Revista76 Trabajos Granada2011
Revista76 Trabajos Granada2011
SUMARIO
Luís Santos Gómez
M.ª Luisa Romero García.
M.ª Ángeles Corzo López
Pablo José Torres Aragón
Ana María Tomás Suárez
Matilde Romero Zarco
Aurora Suárez Martos
—3—
ANATOMÍA PATOLÓGICA
Resumen Comunicación Científica ORAL Materiales y métodos:
Para este estudio se generaron cultivos de MSCs salvajes (wt), p53-/-, Rb-/- y p53-/-Rb-/-
Número: 038
a partir de tejido adiposo de ratones en los que ambos alelos de dichos genes se encuentran
PREVALENCIA Y DISTRIBUCIÓN DE GENOTIPOS DEL VIRUS DEL PAPILOMA flanqueados por secuencias LoxP. Igualmente, se consiguió la expresión ectópica del gen de
HUMANO EN CITOLOGÍAS DE CÉRVIX ANORMALES EN MUJERES RESIDENTES fusión FUS-CHOP, característico del liposarcoma mixoide, en MSCs wt y p53-/- mediante
EN ÁLAVA, PAÍS VASCO transducción lentiviral. Posteriormente se caracterizaron las propiedades de crecimiento in
vitro y la capacidad tumorgénica in vivo de los distintos cultivos.
Trabajo de: Anatomía Patológica
RESULTADOS: y CONCLUSIONES:
Autor/a/s: Domingo López, Aranzazu; García-Agenjo Martínez, Mª del Mar; Ibáñez Ruiz, Mª Al contrario que las MSCs wt o las Rb-/-, las MSCs p53-/- y las p53-/-Rb-/- fueron
José; Delgado San Vicente, Diego; Rodríguez Velasco, María. capaces de generar tumores in vivo cuando se inocularon en ratones inmunodeficientes.
Centro de trabajo: Hospital Santiago. Sección Microbiología Estos tumores presentaban las caracteríticas propias de los leiomiosarcomas. Por otro lado
la expresión del oncogén de fusión FUS-CHOP en MSCs p53-/-, aunque no en MSCs wt,
Provincia: Álava
dio lugar a la formación de tumores tipo liposarcoma in vivo. Por tanto, FUS-CHOP es
Correo electrónico del primer firmante: [email protected] capaz de redirigir la génesis y fenotipo del tumor aunque su expresión aislada no inicia
Introducción: sarcomagénesis. El estudio de estos modelos de sarcoma obtenidos a partir de las células
que dan origen al tumor será de gran ayuda para el desarrollo de terapias más eficaces.
El Objetivo: del estudio fue analizar la prevalencia y distribución de genotipos de VPH en
mujeres con diagnóstico de citología anormal de cérvix residentes en Álava, País Vasco. Resumen Comunicación Científica - PANEL
Métodos: Número: 116
Se estudiaron 106 mujeres con citología de cérvix anormal atendidas en la consulta externa Enriquecimiento de células mesenquimales multipotentes humanas
del servicio de Ginecología por citología anormal previa. Se procedió a la identificación derivadas de células madre embrionarias con propiedades
de los genotipos del VPH mediante amplificación genómica y tipificación por hibridación inmunosupresoras y anti-inflamatorias capaces de proteger
reversa (Linear Array HPV Genotyping Test). contra enfermedades intestinales inflamatorias
RESULTADOS:
Trabajo de: Anatomía Patológica
La prevalencia fue del 69,8%. Se detectaron 30 genotipos diferentes. Los genotipos de alto
y posible alto riesgo fueron los más frecuentes en todos los tipos de lesión citológica en las Autor/a/s: Iván Gutiérrez Aranda, Laura Sánchez Contreras, Gertrudis Ligero Martín, Ruth
mujeres VPH positivas (94,3%, 78,1% y 100% en atipia de significado incierto, lesiones Rubio Amador, Martín Muñoz López, Jose Luis García Pérez, Pedro Real Luna, Clara Bueno,
de bajo y alto grado, respectivamente). Los ocho genotipos más frecuentes en las mujeres René Rodríguez, Mario Delgado, Pablo Menéndez
VPH positivas fueron el genotipo 16 (22 de 74, 29,7%), 51 (17,5%), 53 y 42 (16%, cada Centro de trabajo: Banco Andaluz de Células Madre
uno), 52 (12%), 39 (10,8%), 18 y 58 (9,4%, cada uno). Se detectó coinfección en el 58% Provincia: Granada
de las mujeres VPH positivas, siendo más frecuente en las mujeres con lesiones de bajo Correo electrónico del primer firmante: [email protected]
grado. Tanto la detección de VPH como la coinfección disminuyeron con el aumento de la
edad de las mujeres estudiadas. Introducción:
Las células madre embrionarias humanas (hESCs) facilitan el acceso a las primeras etapas
Conclusión:
de desarrollo humano y pueden servir como una fuente ilimitada de células funcionales
Este estudio confirma la alta prevalencia de VPH y de genotipos de alto riesgo en mujeres para futuras terapias celulares. Es crucial, optimizar métodos que permitan la diferenciación
con citología anormal que residen en Álava. Aunque el genotipo 16 fue el más frecuente, específica de las hESCs a precursores de un tejido específico.
se detectó una amplia variedad de genotipos de alto riesgo no incluidos en las vacunas
Objetivo:
comerciales.
A través de la inhibición específica de la ruta de señalización de Smad-2 / 3, hemos
intentado generar de manera prospectiva células madre mesenquimales (MSCs) a partir de
Resumen Comunicación Científica - PANEL
hESCs, con el fin de estudiar sus capacidades funcionales in vitro e in vivo.
Número: 115
Material y métodos:
CÉLULAS MADRE MESENQUIMALES COMO ORIGEN DE SARCOMAS Las MSCs derivadas de hESCs, surgieron a partir de una población de células fibroblastoides
que expresaban un fenotipo mesenquimal: CD73+, CD90+, CD105+, CD44+, CD166+,
Trabajo de: Anatomía Patológica
CD45-, CD34-, CD14-, CD19-, HLA-DR-.Después de 28 días de inhibición de Smad-2
Autor/a/s: LAURA SANCHEZ CONTRERAS, GERTRUDIS LIGERO MARTIN, IVAN / 3, los cultivos de células madre se enriquecieron (> 42%) en MSCs. Mediante FACS se
GUTIERREZ-ARANDA, RENE RODRIGUEZ GONZALEZ, RUTH RUBIO AMADOR, PABLO aislaron las MSC-hESCs CD73+ CD90+ y se cultivaron in vitro durante numerosos pases.
MENENDEZ-BUJAN. Estas células mostraron un mayor ritmo de crecimiento que el de las MSCs derivadas
Centro de trabajo: BANCO ANDALUZ DE CELULAS MADRE de otros tejidos, conservando la morfología y fenotipo característico de éstas. Las células
mostraron un alto potencial de diferenciación osteogénico, adipogénico y condrocítico
Provincia: GRANADA así como propiedades inmunosupresoras y anti-inflamatorias, in vitro e in vivo, y fueron
Correo electrónico del primer firmante: [email protected] capaces de proteger contra un modelo experimental de enfermedad inflamatoria intestinal
(modelo de enfermedad de Chron basado en administración de TNBS. Es interesante que
RESUMEN: el enriquecimiento de células madre a través de las MSCs por inhibición de la señalización
CÉLULAS MADRE MESENQUIMALES COMO ORIGEN DE SARCOMAS SMAD-2 / 3 no es reproducible con diferentes líneas de iPSC.
