 BBL TSI Agar Slants 

L007520 • Rev. 10 • Octubre 2015

PROCEDIMIENTOS DE CONTROL DE CALIDAD (Opcionales)
I. INTRODUCCION
TSI Agar (Triple Sugar Iron Agar) (agar triple azúcar hierro) es un medio de diferenciación para
organismos entéricos gram negativos basada en su capacidad para fermentar dextrosa, lactosa y
sacarosa y para producir sulfuro.

II. REALIZACION DEL PROCEDIMIENTO DE ANALISIS

1. Inocular muestras representativas con los cultivos enumerados a continuación.
a. Inocular en los tubos cultivos de agar inclinado de soja Trypticase de 18 – 24 h, con una
aguja de inoculación insertada en la base del tubo y extendiendo la muestra en ambas
direcciones por la superficie del agar inclinado.
b. Incubar los tubos con las tapas flojas a 35 ± 2 °C en una atmósfera aerobia.
2. Examinar si los tubos después de 18 – 24 h muestran indicios de crecimiento y reacciones.
3. Resultados previstos
Agar inclinado Base del tubo Gas H2S
*Escherichia coli Acida Acida + –
ATCC 25922
*Salmonella enterica Alcalina Ácida +/– +
subsp. enterica
serotipo Typhimurium
ATCC 14028
*Shigella flexneri Alcalina Ácida – –
ATCC 12022
*Pseudomonas aeruginosa Alcalina Alcalina – –
ATCC 27853
*Cepa de organismo recomendada para control de calidad del usuario.

NOTA: Según CLSI M22-A3, no es necesario que el usuario realice un control de la calidad de
este medio.

III. CONTROL DE CALIDAD ADICIONAL

1. Examinar los tubos como se describe en la sección “Deterioro del Producto”.
2. Examinar visualmente los tubos representativos para asegurarse de que los defectos físicos
existentes no interfieran con el uso.
3. Determinar el pH potenciométricamente a temperatura ambiente para verificar el
cumplimiento de la especificación de 7,3 ± 0,2.
4. Incubar los tubos representativos sin inocular a 20 – 25 °C y 30 – 35 °C y examinar después
de 7 días en busca de contaminación microbiana.

INFORMACION DEL PRODUCTO

IV. USO PREVISTO
TSI Agar se utiliza para diferenciación de bacilos entéricos gram negativos sobre la base de la
fermentación de carbohidratos y la producción de ácido sulfhídrico.

V. RESUMEN Y EXPLICACION
TSI Agar se utiliza para la determinación de carbohidratos y producción de ácido sulfhídrico para
la identificación de bacilos gram negativos1,2.
Hajna desarrolló la fórmula de TSI Agar añadiendo sucrosa a la fórmula de doble azúcar (dextrosa
y lactosa) del Agar Hierro de Kligler3. La adición de sucrosa aumentó la sensibilidad del medio
facilitando la detección de bacilos fermentadores de sucrosa, además de los fermentadores de
lactosa y/o dextrosa.
La fermentación de carbohidratos se detecta mediante la presencia de gas y un cambio de color
visible (de rojo a amarillo) del indicador de pH, rojo fenol. La producción de ácido sulfhídrico se
indica mediante la presencia de un precipitado que oscurece el medio en la base del tubo.

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VI. PRINCIPIOS DEL PROCEDIMIENTO
TSI Agar contiene tres azúcares (dextrosa, lactosa y sucrosa), rojo fenol para detectar la
fermentación de carbohidratos, y sulfato ferroso para la detección de producción de ácido
sulfhídrico (indicado por el oscurecimiento de la base del tubo).
La fermentación de carbohidratos se indica mediante la producción de gas y un cambio en el color
del indicador de pH de rojo a amarillo. Para facilitar la detección de organismos que fermenten
dextrosa solamente, la concentración de dextrosa, es un décimo de la concentración de lactosa o
sucrosa. La cantidad pequeña de ácido producida en el agar inclinado del tubo durante la
fermentación de dextrosa se oxida rápidamente, lo que hace que el medio permanezca de un
color rojo o cambie a un pH alcalino. En comparación, la reacción ácida (amarillo) se mantiene en
la base del tubo si se encuentra bajo una tensión de oxígeno menor.
Después de agotar la cantidad limitada de dextrosa, los organismos capaces de hacerlo
4
comenzarán a utilizar la lactosa o sucrosa .
Para aumentar la condición alcalina del agar inclinado, se debe permitir la libre circulación de aire,
dejando floja la tapa del tubo. Si el tubo está con la tapa ajustada, una reacción ácida (causada
exclusivamente por la fermentación de dextrosa) también va a afectar al agar inclinado.

