Fundamentos de
Microscopía
MSc MV Roy Macedo Macedo
Objetivos
• Identificar las partes ópticas, mecánicas y de iluminación del
microscopio óptico.
• Mencionar la función de los principales elementos de cada una de las
partes.
Historia
• El término microscopio deriva etimológicamente del
griego mikrós (pequeño) y skoopéo (observar) y fue
acuñado por Jean Faber en 1624.
• El impulsor más significativo de la microscopía fue el
holandés Anton Van Leeuwenhoek (1632-1723).
Anatomista y fisiólogo, Leeuwenhoek construyó sus
propios microscopios con lentes convexas que él mismo
pulía. Entre sus aportaciones más importantes está la de
ser uno de los primeros en estudiar la composición de la
sangre y en observar y dibujar protozoos; en 1676
descubrió las bacterias.
• Descubrimiento del microscopio compuesto es
contemporáneo al de las lupas y se debe principalmente Anton Van Leeuwenhoek
a Zacarias Janssen, su primer constructor (1590)
MICROSCOPÍA
• Técnica de producir imágenes visibles de estructuras o
detalles demasiado pequeños para ser percibidos a simple
vista.
• Incluye el conjunto de métodos y técnicas afines pero
extrínsecas al aparato (técnicas de preparación y manejo de
los objetos de estudio, técnicas de salida, procesamiento,
interpretación y registro de imágenes, etc.)
• El tipo más común y el primero de los aparatos de
microscopía que fue inventado es el microscopio óptico.
Poder de resolución
• El PODER RESOLUTIVO(PR) es la capacidad de las
lentes de distinguir o resolver con nitidez dos
puntos próximos ubicados en el plano del objeto.
Cuanto mayor es el PR, menor puede ser la
distancia que separa dos puntos entre si, sin que
estos se confundan. m: metro dm: decímetro cm: centímetro mm: milímetro µm:
micrómetro nm: nanómetro Å: angstroms
Aumento
• Capacidad del microscopio de agrandar una
imagen de la muestra observada.
• En el microscopio óptico compuesto, el
aumento de la muestra se produce en dos
etapas, primero en las lentes del objetivo y a
continuación en las lentes del ocular.
Aumento microscopio = Aumento objetivo × Aumento ocular
• Por ejemplo los números 10x, 40x indica
cuantas veces la lente aumenta el tamaño del
objeto. Por ejemplo, el ocular que tiene el
número 10, aumenta 10 veces el tamaño. Del
mismo modo, en los objetivos, los números
4x, 10x, 40x indican el aumento del objetivo.
Sirven de movimientos, sostén y sujeción
COMPONENTES MECÁNICOS: de los sistemas ópticos y de iluminación;
así como de los objetos a observar.
El TUBO/CABEZAL lleva, en la parte inferior, el revólver con
los objetivos, y en la superior, los oculares cambiables.
El REVÓLVER es una pieza que lleva varios objetivos Los MANDOS DE ENFOQUE manejan el enfoque bien sea
intercambiables y permite adaptar éstos al tubo del por el movimiento vertical de la platina o del tubo, según el
microscopio. tipo de microscopio. Habitualmente se colocan a ambos lados
del estativo. Para una mayor precisión en el enfoque es
necesario un mando micrométrico para ajuste fino, resultando
más cómodos si ambos mandos (macro y micro) actúan sobre
La PLATINA es la pieza sobre la que se colocan las el mismo eje (co-axiales).
diferentes preparaciones que deseamos observar. La Actualmente los microscopios profesionales llevan estos
forma de la platina es variada y puede ser tanto fija mandos graduados, así como control de tensión o preenfoque
como móvil. rápido.
Micrométrico: enfoque lento y más preciso.
El ESTATIVO/SOPORTE/BASE Está formado por un pie pesado De ajuste fino
que sostiene un brazo inclinado del cual salen tanto la platina como
el tubo del microscopio.
Macrométrico: enfoque rápido e inicial
COMPONENTES ÓPTICOS
Los OBJETIVOS constan de un sistema de lentes, cuya función es captar
la luz procedente de la muestra.
Podemos hablar de objetivos secos, que son aquellos en los que entre
el objetivo y la preparación sólo hay aire, y también podemos hablar de
objetivos de inmersión, cuando es necesario colocar entre la lente y la
preparación un elemento líquido, que permite una mayor luminosidad.
Ésta y otras características como: aumento del objetivo, apertura
numérica, longitud del tubo y espesor del cubreobjetos, vienen
indicadas mediante unas marcas en el objetivo.
Los OCULARES están formados por dos o
más lentes que se encuentran separadas
por un diafragma. Para hacer más cómoda Apertura
la observación, existen microscopios que aumento numérica
tienen dos oculares en lugar de uno. Ello
permite observar con los dos ojos a la vez.
Actualmente existen cabezales múltiples,
que permiten que varias personas puedan
observar una misma muestra a la vez.
