UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO
FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE QUÍMICA
BIOLÓGICA Y FISIOLOGÍA ANIMAL
CÁTEDRA DE BIOQUÍMICA AMBIENTAL
P6. - CONSUMO DE GLUCOSA EN ANAEROBIOSIS Y
AEROBIOSIS POR Saccharomyces cerevisiae.
INTRODUCCIÓN
Catabolismo: proceso orgánico
mediante el cual moléculas complejas
se simplifican a sus formas más
sencillas, liberando energía que luego
es usada para diferentes tejidos u
órganos del organismo
La energía de los alimentos se extrae en tres etapas
Grandes moléculas de alimentos se fragmentan hasta
moléculas más pequeñas.
Etapa de preparación → no se genera energía útil.
Estas numerosas moléculas Pequeñas se degradan
hasta unas pocas unidades simples (papel central en
el metabolismo).
Se genera algo de ATP (menos que en 3ra etapa).
Se produce ATP a partir de la oxidación completa del
fragmento acetilo del acetil-CoA.
CAC y FO → Vías finales comunes en la degradación
de las moléculas combustibles.
Catabolismo
Respiración Fermentación
Oxidación total de la materia Oxidación parcial de la materia orgánica
orgánica Los productos de reacción contienen todavía
Los productos de reacción no energía
contienen energía Se libera poca energía
Se libera toda la energía El aceptor final de electrones es una molécula
orgánica
Aerobia Anaerobia Alcohólica Láctica
Aceptor final Aceptor final
el O2 molécula
inorgánica
distinta del O2
ATP: es una molécula altamente energética que es sintetizada a partir del catabolismo de
moléculas como glucosa, lípidos, y rara vez proteínas. El ATP es la principal fuente de energía
para las diferentes funciones celulares como la síntesis de otras moléculas, el transporte a
través de las membranas celulares, entre muchas otras funciones.
Una reacción termodinámicamente favorable puede dirigir otra desfavorable
¿Cómo se agrupan las reacciones individuales para formar un vía específica?
1. Las reacciones individuales deben ser
específicas.
Una vía debe cumplir al
menos dos criterios:
2. El conjunto de las reacciones que forman la
vía debe ser termodinámicamente favorable.
A B+C ΔG°´= +21 KJ mol¯¹ (+5 Kcal mol¯¹)
B D ΔG°´= -34 KJ mol¯¹ (-8 Kcal mol¯¹)
A C+D ΔG°´= -13 KJ mol¯¹ (-3 Kcal mol¯¹)
Una reacción termodinámicamente desfavorable puede ser dirigida por una
termodinámicamente favorable a ella.
El ATP es la divisa universal de energía libre en los sistemas biológicos
Cuando el ATP se hidroliza → se desprende una gran cantidad de energía libre
La energía desprendida se utiliza para impulsar reacciones que
requieren un aporte de energía libre. A su vez se puede formar ATP (a
partir de ADP y Pi) cuando se oxidan las moléculas combustibles
El ciclo ATP-ADP, es la forma fundamental de intercambio
de energía en los seres vivos.
La piruvato deshidrogenasa conecta la
glicólisis con el ciclo del ácido cítrico
El CAC no genera una gran
cantidad de ATP ni incluye al
Oxígeno como reactante.
Fermentación alcohólica: proceso anaerobio realizado por algunos microorganismos que
procesan carbohidratos para producir ATP y además producen compuestos de desecho como
dióxido de carbono y etanol. Tiene un amplio empleo en la industria alimenticia, como por
ejemplo es utilizada para la elaboración de panes, vinos, cervezas etc.
Saccharomyces cerevisiae
Es un microorganismo facultativo que
emplea la respiración aerobia al igual
que la fermentación alcohólica para
metabolizar la glucosa como fuente
de energía y de carbono.
Es la especie de levaduras utilizada
por excelencia para la obtención de
etanol a nivel industrial debido a que
es un microorganismo de fácil
manipulación y recuperación
Metabolismo de Saccharomyces cerevisiae
Saccharomyces cerevisiae puede llevar a cabo
un metabolismo respiratorio o fermentativo de
acuerdo con concentración de oxígeno.
En condiciones aerobias: aumenta la biomasa
En condiciones anaeróbicas: el crecimiento
celular es lento y la producción de etanol es alta.
Por esta razón, la oxidación completa de la fuente
de carbono a CO2 y H2O presenta una producción
celular óptima, donde el oxígeno es el aceptor final
de electrones en la fosforilación oxidativa durante
la respiración.
Es así, que en concentraciones altas de oxígeno
disuelto la fermentación de azúcar a etanol es
inhibida.
Esta situación fue observada por Pasteur en 1967,
y se denomina el efecto Pasteur .