Introducción: RESULTADOS: y CONCLUSIONES:
Las células madre mesenquimales (MSCs) son células pluripotentes que constituyen una Nuestros resultados proporcionan información a cerca de los mecanismos de diferenciación
fuente de progenitores para tejidos mesodérmicos. Las propiedades intrínsecas de las de hESCs en MSCs con propiedades inmunosupresoras y anti-inflamatorias con posibles
MSCs las han convertido en el modelo celular más estudiado para un amplio abanico aplicaciones clínicas.
de aplicaciones terapéuticas. Sin embargo, recientes evidencias sugieren que las MSCs
pueden ser la célula diana para distintas mutaciones responsables del desarrollo de ciertos Resumen Comunicación Científica - PANEL
sarcomas. La transformación tumoral de las MSCs está frecuentemente asociada a la Número: 119
inestabilidad cromosómica, poniendo de manifiesto la importancia de los mecanismos de
control del ciclo celular en los procesos de transformación. EFECTO DE MLLAF4 EN CÉLULAS CD34 DE CORDÓN UMBILICAL Y hESCs COMO
MODELO DE LA LEUCEMIA LINFOBLÁSTICA AGUDA PRO-B DEL LACTANTE
Objetivo:
Teniendo en cuenta que las MSCs pueden ser la célula de origen de distintos tipos de Trabajo de: Anatomía Patológica.
sarcomas, nuestro Objetivo: fue conseguir modelos de esta enfermedad basados en Autor/a/s: LIGERO MARTÍN GERTRUDIS, SÁNCHEZ CONTRERAS LAURA, GUTIÉRREZ
la transformación tumoral de MSCs murinas a través de la manipulación del control de ARANDA IVÁN, BUENO UROZ CLARA, MONTES LORENZO ROSA, AYLLÓN CASES
ciclocelular y/o de la Introducción: de genes de fusión específicos de sarcomas. VERÓNICA, RAMOS-MEJÍA VERÓNICA, REAL LUNA PEDRO JOSÉ, MELÉN GUSTAVO
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JAVIER, PLAZA CALONGE MARÍA DEL CARMEN, RODRIGUEZ - MANZANEQUE JUAN CONCLUSIONES: La citometría de flujo es una metodología rápida y fiable para conocer
CARLOS, MENÉNDEZ BUJÁN PABLO el fenotipo de muestras de tejidos, que permite reconocer fácilmente diversas situaciones
Centro de trabajo: BANCO ANDALUZ DE CÉLULAS MADRE patológicas, procesos malignos infrecuentes y valorar la distribución de cadenas ligeras
en los linfocitos B.
Provincia: GRANADA
Correo electrónico del primer firmante: [email protected] Resumen Comunicación Científica - PANEL
Número: 152
Introducción:
La leucemia linfoblástica aguda pro-B (LLA-proB) del lactante con reordenamiento MLLAF4 K- ras: Diana Terapéutica
se caracteriza por su fatal pronóstico y su corta latencia. Sin embargo hasta la fecha todos Trabajo de: Anatomía Patológica.
los intentos que se han hecho para desarrollar un modelo de enfermedad sobre el que
Autor/a/s: Rosa Mª Garcia Centeno, Mª Teresa Valdajos de la Fuente, Clementina Ballesteros
testar nuevos protocolos de tratamiento han fallado ya que no reproducen ni el fenotipo ni
Lopez, Mª Jesus Lagarto Benito, Raquel Bajo-Grañosera, Manuel García Tejeiro.
la latencia observados en los pacientes.
Centro de trabajo: Hospital Clínico Universitario de Valladolid
Objetivo:
Provincia: Valladolid
El Objetivo: del presente trabajo se centro en desarrollar un modelo de LLA pro-B basado en
la expresión ectópica de MLLAF4 en células neonatales -células CD34+ de cordón umbilical Correo electrónico del primer firmante: [email protected]
(CU-CD34+)-, y células prenatales -células madre embrionarias humanas (hESCs)-. Introducción:
Material y métodos: K-ras es una proteína de la cascada de señalización del receptor del factor de crecimiento
Para ello las células CD34+ de CU transducidas con MLLAF4 o GFP se transplantaron epidérmico (EGFR) además de un oncogen de la familia ras.
en ratones NOD/LtSz-Scid IL-2R-/- (NSG) para estudiar su función y su capacidad Un descontrol en la cascada del EGFR puede ser la causa de procesos neoplásicos debido a
leukemogénica in vivo. In vitro se evaluó la capacidad clonogénica, proliferación y un incremento en el número de receptores del EGF, cuya estimulación induce la activación
de la proteína Ras. Este es un receptor con actividad tirosina quinasa que ha sido implicado
supervivencia. En las hESCs transducidas con MLLAF4 se evaluó in vitro su potencial de
en la promoción de eventos neoplásicos como mitogénesis, inhibición de apoptosis,
diferenciación a hemangioblasto y su posterior diferenciación a sangre y endotelio.
migración celular, angiogénesis y resistencia a las terapias.
La expresión de MLLAF4 en CU-CD34+ aumentó significativamente su capacidad Normalmente la activación del EGFR promueve la progresión del cáncer. Tras la unión del
repobladora y su migración in vivo. Igualmente aumenta la proliferación y supervivencia ligando la activación del EGFR provoca la transmisión de una señal intracelular a traves de
in vitro así como su capacidad clonogénica. La Introducción: de MLLAF4 en hESCs múltiples proteínas, entre ellas K-ras.
promueve la especificación a hemangioblasto, sin embargo dicho hemangioblasto tiene Esta señalización promueve la proliferación de las células cancerosas y la aparición de
comprometida su capacidad de formar sangre y presenta un aumento significativo de su metástasis.
potencial endotelial. En presencia K-ras no mutado, las terapias anti-EGFR inhiben la progresión del cáncer
Ni en CU-CD34+ ni en hESCs la expresión de MLLAF4 es suficiente para desencadenar un bloqueando la activación del EGFR.
proceso leucémico por lo que parece lógico pensar que a pesar de la corta latencia de la Objetivo:
LLA pro-B del lactante, la expresión de MLL-AF4 parece necesitar mutaciones secundarias Comprobar la utilidad clínica en el tratamiento del cáncer colorectal metastático.
para transformar CU-CD34+ y hESCs. MATERIAL Y METODOS:
RESULTADOS: y CONCLUSIONES: Hemos analizado 50 pacientes, 52% de dichos pacientes son varones con edades
El efecto de MLL-AF4 sobre el desarrollo embrionario del hemangioblasto hacia comprendidas entre 36 y 70 años y el 49% son mujeres de edades comprendidas entre
sangre y endotelio tiene implicaciones importantes y pone de manifiesto que tejidos no 47 y 84 años ,todo ellos con un diagnostico de adenocarcinoma. En nuestro laboratorio el
hematopoyéticos pueden formar parte del clon tumoral o estar al menos involucrados en la diagnostico de las mutaciones del gen K-ras la realizamos sobre tejido fijado en formalina
fisiopatología de la enfermedad. y embebido en parafina, hemos realizado 5 cortes de 5 u a partir del cual se realiza una
extracción de DNA por lisis del tejido con Proteinasa K. Con el DNA se realiza una PCR a
tiempo real con el termociclador LightCycler 480 II de Roche.
