Universidad de Guayaquil
Facultad de Ciencias Químicas
Carrera: Bioquímica y Farmacia
Guía de Prácticas de
Laboratorio
Bioquímica I
Práctica No. 2
Aguas y Soluciones
Fecha:
22 / 06 /2022
Docente: Ing. Yaime Delgado Arcaño
Cabezas Ramos Damaris Carina
Chávez Flores Gabriela Mayerli
Integrantes: Mendoza Shanchez Julexy Betsabe
Pachay Huacon Scarlet Paola
Robles Reyes María José
Objetivos de la práctica de laboratorio
• Reconocer las propiedades fisicoquímicas del agua y de las soluciones.
• Realizar cálculos para la preparación de soluciones porcentuales, molares y normales.
• Elaborar una curva de calibración con una solución de fenolftaleína utilizando el
espectrofotómetro.
Instrucciones o consideraciones previas (marco teórico)
El agua es la molécula más abundante en los sistemas vivientes y de ahí la importancia de abordar el
estudio de las soluciones acuosas en un curso de Bioquímica. De acuerdo con su estado físico, las
soluciones se clasifican en gaseosas, líquidas y sólidas. Las soluciones líquidas son las más comunes
y, tal vez, las más importantes para el químico. Generalmente se llama disolvente al componente de
una solución que se encuentra en mayor cantidad; los otros componentes se llaman solutos.
Es importante que el estudiante sepa definir y diferenciar los siguientes términos: mol, equivalente
químico, normalidad, molaridad, molalidad, solución porcentual p/ p, solución porcentual p/ v,
solución porcentual v/ v para poder emplearlos correctamente en los cálculos y determinaciones que
así lo requieran.
El término “espectroscopia” proviene de la palabra “espectro”, que originalmente se refería a los
múltiples colores de luz que aparecían al analizar luz blanca a través de un prisma. Conlleva, por lo
tanto, el uso de múltiples longitudes de onda de luz. Para medir la absorbancia de una solución se
emplea un instrumento llamado espectrofotómetro. La absorbancia es una medida cuantitativa útil y
está relacionada con la concentración a través de la ley de Lambert-Beer.
Soluciones y reactivos de laboratorio:
Agua destilada
Solución de fenolftaleína al 0.5%
Solución de etanol al 50%
NaOH
Materiales
Agitador de vidrio
Gradilla para tubos
Matraz aforado de 100 ml
Pipetas
Probeta de 100 ml
Tubos de ensayo
Vasos de precipitado de 250 ml
Equipos de laboratorio
- Espectrofotómetro
Técnica operatoria o procedimiento (Actividades por desarrollar)
Preparación de reactivos
1. Solución de etanol a 50%:
- Mezclar partes iguales de alcohol y agua destilada, tomando en cuenta la pureza del alcohol. Ajustar
a pH de 9 con gotas de NaOH a 40%.
2. Solución de fenolftaleína a 0.5%:
- En un matraz volumétrico de 100 ml, colocar 0.5 g de fenolftaleína, mezclar y aforar con alcohol a
50%.
3. Procedimiento para realizar la curva de calibración:
- Preparar 6 tubos de ensayo con concentraciones diferentes de fenolftaleína, partiendo de una solución
madre de fenolftaleína al 0,5% (p/V). Realizar previamente los cálculos correspondientes para
preparar cada concentración (C) y anotarlos en el informe.
- Leer el espectrofotómetro a una longitud de onda de 530 nm, ajustando a cero con el blanco.
- Para las diferentes diluciones, graficar los valores obtenidos en la práctica (DO 1 versus
concentraciones), empleando Excel.
- Al graficar los valores de densidad óptica (DO) se obtiene una línea recta, lo que indica que la DO es
directamente proporcional a la concentración (DO ∝ C).
- Realizar un análisis de regresión lineal para determinar el coeficiente de correlación.
Resultados obtenidos (cálculos, datos, tablas, gráficos y otros que así se consideren)
Además de colocar, analizar y discutir los resultados obtenidos, los estudiantes deberán
realizar los cálculos para la preparación de las siguientes soluciones:
Preparar 5ml para cada solución
Solución madre: 100ml Fenolftaleína al 0.5%
Tubo 1: 0.1% Tubo 2: 0.2%
V1.C1 = V2.C2 V1.C1 = V2.C2
V1 = (5ml)(0.1%) / 0.5% V1 = (5ml)(0.2%) / 0.5%
V1 = 1ml (aforar con etanol) V1 = 2ml (aforar con etanol)
Tubo 3: 0.3% Tubo 4: 0.4%
V1.C1 = V2.C2 V1.C1 = V2.C2
V1 = (5ml)(0.3%) / 0.5% V1 = (5ml)(0.4%) / 0.5%
V1 = 3ml (aforar con etanol) V1 = 4ml (aforar con etanol)
Tubo 5: 0.5% Tubo 6: 0%
V1.C1 = V2.C2 V1.C1 = V2.C2
V1 = (5ml)(0.5%) / 0.5% V1 = (5ml)(0%) / 0.5%
V1 = 5ml V1 = 0ml = tomar 5ml de etanol
Valor de la fenolftaleína
--- nm 530 nm
Valor del solvente y
ajustar a 0
CURVA DE CALIBRACIÓN DE LA FENOLFTALEÍNA
TUBO CONCENTRACIÓN (%) ABSORBANCIA
1 0,1 0,16
2 0,2 0,296
3 0,3 0,389
4 0,4 0,527
5 0,5 0,655
6 0 0
CURVA DE CALIBRACIÓN DE LA FENOLFTALEÍNA
0,7
y = 0,1221x + 0,0391
0,6
0,5 R² = 0,9969
ABS (nm)
0,4
0,3
0,2
0,1
0
0,1 0,2 0,3 0,4 0,5
CONC (%)
ABSORBANCIA Lineal (ABSORBANCIA)
Cálculos para la preparación de las siguientes soluciones:
[Link] 250 ml de una solución de cloruro de sodio a 0,9% (p/v). Describir los cálculos para
conocer la cantidad de cloruro de sodio que debe pesarse, para aforarla al volumen deseado.