El efecto Pasteur
Cuando los cultivos anaerobios de levaduras que metabolizaban
glucosa se exponían al aire, se reducía drásticamente la tasa de
utilización de glucosa.
Se obtiene mucha más energía a partir de la oxidación completa
de la glucosa que sólo a partir de la glucólisis.
El efecto Pasteur se produce en microorganismos capaces de
realizar metabolismo fermentador y respiración aerobia
(anaerobios facultativos).
En presencia de O2 utilizan la respiración aeróbica, pero pueden
emplear la fermentación si no hay O2 libre en su medio ambiente.
Pasteur fue el primero en observar que el azúcar es convertido
en alcohol y CO2 por levaduras en ausencia de aire, y que en
presencia de aire se forma muy poco o nada de alcohol, siendo
el CO2 el principal producto final de esta reacción aeróbica. Este
efecto indica el mayor rendimiento energético de la respiración
sobre la fermentación.
Un gran número de levaduras pueden
metabolizar los azucares en aerobiosis y en
anaerobiosis.
Para un mejor rendimiento celular, se consume
menos azúcar en aerobiosis que en
anaerobiosis, o dicho de otro modo, la
aerobiosis implica una disminución del consumo
de azúcar y una disminución de la fermentación .
Esta inhibición de la fermentación por la
respiración se llama “Efecto Pasteur”.
EFECTO PASTEUR
COMPETENCIA
Piruvato descarboxilasa (fermentación) que Piruvato deshidrogenasa (respiración)
tiene una baja afinidad por el piruvato (KM = 3 que tiene una gran afinidad ( 0,1 – 0,2
– 4 mM) mM).
Únicamente cuando la cantidad de piruvato sobrepasa la capacidad de la piruvato
deshidrogenasa puede entonces acumularse para permitir el funcionamiento de la
piruvato descarboxilasa y, de este modo, hacer posible la fermentación.
La importancia del efecto Pasteur varía según las
especies de levaduras. Es tanto más marcado
cuanto más importante es el metabolismo
respiratorio en las cepas.
El efecto Pasteur es más notorio en Candida
troicalpis. En Saccharomyces cerevisiae, el efecto
Pasteur bien está ausente, o bien tiene una
amplitud muy débil.
Respiración
aerobia
BALANCE ENERGÉTICO DE LAOXIDACIÓN COMPLETADE UNA
MOLÉCULA DE GLUCOSA
AEROBIOSIS
Glucosa → 2 Piruvato (Glucólisis) ---- citoplasma
ATP netos = 02 ATP (04 ATP – 02 ATP)
NADH + H= 02 NADH
según la Lanzadera del NADH → electrones a mitocondria
Glicerol 3-Fosfato → 2 FADH2 mit → F.O. → 3 ATP a
Malato-Aspartato → 2 NADH mit → F.O. → 5 ATP
02 Piruvato → 2 Acetil – CoA ----- mitocondria
NADH + H= 02 → F.O. → 5 ATP
2 Acetil – CoA → 2 Ciclo de Krebs ---mitocondria
Por Ciclo = 10 ATP
NADH + H= 03 → F.O. → 7,5 ATP
Ciclo FADH2= 01 → F.O. → 1,5 ATP
01 GTP = 01 ATP Dos ciclos = 20 ATP
F.O.: Fosforilación Oxidativa TOTAL = 30 a 32 ATP
Balance de los procesos de la respiración aerobia
Proceso Sustancia inicial Sustancia final Coenzimas ATP totales
reducidas y ATP
Glucolisis Glucosa 2 ácido pirúvico 2 NADH 3 a 5 ATP (AER: F.O.)
2ATP 2ATP (a nivel de
sustrato)
Descarboxilación 2 ácido pirúvico 2 acetil Co- A 2 NADH 5 ATP (F.O.)
del ácido pirúvico 2 CO2
Ciclo de Krebs 2 Acetil Co-A 4 CO2 6 NADH 15 ATP (F.O.)
2 FADH2 3 ATP (F.O.)
2 GTP 2 ATP (Aerobiosis)
Balance global Glucosa 6CO2 30 a 32 ATP
6CO2 6H2O
Fermentación
alcohólica
ANAEROBIOSIS
Glucosa → 2 Piruvato (Glucólisis)
ATP netos = 02 ATP (04 ATP – 02 ATP)
NADH + H= 02 → Regenerar a NAD+ en Fermentación (EN FERMENTACIÓN
NO SE PRODUCE ATP)
precipitado rojo-ladrillo
R-CHO(red) Cu+2 (oxi) Ind (red)
Solución fosfomolibdica
ácido fosfomolíbdoso
R-COOH(oxi) Cu+1 (red) Ind (oxi)
óxido cuproso Solución fosfomolibdica
ácido fosfomolíbdico
OBJETIVO
La presente experiencia práctica de laboratorio, tiene como
finalidad la demostración del consumo de glucosa en
anaerobiosis y aerobiosis por Saccharomyces cerevisiae.
