Universidad Rafael Landívar
Laboratorio de Bioquímica
Janeth Quintanilla 1148418
Sección: 03
REPORTE 3: PRUEBAS DE REDUCCIÓN
PRÁCTICA No. 3
Objetivos:
1) Demostrar e identificar azúcares reductores mediante diferentes reacciones
químicas, en este caso reactivo de Benedict.
2) Conocer las pruebas de reducción para monosacáridos con distintas soluciones de
carbohidratos.
3) Determinar cualitativamente azúcares en jugos comerciales de frutas.
Antecedentes
Los carbohidratos son moléculas formadas por carbono, oxígeno e hidrogeno. Las cuales
varias moléculas más importantes en la vida de los microorganismos la contienen, como
por ejemplo la glucosa. Esta es utilizada por las células para la obtención de energía
metabólica, el glucógeno contenido en el hígado y el musculo, que forma la reserva de
energía más fácilmente accesible para las células del organismo y la ribosa y desoxirribosa
que forma parte de la estructura química de los ácidos nucleicos. Desde el punto de vista
químico, los carbohidratos son polihidroxi aldehídos o cetonas y sus polímeros. Existen tres
categorías principales que se distinguen por el número de unidades de azúcar que los
conforman: monosacáridos, oligosacáridos y polisacáridos. Los polisacáridos liberan a la
hidrolisis centenares o millares de monosacáridos; mientras que los oligosacáridos
producen de dos a 10 monosacáridos y los monosacáridos mismos son las unidades
mínimas de los carbohidratos que ya no se pueden hidrolizar. Se les llama carbohidratos
debido a que su estructura química se parece a formas hidratadas de carbono y se representa
con la formula Cn (H2O) (Nelson,2007).
Tanto el estudio estructural de los hidratos de carbono como su cuantificación por métodos
colorimétricos se basan en las reacciones químicas propias de los grupos funcionales que
poseen los hidratos de carbono o en las características de los enlaces que establecen. La
reducción de aldehídos y cetonas a alcohol, la cual el borohidruro de sodio reduce las
aldosas a los alditoles correspondientes. Las cetosas se reducen a alcoholes secundarios. En
la mayoría de los casos, se reduce el número de centros de asimetría molecular (Berg,
Tymoczko & Stryer, 2008).
Para identificar carbohidratos existe un método más común, que es la prueba Benedict. Esta
reacción es específica para azucares con grupo de reductores libres (C-O). Todos los
monosacáridos poseen un grupo reductor libre. Los disacáridos como la maltosa y la lactosa
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tienen grupos reductores libres, pero la sacarosa no los posee, ya que se llegan a perder
estos grupos reductores de sus componentes cuando se encuentra ya formada. Se basa en la
capacidad del carbohidrato de reducir el Cu+2 a en un medio alcalino. El Cu+1 se oxida y se
precipita en forma de Cu+1, lo que proporciona la coloración positiva de la reacción. La
coloración dependerá de la cantidad de concentración de óxido de cobre y la reducción del
cobre va desde verde, amarillo, anaranjado o rojizo (Berg, Tymoczko & Stryer, 2008).
La prueba de Benedict es otra de las reacciones de oxidación, que como conocemos, nos
ayuda al reconocimiento de azúcares reductores, es decir, aquellos compuestos que
presentan su OH anomérico libre, como por ejemplo la glucosa, lactosa o maltosa o
celobiosa, en la reacción de Benedict, se puede reducir el Cu2+ que presenta un color azul,
en un medio alcalino, el ión cúprico (otorgado por el sulfato cúprico) es capaz de reducirse
por efecto del grupo aldehído del azúcar (CHO) a su forma de Cu+. Este nuevo ion se
observa como un precipitado rojo ladrillo correspondiente al óxido cuproso (Cu2O), que
precipita de la solución alcalina con un color rojo-naranja, a este precipitado se lo considera
como la evidencia de que existe un azúcar reductor (Mckee & Mckee, 2009).
Diagrama de flujo
Identificar cada tubo de
al ebullir, colocar los
ensayo y colocar 20 a cada tubo de ensayo Preparar un baño de
tubos de ensayo, apagar
Inicio gotas de las soluciones agregar 5 ml de reactivo maría y agregar perlas
el mechero y dejar
de cada azúcar y jugo de Benedict. de ebullición.
enfriar.
natural.
Despues de cinco min. Organizar los tubos con
Observar los cambio de Parte, en 5 tubos de Añadir al primero 1 ml
de haber colocado los base al color. 5 tubos de
color en cada uno de los ensayo agregar un ml de de solución de glucosa al
tubos en el baño, ensayo agregar un ml de
tubos. agua. 5% y mezclar
sacarlos. agua.
