Curso Introducción al Cultivo de Pleurotus ostreatus

Modulo 3.
Elaboración de Micelio
Los 4 pasos del cultivo
1. Obtención del micelio.
Consiste en obtener y hacer
crecer el micelio de las setas
usando agar y placas Petri. Se
realiza clonando en este medio un
pequeño trozo de las mismas, o
bien germinando sus esporas. Es
un proceso crítico y complicado
que debe realizarse en
condiciones estériles y con
maquinaria, instrumentación e
indumentaria adecuadas
2. Inoculación del grano.
Consiste en multiplicar el
micelio obtenido sobre
granos de diferentes
cereales, los cuales poseen
los nutrientes necesarios
para su crecimiento y
desarrollo. Estos granos
deberán incubarse en
temperaturas ligeramente
por encima de los 20 grados
centígrados durante un par
de semanas antes de usarlos
en el siguiente paso.
3. Crecimiento en el sustrato.
Consiste en pasteurizar el
sustrato final de crecimiento y
añadirle los granos anteriores
ya colonizados. Este sustrato
será la materia prima o
alimento final que consumirá el
micelio del hongo antes de que
broten las setas. Al igual que
con los granos, harán falta algo
más de dos-tres semanas de
incubación para que el micelio
colonice totalmente dicho
sustrato.
4. Fructificación de las setas.
Consiste en preparar unas condiciones
ambientales adecuadas de luz, temperatura,
ventilación y humedad para que comiencen a
brotar las setas. Aproximadamente saldrán setas
en una cantidad en torno al 20-30% del peso del
sustrato del paso anterior. Saldrán entre dos y
tres oleadas de setas de aproximadamente una
semana de crecimiento cada una de ellas, con
un descanso de 12-15 días entre cada una. La
primera oleada siempre será la de mayor
producción. En la siguiente sesión (Marzo)
veremos todas las etapas de una producción
hasta la fructificación y obtener setas durante
todo el año.
Obtención del micelio.
 ¿Qué es el micelio?
El micelio es la masa de hifas que constituye
el cuerpo vegetativo de un hongo.
Dependiendo de su crecimiento,
encontramos:

1. El micelio vegetativo, formado por

hifas, generalmente de color blanco que, a
manera de una tela de araña, colonizan el
sustrato para captar nutrientes.

2. El micelio reproductivo que tiene por

objeto la formación de cuerpos fructíferos o
carpóforos, es decir, la producción de
hongos, sombreros o setas.
¿Para qué producir MICELIO?
• La producción de micelio puede ser útil para los cultivadores de
hongos comestibles porque, de esa forma, pueden obtener materia
prima para su emprendimiento.
Para dedicarse a esta actividad, es imprescindible:

1. Poseer un laboratorio equipado para tal fin.

2. Trabajar en condiciones de estricta higiene y esterilidad.
3. Poseer cámara de flujo laminar.
4. Poseer autoclave para la esterilización de materiales y medios de
cultivo.
5. Adquirir un banco de cepas originales. Si bien se pueden hacer
cierta cantidad de repiques sobre un ejemplar de hongo fresco, el
exceso de éstos produce una degeneración de la cepa, perdiendo
ésta resistencia, vigor y calidad comercial.
 ¿Cuáles son las formas de ofrecer MICELIO
para la venta?
• Frascos o bolsas con semillas de cereal
inoculadas: como materia prima para la
producción de hongos comestibles y/o
medicinales.

• Aislamos primero el micelio en placas

petri o tubos, en medios de cultivos
sólidos o líquidos, lo trasladamos a
frascos con granos de cereal estéril e
incubamos.
• Tarugos: en este caso se usa viruta o aserrín
que se colocan en moldes donde se
siembran con el micelio para dar como
resultado estos tarugos que se empelan en
la siembra de troncos.

• Micelio líquido: se prepara y presenta en

botellones de vidrio o plástico.

