INFORME DE COMPONENTE 1601-2021

INFORME DE COMPONENTE
1601-2021

Nombre del
estudiante:
Grupo colaborativo:
Nombre del Tutor:

Práctica 1. Determinación de la concentración de carbohidratos y proteínas

Actividad 1. Determinación de la concentración de glucosa por un método
enzimático colorimétrico
Código del experimento 226
1. Registre los valores de absorbancia a 505nm medidos luego de preparar cada una de
las muestras

Absorbancia
Tubo
505nm

0 0

1 0,044

2 0,147

3 0,237

4 0,51

5 0,813

6 0,756

7 0,374

8 0,187

9 0,015

10 0,028

11 0,048

2. Gráfica de la curva Patrón

Absorbancia Volumen de Masa de Volumen de Volumen Concentración de

Tubo
505nm glucosa (µℓ) glucosa solución salina total (µℓ) glucosa (mg/dl)
 INFORME DE COMPONENTE 1601-2021
(mg) (µℓ)

0 0 0 0 1000 1000 0

1 0,044 30 0,003 970 1000 0,3

2 0,147 90 0,009 910 1000 0,9

3 0,237 150 0,015 850 1000 1,5

4 0,51 300 0,03 700 1000 3

5 0,813 500 0,05 500 1000 5

f(x) = NaN x + NaN

R² = 0 A vs CG
6600tán11a5660

6600tán9a5660
Absorbancia a 505 nm

6600tán7a5660

6600tán5a5660

6600tán3a5660

6600tán1a5660

6600tán28a5660
6600tán28a5660 6600tán1a5660 6600tán3a5660 6600tán5a5660
Concentración de glucosa (mg/dℓ)

3. Concentración de glucosa en los tubos 6 a 11

Registre los cálculos realizados

Para poder hallar la concentración de los tubos 6 y 11, se necesita de la ecuación lineal de
la aproximación de la línea recta de la gráfica de los tubos 0 a 5.

A=0,1646∗CG−0,0016

Tubo 6:

A=0,1646∗CG−0,0016
CG=4,603mg/dl
Tabla de los tubos del 6 INFORME DE COMPONENTE 1601-2021 al 11:

Concentración
Absorbancia
Tubo de glucosa
505nm
(mg/dl)

6 4,603 0,756

7 2,282 0,374

8 1,146 0,187

9 0,101 0,015

10 0,180 0,028

11 0,301 0,048

4. Concentración de glucosa en las muestras de partida A y B

Concentración Volumen Concentración

Masa de
Absorbancia de muestras de
Tubo glucosa glucosa
505nm muestras A partida A y B
(mg/dl) (mg)
y B (µℓ) (mg/dl)

6 4,603 0,756 0,046 80,000 57,533

7 2,282 0,374 0,023 40,000 57,047

8 1,146 0,187 0,011 20,000 57,290

9 0,101 0,015 0,001 200,000 0,504

10 0,180 0,028 0,002 400,000 0,450

11 0,301 0,048 0,003 700,000 0,430

Concentración
Muestra
(mg/dl)

A 57,290

B 0,461
 INFORME DE COMPONENTE 1601-2021

Capturas de los datos:

INFORME DE COMPONENTE 1601-2021
 INFORME DE COMPONENTE 1601-2021

Actividad 2 Determinación de la glucemia (concentración de glucosa en sangre)

Código del experimento 043

1. Registre los valores de absorbancia a 505nm medidos luego de preparar cada una de
las muestras

Absorbancia
Tubo
505nm

0 0

1 0,347

2 0,337

3 0,331

4 -

5 -

6 0,477

7 0,218

8 0,097

9 0,327

10 0,18

11 0,069
 INFORME DE COMPONENTE 1601-2021
2. Concentración de glucosa en la muestra Patrón

Promedio
absorbancias 0,338
Tubos 1 a 3

Registre los cálculos realizados para hallar la concentración de glucosa

Volumen Masa de Volumen de Concentración

Absorbancia Volumen
Tubo de glucosa glucosa solución de glucosa
505nm total (µℓ)
(µℓ) (mg) salina (µℓ) (mg/dl)

0 0 0 0 20 20 0

1 0,347 20 0,02 0 20 100

2 0,337 20 0,02 0 20 100

3 0,331 20 0,02 0 20 100

3. Concentración de glucosa en los tubos 6 a 11 empleando la ecuación de Lambert-

beer.

