PRACTICA N° 8
ANÁLISIS POR ESPECTROFOTOMETRÍA ULTRAVIOLETA
ANÁLISIS DE NITRATOS EN AGUAS. (PRESENCIAL)
SELECCIÓN DE MÉTODO
La determinación de nitrato (NO3-) es difícil debido a los procedimientos
relativamente complejos que se precisan, la elevada probabilidad de que se hallen
sustancias interferentes y los rangos limitados de concentración de las diferentes
técnicas.
Una técnica con luz ultravioleta (UV) que mide la absorbancia de NO 3- a 220 nm
es adecuada para el estudio de aguas no contaminadas (con bajo contenido en
materias orgánicas).
ALMACENAMIENTO DE LAS MUESTRAS
Si se debe almacenar, consérvese a 4ºC hasta 24 horas; para períodos más
largos, añádase 2 mL de H2SO4 concentrado/ L y manténgase a 4ºC.
NOTA: Cuando se conserva una muestra con ácido, no se puede determinar NO 3-
y NO2- individualmente.
MÉTODO ESPECTROMÉTRICO ULTRAVIOLETA SELECTIVO (NO3-)
Fundamento
a) Principio: Utilizar esta técnica solamente para seleccionar muestras con bajo
contenido en materia orgánica, es decir, aguas naturales no contaminadas y
suministros de agua potable. La curva de calibrado de NO3- verifica la ley de Beer
hasta los 11 mg N/L.
La medida de la absorción UV a 220 nm hace posible la determinación rápida de
NO3-. Dado que la materia orgánica disuelta puede absorber también a 220 nm y
NO3- no lo hace a 275 nm, se puede utilizar una segunda medida a 275 nm para
corregir el valor de NO3-. Esta corrección empírica dependerá de la naturaleza y
concentración de la materia orgánica y puede variar de unas aguas a otras. En
consecuencia, este método no es recomendable cuando se precise una
corrección importante para la absorbancia de la materia orgánica, aunque puede
ser útil para controlar los niveles de NO3- en un sistema de aguas con un tipo
constante de materia orgánica. Los factores de corrección para la absorbancia de
materia orgánica se pueden establecer por el método de adiciones en
combinación con el análisis del contenido original de NO 3- por otro método. La
filtración de la muestra tiene por objeto eliminar posibles interferencias de
partículas suspendidas. La acidificación con HCl 1N sirve para impedir
interferencias por concentraciones de hidróxido o carbonato de hasta 1.000 mg
de CaCO3/L. El cloruro no afecta a la determinación.
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b) Interferencia: Interfieren la materia orgánica disuelta, los surfactantes, NO 2- y
Cr6+. Pueden interferir varios iones inorgánicos, que no se encuentran
normalmente en el agua natural, como clorito y clorato. Las sustancias inorgánicas
se pueden compensar con un análisis independiente de sus concentraciones y la
preparación de curvas de corrección individuales.
EQUIPOS Y MATERIALES
1. Espectrofotómetro UV - Visible, Shimadzu 1700.
2. Celdas de cuarzo.
3. Balanza analítica.
4. Desecador de vidrio, con agente deshidratante.
5. Pipetas volumétricas de 1, 2, 3, 5, 10, 15, 20 y 25 mL.
6. Fiolas de 50, 100, 500, 1000 mL.
Reactivos
Todos los reactivos deben ser de grado analítico.
1) Agua exenta de nitrato.
2) KNO3 p.a.
3) Cloroformo, CHCl3. (reactivo controlado), para mantener la solución patrón
de KNO3 por 6 meses.
4) HCl. (reactivo controlado)
Soluciones
1. Solución patrón primario de nitrato (100 ppm NO3-—N): Colocar en un crisol
de porcelana aproximadamente 0,3 g de KNO3 y secar en estufa a 105ºC
durante 24 horas. Retirar y enfriar en el desecador.
Pesar 0,1805 g de KNO3 disolver en agua, agregar 2 mL de CHCl3 y diluir a
250 mL en fiola, enrazar y homogenizar la solución por inversión; 1,00 mL =
100 μg NO3--N. Esta solución es estable durante 6 meses.
2. Solución patrón intermedia de nitrato (5 ppm NO3-_N): Diluir 5 mL de solución
patrón primario de nitrato (1) con agua destilada, llevar a fiola de 100 mL,
enrazar y homogenizar la solución por inversión.
3. Soluciones para la curva de calibración: Preparar soluciones de calibración en
el rango de 0,1- 0,2- 0,3- 0,4- 0,5 ppm de NO3-—N, diluyendo las alícuotas de
solución patrón 5 ppm NO3-—N, antes de enrazar a 50 mL, añadir 1 mL de
HCl 1N, homogenizar la solución por inversión.
4. Solución de ácido clorhídrico, HCl 1N: Diluir 8,3 mL de HCl conc. en agua
destilada y enrazar en fiola de 100 mL, homogenizar la solución por inversión.