• Cepas: algunos laboratorios venden

directamente la cepa, generalmente, tubos
de ensayo cargados de micelio. Estos tubos
hacen las veces de la esporada o el trozo de
himenio que luego vamos a aislar en la placa
o en el recipiente con medio líquido.
• Bolsas incubadas listas para fructificar:
ideales para aquellos productores de
hongos comestibles/medicinales que se
están iniciando.

• Nutracéuticas: en capsulas o tabletas

medicinales. Este tipo de compuestos,
en los últimos años, están siendo objeto
de una atención creciente por:
Materiales para producir micelios
• Cámara de Flujo Laminar
 Laboratorio de Hongos Cultivo madre

Bolsas para la venta

Micelio incubando en semillas
Incubar las placas de petri
• Una vez transferido a una placa de petri con medio nutritivo, y bajo
condiciones ambientales favorables, el micelio empezará a propagarse
hasta la completa colonización del substrato.

• En el caso de Pleurotus ostreatus las placas de petri se mantendrán en

oscuridad, a una temperatura ambiental de unos 24°C.,durante unos 10-15
días. Por favor observe la zonalidad del micelio en anillos concéntricos.
¿Que puede ir mal?
• Durante todo este tiempo es importante vigilar los cultivos, porqué
bacterias o incluso mohos pueden aparecer. En este caso habrá que
transferir los trozos sanos de micelio a otra placa con medio nutritivo,
hasta que obtendremos un cultivo sano.
• También las mismas condiciones son favorables para las bacterias.
Cuando estas aparecen en un cultivo, se reconocen con facilidad por
el aspecto grasiento, y el olor desagradable.
Inoculación del grano.
Preparar los frascos de vidrio
¿Por qué es importante el filtro de aire?

Cuando las setas digieren un sustrato, producen dióxido de carbono

(CO2), y consumen oxígeno (O2). El CO2 es tóxico para el micelio, por lo
cual es importante que los frascos de vidrio tengan un filtro para el
cambio de gases. De esta manera el micelio "podrá respirar". Esto es un
factor bastante importante que puede determinar el éxito o el fracaso
de un intento de crecimiento.
Se puede usar las fibras de relleno de almohadas…

Las fibras de relleno de almohadas (polyfil) contienen

un ingrediente activo que previene la acumulación de
ácaros, y bacterias. Exactamente lo que nos interesa.
Además las fibras de relleno son ignifugas, o sea:
resisten a altas temperaturas.
Como nos interesa esterilizar el medio de cultivo a una
temperatura de 121°C, las fibras de relleno de
almohadas son un buen material a usar.
¿Como preparar los tarros de vidrio con el filtro de aire?
Semilla esterilizada con el procedimiento anterior en frascos
Semilla esterilizada en bolsas de polietileno.
Para preparar el inoculo:
Antes de nada, asegúrate que todo está limpio y desinfectado. Friegue
el suelo con agua y lejía, limpie la mesita con desinfectante. Date una
ducha y ponte ropa recién lavada. La más mínima falta de higiene en
este momento repercutirá negativamente en los futuros resultados.
Ahora puedes empezar:

1. Mire que las culturas de micelio en placas de petri sean vigorosas,

sanas, libres de contaminantes, y si es posible no más viejas de 2
semanas.
2. Limpie el exterior de la placa de petri con alcohol.
3. Limpie el exterior del bote a inocular con alcohol.
4. Esterilize el bisturí con el mechero calentándolo al rojo vivo, y deje
que se enfríe unos segundos.
5. Corte el cultivo micelial en sectores, directamente en la placa de
petri.
6. Abra la placa de petri, coja 1-2 sectores de agar colonizado en la
punta del bisturí, cierre la placa de petri, abra el frasco y deje caer
dentro el agar colonizado.
7. Ahora cierre la tapa del frasco.
• Tomar una porción de
Micelio, con una
cucharilla o cuchilla
previamente esterilizarla
con alcohol y colocarlo en
el nuevo sustrato.
• Después de tomar 2 ó 3
porciones de “Micelio
Madre” cerca de la flama,
colocar los frasco o bolsas
inoculados en un lugar
obscuro y a temperatura
constante.
Primeras etapas del crecimiento del micelio en un frasco con sustrato
de semilla de trigo previamente esterilizado.
Principio de crecimiento del Micelio después de la inoculación (5 días)
SECUENCIA DE CRECIMIENTO DEL MICELIO EN FRASCOS
CONTENIENDO GRANOS DE TRIGO
Semilla de trigo colonizada por micelio
Producción de micelio para cultivo
almacenado en refrigeración
Tipos de granos de inoculación
El grano es el corazón de un cultivo. La fuente de nutrientes más
importante que va a poder obtener el micelio para crecer. El grano
proporciona todos los nutrientes que el micelio necesita para su correcto
desarrollo. Y solo presenta tres inconvenientes:

