AMYLASE-LQ

α- Amilasa
CNPG3. Cinético. Líquido
Determinación cuantitativa de α-amilasa (AMS) 6. Calcular el promedio del incremento de absorbancia por minuto
IVD (∆A/min).

Conservar a 2-8ºC CÁLCULOS

Suero o plasma ∆A/min x 3954 = U/L AMS
PRINCIPIO DEL MÉTODO
La α-amilasa hidroliza el 2-cloro-4-nitrofenil-α-D-maltotriósido Orina ∆A/min x 7908 = U/L AMS
(CNPG3) a 2-cloro-4-nitrofenol (CNP) y forma 2-cloro-4-nitrofenil-α-D-
maltoside (CNPG2), maltotriosa (G3) y glucosa (G), según la Unidades: La unidad internacional (UI) es la cantidad de enzima que
siguiente reacción: convierte 1 µmol de substrato por minuto, en condiciones estándar. La
Amilasa concentración se expresa en unidades por litro (U/L).
10 CNPG3 ⎯⎯ ⎯⎯ ⎯→ 9 CNP + 1 CNPG2 + G3 + G
La velocidad de formación de 2-cloro-4-nitrofenol, determinado Factor de conversión: U/L x 0,01667 = µkat/L.
fotométricamente, es proporcional a la concentración catalítica de α-
1
amilasa en la muestra ensayada . CONTROL DE CALIDAD
Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control valorados:
SIGNIFICADO CLÍNICO SPINTROL H Normal y Patológico (Ref. 1002120 y 1002210).
La α-amilasa (AMS) es una enzima que ayuda a digerir el glucógeno Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de tolerancia, se debe
y el almidón. Se produce principalmente en las glándulas salivales y revisar el instrumento, los reactivos y la técnica.
el páncreas exocrino. Su determinación se realiza principalmente Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y establecer
para diagnosticar o controlar enfermedades del páncreas como correcciones en el caso de que los controles no cumplan con las
pancreatitis crónica o aguda. Puede reflejar también enfermedad de tolerancias.
la vesícula biliar, algunos problemas gastrointestinales y otros
2,5,6 3
trastornos . VALORES DE REFERENCIA
El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los Suero o plasma Hasta 90 U/L de α-amilasa
datos clínicos y de laboratorio. Orina Hasta 450 U/L de α-amilasa
Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio
REACTIVOS establezca sus propios valores de referencia.
MES pH 6,0 100 mmol/L
CNPG3 2,25 mmol/L CARACTERÍSTICAS DEL MÉTODO
Cloruro sódico 350 mmol/L Rango de medida: Desde el límite de detección 1 U/L hasta el límite de
R linealidad 2000 U/L.
Acetato cálcico 6 mmol/L
Tiocianato potásico 900 mmol/L Si la concentración de la muestra es superior al límite de linealidad, diluir
Ácida sódica 0,95 gr/L 1/2 con ClNa 9 g/L y multiplicar el resultado final por 2.
Precisión:
PREPARACIÓN Intraserie (n= 20) Interserie (n= 20)
Reactivo listo para su uso. Media (U/L) 61,2 165 65,1 172
SD 1,00 2,44 2,84 4,57
CONSERVACIÓN Y ESTABILIDAD CV (%) 1,64 1,47 4,36 2,65
Todos los componentes del kit son estables, hasta la fecha de
caducidad indicada en la etiqueta, cuando se mantienen los frascos Sensibilidad analítica: 1 U/L = 0,0003 ∆A/min.
bien cerrados a 2-8ºC, protegidos de la luz y se evita su Exactitud: Los reactivos SPINREACT (y) no muestran diferencias
contaminación. No usar reactivos fuera de la fecha indicada. sistemáticas significativas cuando se comparan con otros reactivos
Una vez abierto el reactivo es estable 60 días, si se cierra comerciales (x).
inmediatamente después de su uso y se conserva a 2-8ºC. Las características del método pueden variar según el analizador utilizado.
Indicadores de deterioro de los reactivos:
- Presencia de partículas y turbidez. INTERFERENCIAS
La hemólisis interfiere en los resultados . La actividad α-amilasa puede
1
- Absorbancias del Blanco a 405 > 0,50.
ser inhibida por agentes quelantes como citrato y EDTA.
MATERIAL ADICIONAL Se han descrito varias drogas y otras substancias que interfieren en la
determinación de la α-amilasa .
3,4
- Espectrofotómetro o analizador para lecturas a 405 nm.
(Nota 1)
- Baño termostatable a 37ºC .
- Cubetas de 1,0 cm de paso de luz. NOTAS
-
Equipamiento habitual de laboratorio
(Nota 2)
. 1. La α-amilasa es temperatura-dependiente, los ensayos realizados a
temperaturas <37ºC o >37ºC puden variar los resultados.
MUESTRAS 2. La saliva y el sudor contienen α-amilasa. Evitar el pipeteo con la boca
1 y el contacto de la piel con el reactivo o material empleado.
- Suero o plasma , separado lo antes posible de los hematies.
Como anticoagulante se recomienda la heparina. 3. Contiene tiocianato potásico. Evitar inhalación o contacto del reactivo
- Orina, ajustar el pH aproximadamente a 7,0 antes de conservar. con la piel y ojos. En tal caso, lavar la piel y los ojos con abundante
Estabilidad: 1 mes a 2-8ºC. agua y consultar a un médico.
4. SPINREACT dispone de instrucciones detalladas para la
PROCEDIMIENTO aplicación de este reactivo en distintos analizadores.
1. Condiciones del ensayo:
BIBLIOGRAFÍA
Longitud de onda: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .405 nm
1. Ying Foo A et al. Amylase measurement with 2-chloro-4nitrophenyl
Cubeta:. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .1 cm paso de luz
maltrotrioside as substrate. Clin Chim 272, 1998; 137-147.
Temperatura constante . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 37ºC 2. McNeely M. Amylase. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St
2. Ajustar el espectrofotómetro a cero frente a agua destilada. Louis. Toronto. Princeton 1984; 1112-116.
3. Pipetear en una cubeta: 3. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.
4. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
Suero o plasma Orina 5. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
R (mL) 1,0 1,0 6. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
Muestra (µL) 20 10
PRESENTACIÓN
4. Mezclar, incubar 30 segundos.
Ref: 41201 Cont.
20 x 2 mL
5. Leer la absorbancia (A) inicial de la muestra, poner en marcha el
cronometro y leer la absorbancia cada minuto durante 3 minutos. Ref: 41202 2 x 60 mL