Resumen Comunicación Científica - PANEL
Número: 147 RESULTADOS:
El resultado del trabajo ha sido que de 50 casos analizados, 23 han sido positivos siendo
INMUNOFENOTIPAJE EN BIOPSIAS GANGLIONARES POR CITOMETRÍA DE FLUJO la mutación 12VAL la más repetida.
Trabajo de: Anatomía Patológica. CONCLUSIONES:
Por todo ello creemos que la detección de mutaciones de K-ras se revela como una de las
Autor/a/s: Núria Medina Esteban, Marta Aymerich, Neus Villamor técnicas que pasara a ser de rutina en los laboratorios de anatomía patológica.
Centro de trabajo: Hospital Clínic Barcelona. Servicio: Anatomía Patológica
Correo electrónico del primer firmante: [email protected] Resumen Comunicación Científica - PANEL
Número: 157
Introducción: Los estudios fenotípicos en tejidos se realizan de manera rutinaria con
técnicas inmunohistoquímicas (IHQ), mientras que en sangre se emplea de forma habitual DESARROLLO DE MODELOS TUMORALES DERIVADOS DE PACIENTES CON
citometría de flujo (CF). La utilización de CF después de obtener células en suspensión de CANCER DE MAMA PARA ESTUDIOS PRE-CLÍNICOS BASADOS EN TERAPIAS
tejido puede permitir ampliar el panel de anticuerpos a estudiar, reducir el tiempo hasta la DIRIGIDAS
obtención del resultado y mejorar la detección de restricción clonal. Trabajo de: Anatomía Patológica.
Objetivo:s: Valorar la contribución al estudio inmunofenotípico mediante citometría de Autor/a/s: Pilar Antón, Marta Guzman, José Jimenez, José Maria Perez, Yasir Ibrahim,
flujo al diagnóstico de la biopsia ganglionar. Josep Baselga
Material y métodos: Se analizaron 380 ganglios, 25 bazos y 17 muestras de otros Centro de trabajo: VHIO (Vall d’Hebron Instituto de Oncologia)
tejidos, que se incluyeron según el proceso habitual de patología y se procesaron por CF. Provincia: Barcelona
Las células en suspensión se obtuvieron disgregando el tejido ganglionar con la base del
embolo de una jeringa en medio de R.P.M.I (con 10% de suero bovino fetal) repetidas Correo electrónico del primer firmante: [email protected]
veces, seguido de una filtración a través de una membrana de 70 µM, o bien por infiltración Introducción:
repetida de medio de cultivo con una aguja fina. El cáncer de mama es el más frecuente en mujeres del primer mundo y la primera causa
Las suspensiones celulares se marcaron con inmunofluorescencia directa aplicando un de muerte.
panel de anticuerpos frente antígenos B y T. Objetivos:
RESULTADOS: Se observó una buena correlación entre la presencia de malignidad en el Existe una falta de modelos pre-clínicos representativos de la enfermedad en un contexto
tejido y la presencia de un patrón fenotípico anormal (218/250 casos) con la excepción del tridimensional. Nuestro Objetivo: es crear un modelo animal que asemeje este tipo de
linfoma de Hodgkin (p<0.001). El valor predictivo negativo del estudio fenotípico por CF es cáncer para realizar estudios con terapias dirigidas.
de 0.52 y el valor predictivo positivo de 1. Por CF, se observó restricción de cadena ligera Material y método:
en 182 de 201 linfomas B y en 0 de 142 procesos no B. Biopsias procedentes de tumores primarios y de metástasis de pacientes con cáncer de
El patrón de distribución de cadena ligera sólo pudo ser evaluado por IHC en 38 de 91 mama han sido implantadas subcutáneamente en ratones inmunodeprimidos. Las muestras
casos. La CF permitió un diagnóstico rápido de malignidad en patologías infrecuentes tumorales se han expandido en dos fases consecutivas hasta obtener el número de animales
como el sarcoma granulocítico o el linfoma linfoblástico T, o casos de doble patología (1% necesario para realizar estudios de eficacia antitumoral y análisis de biomarcadores. Tras la
de los pacientes). primera fase de expansión se ha comparado la histología y el genotipo del modelo generado
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con el tumor original del paciente. En la segunda fase de expansión (y subsiguientes) se Introducción:
han ensayado terapias dirigidas y combinaciones de ellas diseñadas de forma específica Actualmente mas del 80% de los hombres homosexuales portadores del virus de la
para cada tipo de tumor. Los estudios de eficacia antitumoral se han acompañado con un inmunodeficiencia adquirida (VIH), estan infectados por el virus del papiloma humano
análisis exhaustivo de marcadores de inhibición de las vías de señalización afectadas por (HPV), relacionados con lesiones displásicas anales y cancer anal, de ahí la importancia de
la terapia aplicada. elaborar estrategias de cribado con las citologias anales para su detección precoz.
RESULTADOS: Objetivos:
Un 20% de los tumores implantados ha desarrollado un modelo tumoral que refleja la Determinar la prevalencia de lesión escamosa intraepitelial anal, en pacientes portadores
histología y genotipo del tumor original. En un modelo de cáncer de mama triple negativo del virus VIH y su asociación con los siguientes factores:
se ha testado la administración conjunta de un inhibidor de la vía de PI3K en combinación Nivel de CD4
con un inhibidor de MEK. Se ha observado un efecto aditivo en la combinación de los Carga Viral
medicamentos, así como una atenuación de las vías de señalización implicadas. Tratamiento antirretroviral
CONCLUSIONES: Relaciones sexuales de riesgo
El modelo animal derivado de biopsias de cáncer de mama refleja la enfermedad y MATERIAL Y METODOS:
permite el estudio de combinaciones de terapias dirigidas in vivo, así como el análisis de Estudio observacional longitudinal prospectivo de 23 pacientes controlados en la consulta
biomarcadores. de Infecciosos de nuestro centro desde Septiembre de 2010 hasta el 15 de Febrero de
2011, de edades comprendidas entre 20-66 años. Incluimos a pacientes con historia de
Resumen Comunicación Científica - PANEL VIH y con presencia de los factores anteriormente descritos. Se excluyeron las citologias
Número: 158 contaminadas y aquellas con el diagnóstico de ASCUS. A todos los pacientes se les
realizó estudio de HPV, anoscopia, citologia anal y biopsia en caso necesario. Los datos se
ApoD como marcador pronóstico del Adenocarcinoma de colon analizaron con el programa SPSS.