1. Contiene poca agua, por lo que debe hidratarse.

2. Contiene ciertas endosporas (bacterias resistentes al calor), por lo que
debe esterilizarse.
3. En el mercado se vende muy caro (una vez colonizado; a lo que
llamamos Spawn).
Tamaño y número de granos:
• Mientras más grande sean los grano más espacio libre quedará entre
los mismos.
• Mientras mayor sea el grano más tiempo le costará al micelio llegar
hasta el núcleo y colonizarlo en su totalidad.
• Un grano totalmente colonizado (“Spawn”) es prácticamente inmune
al ataque de estos contaminantes, pudiendo separarse y exponerse
sin problemas al aire ambiental antes de inocular con él cualquier
sustrato.
 Actividad bacteriana:
• Casi cualquier grano de cereal contiene endosporas
en su núcleo, por lo que será necesario esterilizarlo
una vez hidratado para acabar con estos
microorganismos.

• Esterilizar, en la práctica, acaba con casi la totalidad

de estas endosporas, aunque algunas siempre
sobreviven.
Hidratación:
Hay dos métodos principales para hidratar convenientemente
un sustrato:
1. mantenerlo en remojo durante varias horas (o días);
2. cocerlo a una temperatura determinada durante unos
minutos.
• El primer método es más lento pero mucho más sencillo, ya
que no hace falta energía para llevarlo a cabo y los granos se
hidratarán hasta casi su punto óptimo, absorbiendo una
correcta cantidad de agua.
• El segundo método es más rápido y consigue un mayor
porcentaje de hidratación (acelerando su colonización), pero
es más costoso y puede desintegrar algunos granos durante el
proceso.
Tipos de granos usados como Spawn:
Centeno:
• Es el tipo de grano que se ha
utilizado desde siempre en la
producción de Spawn. Se
trata de un grano rojizo, muy
nutritivo, barato y de tamaño
medio. Para hidratar el grano
convenientemente debe
cocerse de 30 a 40 minutos.
Trigo:

• Es de tamaño y composición similar al

centeno. También es necesario cocerlo
para su hidratación. Ha tenido siempre
fama de contener un mayor número de
endosporas que el centeno.
Mijo:

• Este cereal es uno de los más nutritivos

y pequeños que se encuentran en el
mercado, lo que implica un aumento del
número de puntos de contacto del
micelio, reduciendo enormemente el
periodo necesario de incubación. Puede
hidratarse manteniéndolo en remojo de
12 a 24 horas.
Arroz:

• Se utiliza fundamentalmente el grano integral

(con cáscara)
• Se trata de un grano tremendamente nutritivo
y versátil, pero debemos destacar que NO es el
grano blanco que encontramos en nuestro país
en cualquier supermercado.
Avena:

• Se trata de uno de los granos más

nutritivos del mercado. Es de tamaño
medio y debe utilizarse en su versión
integral (con cáscara y entero), no
partido, prensado o molido como se
encuentra en los supermercados.
Sorgo:

• Es un grano barato y pequeño (algo más

grande que el mijo) que se produce en
grandes cantidades y que lo usan muchas
empresas productoras de micelio.
Maíz:

