METODOS LUMINISCENTES
EMISION MOLECULAR
METODOS LUMINISCENTES
I. INTRODUCCION
• La fluorescencia es un fenómeno que fue conocido en el
siglo XIX por Stoke: observó fluorescencia en el mineral de
fluorita(CaF2).
• El agua tónica es un refresco carbonatado aromatizado
con quinina. La quinina es un alcaloide de sabor amargo
que se extrae de la corteza del árbol de la quina, y tiene
propiedades antipiréticas, analgésicas y contra la
malaria. La quinina es una sustancia fluorescente.
• Cuando las moléculas o átomos en estados fundamental pasa
a un estado mayor de energía denominado estado excitado,
si esta especie se desactiva por emisión de radiación se trata
de un sistema limuniscente. Puede ser Fosforescencia,
fluorescencia y quimioluminiscencia.
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II. FUNDAMENTOS
La Fluorescencia es un proceso
fotoluminiscente en el que los
átomos y moléculas se excitan con
la absorción de la RE, después la
especie excitada se relaja al estado
fundamental y emite un exceso de
energía en forma de fotones.
Proceso de relajación.
I) Relajación no radiante.
•Relajación vibracional: Ocurre durante las colisiones de las moléculas excitadas con las del disolvente. ( 10-11s)
•Conversión Interna: Este fenómeno se ve influenciado por el medio, solapamiento de los niveles implicados.( 10-
11s a 10-10s)
II) Fluorescencia.( 10-10s a 10-5s)
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II. FUNDAMENTOS
La fosforescencia está acompañado por un cambio de spin llamado
triplete en el cual dos electrones presentan la misma orientación.
La fluorescencia sus transiciones energéticas no cambian el spin del
electrón.
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III. ESPECIES FLUORESCENTES.
Todas las moléculas absorbentes tienen
potencial para ser fluorescente, pero
muchos compuestos no lo hacen porque
su estructura permite otros mecanismos
de relajación sin radiación que ocurre
con mayor rapidez que la emisión por
fluorescencia.
Las moléculas que pueden presentar
fluorescencia:
Moléculas con anillos.
Ciertos compuestos de carbonilos
alifáticos y aliciclicos así como
estructuras de doble enlace muy
conjugados.
Algunas Excepciones: Piridina, furano,
tiofreno y pirrrol.
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IV. INSTRUMENTACION
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FUENTE DE LUZ:
IV. INSTRUMENTACION •De mayor potencia que las que se utilizan en
absorción.
•La energía radiante emitida en fluorescencia es
directamente proporcional a la intensidad de la fuente.
•Lámpara de arco de mercurio,
•Lámpara de arco de xenón,
•Láseres de N2 o de Ar
SELECTOR DE LONGITUD DE ONDA:
Filtros: fluorimetros, monocromadores:
espectrofluorimetros.
CUBETAS:
Vidrio o cuarzo, rectangulares, con las cuatro caras
transparentes.
DETECTORES:
fotomultiplicador.
Para calibración sulfato de quinina 10-5 M absorbe a
350 nm y emite a 450 nm.
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V. RELACIÓN ENTRE EL ESPECTRO DE EXCITACIÓN Y DE
EMISIÓN.
El espectro de absorción o espectro de
excitación y ele espectro de florescencia de un
compuesto parecen imágenes especulares una
de la otra. Ambas empalman cerca del origen de
transición. Ej el espectro del antraceno de 1ppm
en alcohol. Y la quinina
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Análisis cualitativo: poca aplicación.
[Link].
Análisis cuantitativo:
La aplicación más importante de la fluorimetría corresponde al análisis de productos
alimenticios, sustancias farmacéuticas, muestras clínicas y productos naturales
Los métodos fluorescentes son :
Aplicables a intervalos de concentración más bajos los de absorción
Tienen sensibilidades mayores que los métodos de absorción.
•Tienen una precisión y exactitud menor que las de los de absorción.