5. Blanco: En una fiola de 50 mL colocar aproximadamente 45 mL de agua
redestilada, añadir 1 mL de solución de HCl 1N y luego completar el volumen
hasta el enrase, homogenizar la solución por inversión.
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TRATAMIENTO DE LA MUESTRA
PROCEDIMIENTO. (PRESENCIAL)
En una fiola de 50 mL, añadir 1 mL ó 2 mL ó 5 mL ó 10 mL, según sea el contenido
de nitrato de la muestra transparente, filtrada si fuera preciso y antes de enrazar,
añadir 1 mL de la solución de HCl 1N, mezclar bien y completar a 50 mL con agua
destilada, homogenizar la solución por inversión.
Medida espectrofotométrica: Leer la absorbancia o Transmitancia frente al blanco
reactivo en agua redestilada, ajustada a absorbancia cero.
INSTRUCCIONES PARA EL MANEJO DEL ESPECTROFOTÓMETRO UV_
VISIBLE SHIMATZU 1700.
1) Retirar la bolsa de sílice, del compartimiento de pórtaselas del
espectrofotómetro UV. visible.
2) Encender el supresor de picos, el estabilizador, el espectrofotómetro (botón
lado izquierdo), levantar la pantalla del espectrofotómetro UV. Visible, se
completa la verificación del instrumento (Inicio y Mode).
3) Encender la PC, el monitor. Presionar en el espectrofotómetro PC CONTROL
(F4) y cerrar la pantalla.
4) Ingresar al software UV PROBE, luego al modo SPECTRUM y presionar
CONNECT.
5) Ir a EDIT e introducir datos solicitados:
Wavelengh range: Start: 350, End: 190. Scan: fast. Single: simple.
Parametros instruments: Absorbancia.
No modificar: Path length: 10 nm. Slit wicht:1.0 mm fixed.
Light source: 340,8
S/R Exchange.
Click en ACEPTAR.
6) Seleccionar BASELINE (rango: 190-350nm), aparece SLEWING (esperar) y
STOP (botón rojo), NO manipular el equipo hasta que aparezca en
pantalla inferior izquierda: λ max 0,00 Abs, al activarse los íconos,
presionar START, para iniciar corrida de la línea base sobre la escala de
cero.
7) En cada compartimiento: muestra y referencia, colocar las celdas con el
Blanco (parte opaca de la celda, frente al operador) presionar AUTOZERO,
parpadea este ícono y aparece λ max - 0,00 Abs.
8) DETERMINACIÓN DE λ max NO3-: colocar en compartimiento de muestra
(adelante), la celda con patrón intermedio. Si desea cambiar límites, llevar
el cursor al gráfico, click derecho, CUSTOMIZE, LIMITS: introducir datos
necesarios, ACEPTAR. Presionar START y se inicia el barrido del
espectro, se activa STOP (rojo), no manipular el equipo, hasta que
culmine gráfico de la curva. En NEW DATA SET completar los datos y
presionar OK.
9) DETERMINAR la λ max EN LA CURVA: Presionar OPERATION, PEACK
PICK, aparece tabla, click en celda de DESCRIPTION a la altura de λ
max apropiado, anotar este valor, ir a celda de λ max apropiado, click
derecho, click en Propiedades, en PEAKS, activar Description y Down, Cerrar.
10) Ir a FILE, SAVE AS, introducir datos solicitados y Guardar.
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11) GRÁFICA DE LA CURVA DE CALIBRACIÓN: Seleccionar modo
PHOTOMETRIC. Crear método presionando M. En nueva ventana,
seleccionar parámetros del método.
Utilícese λ max obtenida en (9), luego CLOSE, FILE, SAVE AS, completar
datos y guardar.
12) Colocar en compartimiento de muestra (adelante), la celda con el Blanco.
En STANDAR TABLE (Active) registrar los valores de las disoluciones
preparadas. Ejemplo: Bk, std, 0,00, en las celdas SAMPLE; TYPE CONC.
Respectivamente, y así con cada patrón a analizar.
En SAMPLE TABLE ACTIVE, registrar datos de la(s) muestra(s), clic en celda
BK, luego en READ STD y YES ante la pregunta ¿Quiere continuar?
13) Colocar en compartimiento de muestra (adelante), la celda con el patrón 1,
clic en celda correspondiente a P1, READ STD, continuar igual con cada
patrón. Luego colocar la celda con la(s) muestra(s) en el compartimiento
correspondiente y marcar READ UNK para realizar la lectura.
14) Ir a GRAPH, introducir parámetros estadísticos, FILE, SAVE AS, guardar.
15) Presionar DISCONECT, si desea, guarde información en un USB nuevo.
16) Retirar celdas, presionar MODE (espectrofotómetro), apagar equipo,
estabilizador, monitor, supresor de picos y colocar la sílice.
CÁLCULOS
Graficar la Curva de calibración con los datos de Absorbancia vs. Concentración
NO3--N (nitrato expresado como N) del patrón. Con las absorbancias de las
muestras y la curva de calibración calcular el contenido de NO3- en la muestra en
ppm.
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