MATERIALES
❑Buffer de acetato 0.1 M
pH 5
❑ Glucosa 0.2 M.
❑ Ácido sulfúrico 2/3 N.
❑ Tungstato de sodio 10
%
❑Solución cúprico
alcalina.
❑ Solución fosfomolibdica.
❑ Agua destilada.
MÉTODO
A. SISTEMA DE INCUBACIÓN:
1.8 mL
12.0 mL 1.5 mL
Glucosa 0.2 M
Buffer acetato Suspensión de
en buffer
0.1 M pH 5 levadura 1% en
acetato 0.1 M
buffer acetato
pH 4.6
SISTEMA DE INCUBACIÓN
ANAEROBIO:
tomar una
alícuota de 1 mL 1 mL de H2SO4
2/3 N t=0 tomar una
alícuota de 1 mL
extraer el aire con una bomba
1 mL de H2SO4
de vacío durante 3 a 5 minutos 2/3 N
incubación,
durante
una hora
t=60
SISTEMA DE INCUBACIÓN
AEROBIO:
tomar una
alícuota de 1 mL 1 mL de H2SO4
2/3 N t=0
tomar una
alícuota de 1 mL
inyectar el aire con un aireador
durante todo el tiempo de
incubación
1 mL de H2SO4
incubación, 2/3 N
durante
una hora
t=60
SISTEMA DE INCUBACIÓN
ANAEROBIO: 1 mL
tungstato de
de
sodio
7 mL de
(Na WO ) al 10
2 4
agua
%. destilada
Mezclar y Mezclar mezclar por Recolectar
dejar en vigorosamente y inversión y filtrado
dejar en reposo
t=0
reposo por 2 filtrar.
minutos por 2 minutos
1 mL de
tungstato de
sodio
7 mL de
(Na WO ) al 10
2 4
agua
%. destilada
t=60 Mezclar y
dejar en
reposo por 2
minutos
Mezclar
vigorosamente y
dejar en reposo
por 2 minutos
mezclar por
inversión y
filtrar.
Recolectar
filtrado
SISTEMA DE INCUBACIÓN
AEROBIO: 1 mL
tungstato de
de
sodio
7 mL de
(Na WO ) al 10
2 4
agua
%. destilada
Mezclar y Mezclar mezclar por Recolectar
dejar en vigorosamente y inversión y filtrado
dejar en reposo
t=0
reposo por 2 filtrar.
minutos por 2 minutos
1 mL de
tungstato de
sodio
7 mL de
(Na WO ) al 10
2 4
agua
%. destilada
t=60 Mezclar y
dejar en
reposo por 2
minutos
Mezclar
vigorosamente y
dejar en reposo
por 2 minutos
mezclar por
inversión y
filtrar.
Recolectar
filtrado
[Link]ÓN DEL AZUCAR RESIDUAL:
El azúcar residual se determinara con los filtrados del paso anterior, utilizando el siguiente sistema:
t=0 t=60 t=0 t=60
Anaerobio Aerobio 0,5 ml
1 ml 0,5 ml 0,5 ml 1 ml 0,5 ml
Agua Agua
destilada B I II destilada B I II
0,5 ml 0,5 ml
t=0 t=0
I I
0,5 ml 0,5 ml
t=60
II t=60 II
[Link]ÓN DEL AZUCAR RESIDUAL:
El azúcar residual se determinara con los filtrados del paso anterior, utilizando el siguiente sistema:
Anaerobio Aerobio
t=0 t=60 t=0 t=60
1 ml 1 ml 1ml
1 ml 1 ml 1ml
Solución
cúprico
alcalina
B I II B I II
Mezclar y colocar en baño de agua hirviendo por 8 minutos. Al Mezclar y colocar en baño de agua hirviendo por 8 minutos. Al
termino de este tiempo enfriar en agua corriente termino de este tiempo enfriar en agua corriente
[Link]ÓN DEL AZUCAR RESIDUAL:
El azúcar residual se determinara con los filtrados del paso anterior, utilizando el siguiente sistema:
Anaerobio
t=0 t=60
7ml
1 ml 1 ml 1ml
Solución
fosfomolíbdica
Agua
B
I II destilada
mezclar enérgicamente y dejar en reposo 3 minutos
[Link]ÓN DEL AZUCAR RESIDUAL:
El azúcar residual se determinara con los filtrados del paso anterior, utilizando el siguiente sistema:
Aerobio
t=0 t=60
7ml
1 ml 1 ml 1ml
Solución
fosfomolíbdica
B Agua
I II
destilada
mezclar enérgicamente y dejar en reposo 3 minutos