Parte, en 5 tubo agregar
Del tubo anterior tomar Del tubo anterior tomar Hacer la misma 5 ml de reactivo mezclar y someter a
1 ml y agregarselo al 1 ml y agregarlo al operación hasta tener 5 Benedict y agregar 10 baño de maría, esperar
segundo tubo. tercer tubo. tubos de ensayo. gotas de cada una de las 3 min. sacar los tubos.
diluciones.
Anotar resultados Fin del Proceso.
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Datos, Cálculos y Resultados
Tabla 1: Disoluciones de glucosa con reactivo de Benedict.
No. de tubo de ensayo Disolución de glucosa Observaciones de
Coloración
1 1:1 Tono azul oscuro
2 1:10 No cambio de color
3 1:100 No cambio de color
4 1:1000 No cambio de color
5 1:10000 Azul verdoso-azul
Fuente: Datos Experimentales
Tabla 2: Prueba de reducción (Benedict) para monosacáridos.
Tubo de Azúcar (Monosacárido) Jugo Natural o Rango en la
Ensayo artificial prueba de
Benedict.
1 Sacarosa Piña natural 0.6-1%
2 Maltosa Piña natural 0.6-1%
3 Glucosa Piña natural 0.6-1%
4 Fructosa Naranja artificial 2.6-3.5%
5 Sacarosa Naranja artificial 2.6-3.5%
6 Maltosa Naranja artificial 2.6-3.5%
7 Glucosa Naranja artificial 3.6-4%
8 Fructosa Piña natural >4.0%
Fuente: Datos Experimentales
Discusión de resultados
Disoluciones de glucosa con reactivo de Benedict, en la prueba de Benedict lo que ocurre
es que, si el color cambia a azul, entonces no hay azúcares reductores presentes,
particularmente glucosa. Si hay una gran cantidad de glucosa presente en la muestra a
analizar, entonces el cambio de color progresará a verde, amarillo, naranja, rojo y
finalmente marrón (Briceño, 2019). Mientras más diluida este la glucosa va disminuyendo
la prueba de Benedict, lo que significa que no encuentra azucares rectores por lo tanto la
solución se torna color azul.
En el tubo de ensayo No. 1 donde se encontraba la glucosa más concentrada al 2.5%, es
decir una disolución de 1:1, se obtuvo un color azul más intenso, y en el tubo de ensayo No.
5 en donde había una disolución de 1:10000, el resultado fue una tornación de color entre
verdoso y azul. Lo que ocurre con la glucosa es que es un compuesto que presenta su OH
anomérico libre, lo cual permite que, al momento del contacto con la prueba de Benedict, se
pueda reducir el Cu2+ que es lo que presenta el color azul. La evidencia de la reacción de
Benedict es la formación del precipitado Ion Cuproso Cu2O. Al comparar los datos teóricos
con los datos obtenidos en el laboratorio se puede observar que el tubo No. 2, 3 y 4 no hubo
reacción esto debido a que la prueba de Benedict que se encontraba en el laboratorio estaba
vencida, lo cual hizo que los datos obtenidos estuviesen alterados, obteniendo así datos no
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deseados. Para observar los resultados obtenidos, véase; (Tabla 1: Disoluciones de glucosa
con reactivo de Benedict).
Prueba de reducción (Benedict) para monosacáridos, muchos monosacáridos, como la
glucosa y la fructosa, y algunos disacáridos, son azúcares reductores porque poseen un
aldehído libre. La Prueba de Benedict se usa para detectar la presencia de azúcares
reductores porque el reactivo de Benedict contiene cobre que se reduce en presencia de
azúcares reductores. Durante esta reacción el azúcar se oxida. La oxidación del azúcar
sucede simultáneamente con la reacción de reducción del cobre (Mckee & Mckee, 2009).
Cuando se agregó el reactivo de Benedict al azúcar reductor, en este caso (sacarosa,
fructosa, maltosa y glucosa) y se aplicó calor, el color de la mezcla cambio de naranja o
amarillo a colores más o menos intenso, dependiendo del tipo de azúcar.
En la práctica se utilizó jugo de piña natural y jugo de naranja artificial. Al usar el jugo de
piña se obtuvo un resultado entre un rango de 0.6-1%, dando a conocer que no contenía
mucha azúcar. Mientras que el jugo de naranja presento rangos entre 2.6 hasta 4% lo cual
indicaba presencia alta de azúcar. Se presentaron colores entre rojo y color ladrillo cuando
había mayor abundancia de azúcares reductores y ocurrieron cambios de color verde o
celeste cuando la presencia azúcares reductores era menor. Los azúcares que no reducen,
como la sacarosa, no produjo cambios en color y la solución permaneció de color azul. Los
datos obtenidos fueron los esperados, teniendo congruencia con los datos teóricos. Véase;
(Tabla 2: Prueba de reducción (Benedict) para monosacáridos).
