Tipificación del sistema ABO
Objetivo: Al término de la práctica el alumno determinara los cuatro grupos sanguíneos en
sangre del sistema ABO.
Generalidades: En la membrana del glóbulo rojo existen complejos químicos que representan
los llamados grupos o factores sanguíneos Fué Landsteiner quién realizó en 1900 el importante
descubrimiento de que los eritrocitos del hombre pertenecen a varios sistemas Antigénicos
diferentes, este autor descubrió el sistema A B O.
La clasificación del grupo sanguíneo está, determinada por la presencia o ausencia
de los aglutinógenos en el eritrocito y las aglutininas en el suero. Para la identificación del
grupo sanguíneo ABO se deben hacer dos investigaciones consecutivas: la primera se llama
tipado globular y es la determinación de los aglutinógenos eritrocíticos con antisueros o
aglutininas conocidas, la segunda se llama tipado sérico o contratipado y es la identificación de
las aglutininas utilizando glóbulos rojos con antisueros conocidos, los sueros patrones deben
ser de alto titulo, estos sueros pueden ser preparados en el laboratorio o en su defecto, se
consiguen en las casas comerciales de productos biológicos. La investigación de los
aglutinógenos eritrociticos se deben realizarse por el método de tubo de ensayo.
Se utilizan tres reactivos llamados: suero anti A (de sangre b), de color azul y que
contiene aglutininas alfa, suero anti B (de sangre a), de color amarillo y que contiene
aglutininas beta, existe además otro suero, el anti AB que contiene las dos aglutininas, alfa y
beta.
Fundamento: Los antígenos de los hematíes son estructuras químicas que proporcionan
propiedades específicas a su superficie y que solo pueden detectarse con anticuerpos que
corresponden a esos antígenos la mayoría de estas reacciones antígeno-anticuerpo implican la
aglutinación o hemólisis de los hematíes.
Material y equipo:
Ø 1 gradilla
Ø 16 tubos 10 x 75
Ø 4 tubos 13 x 100
Ø 4 pipetas Pasteur con bulbo
Ø Centrifuga clínica
Ø Centrífugas Serofuge
Ø Sueros hemoclasificadores Anti-A, Anti B. Anti-AB
Ø Albúmina bovina al 22% o 33%
Ø Solución fisiológica en Pizeta
Ø Sangre problema
Tipificación en tubo.
Técnica:
1. Se prepara una suspensión de glóbulos rojos al 5%, previamente lavado en solución
fisiológica.
2. En una gradilla colocar 4 tubos de ensaye de 10 x 75, marcados con las letras A, B, AB y
Control.
3. En cada tubo poner una gota de suspensión de glóbulos rojos al 5%.
4. En el tubo marcado con A poner una gota de suero anti A, en el tubo marcado con B,
poner una gota de suero anti B, en el tubo AB una gota de suero anti AB
5. Se debe hacer un control agregando a 1 tubo con una gota de albúmina bovina al 22 %
6. Mezclar perfectamente los tubos y dejar reposar por dos minutos.
7. Mezclar nuevamente y se procede a centrifugar a 2,500 r p m durante un minuto
8. Se sacan los tubos cuidadosamente de la centrifuga evitando que se mezclen los
glóbulos rojos que quedan depositados en el fondo de los tubos y para efectuar la
lectura se sacuden cuidadosamente el botón del fondo, uno por uno buscando si existe
aglutinación macroscópica.
9. Si la aglutinación tuvo lugar, puede comprobarse en el seno del liquido claro los
hematies que nadan y se flotan formando pequeños agrupamientos, si el resultado es
negativo los glóbulos rojos se distribuyen uniformemente por el líquido.
INTERPRETACION DE LOS RESULTADOS
Técnica en placa Reacción positiva: los hematíes aglutinan en segundos y permanecen
aglutinados al balancear la placa. Indica la presencia del antígeno eritrocitario
correspondiente. Reacción negativa: no se observa aglutinación a los 2 minutos, indicando
ausencia del antígeno correspondiente.
