UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CALLAO
FACULTAD DE INGENIERÍA QUÍMICA
ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA QUÍMICA
LABORATORIO DE ANÁLISIS INSTRUMENTAL – 92G
Informe N°1: Determinación de la longitud de onda de un
compuesto coloreado
Docente: RODRIGUEZ VILCHEZ RICARDO
Integrantes:
Paz Cieza, Paul Nike
Reyes Poma, Jesús Alberto
Valdivia de la Cruz, Marco Antonio
Villegas Áreas, Fernando José
CALLAO – PERÚ
2022
1. INTRODUCCIÓN
El fondo del espectro se debe a la capacidad de las moléculas para absorber
radiación, incluida la radiación en el espectro UV-visible. Las longitudes de onda
de radiación que una molécula puede absorber y la eficiencia con la que son
absorbidas dependen de la estructura atómica y las condiciones ambientales (pH,
temperatura, fuerza iónica y constante dieléctrica), por lo que esta técnica se
convierte en una valiosa herramienta para la identificación y caracterización de
biomoléculas
Las moléculas pueden absorber energía luminosa y almacenarla como energía
interna. Al determinar la longitud de onda (λ) de un compuesto coloreado, se
confía en que en el espectro electromagnético se configuran las longitudes de
onda de todos los elementos coloreados y los que interactúan con los reactivos se
colorean, se manchan y con mucha facilidad, para poder identificarlos.
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2. OBJETIVOS
Determinar la maxima longitud de onda de una sustancia.
Conocer el manejo y funcionamiento del espectrofotómetro lambda 3B
doble Haz Perkin Elmer UV-VIS.
Demostrar que a diferentes concentraciones de un sustancia se obtendra
la máxima absorción de onda.
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3. MARCO TEORICO
2.1 La espectroscopia
La espectroscopia UV visible es una técnica analítica que ayuda a determinar la
concentración de un compuesto en una solución. Se basa en que las partículas
absorben radiación electromagnética, y por tanto la cantidad de luz absorbida
depende linealmente del foco. Para realizar este tipo de medición se utiliza un
espectrofotómetro, en el cual se puede determinar la longitud de onda de la luz
que pasa a través de la solución y medir la cantidad de luz que se absorbe.
En espectroscopia, el término luz se aplica no solo a la forma visible de
radiación electromagnética, sino también a las formas invisibles de radiación
ultravioleta e infrarroja. En la espectroscopia de absorción, se utilizan las
regiones ultravioletas (ultravioleta cercano, 195-400 nm) y visible (400-780 nm).
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En un análisis físico, la combustión es la oxidación de los combustibles. Por lo
tanto, es necesaria la presencia de oxígeno para este tipo de procesos y,
además, los combustibles se compondrán de sustancias volátiles o de fácil
encendido en la oxidación, generalmente se constituyen de materiales como
azufre, hidrógeno y carbono.
Las moléculas pueden absorber energía luminosa y almacenarla como energía
interna. Esto permite el inicio de ciclos de vida para muchos organismos,
incluida la fotosíntesis en plantas y bacterias. La mecánica cuántica nos dice
que la luz esta compuesta de fotones, cada uno con una energía.
Efotón = hν = h(c/λ)
Donde c es la velocidad de la luz y la frecuencia, λ es la longitud de onda y h =
6,6 10-34 J⋅s es la constante de Planck. Cuando decimos que una sustancia
química absorbe luz de longitud de onda λ, esto significa que las moléculas de
esa sustancia absorben fotones de esa longitud de onda. Cuando una molécula
absorbe un fotón en este rango espectral, se excita al transferir un electrón
desde una órbita terrestre a un orbital excitado de mayor energía. En este caso,
estudiaremos la absorción de luz cerca de las regiones ultravioleta (λ≈325-420
nm) y visible (λ≈420-900 nm), de modo que la molécula almacena energía.
Cantidad de fotones:
A + h⋅ν → A* E(A*) = E(A) + Efotón
La energía se conserva, la diferencia de energía entre el estado fundamental de
la molécula (A) y su estado excitado (A*) debe ser exactamente igual a la
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energía del fotón. En otras palabras, la molécula solo puede absorber fotones
con energía h⋅ν igual a la energía del estado molecular excitado. Cada molécula
contiene una serie separada de estados excitados (o bandas) que dependen de
su estructura electrónica y la distinguen de otras moléculas. Así, el espectro de
absorción, es decir, la luz absorbida por la longitud de onda, constituye una
señal verdadera para cada sustancia o molécula.
2.2 Transmitancia(T)
La transmitancia óptica es el cociente entre la intensidad luminosa emergente
y la intensidad luminosa incidente sobre una muestra de solución traslúcida
que ha sido iluminada con luz monocromática.
El proceso físico del paso de la luz a través de una muestra se llama
transmisión luminosa y la transmitancia es una medida de la transmisión
luminosa. La transmitancia es un valor importante para determinar la
concentración de una muestra que generalmente está disuelta en un solvente
como puede ser agua o alcohol, entre otros.