Trabajo de: Anatomía Patológica. RESULTADOS:
Autor/a/s: Rosa Mª Garcia Centeno, Mª Teresa Valdajos de la Fuente, Raquel Bajo- De los 23 pacientes estudiados se excluyo uno por citologia contaminada y dos por
Grañosera, Manuel García Tejeiro, Rosa Bustamante Bustamante, presentar ASCUS. El 95% de los pacientes eran varones y el 5% eran mujeres. Del total de
los pacientes, 70% presentaban citologias negativas y el 30% LSIL-HPV. El 40% de los
Centro de trabajo: Hospital Clínico Universitario de Valladolid pacientes tenian niveles de CD4 entre 250-500 c/mm3, de las cuales el 50% presentaba
Provincia: Valladolid LSIL-HPV (p=0,845) y el otro 50% las citologias eran negativas. El 60% restante tenian
Correo electrónico del primer firmante: [email protected] niveles de CD4 mayor de 500 c/mm3 y de estos el 83,3% presentaba citologia anal negativa.
El 55% de los pacientes tenia carga viral indetectable y de estos el 27,2% presentaban
Introducción: LSIL-HPV. El 90% de los pacientes estaba con tratamiento antirretroviral. El 10% de los
Apolipoproteína D (ApoD) es una glicoproteína de la familia de las lipocalinas unidora de pacientes tenia HPV confirmado y el resto estan en estudio.
pequeños ligandos hifrofóbicos como progesterona y ácido araquidónico.
CONCLUSIONES:
En el plasma forma parte de los complejos HDL. En tejidos aumenta la expresión de ApoD
El diagnóstico de los tumores del ano suele realizarse cuando aparece la sintomatología,
con la edad y en patologías como el Alzheimer o la Esclerosis Múltiple dentro del sistema
lo cual implica que la enfermedad se encuentra en fase avanzada. La prevalencia de esta
nervioso. ApoD se ha relacionado con la parada del crecimiento celular y se conoce que la
patología ha aumentado en los pacientes VIH y esta relacionado con el HPV. La citologia
expresión del gen está regulado por proteínas de la familia de p53, por lo que se relaciona
anal es un examen sencillo y costo-efectivo que permite hacer Screening en poblaciones de
con algunos tipos de cáncer como el de mama, ovárico, hepático y en astrocitomas, en los
riesgo para evitar la aparición de cancer anal.
que ha sido propuesta como marcador de buen pronóstico.
En este trabajo hemos estudiado la relación de ApoD con el cáncer colorectal. Resumen Comunicación Científica - PANEL
Material y métodos: Número: 206
Se han estudiado 62 adenocarcinomas de colon y recto (de los cuales, 19 eran de Estadio
I, 18 de Estadio II, 10 de Estadio III y 15 de Estadio IV). Se colectaron muestras de tejido VIRUS BK EN PACIENTES CON TRASPLANTE RENAL. CULPABLE O INOCENTE?
tumoral y de mucosa sana. Una parte de cada uno de los tejidos se recogió congelada en
nitrógeno líquido para posteriormente medir proteínas utilizando la técnica de inmunoblot. Trabajo de: Anatomía Patológica.
Otra parte del tejido fue recogida en RNALater para su posterior extracción de RNA con TRIzol Autor/a/s: Mª Jesús Fernández Orgales, Magali Piso Neira, Alejandro Seoane Seoane, María
y medir la expresión génica mediante RT-PCR cuantitativa (usando sondas fluorescentes del Mar Perez Costoya, Josefa Buela Cruces, Ihab Abdulkader Nallib, José Cameselle-
SYBR Green). Una última porción de tejido se destinó para realizar inmunohistoquímica y Teijeiro, Jerónimo Forteza Vila.
fue procesada según la rutina del Banco de Tumores del HCUV (Inmersión en TissueTek e Centro de trabajo: Hospital Clínico Universitario, Santiago de Compostela.
isopentano). Provincia: A Coruña
CONCLUSIONES: Correo electrónico del primer firmante: [email protected]
Hemos comprobado que en los adenocarcinomas de colon la expresión del gen de ApoD
está reprimida. Esta represión es muy marcada en los tumores de Estadio I y mantenida Introducción:
en el resto de Estadios. La disminución de expresión del gen viene acompañada de una El virus BK es un virus de ADN de la familia de los Poliomavirus aislado por primera vez en
disminución de la cantidad de proteína en el tejido en todos los Estadios. Se observa 1971, a partir de la orina de un paciente con transplante renal. Puede transmitirse a partir
un cambio en el patrón de distribución celular de la proteína, pasando de aparecer en de los fluidos respiratorios, la orina o vía transplacentaria e infectar el sistema respiratorio,
células del mesénquima de la mucosa normal, a formar parte principalmente de los riñones y cerebro (a veces mortal al causar leucoencefalopatía multifocal progresiva). La
infiltrados inflamatorios en el Estadio I y de los núcleos necróticos en el Estadio IV. infección primaria ocurre en edades tempranas y el virus BK puede permanecer latente
Estos RESULTADOS: podrían indicar un control a nivel transcripcional del gen de ApoD en el tracto urogenital, especialmente en riñón. Su reactivación suele producirse en
ejercido por las células tumorales. Apoyan también el hecho de que lo propongamos como estados de inmunosupresión, como ocurre en algunos pacientes trasplantados. Debido a
complemento a las técnicas rutinarias de diagnóstico, demostrando que ApoD puede que la nefropatía producida por el virus BK puede llevar a la pérdida del injerto renal, su
usarse como un marcador pronóstico también en el adenocarcinoma de colon. diagnóstico es muy importante dado que los datos clínicos no permiten diferenciar entre la
I nefropatía inducida por el virus BK y el rechazo agudo, y ambos procesos tienen tratamiento
Resumen Comunicación Científica - ORAL diferente. En estos pacientes, la incidencia es mayor en los 3 meses post-transplante y
puede ocasionar una nefropatía túbulointersticial, ulceración y estenosis uretral así como
Número: 188 una cistitis hemorrágica. En el presente estudio se describen dos casos de infección por BK
CITOLOGIAS ANALES: IMPORTANCIA EN EL DIAGNÓSTICO DE LESIONES en varones de 49 y 52 años, con trasplante renal, deterioro de la función renal y sospecha
DISPLÁSICAS Y CANCER ANAL EN PACIENTES VIH EN EL ÁREA NORTE DE de rechazo agudo.
TENERIFE Objetivos:
Trabajo de: Anatomía Patológica. Se pretende mostrar la importancia de diferentes técnicas anatomopatológicas (citología,
Autor/a/s: CARMEN MARIA GIL CASANOVA - TANIA VIÑA PEREZ - LETICIA MELGAR histología, inmunohistoquímica, microscopía electrónica y técnicas moleculares) en la
VILAPLANA - CANDELARIA GARCIA CASTRO - JUAN LUIS GOMEZ SIRVENT - identificación de la nefropatía por el virus BK y su diagnóstico diferencial con el rechazo
ALEJANDRO JIMENEZ SOSA) agudo.