BEDTT27 Ed.2004 SPINREACT,S.A. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
Tel. +34 972 69 08 00 Fax +34 972 69 00 99. e-mail: [email protected]
 AMYLASE-LQ

α- Amylase
CNPG3. Kinetic. Liquid

Quantitative determination of α-amylase (AMS) 6. Calculate the difference between absorbances and the average
IVD absorbance differences per minute (∆A/min).
CALCULATIONS
Store at 2-8ºC
Serum or
∆A/min x 3954 = U/L AMS
plasma
PRINCIPLE OF THE METHOD
α-Amylase hydrolyzes the 2-chloro-4-nitrophenyl-α-D-maltotrioside Urine ∆A/min x 7908 = U/L AMS
(CNPG3) to release 2-chloro-4-nitrophenol (CNP) and form 2-chloro-
4-nitrophenyl-α-D-maltoside (CNPG2), maltotriose (G3) y glucose (G) Units: One international unit (IU) is the amount of enzyme that transforms 1
according to the following reaction: µmol of substrate per minute, in standard conditions. The concentration is
Amilase expressed in units per litre of sample (U/L).
10 CNPG3 ⎯⎯ ⎯⎯ ⎯→ 9 CNP + 1 CNPG2 + G3 + G
The rate of 2-chloro-4-nitrophenol formation, measured Conversion factor: U/L x 0,01667 = µkat/L.
photometrically, is proportional to the catalytic concentration of α-
amylase present in the sample .
1 QUALITY CONTROL
Control sera are recommended to monitor the performance of assay
CLINICAL SIGNIFICANCE procedures: SPINTROL H Normal and Pathologic (Ref. 1002120 and
α-Amylase (AMS) is an enzyme that helps to digest the glycogen and 1002210).
the starch. It is produced mainly by exocrine pancreas and salivary If control values are found outside the defined range, check the instrument,
glands. This determination is made mainly in diagnosis or to control reagents and technique for problems.
diseases of the pancreas as acute or chronic pancreatitis. It can also Each laboratory should establish its own Quality Control scheme and
2,5,6
reflect biliary or gastrointestinal disease and other upheavals . corrective actions if controls do not meet the acceptable tolerances.
Clinical diagnosis should not be made on a single test result; it should REFERENCE VALUES
1
integrate clinical and other laboratory data. Serum or plasma Up to 90 U/L of α-amylase
Urine Up to 450 U/L of α-amylase
REAGENTS
These values are for orientation purpose; each laboratory should establish
MES pH 6.0 100 mmol/L
its own reference range.
CNPG3 2.25 mmol/L
R Sodium clorhidre 350 mmol/L PERFORMANCE CHARACTERISTICS
Calcium acetate 6 mmol/L Measuring range: From detection limit of 1 U/L to linearity limit of 2000
Potassium thiocyanate 900 mmol/L U/L.
Sodium azide 0.95 gr/L If the results obtained were greater than linearity limit, dilute the sample 1/2
with NaCl 9 g/L and multiply the result by 2.
PREPARATION Precision:
The reagent is ready to use.
Intra-assay (n=20) Inter-assay (n=20)
STORAGE AND STABILITY Mean (U/L) 61.2 165 65.1 172
All the components of the kit are stable until the expiration date on SD 1.00 2.44 2.84 4.57
the label when stored tightly closed at 2-8ºC, protected from light and CV (%) 1.64 1.47 4.36 2.65
contaminations prevented during their use.
Sensitivity: 1 U/L = 0,0003 ∆A / min.