I
T=
Io
Donde:
6
Io es la intensidad de la luz incidente en la muestra
I es la intensidad de la luz que atraviesa el medio
T transmitancia
2.3 Absorbancia(A)
De lo anterior se desprende que la absorbancia (A) o luz que es absorbida
por la muestra es igual al logaritmo en base diez del recíproco de la
transmitancia (T) o bien al -log10 de la transmitancia, en el que el disolvente
puro o (“blanco”) es el material de referencia; esto es:
A=−log ( %T )
2.4 Ley de Beer-Lambert
En óptica, la ley de Beer-Lambert, también conocida como ley de Beer o ley
de Beer- Lambert-Bouguer es una relación empírica que relaciona la
absorción de luz con las propiedades del material atravesado.
Sus ecuaciones (o relaciones) se pueden expresar como:
Donde:
A es la absorbancia
Io es la intensidad de la luz incidente
I1 es la intensidad de la luz una vez ha atravesado el medio
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L es la distancia que la luz atraviesa por el cuerpo
C es la concentración de sustancia absorbente en el medio
K o alfa es el coeficiente de absorción o la absorbancia molar
2.5 Espectrofotómetro Lambda 3B de Perkin Elmer
El espectrofotómetro UV-Visible de la serie Lambda 3B de Perkin Elmer,
modelo C618- 0437, tiene una óptica de doble haz, que proporciona una
línea de base plana y estable y significa que no es necesario retirar la
muestra para cada longitud de onda medida. Tiene un ancho de banda
espectral de 1nm y puede escanear todo el rango de longitudes de onda de
190 - 900nm.
Este es el espectrómetro que usamos en nuestro laboratorio.
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Puesta en operación del Lambda 3B
MODO DE ABSORCIÓN
1. Seleccionar ABS luego de presionar la tecla MODE.
2. Ubicar la longitud de onda deseada y presionar la tecla GOTO λ.
3. Insertar la muestra blanca, y su referencia si es apropiado, y
presionar la tecla AUTO ZERO.
4. Insertar cada muestra desconocida y leer la absorbancia de la
muestra en la pantalla digital ordinaria.
MODO DE % TRANSMISIÓN
Seleccionar la tecla º/T luego de presionar la tecla MODE.
Seguir los pasos A, del 2 al 4 del procedimiento anterior
MODO DE CONCENTRACIÓN
I. Seleccionar CONC luego de presionar la tecla MODE.
II. Indicar la longitud de onda deseada y luego presionar la tecla GOTO λ.
III. Insertar la muestra blanca, y su referencia si es apropiado, y
presionar la tecla AUTO ZERO.
IV. Insertar el estándar en la posición de la muestra, indicar el
valor de la concentración, presionar la tecla AUTO CONC, y se
calcula el factor K automáticamente (si desea usar un factor K
específico) en lugar de un valor de concentración, insértese el
estándar en la posición de la muestra, ubicarse en el factor K,
presionar la tecla LOAD y luego presionar la tecla AUTO
CONC.
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V. insertar cada muestra desconocida y leer el valor de la concentración
de la muestra en la pantalla digital ordinaria.
4. MATERIALES Y REACTIVOS
Materiales
MATRAZ AFORADO
50ml
VASO DE 100ML
LUNA DE RELOJ
10
BURETA DE 25ml
ESPATULA
PISETA
BAGUETA
EQUIPO
BALANZA ANALITICA
ESPECTRO VIS
REACTIVOS
11
NAOH
FENOLFTALEINA
KMnO4
5. PARTE EXPERIMENTAL
Caso 1:
Se tiene una solución de 66mg/L de Mn utilizando KMnO4 en 100ml en
agua.
Caso 2:
Se tiene una solución 0.15M de CO(NO3)2.6H2O en 100ml con H2O.
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Caso 3:
Landa de un indicador de ácido o base fenolftaleína
6. ANALISIS O RESULTADOS
Caso 1:
Se procede calcular la cantidad de masa de KMnO4 para poder pesar
en la balanza.
Haciendo los cálculos obtenemos 0.018g de KmnO4.
Entonces el peso del vaso precipitado 28.767+0.018= 28.785g .
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Procedemos a echar agua destilada, y utilizar 5ml de solución disuelto en
25 ml en un matraz aforado.
Se procede a llevar al espectrofotómetro para calcular la ABS Y % T.
Obteniendo los siguientes datos orden 1, 2 y 3:
CASO I
1 2
%
λAT
0.044
9
4 0
5 .
0
. 8
4 0 8
5 5 .
5 3 5
0
. 8
4 0 5
6 6 .