Centro de trabajo: HOSPITAL UNIVERSITARIO DE CANARIAS - LA LAGUNA - TENERIFE Material y métodos:
El análisis se realizó a partir de las muestras de orina y de biopsia renal en ambos
Provincia: S/C DE TENERIFE pacientes. Las muestras de orina se procesaron utilizando el ThinPrep Pap Test, (TPPT,
Correo electrónico del primer firmante: [email protected] Hologic, Malborough, Massachussets). Además del estudio histológico convencional
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(H&E) del tejido renal, se procedió al estudio inmunohistoquímico sobre secciones en El sistema OSNA analiza cada muestra por duplicado (una muestra normal y una diluida)
parafina usando el sistema EnVision (Dako, Glostrup, Dinamarca), que utiliza un polímero cuando los datos de la muestra normal son erróneos (inhibición de la muestra) y analiza los
de dextrano ligado a peroxidasa para evitar falsas positividades por la biotina endógena datos de la muestra diluida. Durante 2010 esto ocurrió en 10 ganglios. Comprobamos que
o la actividad biotina-like, utilizando como anticuerpo primario un anticuerpo comercial una de las inhibiciones se produjo por una excesiva cantidad de CK19 en la muestra y el
monoclonal específico, SV40 (SV40T-Ag, Oncogene Research products, Cambridge, MA, resto fueron debidas a las características químicas o presencia de sustancias inespecíficas
Estados Unidos). Se pudo realizar extracción de ADN del tejido de biopsia con el sistema (sales, colágeno, otras moléculas) en el ganglio que interfieren en la reacción inhibiéndola.
QIAamp DNA Mini Kit (QIAGEN, The Netherlands) de acuerdo con las instrucciones del CONCLUSIONES: Con la implantación de esta nueva técnica el Hospital Universitario
fabricante y tras la PCR se realizó una secuenciación bidireccional mediante electroforesis Rio Hortega incrementó en un 74% el nº de pacientes intervenidas con el protocolo de
capilar (ABI3730, Applied Biosystems). Para completar el estudio, también se realizó el ganglio centinela. Se eliminó el porcentaje de pacientes que fueron reintervenidas para la
estudio de microscopía electrónica a partir de tejido fresco de dichas biopsias, que se realización de linfadenectomía axilar, dicho porcentaje en 2008 fue del 14% y en 2009 del
había fijado en glutaraldehido, con post-fijación en tetróxido de osmio e inclusión en epoxi 17%. Esto supuso una mejora en la calidad del tratamiento de las pacientes al eliminar
resina de Spurr. las reintervenciones y un gran ahorro económico así como un mejor tratamiento de la
RESULTADOS: enfermedad.
En el examen histológico convencional pudo realizarse el diagnóstico de infección por el También observamos un incremento en el promedio de ganglios por paciente que tras la
virus BK tras reconocer el efecto citopático viral que ya había sido detectado en algunas implantación de la nueva técnica OSNA pasó de 1.76 y 1.9 en 2008 y 2009 respectivamente
células de la muestra urinaria (células decoy). Estos hallazgos fueron confirmados por la a 2,4 ganglios por paciente en 2010. Esto es debido a que tras la implantación de la nueva
positividad inmunohistoquímica para el antígeno SV40, la presencia de cápsides virales técnica que diagnostica las metástasis existentes en un periodo de unos 30 minutos, el
intranucleares en el estudio ultrarestructural y por la detección de la secuencia que codifica cirujano en muchas de las intervenciones envía junto al ganglio centinela los ganglios
para el antígeno T grande del virus BK en la secuenciación directa. siguientes, esto se debe a la baja fiabilidad por parte del cirujano al ser ésta una técnica
CONCLUSIONES: novedosa. Según la experiencia de otros hospitales esta fiabilidad aumenta con el paso
Nuestros hallazgos en ambos casos confirman la utilidad de diferentes técnicas del tiempo. También influye que la capacidad de análisis del OSNA es de 4 muestras. El
anatomopatológicas (citología, histología, inmunohistoquímica, microscopía electrónica y porcentaje de positividad en las muestras es variable entre los 3 periodos analizados,
técnicas moleculares) para el diagnóstico de la nefropatía por virus BK y su diagnóstico encontrando pequeñas diferencias entre los periodos previos a la implantación de la técnica
diferencial con el rechazo agudo. OSNA. La gran diferencia encontrada en este campo es el aumento significativo en el nº
de pacientes con metástasis que en 2008 y 2009 era de un 26% y 16% respectivamente
Resumen Comunicación Científica - ORAL y en el periodo 2010 pasó a ser de un 40%. Este incremento se debe a que con la técnica
Número: 216 en parafina se analiza una parte de tejido desperdiciando tejido en el desbastado y corte
del bloque tanto en congelación como en parafina y dejando parte del tejido en archivo
ANALISIS DE GANGLIO CENTINELA DE MAMA EN EL HOSPITAL RIO HORTEGA de bloques de parafina sin analizar, con la técnica OSNA se analiza la totalidad del tejido
TRAS LA IMPLANTACIÓN DE LA TECNICA OSNA.
Trabajo de: Anatomía Patológica. Resumen Comunicación Científica - PANEL
Autor/a/s: Francisco José Ortega Rojo, Marta González de la Parra y Raquel Muñiz Roces. Número: 248
Centro de trabajo: HOSPITAL UNIVERSITARIO RIO HORTEGA (VALLADOLID) La infección del HPV y HSV, ¿podría servir como marcador
Correo electrónico del primer firmante: [email protected] predictivo de la malignización de lesiones en cancer de cuello
uterino?
Introducción: La biopsia selectiva de ganglio centinela (GC) en cáncer de mama se viene
realizando en el Hospital Universitario Río Hortega desde hace más de 10 años y de forma Trabajo de: Anatomía Patológica.
protocolizada con estudio intraoperatorio desde hace 8 años. El protocolo de actuación Autor/a/s: Couso Folgueiras, Mª Elena; Rico Rodriguez, Trinidad Yolanda; Vieiro Balo,
comenzaba con el estudio intraoperatorio de los ganglios centinela mediante cortes en Paula; Insua Santamraria, Dora Cristina; Fernandez Campos, Mª Inés
congelación y posteriormente se procesaba la muestra en parafina utilizando cortes a 5 Centro de trabajo: Hospital Clinico Universitario (CHUS)
niveles diferentes del ganglio. El protocolo de tinción constaba de 14 tinciones de HE, 5
tinciones de citoqueratina AE1AE3 y un portaobjetos se guardaba para reserva, haciendo Localidad: Santiago de Compostela. Provincia: A Coruña
un total de 20 cortes. Con este tipo de protocolo se emitía un diagnóstico provisional Correo electrónico del primer firmante: [email protected]
intraoperatorio y el diagnostico definitivo se emitía 7 o 10 días después de la intervención
una vez concluído el estudio histológico definitivo. Introducción:
A partir de enero de 2010 se implantó una nueva técnica molecular para el estudio El virus del papiloma humano está estrechamente relacionado con lesiones precancerosas
intraoperatorio definitivo del GC, la técnica de OSNA (One Step Nucleic acid Amplification). y cancerosas en cérvix uterino. El largo intervalo entre la Lesión Intraepitelial Escamosa de
Es una técnica de replicación RT-LAMP, a temperatura constante y a tiempo real con la que Bajo grado (LSIL) y el cáncer cervical, así como la alta incidencia de infección por HPV en
medimos de manera semi-cuantitativa la CK19, a través de la turbidez obtenida durante la mujeres sexualmente activas, sugieren diversos cofactores asociados, que juegan un papel
replicación del ARNm por acción del pirofosfato de magnesio. El proceso automatizado importante en la progresión a malignidad de las lesiones cervicales inducidas por HPV. El
se realiza como una biopsia intraoperatoria, utilizando todo el ganglio linfático en fresco, Herpes simplex, ha sido largamente sopechoso de actuar como cofactor en el desarrollo
mientras la paciente está en quirófano. Una vez disecados los ganglios de la grasa, se del cáncer cervical; otros virus herpes son potencialmente candidatos. Desde el punto de
homogeiniza la muestra, se extrae una suspensión de la misma, se realizan una serie de vista epidemiológico y bioquímico se clasifican los HPV en dos grupos: alto riesgo y de
diluciones y posteriormente se introduce en la máquina que realiza la PCR RT-LAMP. bajo riesgo. El HPV 16 que pertenece al grupo de alto riesgo, ha sido el más ampliamente
Durante este proceso (que suele durar entre 20 y 30 min.) se mide la turbidez de la muestra estudiado y sirve como prototipo para el estudio de la carcinogénesis viral.