Se calcula el coeficiente de extinción con los datos de la tabla anterior, sabiendo que
este es el mismo en todos los ensayos ya que se mantiene constante:
-el grosor de celda es 1 cm.
-la absorbancia de la muestra es el promedio.

A=ε∗l∗c
mg
0,338=ε∗1 ( cm)∗100
dl
0,338
ε=
mg
100 ∗cm
dl

( )
−1
−3 mg
ε =3,38∗10 ∗cm
dl

Ahora bien,
 INFORME DE COMPONENTE 1601-2021
En donde, A hace referencia a la absorbancia de
la muestra, “l” el grosor de celda y ε al coeficiente de extinción.

( )
−1
−3 mg
ε =3,38∗10 ∗cm
dl
l=1 cm

Entonces para cada de muestra se aplica la ecuación con sus respectivos parámetros y
se hallan las concentraciones:

Concentración
Absorbanci
Tubo de glucosa
a 505nm
(mg/dl)

6 0,477 141,124
7 0,218 64,497
8 0,097 28,698
9 0,327 96,746
10 0,18 53,254
11 0,069 20,414
4. Concentración de glucosa en las muestras de partida A y B

Masa Volumen
Concentración
Absorbanci de de Concentración
Tubo de glucosa
a 505nm glucosa muestras (mg/dl)
(mg/dl)
(mg) A y B (µℓ)
6 0,477 141,124 0,028 20,000 141,124
7 0,218 64,497 0,013 20,000 64,497
8 0,097 28,698 0,006 20,000 28,698
9 0,327 96,746 0,019 20,000 96,746
10 0,18 53,254 0,011 20,000 53,254
11 0,069 20,414 0,004 20,000 20,414

Concentración
Muestra
(mg/dl)
A 78,107
B 56,805
Capturas de los datos: INFORME DE COMPONENTE 1601-2021
INFORME DE COMPONENTE 1601-2021
 INFORME DE COMPONENTE 1601-2021

Actividad 3. Determinación de la concentración de proteínas por un método

colorimétrico: método de Lowry
Código del experimento 043
1. Registre los valores de la concentración y absorbancia a 580nm medidos luego de
preparar cada una de las muestras patrón de los tubos 0 – 5.

Absorbancia
Tubo
580nm
0 0
1 0,264
2 0,469
3 0,655
4 0,767
5 0,91

Registre los cálculos realizados para hallar la concentración de la proteína patrón

Masa de Volumen Concentración

Absorbancia Volumen de Volumen
Tubo proteína de agua de proteína
580nm proteína (µℓ) total (µℓ)
(g) (µℓ) (g/l)
 INFORME DE COMPONENTE 1601-2021
0 0 400 0
0 0 400
1 0.264 30 0,00006 370 400 0,15
2 0.469 60 0,00012 340 400 0,3
3 0.655 90 0,00018 310 400 0,45
4 0.767 120 0,00024 280 400 0,6
5 0.910 150 0,0003 250 400 0,75
2. Gráfica de la curva Patrón (concentración vs absorbancia)

A vs CP
6600tán29a5660
f(x) = 1.18952380952381 x + 0.0647619047619047
R² = 0.978531206364698
Absorbancia a 580 nm

6600tán28a5660

6600tán28a5660
6600tán28a5660 6600tán28a5660 6600tán29a5660
Concentración de proteína (g/l)

3. Concentración de proteína en los tubos 6 a 9

Registre los cálculos realizados

Para poder hallar la concentración de los tubos 6 y 9, se necesita de la ecuación lineal de

la aproximación de la línea recta de la gráfica de los tubos 0 a 5.

A=0,1895∗CP+0,0648

Tubo 6:

A=0,1895∗CP+0,0648
A−0,0648
CP=
0,1895
0,877−0,0648
CG=
0,1895
 INFORME DE COMPONENTE 1601-2021
Tubo Concentración
Absorbancia
de glucosa
580nm
(mg/dl)
6 0,877 0,00429
7 0,983 0,00485
8 0,575 0,00269
9 0,812 0,00394

4. Concentración de proteína en las muestras de partida A y B

Masa de Volumen de
Concentración Absorbancia Concentración
Tubo proteína muestras A y
(mg/dl) 580nm (mg/dl)
(mg) B (µℓ)
6 0,03132 0,877 0,000125 120,000 0,104
7 0,03660 0,983 0,000146 200,000 0,073
8 0,04187 0,575 0,000167 120,000 0,140
9 0,04715 0,812 0,000189 200,000 0,094