Técnica en tubo Lectura: golpear suavemente el tubo para desprender el sedimento y
examinar macroscópicamente la presencia o ausencia de aglutinación. Reacción negativa: no
se observa aglutinación a los 2 minutos, indicando ausencia del antígeno corespondiente. La
resuspensión de los glóbulos rojos es homogénea. Reacción positiva: los hematíes aglutinan en
segundos y permanecen aglutinados una vez resuspendidos. Indica la presencia del antígeno
eritrocitario correspondiente. En casos dudosos se recomienda esperar 2 minutos. Todos los
resultados obtenidos en las pruebas de glóbulos rojos (directas), excepto las realizadas sobre
muestras de sangre de infantes, deben ser confirmadas por una prueba sobre suero (inversa),
usando eritrocitos tipificados A1 , A2 , B y O. En la siguiente tabla se muestran los perfiles
esperados ¿Qué es la prueba inversa de grupo sanguíneo?
Si los glóbulos permanecen juntos, eso significa que la sangre reaccionó con uno de los
anticuerpos. El segundo paso se llama prueba inversa. La parte líquida de la sangre sin células
(suero) se mezcla con sangre que se sabe que pertenece al tipo A o al tipo B. Las personas con
sangre tipo A tienen anticuerpos anti-B.
PRUEBA DIRECTA
buscar los antígenos eritrocitarios utilizando sueros conocidos (anti-A, anti-B, anti- D
y/o anti-AB)
Si usted tiene sangre tipo A, solo puede recibir sangre tipos A y O.
Si usted tiene sangre tipo B, solo puede recibir sangre tipos B y O.
Si usted tiene sangre tipo AB, puede recbir sangre tipos A, B, AB y O.
Si usted tiene sangre tipo O, solo puede recibir sangre tipo O.
Si usted es Rh+, puede recibir sangre Rh+ o Rh-.
Si usted es Rh-, solo puede recibir sangre Rh-.
La sangre tipo O se puede dar a cualquier persona con cualquier tipo de sangre. Es por eso que
a las personas con sangre tipo O se las llama dadores universales de sangre.
PRUEBA DE GEL
Utiliza microtubos contenidos en una tarjeta de gel.Este formato permite la centrifugación
simultánea de los tubos(6) en equipos especialmente diseñadosLa incubación del Ac con los GR
en suspención se realiza en la parte superior del tubo ,luego se centrifuga para que los GR
entren en contacto con el As que baña el gelLos geles actúan como filtro,reteniendo los
aglutinados y dejando pasar los GR libres que se depositan en el fondo
7 EXISTEN 3 FORMULACIONES BÁSICAS DEL GEL
Gel neutro:Solo contiene la matriz del gel-sephadex para detección deaglutinados producidos
por Ac aglutinantesPrueba inversa ABO,investigación de Ac frios y pruebas enzimáticas
Gel especifico:Mezcla de gel-sephadex contra un Ag de gr sanguineoDeterminación de Gr
sanguíneo
Gel antiglobulina:Se usa en la P de Coombs para identificar Ac antieritrocitarios incapaces de
producir aglutinación directa
11 Puede ser utilizado para detectar e identificar Ags y Ac,pruebas de compatibilidad
pretransfusional
En los tubos que contiene el panel ABO,el gel está en medio salino,mientras que en los del
panel selector está en reactivo de CoombsVENTAJAS:Puede efectuarse técnicas en ½ salino,
enzimático,antiglobulinicoEs automatizableDESVENTAJAS:Costo y equipamiento
12 Partículas de gel :filtros que atrapan los aglutinados
Aglutinados grandes:Parte superiorAglutinados pequeños: Parte InferiorNo
aglutinados :extremos en picoAPLICACIONES:Detectar e identificar Ac o AgPruebas de
compatibilidad