COMPONENTES DE ILUMINACIÓN
El DIAFRAGMA está situado debajo de la platina y del condensador,
siendo el encargado de regular la entrada de luz al condensador. En
algunos modelos se acciona por medio de una palanca y en otros
mediante una rueda con orificios de distintos diámetros.
El CONDENSADOR es una lente o sistema de lentes
situadas debajo de la platina y que permite concentrar la
luz en la muestra que se observa. Existen distintos tipos de
condensadores, dependiendo de las necesidades y
requerimientos de nuestra observación: de campo oscuro,
acromático, etc.
La FUENTE DE LUZ es muy importante ya que una correcta
iluminación de la preparación que deseamos observar es una condición
necesaria para poder realizar una buena observación. Podemos obtener la
fuente de luz a través de un espejo situado debajo de la platina, que
recoge tanto la luz natural como la luz eléctrica, o a través de lámparas
incorporadas al pie del microscopio.
Monoculares
M. SIMPLE
Binoculares
Estereomicroscopios
M. ÓPTICO
De luz ultravioleta
De fluorescencia
TIPOS DE
MICROSCOPIO M. COMPUESTO De contraste de fases
De Barrido (MEB) De campo oscuro
M. ELECTRÓNICO De Transmisión (TEM) De polarización
Microscopio confocal Microscopia por luz
de barrido láser reflejada
M. ÓPTICO SIMPLE
• Aquel que utiliza una sola
lente para ampliar las
imágenes de los objetos
observados. Es el
microscopio más básico.
• Ejemplo característico: lupa
M. O. COMPUESTO: ESTEREOMICROSCOPIO
• Son microscopios dobles,
erróneamente denominados
"lupas binoculares", con dos
objetivos y dos oculares
que poseen un doble
prisma.
• No es necesario modificar
los objetos a ver, (laminar)
ni tampoco lo es que la luz
pase a través de la
muestra.
• Apropiado para observar
objetos de tamaños
relativamente grandes.
M.O. COMPUESTO:DE LUZ ULTRAVIOLETA
• Utiliza lentes de cuarzo
con una fuente de luz
ultravioleta.
• La muestra no se puede
observar directamente a
través del ocular porque la
luz ultravioleta no es
visible y puede dañar la
retina.
• Sirve para detectar
ácidos nucleicos,
proteínas que contienen
determinados
aminoácidos .
M. O. COMPUESTO:DE
Sistema para
cámara digital
FLUORESCENCIA Alojamiento de
lámpara de
fluorescencia
Inmunocitoquímica directa. Se tiñeron
• Aprovecha la capacidad de inmunológicamente neuronas cultivadas con
algunas moléculas de anticuerpo marcado con fluorescencia
Cubo de
específico para el receptor de insulina.
fluorescencia
fluorescer bajo la luz UV.
• Los objetos son iluminados
por rayos de una
determinada longitud de
onda. Las moléculas
absorben la excitación Protector de rayos
UV
primaria y reemiten una luz
con mayor longitud de onda.
• Se usa para detectar
sustancias con
autofluorescencia (vitamina
A y algunos
neurotransmisores) o
sustancias marcadas con
fluorocromos.
M. O. COMPUESTO:DE CONTRASTE DE FASES
• Aprovecha las pequeñas
diferencias de los índices
de refracción en las
distintas partes de una
célula y/o tejido.
• Las partes oscuras de la
imagen corresponden a las
porciones densas; las
claras corresponden a
porciones menos densas.
Inyección intracitoplasmática de
• Se utiliza para observar espermatozoides en óvulos
células y tejidos vivos y
cortes semifinos no
coloreados.
M. O. COMPUESTO: DE CAMPO OSCURO
• Un condensador especial ilumina el
preparado con mucha intensidad y
en forma oblicua. Solo los rayos de
luz refractados por las estructuras
penetran en el objetivo.
• Se observa un fondo oscuro sobre
el cual aparecen pequeñas
partículas brillantes de la muestra
que reflejan parte de la luz.
• Se utiliza para detección de
cristales en la orina, para la
identificación de bacterias.
Ammonia tepida
MICROSCOPIO Tiene la ventaja de alcanzar una extraordinaria amplificación. Puede dar un
poder de resolución hasta mil veces mayor que el óptico, debido a que
ELECTRÓNICO emplea un haz de electrones en lugar de un haz de fotones.
Espermatozoide
Espermatozoides
MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE BARRIDO no tiene la resolución
MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE TRANSMISIÓN En este tipo de que se alcanza con el microscopio electrónico de transmisión, pero su
microscopía electrónica, el haz de electrones atraviesa al material que se ventaja es una excelente impresión tridimensional. Este microscopio se
desea observar. Las películas de muestra, además de ser delgadas, no deben basa en el principio de la amplificación electrónica de señales que se
poseer materiales que puedan dispersar o absorber electrones. Los generan al irradiar la superficie de las muestras con un haz muy estrecho
microscopios electrónicos de transmisión pueden aumentar un objeto hasta de electrones
un millón de veces.