VII. REACTIVOS
TSI Agar
Fórmula aproximada* por litro de agua purificada
Digerido pancreático de caseína ............................... 10,0 g
Digerido péptico de tejido animal ............................ 10,0 g
Cloruro sódico ............................................................... 5,0 g
Lactosa ........................................................................ 10,0 g
sacarosa ....................................................................... 10,0 g
Dextrosa ........................................................................ 1,0 g
Sulfato ferroso de amonio ........................................... 0,2 g
Tiosulfato sódico .......................................................... 0,2 g
Rojo fenol ..................................................................... 0,025 g
Agar ............................................................................. 13,0 g
*Ajustada y/o suplementada según requisitos para satisfacer los criterios de rendimiento.

Advertencias y precauciones
Para uso diagnóstico in vitro.
Los tubos con tapas ajustadas deben abrirse con cuidado para evitar lesiones por la rotura del
vidrio.
Observar las precauciones establecidas contra los peligros microbiológicos durante todos los
procedimientos. Antes de desecharlos, esterilizar en autoclave los tubos preparados, los
recipientes para muestras y cualquier otro material contaminado.
Instrucciones para el almacenamiento
Al recibir los tubos, almacenarlos en un lugar oscuro a 2 – 8 °C. No congelar ni sobrecalentar. No
abrir hasta que vayan a utilizarse. Reducir al mínimo la exposición a la luz. Los medios en tubos
almacenados como se indica en sus etiquetas hasta momentos antes de su utilización pueden ser
inoculados hasta la fecha de caducidad e incubados durante los períodos recomendados de
incubación. Dejar que el medio se caliente a temperatura ambiente antes de la inoculación.
Deterioro del producto
No utilizar los tubos si muestran evidencia de contaminación microbiana, decoloración,
deshidratación o cualquier otro signo de deterioro.

VIII. RECOGIDA Y MANIPULACION DE LAS MUESTRAS

Las muestras adecuadas para cultivo pueden manipularse mediante diversas técnicas. Para
obtener información detallada, consultar los textos correspondientes2,5. Las muestras deben
obtenerse antes de administrar los agentes antimicrobianos. Deben adoptarse las medidas
necesarias para un transporte inmediato al laboratorio.

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IX. PROCEDIMIENTO
Material suministrado
TSI Agar Slants
Materiales necesarios pero no suministrados
Medios de cultivo auxiliar, reactivos, organismos para el control de calidad y el equipo de
laboratorio que se requiera.
Procedimiento de análisis
Emplear técnicas asépticas.
Para inocular, tocar con cuidado sólo el centro de una colonia aislada en un medio en placa
entérico con una aguja estéril fría, insertarla en el medio en la base del tubo y luego extender la
muestra en ambas direcciones por la superficie del agar inclinado. Se deben estudiar por separado
varias colonias de cada placa primaria dado que es posible que se produzcan infecciones mixtas.
Incubar con las tapas flojas a 35 °C y examinar después de 18 – 24 h para detectar fermentación de
carbohidrato, producción de gas y producción de ácido sulfhídrico. Es posible observar una
combinación de cualquiera de estas reacciones. No incubar durante un período más prolongado
que 24 h porque la reacción ácida en el agar inclinado de los organismos fermentadores de lactosa
y sucrosa pueden convertirse a una reacción alcalina.
Control de calidad del usuario
Véase “Procedimientos de control de calidad”.
Cada lote de medios se ha probado con los microorganismos de control de calidad adecuados
mediante una prueba que cumple las especificaciones del producto y los criterios aplicables del
CLSI. Como siempre, las pruebas de control de calidad se deben llevar a cabo conforme a la
normativa local, estatal, federal o nacional aplicable, a los requisitos de los organismos de
acreditación y/o a los procedimientos estándar de control de calidad del laboratorio.

X. RESULTADOS
Después de la incubación, comparar las reacciones producidas por los aislados desconocidos con las
producidas por los organismos de control conocidos.
La fermentación de carbohidratos se indica mediante una coloración amarilla del medio. Si el
medio en la base del tubo se torna amarillo (ácido), pero el medio en el agar inclinado adquiere
un color rojo (alcalino), el organismo de prueba fermenta solamente dextrosa (glucosa).
Un color amarillo (ácido) en el agar inclinado y la base del tubo indica que el organismo de prueba
fermenta dextrosa, lactosa y/o sucrosa.
Un color rojo (alcalino) en el agar inclinado y la base del tubo indica que el organismo de prueba
no es fermentador.
La producción de ácido sulfhídrico causa un precipitado negro en la base del tubo.
La producción de gas se indica mediante la división o craqueo del medio.
Consultar las referencias correspondientes para mayor información2,5-7.