•Muy selectivos, con una selectividad mayor que los métodos de absorción.
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[Link].
Especies fluoresecentes
Inorgánicos DETERMINACIÓN
Directos: Basados en la reacción con . Los basados en la reacción del analito con un agente de complejación para
un agente complejante para formar un formar un complejo fluorescente.
compuesto fluorescente. Se utilizan para cationes.
• Determinación de Al (III)
El granate de alizarina R permite detectar Al3+ a niveles de 0,007 µg/mL.
GAR + Al (III) ---- GAR - Al (III)
Indirectos: Dependen de la Se utilizan para aniones y determinación de oxígeno en disolución.
desactivación fluorescente como Determinación de anión F-, se basa en la desactivación de la fluorescencia del
resultados de la interacción del analito complejo GAR - Al (III)
con un reactivo fluorescente GAR - Al (III) + F- --------- GAR + Al(III)-F
( Quenching)
Orgánicos y Bioquímicos Pueden determinarse por fluorescencia los aminoácidos, proteínas,
coenzimas, vitaminas, ácidos nucleicos, alcaloides, porfirinas, esteroides,
flavonoides, la adenina, ácido antranílico, hidrocarburos policíclicos
aromáticos, cisteína, guanina, isoniazida, naftoles, ácido salicílico, triptófano,
ácido úrico y numerosos metabolitos.
También muchos agentes medicinales pueden determinarse por fluorimetría,
como la adrenalina, morfina, penicilina, fenobarbital, procaína, reserpina y
dietilamida del ácido lisérgico (LSD).
• La aplicación más importante de la fluorimetría corresponde al análisis de
productos alimenticios, sustancias farmacéuticas, muestras clínicas y
productos naturales.
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Especies fluoresecentes
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VII. QUIMIOLUMINISCENCIA
El tipo de reacción más sencilla de dichos compuestos para
producir quimioluminiscencia se puede formular como:
A + B = C* + D
C* = C + hv
C* representa a la especie C en el estado excitado. El espectro
de luminiscencia es el del producto de reacción C. La mayoría
de las reacciones quimioluminiscentes son
considerablemente más complicadas de lo que sugieren las
reacciones anteriores.
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VII. QUIMIOLUMINISCENCIA
Los científicos forenses utilizan la reacción del luminol para detectar sangre en la escena del crimen.
Una mezcla de luminol en una solución diluida de peróxido de hidrógeno se aplica en la zona donde los forenses
sospechan que hay sangre. El hierro presente en el grupo hemo de la hemoglobina en la sangre actúa como catalizador
de la reacción descrita. La habitación debe estar oscura y si la sangre está presenta, un resplandor azul, con una duración
de 30 segundos, se observara
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EJERCICIOS
1)La quinina es una pastilla antimalaria de 1.664 g que se disuelve en 0.10M de HCl hasta obtener un volumen de
500 mL posteriormente se diluye una alícuota de 15 mL hasta 100 ml con el ácido. La intensidad de la muestra
diluida a 347.5 nm es de 288 en una escala arbitraria. Una solución patrón de 50 ppm de quinina tiene una lectura de
90 cuando se mide en las condiciones idénticas de la muestra.
a) Calcule la concentración de quinina en la tableta.
b) ¿Cuál es el porcentaje de quinina en la tableta?
2) El método anterior se modifica en este caso una tableta de 2.196 g en 0.1M hasta 1 litro. Se toma una
alícuota de 20 mL hasta 100 mL proporciona una lectura de 540 a 347.5 nm. Una segunda alícuota de 20 mL se
mezcla con 10 mL de un estándar de quinina de 50 ppm antes de su dilución a 100 mL la intensidad de fluorescencia
de esta solución es de 600. .
a) Calcule la concentración de quinina en la tableta.
b) ¿Cuál es el porcentaje de quinina en la tableta?
c) ¿Cuál es la concentración en ppm en peso de quinina?
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EJERCICIOS