que se correlaciona con la cantidad de ARNm de CK19 y a su vez con el número de células Objetivos:
tumorales existentes en la muestra (ganglio). Estudiar la relación entre HPV 16 y otros genotipos de HPV de alto riesgo, con diferentes
Objetivos: Análisis de los resultados obtenidos del estudio del ganglio centinela en virus de la familia Herpesviridae, en pacientes con lesiones precancerosas (CIN I y ASCUS).
cáncer de mama mediante el sistema OSNA durante el primer año de implantación y
Material y métodos:
optimización del mismo y comparación de sus RESULTADOS: con los obtenidos por el
A partir de muestras de citología vaginal en medio líquido (ThinPrep) , realizamos la
método histológico antes descrito en los años 2008 y 2009.
determinación de virus herpes, mediante la técnica CLART ENTHERPEX del laboratorio
Material y métodos: Se obtienen los datos de las pacientes intervenidas de cáncer de
Genómica, siguiendo instrucciones del propio fabricante.
mama a las que se les aplicó la técnica de ganglio centinela durante el año 2008, 2009
Se hicieron tres grupos experimentales: grupo A con 14 muestras positivas para HPV 16;
Se analizan el nº de ganglios estudiados en cada caso y los RESULTADOS obtenidos. Se
obtienen también el nº de pacientes intervenidas en 2010, el nº de ganglios analizados con grupo B con 14 muestras que presentan coinfección con distintos HPV, y grupo C con
el sistema OSNA y sus resultados, comparando ambos métodos. Se hace referencia a los 8 muestras negativas para HPV y cuyo diagnóstico citológico era normal. Este último lo
problemas y ventajas encontrados en el manejo de la nueva técnica. consideramos nuestro grupo control .
RESULTADOS: RESULTADOS:
2008: 56 pacientes y 99 ganglios, promedio 1,76 ganglios por paciente. 8 pacientes con -En el grupo A: el 57,14% fueron negativas para virus herpes y el 42,7% positivas. De las
resultado negativo en intraoperatoria y positivo con el estudio posterior en parafina. 25% cuales 28,5% EBV+, y 14,2% H.SV VI+.
de los ganglios positivos. 26% de las pacientes con metástasis. -En el grupo B: 85,7 % fueron negativas para virus herpes y el 14,2% positivas, de las
2009: 59 pacientes y 112 ganglios, promedio 1,9 ganglios por paciente. 10 pacientes con cuales 7.1% son EBV+ y 7,1% HSV VI+.
resultado negativo en intraoperatoria y positivo con el estudio posterior en parafina. 17% -En el grupo C: el 87,5% fueron negativas y el 12,5% positivas para CMV
de los ganglios positivos. 16% de las pacientes con metástasis. CONCLUSIONES:
2010: 80 pacientes y 196 ganglios, promedio 2,45 ganglios por paciente. 25% de los En la muestra los casos que eran positivos sólo para HPV 16 presentaban mas probabilidad
ganglios positivos. 40% de las pacientes con metástasis. de infección por virus herpes. En el grupo de muestras con genotipos positivos para varios
—7—
HPV la probabilidad por infección por herpes era similar a las pacientes negativas para el SANZ;MARIA GUTIERREZ MATEOS;ESTHER ALONSO ESCUDERO; CARMEN GARCIA
papiloma virus. MACIAS.
Los datos obtenidos sugieren que la coinfección con HPV 16 y virus herpes en fases Centro de trabajo: Servicio de Anatomia Patologica-Hospital Universitario de Salamanca
tempranas de la lesión podría utilizarse como marcador de posible malignización de la
Correo electrónico del primer firmante: [email protected]
lesión, lo que serviría para identificar aquellas pacientes que requerirían un seguimiento
más exhaustivo. Introducción:
La alta incidencia del carcinoma pulmonar en ambos sexos y su mal pronóstico dependiendo
Resumen Comunicación Científica - PANEL del tipo histológico, unido a la gran utilidad de la técnica de punción aspiración con aguja
Número: 249 fina (PAAF) para la obtención de material adecuado para la aplicación de técnicas de
inmunocitoquímica en dichas muestras, justifica la realización del presente estudio por su
PROCESAMIENTO DE MUESTRAS. ESTUDIOS FARMACODINAMICOS EN importancia en el diagnóstico y tratamiento de los carcinomas de pulmón.
PACIENTES ONCOLOGICOS DE ENSAYOS CLÍNICOS.
Objetivo:
Trabajo de: ANATOMIA PATOLÓGICA Aplicar paneles de inmunocitoquímica en extensiones celulares obtenidas por PAAF que
Autor/a/s: Sánchez Vílchez, Gertrudis; Díaz García, Mª Ángeles; Peiró Navalpotro, Nerea; permitan realizar diagnósticos diferenciales correctos.
Ovalle Ribeiro, Elena; Jimenez Flores, Jose A. Material y métodos:
Centro de trabajo: Hospital universitario Vall d`Hebrón, servicio patología-molecular. El estudio se efectua sobre material obtenido por PAAF de 116 casos registrados durante
Provincia: Barcelona el año 2009 de pacientes con imagen radiológica de tumoración pulmonar en los que se
realiza PAAF, unos trans-bronquial y bajo control de eco-endoscopia, otros sin control
Correo electrónico del primer firmante: [email protected] radiológico, y un tercer grupo bajo control de TAC (tomografía axial computerizada).