P g de soluto
Datos: % V = ml de solucion 𝑥100
0,9% de cloruro de sodio 0,9% 𝑥 250𝑚𝑙 𝑑𝑒 𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜
= 2,25g NaCl
V= 250 100
G=?
2. Preparar 500 ml de una solución de ácido fosfórico (H 3PO4) a 0,1 M, tomando como base los
siguientes datos:
a) Peso molecular (PM) del ácido fosfórico: 98 g/mol.
b) Pureza de 85%.
c) Densidad de 1,71 g/cm3.
Describir los cálculos efectuados para conocer el volumen del ácido fosfórico concentrado que se
utilizó para preparar 500 ml de esa solución.
M= n/v 500 𝑚𝐿 ∗ 1𝐿 = 0.5 𝐿
1000 𝑚𝐿
m= M*pm*L
m= 0.1M * 98 * 0.5L
1 𝑐𝑚3
3
12.1176𝑔 𝐻3PO4 ∗ 𝑔 = 7.0863 𝑐𝑚 𝐻3𝑃𝑂4
1.71 𝑐𝑚3
m= 10.3g H3PO4
Se necesitan 7.08 cm3 de H3PO4 para preparar 500 mL de solución.
3. Preparar 500 ml de una solución de NaOH a 0,1 M, con peso molecular de 40. Describir los
cálculos para saber cuántos gramos se deben tener de NaOH.
Datos:
V =500 ml solución de NaOH → 0,5 l Convertimos ml a l
M =0,1 1𝑙
n = 0,05 moles NaOH 500 ml . = 0,5 𝑙
1000 𝑚𝑙
Finalmente, calculamos el número de
moles:
40 𝑔 𝑑𝑒 𝑁𝑎𝑂𝐻
Despejamos la fórmula de M: 0,05 mol x = 2 𝑔 𝑁𝑎𝑂𝐻
𝑛 1 𝑚𝑜𝑙 𝑁𝑎𝑂𝐻
M=
𝑉
↧
n =𝑀 𝑥 𝑉 = 0,1𝑀 𝑥 𝑂, 5 𝑙 = 0,05𝑚𝑜𝑙𝑒𝑠 R//: Se deben tener 2g de NaOH para
preparar una solución de NaOH 0,1M.
4. Preparar dos soluciones: una de HCl y otra de NaOH a 0,01 N. Se necesitan 1 000 ml de cada
una. El PM del HCl es de 36,5 y su densidad a 20 °C es de 1,060 g/ml. El PM del NaOH es de 40.
Describir los cálculos para conocer las cantidades de solutos (HCl y NaOH) que hay que utilizar.
Soluto P.m V D N
NaOH 40 1000 --- 0.01
HCl 36.5 1000 1.060 ---
NaOH
0.01 𝑁
= 0.4 𝑔 𝑁𝑎𝑂𝐻
1𝐿
0.4 𝑔 𝑁𝑎𝑂𝐻 = 0.4 𝑔 𝑁𝑎𝑂𝐻
HCl
1060 ∗ 36.5
𝑚= = 38.69 𝐻𝐶𝑙
1000 𝑚𝐿
Se necesitan 0.4 g de NaOH para preparar la solución 0.01 M, y, se necesitan 38.69 mL de HCl
para preparar la solución con una densidad de 1.060 g/mL
Conclusiones:
En esta práctica pudimos realizar los cálculos de concentración porcentuales, tanto como
normales y molares.
Pudimos determinar aquella curva que corresponde a las medidas de absorción en función
de la fenolftaleína
Con respecto a la curva determinada, esta nos indicó que la absorbancia tiene una relación
directa con la concentración ya que se obtuvo una curva lineal.
Recomendaciones
El NaOH pesado se lleva a un vaso de precipitado previamente lavado y curado con agua
destilada.
Se debe disolver la sustancia con una pequeña cantidad de agua destilada.
Se recomienda llenar y medir con precisión los volúmenes de cada sustancia.
Usar traje de protección en el laboratorio (bata, guantes, mascarillas, etc.…)
Bibliografía
• Bettelheim, F. A., & Landesberg, J. M. (2012). Laboratory experiments for introduction to general,
organic and biochemistry. Cengage Learning.
• Roca, P., Oliver, J., & Rodríguez, A. M. (2004). Bioquímica: técnicas y métodos. Editorial Hélice.
• Sánchez, S. S.; Flores, L. J.; Gurrola, C.; Heredia, P. (2014). Manual de prácticas de laboratorio de
bioquímica. McGraw-Hill Interamericana.
1
La absorbancia, denominada densidad óptica de transmitancia o densidad óptica (DO), es la cantidad de
radiación que absorbe un material. Según la Ley de Lambert Beer: La absorbancia de una muestra a
determinada longitud de onda depende de la cantidad de especie absorbente con la que se encuentra la luz
al pasar por la muestra.