• Es un grano de tamaño medio-grande

• Contiene altos niveles de azúcares, lo que hace
que el micelio lo colonice vigorosamente. Sin
embargo, su gran tamaño compensa su tiempo
de colonización, mayor que para otras especies
de grano.
Alpiste: Semilla de Césped:
• Se trata del grano del futuro que
• Es un grano muy pequeño que se
más expectativas está creando.
utiliza principalmente para la cría
de aves. • Es muy pequeño y nutritivo, fácil
de hidratar por inmersión, y que
• Es relativamente barato, contiene
otorga más puntos de colonización
mucha cáscara (salvado) y es
suficientemente nutritivo. que cualquier otro grano.
• Tiene dos problemas principales:
• Puede hidratarse por inmersión.
que puede contener pesticidas y
que es bastante caro.
 Suplementos y aditivos
Los principales componentes que éstos ponen a disposición del micelio son
fundamentalmente 5, y no todos son buenos: calcio, azufre, magnesio,
carbono y nitrógeno.
Lista de suplementos y aditivos que podemos
incorporar a un sustrato:
Yeso agrícola (o Gypsum en
inglés):

Es un estabilizador del pH y un
antiaglutinante, que proporciona calcio y
azufre en grandes cantidades. Se suele añadir
en no más de un 5% al grano hidratado antes
de esterilizarlo. Puede aumentar de un 20 a
un 30% el rendimiento de un sustrato.
•
 Carbonato Cálcico (CaCO3):
• Se trata de una sustancia que previene los cambios
bruscos en el pH del sustrato.
• Proporciona principalmente calcio al sustrato.
• El Carbonato de Calcio previene estas importantes
bajadas de pH en aquellos sustratos, que ya tienen
un nivel de pH adecuado para el crecimiento del
sustrato.
 Hidróxido de Calcio:
• Hablamos de cal hidratada, o lo que es lo mismo,
una sustancia mineral en forma de polvo, de
composición Ca(OH)2, que se obtiene del
tratamiento controlado de cal viva con agua.
• Es una base fuerte que aumenta el pH de
cualquier solución o sustrato y que entrega
importantes cantidades de calcio.
Salvados de cereales:
• Se trata de la cáscara o corteza de diversos granos de
cereal, sobre todo de trigo y avena.
• Es el principal suplemento que se incorpora a un
sustrato para aumentar su rendimiento. Es uno de esos
compuestos que llamamos suplementos nitrogenados.
• No deben usarse en un porcentaje superior al 20-30%.
Pueden provocar un aumento de la temperatura
interna del sustrato y acabar con el micelio.
 Café (posos):
• Hablamos de un tipo de suplemento cuyo uso
va en aumento en las grandes ciudades. Se
trata, ni más ni menos, de los restos o posos de
café gastados como residuo diario de la
industria hostelera.
• Tiene una composición nutritiva algo menor a la
de los salvados de cereales.
• Entre sus inconvenientes destaca la necesidad
de tener que esterilizar el sustrato y la notable
bajada de pH que provoca su adición, al tener
un pH en torno a 4,5-5,5.
Estiércoles (de vaca, caballo, gallina o conejo):

• Se trata de un tipo de suplemento menos nutritivo el salvado de

cereal o los posos de café, pero que se encuentra previamente
digerido o “tratado”. Es ideal para añadir en cierta cantidad a los
residuos agrícolas que se vayan a compostar al aire libre,
otorgando una gran cantidad de nutrientes.
• Si se añade directamente a los sustratos de crecimiento, deberá
tratarse antes para eliminar las posibles cantidades de amoniaco
presente
• Hay varias formas de estiércol disponible. Las más usuales y
recomendables son el de vaca y caballo, al encontrarse ambos
más procesados y digeridos. El de conejo se sitúa en un punto
intermedio entre estos dos y el de gallina no se recomienda su
uso en sustratos.
Otros suplementos: alfalfa, orujillo, comida
para perros… etcétera.
• Se trata de nuevos suplementos que se están empezando a
incorporar a diversos sustratos. Su composición nutritiva suele ser
alta, así como contener altos niveles de nitrógeno, por lo que es
necesaria la esterilización de sus sustratos.
Problemas y contaminaciones en el Spawn
FIN Modulo 3
Cultivo de Pleurotus en paja