Introducción: La Técnica de hematoxilina-eosina permitió controlar la cantidad y calidad del material
La farmacodinámica es el estudio de los efectos bioquímicos y fisiológicos de los fármacos recibido y realizar el diagnóstico de benignidad ó malignidad. Una vez realizado el
y de sus mecanismos de acción y la relación entre la concentración del fármaco y el efecto de diagnóstico citológico del material, en los casos donde no se puede afirmar tumor
éste sobre un organismo. Uno de los puntos importantes en un ensayo clínico en oncología primitivo pulmonar o metastásico y en los primitivos indiferenciados se aplican técnicas de
es observar y cuantificar el efecto producido por un fármaco en pacientes, mediante la inmunocitoquímica que permitan dar un diagnóstico de precisión.
obtención de biopsias seriadas durante el tratamiento. Utilizando dichas biopsias podemos Con el panel de inmunocitoquímica determinamos :
realizar diferentes técnicas, entre las que se encuentran, la inmunohistoquímica, búsqueda 1- diferenciación histológica de los tumores primitivos pulmonares:
de mutaciones génicas y otros estudios genómicos. Dependiendo del tipo de estudio que 1a- Carcinoma indiferenciado no microcítico sospechoso de epidermoide.
se quiera realizar, las biopsias deben ser procesadas de diferente manera. TTF1 +/-, P63 +, Napsin A -, cK7 +
1b- Carcinoma indiferenciado no microcítico sospechoso de adenocarcinoma.
Objetivos:
TTF1+, P63-, Napsin A+, CK7+
Debido a que los tiempos de preservación de las fosfoproteínas y del RNA son muy cortos 1c-Carcinoma microcítico.
(20-30 minutos) es importante garantizar una buena calidad de las muestras obtenidas; Sinaptofisina +, Cromogranina +, Enolasa Neuronal específica +, CD56 +,
la optimización de los procesos y circuitos para la obtención y conservación del material 2- Tumores metastásicos en pulmón:
biopsiado es primordial. TTF1, CK7, CK20,CDx2, CD10, ALC, CD125 . Pudiendo aplicar cualquier otro tipo de
Material y métodos: técnica inmunocitoquímica dependiendo de la sospecha citológica.
El material obtenido se procesa de las siguientes formas para los distintos fines RESULTADOS:
diagnósticos: De los 116 casos estudiados, se necesitó determinar diagnóstico diferencial mediante
- Fijación en formol e inclusión en parafina. panel de inmunotinción en 76 de ellos, de los cuales 32 fueron carcinoma epidermoide, 27
- Congelación en OCT y almacenaje a -80ºC. adenocarcinoma , 8 carcinoma microcítico y 9 metastásicos.
- Congelación en nitrógeno líquido y almacenaje a -80ºC. CONCLUSIONES:
Para el control de calidad de nuestras muestras realizamos los siguientes procesos: En este estudio hemos podido comprobar la sensibilidad y especificidad de la técnica
- Bloques de parafina. inmunocitoquímica aplicada a las muestras obtenidas mediante PAAF en lesiones
- OCT y nitrógeno líquido. neoplásicas pulmonares sospechosas mediante imágenes radiológicas.
Para la recogida del material, el personal técnico se desplaza a las diferentes unidades
donde se realizan las biopsias para garantizar los tiempos óptimos de fijación/congelación. Resumen Comunicación Científica - PANEL
Las biopsias destinadas a hacer bloques de parafina son sumergidas inmediatamente en
formol pre-enfriado a 4ºC y procesadas dentro de las 6-24horas siguientes a su extracción, Número: 304
dependiendo del tamaño de la misma. DETERMINACIÓN DE LA EFECITIVIDAD DE TRES PROTOCOLOS DE LISIS PARA
Las muestras congeladas son introducidas inmediatamente en nitrógeno líquido (-196ºC) LA EXTRACCIÓN DE ADN A PARTIR DE EXTENSIONES CELULARES
utilizando un contenedor específico y almacenadas en congeladores de -80ºC.
Trabajo de: Anatomía Patológica.
RESULTADOS Y CONCLUSIONES:
Durante los años 2009 y 2010 hemos participado en 28 ensayos clínicos, de los cuales Autor/a/s: MARÍA ANTONIA NÚÑEZ GARCÍA; MARÍA DEL CARMEN RODRÍGUEZ
hemos obtenido las siguientes muestras: GONZÁLEZ; ELENA JULIA ALONSO MORRONDO; MARÍA ISABEL GARCÍA MARTÍNEZ;
- 1249 tejidos fijados en formol e incluidos en parafina. BELÉN RIVAS MARCOS; RUTH GERVÁS RÍOS; JUAN JOSÉ GARRIDO GALLEGO
- 1261 tejidos congelados en nitrógeno líquido y conservados a -80ºC. Centro de trabajo: Servicio Anatomía Patológica-Hospital Universitario de Salamanca
- 259 tejidos congelados en OCT y conservados a -80ºC. Correo electrónico del primer firmante: [email protected]
Se han realizado controles de calidad adecuados al empleo de cada muestra y hemos
obtenido los siguientes resultados: Introducción:
- Muestras Incluidas en Parafina: Preservación de las fosfoproteínas en un 96% de las Las actuales técnicas diagnósticas basadas en biología molecular están cada dia más
muestras analizadas y del 99% en la cantidad-calidad de ADN extraído. presentes en los laboratorios, lo cual nos leva a la necesidad de establecer protocolos de
- Muestras Congeladas: Preservación de las fosfoproteínas en un 93% de las muestras actuación que determinen unos RESULTADOS: finales exitosos.
analizadas, del 99% en la cantidad-calidad de ADN extraído y del 93% en la calidad del Objetivo:
ARN extraído. Evaluar tres protocolos de lisis y purificación en la extracción de ADN, a partir de extensiones
La optimización de los circuitos de recogida y procesado es el factor determinante a la hora celulares teñidas previamente con Papanicolau, para posteriormente determinar el estado
de considerar la calidad de las muestras y su eficiente utilización, de manera que éstas de ADN y su viabilidad para técnicas de biología molecular (EFGR,HPV y K-RAS).
provean información fidedigna que justifique su recolección.
Material y métodos:
Resumen Comunicación Científica - PANEL El estudio se efectua sobre extensiones citológicas (esputos) teñidas con Papanicolau, de
seis pacientes con patología pulmonar neoplásica ,en los que se requiere una extracción de
Número: 303 ADN para estudios posteriores de biología molecular.
APLICACION DE INMUNOCITOQUIMICA EN EL DIAGNOSTICO DE TUMORES DE Se toman de cada caso tres portas, se recupera el material raspando el porta y se
PULMON EN MATERIAL OBTENIDO POR PUNCION ASPIRACION AGUJA FINA resuspenden con buffer de lisis.
Cada caso se somete a tres protocolos distintos:
Trabajo de: Anatomía Patológica. Protocolo A: Con 180 ¼l de muestra se utilizo el kit comercial QIAMamp® DNA Mini Kit
Autor/a/s: MARIA ANGELES PACIOS PACIOS; ELENA JULIA ALONSO MORRONDO; siguiendo el protocolo de lisis y purificación para sangre y tejidos que marca el proveedor
ROBERTO RODENAS FERNANDEZ; FRANCISCA PORRAS TRIGO; ESTEFANIA MOYANO Ambos pasos se realizan de manera automática con QIAcube de QUIAGEN.