Concentració
Muestra
n (mg/dl)
A 0,089
B 0,117

5. Capturas de los datos:

INFORME DE COMPONENTE 1601-2021
INFORME DE COMPONENTE 1601-2021
INFORME DE COMPONENTE 1601-2021
 INFORME DE COMPONENTE 1601-2021

Conclusiones
Como se observa en las prácticas todas las concentraciones medidas dependen de la
cantidad volumétrica que se agregue en una muestra y la masa que se encuentra dentro
de los tarros, lo cual certifica la dilución en soluciones concentradas, así mismo, con el
experimento se logra observar que a medida que las concentraciones de glucosa de los
tarros aumentan en las muestras, la absorbancia de igual forma aumenta, por lo cual se
certifica que la absorbancia en directamente proporcional a la concentración de glucosa de
la muestra.

Práctica 2. Separación electroforética de isoenzimas de LDH

sobre acetato de celulosa.
Código del experimento 0768
Muestra Tira A M1
 INFORME DE COMPONENTE 1601-2021 M3
Muestra Tira B
1. Registra la imagen de la tinción de la tira y densitograma de cada una de las
tiras

*Para la Muestra Tira A:

*Para la Muestra Tira B:

A2. partir de que tejido se ha preparado la muestra

Tejido Tira A Se preparo a partir de una muestra muscular (Tejido

musculo)
Imagen de densitometría y tinción del tejido seleccionado
 INFORME DE COMPONENTE 1601-2021

Tejido Tira B Se preparo a partir de una de cerebro (Tejido Cerebro)

Imagen de densitometría y tinción del tejido seleccionado

Conclusiones
Como se observó en la práctica al momento de comparar la separación de la tira
de acetato y los densitograma para cada caso se encontró que la muestra
depositada en la tira A presenta perfiles normales correspondientes a tejido
muscular, mientras que la muestra depositada en la tira B presenta perfiles
normales correspondientes a tejido cerebral; por otro lado se determina que el
tejido muscular INFORME DE COMPONENTE 1601-2021 presenta hacia el polo
negativo del campo eléctrico por lo cual teniendo en cuenta la definición del punto
isoeléctrico (PI) se dice que la muestra de tejido muscular predomina dicho tipo de
cargas, caso contrario a lo que sucede con la muestra de tejido cerebral ya que en
esta se observa mayor afinidad por el polo positivo del campo eléctrico.

Práctica 3. Ensayo de Cinética enzimática: Determinación de la actividad

gamma-glutamiltranspeptidasa en una muestra de orina
Actividad gammaGT.
Código del experimento 006
1. Medida del curso de la reacción enzimática cubeta 2
Absorbancia 405
Tiempo (min)
nm
1 0,006
2 0,033
3 0,049
4 0,062
5 0,069
6 0,08
7 0,091
8 0,103
9 0,113
10 0,123
11 0,135
12 0,146
13 0,159
14 0,168
15 0,183
16 0,193

2. Medida del curso de la reacción enzimática cubeta 3

Absorbancia 405
Tiempo (min)
nm
1 0,011
2 0,055
INFORME DE COMPONENTE 1601-2021
3 0,08
4
0,1
5 0,121
6 0,147
7 0,166
8 0,183
9 0,205
10 0,229
11 0,253
12 0,283
13 0,301
14 0,322
15 0,345
16 0,367
 3 . Gráfica de la INFORME DE COMPONENTE 1601-2021 absorbancia vs tiempo de
reacción para cada muestra
-Para la muestra de la cubeta 2:

6600tán17a5660
6600tán15a5660
f(x) = 85.9535143221671 x − 0.702398127117011
6600tán13a5660 R² = 0.993142297101863
6600tán11a5660
Tiempo (min)

6600tán9a5660
6600tán7a5660
6600tán5a5660
6600tán3a5660
6600tán1a5660
6600tán28a5660
6600tán28a5660 6600tán28a5660 6600tán28a5660

Absorvancia 405 nm

-Para la muestra de la cubeta 3:

6600tán17a5660
6600tán15a5660
6600tán13a5660 f(x) = 43.8741909844442 x − 0.187089814919952
R² = 0.997234552728779
6600tán11a5660
Tiempo (min)

6600tán9a5660
6600tán7a5660
6600tán5a5660
6600tán3a5660
6600tán1a5660
6600tán28a5660
6600tán28a5660 6600tán28a5660 6600tán28a5660

Absorvancia 405 nm
 1. Concentración INFORME DE COMPONENTE 1601-2021 de la actividad enzimática
de cada muestra

Cubeta Concentración de la actividad

2 enzimática −3 M
9,29∗10
s
3 M
4,74∗10−3
s

Registre los cálculos realizados a partir de la pendiente de la recta

Tenido en cuenta que la pendiente en cada caso determina el cambio de la
absorbancia respecto a la variación del tiempo, además que el coeficiente de

( )
−1
3 mol
extinción molar es de9,25∗10 ∗cm , además de que se tienen celdas con un
L
grosor de 1 cm.