Cuestionario
1. Investigue sobre la prueba de Benedict. La prueba de Benedict se utiliza en química
para localizar la presencia de monosacáridos y azucares reductores. La solución de
Benedict tiene entre sus componentes carbonato de sodio, citrato de sodio y sulfato de
cobre. Para realizar esta prueba se posee una pequeña cantidad del alimento disuelto en
agua, se agrega una pequeña cantidad del reactivo. Si no existe ningún azúcar presente el
color de la solución permanecerá de color azul. En presencia de azúcar el color cambia a
verde, amarillo, naranja rojo y corinto. Un cambio de color confirma la presencia de la
glucosa. La sacarosa no se identifica directamente en esta prueba debido a que no es una
azúcar reductora (Berg, Tymoczko & Stryer, 2008).
2. ¿Qué puede concluir de las diversas coloraciones obtenidas en la primera parte del
experimento? Las soluciones que tienen más unidades de azúcar cambian de color con
mayor rapidez como lo fueron los jugos. La sacarosa permaneció del mismo color, azul,
debido a que esta no es una azúcar reductora. La mayoría de los tubos de ensayo que
contenían los jugos comerciales presentaron distintas tonalidades de colores dentro de sus
soluciones (Fuente Propia).
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3. Investigue sobre métodos cuantitativos y cualitativos para determinar azúcares en
diferentes medios.
Prueba de Bial: Es una prueba específica para la determinación de pentosas. Cuando
es positiva la prueba su coloración es de color verde brillante.
Prueba de Molish: Es una prueba específicamente para determinar carbohidratos
que contengan 5 átomos de carbono.
Prueba de lugol: Se utiliza para identificar almidón. El color azul se debe
posiblemente a la formación de un complejo ioduro de almidón.
Prueba de Barfoed: Sirve para identificar monosacáridos y algunos disacáridos en
especial los reductores, dan positiva la reacción cuando se calienta ya que se
hidroliza el disacárido. Es posible que se deba debido a la reducción del acetato
cúprico a oxido cuproso.
Prueba de Fenilhidrazina: Sirve para distinguir oligosacáridos. Los carbohidratos
que solo se diferencian en sus átomos de carbono 1 y/o 2 darán la misma como es el
caso de la glucosa y la fructosa que son isómeros de función.
Prueba de Benedict: Sirve para identificar soluciones que posean azucares
reductores o carboxilos libres.
Prueba de Seliwanott: Sirve para identificar cetosas que contengan 5 o más átomos
de carbono, pero se usa específicamente para identificar fructosa.
(Voet & Voet, 2006)
Conclusiones
Loa azúcares reductores pueden ser oxidados por agentes oxidantes débiles como el
reactivo de Benedict.
Mediante la reacción de Benedict podemos identificar azúcares reductores y comprobar que
la reducción que se lleva a cabo es por el efecto del grupo aldehído del azúcar (CHO) en
forma de Cu+.
La glucosa, la fructosa y la maltosa al someterse a la Reacción de Benedict dan un
resultado positivo debido a que presentan un precipitado de color rojo ladrillo o anaranjado
(óxido cuproso) lo cual es la evidencia de un azúcar reductor.
La sacarosa, es un disacárido que, en reacciones de oxidación como la reacción de
Benedict, no presenta evidencia de un precipitado con coloración rojo ladrillo, y no es un
azúcar reductor.
Para la reducción de monosacáridos se pueden utilizar distintas pruebas, por ejemplo, la
realizada en el laboratorio.
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Referencias Bibliográficas
Berg, J., Tymoczko, J., & Stryer, L. (2008). Biochemistry. Barcelona.
Briceño, K. (2019). Azúcares Reductures: Métodos Para Determinación, Importancia -
Lifeder. Retrieved 26 September 2019, from [Link]
Mckee, T., & Mckee, J. (2009). Bioquímica (4th ed., p. 113). México D.F.: Gabriel
Romero.
Nelson, D. L. (2007) Lehninger: Principios de Bioquímica. Editorial Omega. 5ª Edición.
Voet, D., & Voet, J. (2006). Bioquímica (3rd ed.). Montevideo, Uruguay: Editorial
Médica Panamericana S.A.
Anexos
Intervalos por porcentajes de
coloración de la prueba de
Benedict (Briceño, 2019).
Figura 1 y 2: Resultado de la
Prueba de Benedict con
distintos monosacáridos.
