohol 70% * 100 ml
(*) materiales que deben traer los estudiantes
Procedimiento experimental:
PREPARACIÓN DEL LUGAR DE TRABAJO
A partir de un alimento en visible estado de descomposición usted realizará
aislamientos y observaciones microscópicas.
CULTIVO DE MOHOS EN MEDIO SÓLIDO
1. Con aguja de disección previamente esterilizada tome una pequeña
muestra de moho y deposítela sobre la superficie del medio de cultivo
así
:
2. Repita la siembra sobre un medio inclinado servido en tubo.
3. Incube a temperatura ambiente por 5 – 7 días.
PREPARACIÓN DE COLORACION EN FRESCO PARA HONGOS
1. Tome una lamina, límpiela y márquelas con el nombre de la muestra
2. Agregue una gota de azul de lactofenol sobre la superficie de la lámina
3. Con la ayuda de un trozo de cinta adhesiva transparente, tome una
pequeña muestra de moho y deposítela sobre la gota de azul de
lactofenol con cuidado de no dejar burbujas.
4. Observe en el microscopio con el objetivo 10x y 40x. Dibuje lo
observado, trate de reconocer las hifas, si son septadas o no y la
estructura de reproducción del hongo.
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MICROCULTIVO
1. Tome una lámina estéril y coloque sobre ella un cuadro de 1x 1cm de
agar PDA. Saboaraud o agua
2. Con la ayuda de una aguja de disección previamente esterilizada tome
una muestra de moho y pique en el centro del agar
3. Cubra con laminilla estéril
4. Incube en cámara húmeda por 48 - 72 horas a temperatura ambiente
5. Tome la lámina, obsérvela en el microscopio con los objetivos 10x y
40x.
6. Dibuje lo observado
RESULTADOS
1. Realice la observación macroscópica de las colonias y describa el micelio
según:
- su situación: aéreo o profundo
- su morfología: velludo, liso, rugoso, algodonoso, etc.
- su coloración
- presencia o no de pigmentos que difundan al medio
2. Realice observaciones microscópicas del hongo evaluado
3. Con una clave para la identificación de hongos, identifique el género del
moho presente en su muestra
Taller de consulta:
PARA RESOLVER ANTES DE INGRESAR A LA PRÁCTICA
1. Defina moho
2. Defina levadura
3. ¿Qué condiciones ambientales deben tenerse en cuenta para el
cultivo de los hongos?
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Cuestionario:
PARA ENTREGAR CON EL INFORME DE LABORATORIO
1. ¿Qué medios de cultivo se usan para el cultivo de hongos, que
componentes los hacen selectivos para este tipo de microorganismos?
2. Nombre 3 hongos de interés en ingeniería de alimentos explique en
que radica su importancia, dibuje y describa sus características
microscópicas y macroscópicas.
3. Que otras técnicas se pueden usar para identificar hongos en el
laboratorio (Incluyendo levaduras)
Bibliografía
Brock. 2003. Biología de los microorganismos. Prentice Hall
MERCK. 1994. Manual de Medios de Cultivo. Alemania
Prescott, Lansing M. 1999. Microbiología. Mac Graw Hill. España
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