A
C=
l∗ε
Para la muestra 2:
85,954
C=
( )
−1
3 mol
1cm∗9,25∗10 ∗cm
L
M
C=9,29∗10−3
s
Para la muestra 3:
43,874
C=
( )
−1
3 mol
1cm∗9,25∗10 ∗cm
L
−3 M
C=4,74∗10
s

Conclusiones
con los resultados obtenido se observa que a mayor cantidad de orina se presenta
una mayor determinación la actividad enzimática, lo cual era de esperarse ya que si
se ofrece una mayor cantidad de reactivo o revelador a una reacción se apreciara en
mayor medida los cambios que esta genere; además con los datos encontrados en
la práctica y teniendo en cuenta las regresiones realizadas se rectifica dicha
proposición ya que para la muestra 3 donde fue agregado mayor cantidad de orina
se pudo apreciar una variación más grande en los datos para la absorbancia de la
muestra, además la duplicación de dicha cantidad se observa directamente en la
concentración de la actividad enzimática medida en el tiempo por lo cual se puede
decir que dichas INFORME DE COMPONENTE 1601-2021 variables son
inversamente proporcionales.

Práctica 4. Ensayo de viabilidad celular (actividad metabólica)

por reducción del compuesto MTT
1. Preparación de las soluciones registre la tabla y los cálculos
realizados para la preparación de las disoluciones de peróxido de
hidrógeno

Para preparar las disoluciones se debe tener en cuenta que el volumen

total de disolución para cada una de las concentraciones debe ser
5000 microlitros, además de:
 INFORME DE COMPONENTE 1601-2021
C 1=9800 mM
V 1=?
C 2=20 mM
V 2=5000 μL

Teniendo en cuenta la fórmula para disoluciones:

C 1 V 1=C 2 V 2

C2V 2
V 1=
C1
20 mM∗5000 μL
V 1=
9800 mM

V 1=10,2 μL≈ 10 μL
Teniendo en cuenta que se deben completar un volumen de disolución
de 5000 μL:
5000 μL=vol . medio+ vol . anterior
vol. medio=5000−10
vol . medio=4990 μL
De igual manera se desarrollan los cálculos pertinentes para cada una
de las concentraciones requeridas:
C 1=20 mM
V 1=?
C 2=10 mM
V 2=5000 μL

Teniendo en cuenta la fórmula para disoluciones:

C 1 V 1=C 2 V 2

C2V 2
V 1=
C1
10 mM∗5000 μL
V 1=
20 mM

V 1=2500 μL
Teniendo en cuenta que se deben completar un volumen de disolución
de 5000 μL:
5000 μL=vol . medio+ vol . anterior
vol. medio=5000−2500
vol. medio=2500 μL
- Sucesivamente se realizan los cálculos para las demás
disoluciones teniendo en cuenta que el estado 1 va a ser
 la nueva INFORME DE COMPONENTE 1601-2021 medida de
concentración y el estado dos será la anterior medida.

2. Imagen de la distribución de los tratamientos en la placa de

cultivo

20 mM
l neg.
Contro
4 mM
10 mM
1 mM
0,2 mM l pos.
Contro
M
0,05 m

3. Registro de las absorbancias en cada tratamiento

% de
Tratamiento Pocillo Absorbancia
viabilidad
Replica 1 0,781
 INFORME DE COMPONENTE 1601-2021
Replica 2 0,731
Replica 3
0,724
Replica 1 -0,002
Control positivo Replica 2 0,001 -0,001
Replica 3 -0,002
Replica 1 0,739
0,05 Replica 2 0,733 0,761
Replica 3 0,812
Replica 1 0,768
0,2 Replica 2 0,679 0,710
Replica 3 0,684
Replica 1 0,572
1 Replica 2 0,593 0,574
Replica 3 0,556
Replica 1 0,222
4 Replica 2 0,246 0,236
Replica 3 0,241
Replica 1 0,07
10 Replica 2 0,069 0,067
Replica 3 0,062
Replica 1 0,03
20 Replica 2 0,029 0,032
Replica 3 0,038