0 8 5
14
λ A %T
450 0.045 90.1
455 0.054 88.2
460 0.069 85.3
465 0.093 80.8
465 0.089 81.5
470 0.11 77.6
470 0.109 77.7
475 0.13 74.2
475 0.128 74.5
480 0.171 67.5
480 0.168 67.9
485 0.208 62
485 0.207 62.1
490 0.221 60.1
490 0.22 60.2
495 0.262 54.7
495 0.258 55.2
500 0.329 46.8
500 0.326 47.2
3 PROMEDIO
λ A %T
450 0.047 89.8
λ A %T
455 0.056 88 450 0.045 90.100
460 0.07 85.2 455 0.054 88.233
465 0.093 80.8 460 0.069 85.333
470 0.11 77.6 465 0.092 81.033
475 0.13 74.2 470 0.110 77.633
480 0.171 67.4 475 0.129 74.300
485 0.208 62 480 0.170 67.600
490 0.221 60.1 485 0.208 62.033
495 0.262 57.7 490 0.221 60.133
500 0.328 47 495 0.261 55.867
500 0.328 47.000
GRAFICA:
0.350 100.000
90.000
0.300
80.000
0.250 70.000
% TRAMITANCIA
60.000
ABSORBANCIA
0.200
50.000
0.150
40.000
0.100 30.000
20.000
0.050 15
10.000
0.000 0.000
450 455 460 465 470 475 480 485 490 495 500
Caso 2:
Se utiliza 10 ml de sol 0.15M de CO disuelto en 25ml en el matraz
aforado.
Se procede calcular la cantidad de masa mediante cálculos, obteniendo
4.365g Co (NO3)2.6H2O.
CASO II
1 2
λ A %T
450 0.087 82.1
455 0.1 75.8
460 0.144 71.7
16
λ A %T
450 0.093 80.8
455 0.124 75.1
460 0.148 71.1
465 0.163 68.6 465 0.165 68.4
470 0.186 65.2 470 0.19 64.5
475 0.214 61.2
475 0.211 61.6
480 0.218 60.6
480 0.218 60.5
485 0.195 63.8
485 0.2 63.1
490 0.152 70.4
490 0.162 69
495 0.101 79.3
495 0.11 77.7
500 0.057 87.8
500 0.063 86.4
λ A %T λ A %T
450 0.099 79.7 450 0.093 80.867
455 0.127 74.6 455 0.117 75.167
460 0.151 70.7 460 0.148 71.167
465 0.168 67.9 465 0.165 68.300
470 0.193 64.1 470 0.190 64.600
475 0.215 61 475 0.213 61.267
480 0.216 60.9 480 0.217 60.667
485 0.191 64.4 485 0.195 63.767
490 0.146 71.3 490 0.153 70.233
495 0.095 80.3 495 0.102 79.100
500 0.052 88.7 500 0.057 87.633
GRAFICA:
17
El valor de la longitud de onda, será la proyección del punto de mayor valor de
ABSORVANCIA obtenido:
λ = 510 nm
Caso 3:
En este caso sería primero calibrar la maquina y proceder y calculo
lambda en la reacción de NaOH con fenolftaleína en intervalo 500-
600nm.
18
1 2
λ A %T λ A %T
500 0.882 13.2 500 0.81 18.8
510 1.14 7.3 1.054 8.9
510
520 1.44 3.7 1.336 4.6
520
530 1.849 1.4 1.725 1.9
530
540 2.261 0.3 2.082 0.8
540
550 2.233 0.3 2.007 1
550
560 1.528 3 1.328 4.7
560
570 0.749 18 0.639 23
570
580 0.306 49.5
580 0.26 55
590 0.113 77.1
590 0.098 80.4
600 0.038 91.6
600 0.032 42.8
3 PROMEDIO
λ A %T λ A %T
500 0.099 16.8 500 0.597 16.267
510 0.127 9.9 510 0.774 8.700
520 0.151 5.2 520 0.976 4.500
530 0.168 2.2 530 1.247 1.833
540 0.193 1 540 1.512 0.700
550 0.215 1.5 550 1.485 0.933
560 0.216 7.4 560 1.024 5.033
570 0.191 29.9 570 0.526 23.633
580 0.146 61.6 580 0.237 55.367
590 0.095 83.8 590 0.102 80.433
600 0.052 94.1 600 0.041 76.16719
GRAFICA:
20
El valor de la longitud de onda, será la proyección del punto de mayor valor de
ABSORVANCIA obtenido:
λ = 540 nm
7. CONCLUSIÓN
Se pudo determinar la longitud de onda de las 3 solución.
Mientras más cortos sean lo intervalos de la longitud de onda a tomar en
las corridas más exacto se obtendrá los resultados.
Se deber usar la cubeta de espectrofotometría de un material de vidrio
que de plástico.
8. RECOMENDACIONES
Realizar una correcta calibración del equipo con agua antes de cada
corrida
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En una de las cubetas de espectrofotometrías debe estar el solvente con
la que se disolvió el soluto en la muestra de patrón.
Realizar siempre 3 o más repeticiones en cada ensayo de para aumentar
la precisión.
Limpiar las cubetas cada vez terminado un ensayo con agua y secarlo
con papel.
22