Do not use reagents over the expiration date.
Accuracy: Results obtained using SPINREACT reagents (y) did not show
After opening, the reagent is stable for 60 days when properly capped
systematic differences when compared with other commercial reagents (x).
immediately after each opening and stored at 2-8ºC.
The results of the performance characteristics depend on the analyzer used.
Signs of reagent deterioration:
- Presence of particles and turbidity. INTERFERENCES
- Blank absorbance (A) at 405 nm ≥ 0.50. 1
Hemolysis interferes in the results .
α-Amylase enzyme activity is temperature dependent. Assays performed at
ADDITIONAL EQUIPMENT temperatures <37ºC or >37ºC will show an apparent decrease or increase
- Spectrophotometer or colorimeter measuring at 405 nm. levels. A list of drugs and other interfering substances with α-amylase
(Note 1)
- Thermostatic bath at 37ºC . 3,4
determination has been reported by Young et. al .
- Matched cuvettes 1.0 cm light path.
(Note 2)
- General laboratory equipment . NOTES
1. α-Amylase enzyme activity is temperature dependent. Assays
SAMPLES performed at temperatures <37ºC or >37ºC will show an apparent
1
- Serum or plasma , remove from cells as soon as possible. It is decrease or increase levels.
recommended to use heparin as anticoagulant. 2. Saliva and sweat contain α-amylase. Avoid mouth pippeting and skin
- Urine, adjust pH to approximately 7.0 prior to storage. contact with the reagent or material used.
Stability: 1 month at 2-8ºC. 3. Contains potassium thiocyanate. Avoid inhalation, skin or eyes contact.
If it happens, wash with plenty of water and consult a doctor.
PROCEDURE 4. SPINREACT has instruction sheets for several automatic
1. Assay conditions: analyzers. Instructions for many of them are available on request.
Wavelength: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 405 nm
Cuvette: . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . 1 cm light path BIBLIOGRAPHY
Constant temperature . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .37ºC 1. Ying Foo A et al. Amylase measurement with 2-chloro-4nitrophenyl
2. Adjust the instrument to zero with distilled water. maltrotrioside as substrate. Clin Chim 272, 1998; 137-147.
3. Pipette into a cuvette: 2. McNeely M. Amylase. Kaplan A et al. Clin Chem The C.V. Mosby Co. St
Louis. Toronto. Princeton 1984; 1112-116.
Serum or plasma Urine 3. Young DS. Effects of drugs on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC Press, 1995.
R (mL) 1,0 1,0 4. Young DS. Effects of disease on Clinical Lab. Tests, 4th ed AACC 2001.
Sample (µL) 20 10 5. Burtis A et al. Tietz Textbook of Clinical Chemistry, 3rd ed AACC 1999.
6. Tietz N W et al. Clinical Guide to Laboratory Tests, 3rd ed AACC 1995.
4. Mix, incubate for 30 seconds.
5. Read initial absorbance (A) of the sample, start the stopwatch PACKAGING
and read absorbances at 1 minute intervals thereafter for 3 Ref: 41201 Cont.
20 x 2 mL
minutes. Ref: 41202 2 x 60 mL

BEDTT27 Ed.2005 SPINREACT,S.A. Ctra.Santa Coloma, 7 E-17176 SANT ESTEVE DE BAS (GI) SPAIN
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