XI. LIMITACIONES DEL PROCEDIMIENTO

Algunos organismos pueden demostrar producción de ácido sulfhídrico en Agar Hierro de Kligler,
pero no en TSI Agar debido a la utilización de sucrosa a TSI Agar elimina el mecanismo enzimático
que genera la producción de H2S. Específicamente, la Salmonella productora de H2S y algunos
1
miembros de Enterobacteriaceae tal vez no den resultado positivo a H2S en TSI Agar .
De igual manera que con el agar hierro de Kligler, los organismos productores de ácido sulfhídrico
en TSI Agar pueden producir una cantidad tan grande de precipitado negro, sulfuro ferroso, que
la acidez producida en la base del tubo se ve completamente enmascarado. Sin embargo, si se
reduce H2S, la condición de ácido existe en la base del tubo aunque no se pueda observar y
registrarse como tal1.
Para su identificación, los organismos deben encontrarse en un cultivo puro. Deben llevarse a cabo
pruebas morfológicas, bioquímicas y/o serológicas para lograr una identificación final. Consultar
los textos correspondientes para obtener información detallada y los procedimientos
2,5 -7
recomendados .

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XII. CARACTERISTICAS DE RENDIMIENTO
Antes de su lanzamiento, todos los lotes de TSI Agar slants se someten a prueba para determinar
sus características de rendimiento. Se analizan muestras representativas del lote con cultivos de
agar de soja Trypticase de Escherichia coli (ATCC 25922), Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853),
Salmonella Typhimurium (ATCC 14028) y Shigella flexneri (ATCC 12022) extendiendo la muestra
en el agar inclinado e insertando una aguja de inoculación en la base del tubo. Los tubos se
inoculan con las tapas flojas a 35 ± 2 °C y se efectúa la lectura después de 18 – 24 h para detectar
crecimiento y reacciones. El crecimiento de todos los organismos es de moderado a denso. El agar
inclinado del tubo inoculado con
E. coli demuestra una reacción ácida mientras que los agares inclinados de todos los otros tubos
inoculados muestran una reacción alcalina. S. flexneri produce una reacción ácida en la base del
tubo, P. aeruginosa una reacción alcalina. E. coli produce ácido y gas en la base del tubo.
Salmonella Typhimurium produce una reacción ácida en la base del tubo junto con un
oscurecimiento del medio; es posible que haya o no presencia de gas.

XIII. DISPONIBILIDAD
Nº de cat. Descripción
221038 BD BBL TSI Agar Slants, pqt. de 10 tubos de tamaño K
221039 BD BBL TSI Agar Slants, caja de 100 tubos de tamaño K

XIV. REFERENCIAS
1. MacFaddin, J.F. 1985. Media for isolation-cultivation-identification-maintenance of medical bacteria, vol. 1, Williams &
Wilkins, Baltimore.
2. Forbes, B.A., D.F. Sahm, and A.S. Weissfeld. 2002. Bailey & Scott's diagnostic microbiology, 11th ed. Mosby, Inc., St. Louis.
3. Hajna, A.A. 1945. Triple-sugar iron agar medium for the identification of the intestinal group of bacteria. J. Bacteriol.
49:516-517.
4. Baron, E.J., L.R. Peterson and S.M. Finegold. 1994. Bailey & Scott’s diagnostic microbiology, 9th ed. Mosby-Year Book, Inc.
5. Murray, P.R., E.J. Baron, J.H. Jorgensen, M.A. Pfaller, and R.H. Yolken (ed.). 2003. Manual of clinical microbiology, 8th ed.
American Society for Microbiology, Washington, D.C.
6. Ewing, W.H. 1985. Edwards and Ewing's identification of Enterobacteriaceae, 4th ed. Elsevier Science Publishing Co., Inc.,
New York.
7. Holt, J.G., N.R. Krieg, P.H.A. Sneath, J.T. Staley, and S.T. Williams (ed.). 1994. Bergey's Manual of determinative
bacteriology, 9th ed. Williams & Wilkins, Baltimore.

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