4. Grafica % de viabilidad vs concentración peróxido de hidrógeno

 INFORME DE COMPONENTE 1601-2021

%Viabilidad Vs. Concentración H2O2

0,001

f(x) = − 0.135729514375393 ln(x) + 0.44387359843737

R² = 0.940283620007294
Absorbancia

0,001

0,000
6600tán28a5660 6600tán9a5660 6600tán19a5660 6600tán29a5660
Concentracion (mM)

En la gráfica se observa que a medida que aumenta la concentración

de reactivos la absorbancia disminuye por lo cual estas variables
actúan de forma inversa; además de que la viabilidad esta
determinada por la absorbancia que se presente en una muestra en
determinado momento.

5. Calcule la concentración a la cual el 50% de las células están

vivas

Para calcular el porcentaje de viabilidad dado, se debe relacionar

directamente con la absorbancia que tendría la muestra por lo cual se
realiza el promedio entre los valores superior e inferior de la
absorbancia lo que determinara la mitad o 50% de viabilidad:

0,761−0,032
A50 %de viabilidad = =0,3645
2

Ahora tenido en cuenta la ecuación que describe el comportamiento de

las variables presentes en el experimento se calcula la concentración a
la cual se da la absorbancia en la que el 50% de las células están
vivas:

y=−0,136∗ln ( x ) +0,4439

Donde “Y” hace referencia a la absorbancia y “X” a la concentración:

 INFORME DE COMPONENTE 1601-2021 0,3645−0,4439
ln ( x )=
−0,136

ln ( x )=0,5838
e ln ( x ) =0,5838
0,5838
x=e

x=1,7928
La concentración a la cual el 50% de las células están vivas es 1,7928
mM de H2O2.

Conclusiones
Al desarrollar los ítems pertinentes para el laboratorio se observa la
relación existente entre lo que se podría considerar el paso del tiempo
en la realidad, pues teniendo en cuenta que el objetivo de la practica
es relacionar el proceso de digestión con la actividad enzimática, se
puede asimilar que el peróxido de hidrogeno son los ácidos gástricos y
el aumento de su concentración es el paso del tiempo en el cual para
el proceso de digestión se liberan más ácidos gástricos por lo cual su
concentración también aumenta; de estas similitudes e concluye que a
mayor paso del tiempo la cantidad células presentes vivas disminuyen
de manera asintótica lo que implica que la actividad enzimática se da
en mayor cantidad durante un tiempo reducido.

Referentes

 Universidad de Malaga, 2017. Técnicas básicas en Bioquímica:

espectrofotometría [archivo de video] recuperado en
https://www.youtube.com/watch?v=fXjP10sdmQU
 Peñaranda L. 2020. Práctica # 5: Cuantificación de proteínas
[Archivo de vídeo] recuperado en https://youtu.be/NH7BBGUXqos
 Miller D.D. 2001. Química de Alimentos, Manual de Laboratorio.
Limusa Wiley, México
 Herráez A. s.f. Biomodel. Laboratorios virtuales. Ensayo del MTT
para viabilidad metabólica [disponible en línea] recuperado en
http://biomodel.uah.es/lab/citotox/inicio.htm
 Herráez A. s.f. Biomodel. Laboratorios virtuales.
Espectrofotómetro UV-VIS virtual [disponible en línea] recuperado
en http://biomodel.uah.es/lab/abs/cinetica.htm
 INFORME DE COMPONENTE 1601-2021
 Herráez A. s.f. Biomodel.
Laboratorios virtuales. Simulador de electroforesis de proteínas
sobre acetato de celulosa [disponible en línea] disponible en
http://biomodel.uah.es/lab/acetato/LDH_aplicar_muestras.htm
 García Jerez A. 2018. Cinética Enzimática [Archivo de vídeo]
recuperado en https://www.youtube.com/watch?v=sLrhI9mgHDQ
 Herráez A. s.f. Biomodel. Laboratorios virtuales.
Espectrofotómetro UV-VIS Virtual [disponible en línea] disponible
en http://biomodel.uah.es/lab/abs/ensayo.ht
Anexos: (Evaluaciones de las practicas)
1.
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2.
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3.
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4.
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INFORME DE COMPONENTE 1601-2021