—8—
Protocolo B: 25 ¼l de proteinasa K (Genómica) con 180 ¼l de muestra a 56º en termobloque Resumen Comunicación Científica - ORAL
2 horas. Número: 315
- La muestra resultante se somete a una nueva lisis y purificación de manera automática
con QIAcube. GANGLIO CENTINELA DE MAMA: RENOVARSE O MORIR. ARN VS CONGELACION
protocolo C: 25 ¼l de proteinasa K con 180 ¼l de muestra a 56º en termobloque 2 horas. Trabajo de: Anatomía Patológica.
- La muestra resultante se somete a una purificación automática con buffer purification
Autor/a/s: Carmona Manzaneda, Noemí; Cerdán Tudela, Miriam; Román Ruiz, Jenifer;
QIAamp DNA FFPE para tejidos.
Hurtado Mas, Silvia; Gabaldón Ortega, Francisco Javier; Peg Cámara, Vicente.
Para la determinación de la calidad del ADN extraido se realizaron lecturas de absorbancia
en el Nanodrop. Centro de trabajo: Hospital Universitario Vall d’Hebron. Servicio de Anatomía Patológica.
Barcelona.
RESULTADOS: Correo electrónico del primer firmante: [email protected]
Protocolo A Protocolo B Protocolo C Introducción: No cabe duda que hoy en día todo el mundo conoce la existencia del ADN.
En el año 1953 Watson y Crick descubrieron la doble hélice, quien iba a decir que su
ADN Sales ADN Sales ADN Sales
descubrimiento acabaría siendo utilizado en el diagnóstico intraoperatorio del ganglio
1 16´6 2´18 20,0 1.99 69´1 1´94 centinela en el cáncer de mama, en concreto, valorando el ARN.
2 5´4 2´20 9´3 2´12 17´5 2´00 Objetivoa: Dar a conocer el uso del ARN mensajero de la citoqueratina 19 para el
3 3´7 2´87 8´6 2´24 24´0 2´29 diagnóstico de metástasis.
4 3´5 2´34 3´7 2´32 21´0 2´05 Comparar el proceso convencional (impronta y criocorte) de las muestras de ganglio
centinela de mama con el método OSNA(One Step Nucleic Amplification).
5 8´4 2´24 7´1 2´04 19´1 2´12
Valorar las ventajas e inconvenientes del procesamiento de las biopsias intraoperatorias del
6 1´5 3´17 0´7 -1´61 4´4 2´98 ganglio centinela de mama por congelación y por el método OSNA.
Se considera como ADN con un buen nivel de pureza cuando estos valores se encuentran Material y métodos: Estudiamos 97 ganglios de 48 pacientes por congelación y por el
>10 ng / ¼l y unos valores de concentración de sales entre 1´6 y 2´4. método OSNA para la detección de la citoqueratina 19 en el ganglio centinela.
El protocolo C , probó ser el más eficiente para extraer ADN a partir de extensiones celulares
PROCEDIMIENTO: A cada ganglio centinela se le realizan 4 cortes sagitales y los
previamente teñidas.
fragmentos obtenidos de forma alterna se destinan a los 2 métodos a comparar.(1-3 o 2-4).
CONCLUSIONES: Las dos partes de ganglio para estudio convencional se analizan por impronta, congelación
El trabajo realizado pone de manifiesto que el material recogido para estudio citológico de los fragmentos, corte en el criostato y tinción con Hematoxilina/Eosina y posterior
también es útil y viable para la elaboración de técnicas de biología molelcular que deriven estudio en parafina.
en un diagnóstico concreto y un tratamiento personalizado. Las otras dos partes restantes se homogenizan, se extrae el ARN mensajero y se obtienen
dos muestras, una concentrada y otra diluida para la detección de la citoqueratina 19 por
Resumen Comunicación Científica - PANEL el método OSNA.
Número: 306 RESULTADOS: De 97 ganglios analizados correspondientes a 48 pacientes:
-Por el método convencional el 76% de ganglios fueron negativos, en un 7% se detectaron
LINFOMA T CUTANEO EN CELULAS DEL DONANTE EN PACIENTE TRASPLANTADO
células aisladas y el 17% restante fue positivo, de los cuales en un 11% se diagnosticaron
DE MEDULA OSEA.DEMOSTRACION MEDIANTE TECNICAS DE LABORATORIO macrometástasis y en un 6% micrometástasis.
Trabajo de: Anatomía Patológica. -Por el método OSNA se detectaron un 67% de ganglios negativos, en un7% se detectaron
células aisladas y un 26% de casos positivos, de los cuales un 17% correspondieron a
Autor/a/s: NOELIA MACIAS GONZALEZ; PILAR SANTAMARIA BASILIO; ANGUSTIAS
macrometástasis, un 9% a micrometástasis.
PEREZ SANCHEZ; JOSE FERNANDO PEREZ-FONTAN FERNANDEZ; GRACIA MONESCILLO
En lo que se refiere al tiempo empleado en realizar la técnica por el método convencional
MARTIN; MIRIAM NAVAS PALENCIA; ANGEL SANTOS-BRIZ TERRON
se tarda una media de 28,12 minutos. Este diagnóstico no siempre es definitivo con lo
Centro de trabajo: Servicio Anatomia Patológica-Hospital Universitario Salamanca cual debe realizarse el estudio en parafina y como consecuencia se alarga en 2 o 3 días el
Correo electrónico del primer firmante: [email protected] diagnóstico definitivo.
El tiempo medio empleado en la técnica OSNA es de 41,13minutos y conseguimos el
Introducción: diagnóstico definitivo.
Los linfomas T cutáneos en pacientes trasplantados suelen ser poco frecuentes y más aun
CONCLUSIONES: El tiempo que se tarda en dar un diagnóstico intraoperatorio es muy
cuando se trata de trasplantes alogénicos de médula ósea. Presentamos el caso de un
importante. Cierto es que por el método convencional éste es mucho más rápido pero no
paciente varón con antecedentes de linfoma no Hodgkin que desarrolla una lesión cutánea
definitivo.
linfoproliferativa tipo T después de recibir un trasplante hematopoyético.
Gracias al método OSNA se puede analizar la totalidad del ganglio. Es una técnica
Objetivo: automatizada, reproducible y elimina la subjetividad. Nos proporciona un diagnóstico.
Determinar, mediante técnicas de laboratorio, el diagnóstico de linfoma T cutáneo en
paciente trasplantado de médula ósea. Resumen Comunicación Científica - PANEL
MATERIAL Y METODOS: Número: 316
Paciente varón de 56 años, con antecedentes de linfoma no Hodgking, receptor de
trasplante de médula ósea de su hermana. Pasados seis años acude con lesiones cutáneas RECOMENDACIONES PARA LA CORRECTA REALIZACIÓN DEL MÉTODO OSNA EN
EL ANÁLISIS DEL GANGLIO CENTINELA DE MAMA.
de tres meses de evolución que no mejoran con tratamiento tópico con corticoides. Se
realiza biopsia cutánea que tras fijación formólica e inclusión en parafina se procesa Trabajo de: Anatomía Patológica.
para estudios histológicos, inmunohistoquímicos y FISH( hibridación in situ de sondas Autor/a/s: Cerdán Tudela, Miriam; Carmona Manzaneda, Noemí; Hurtado Mas, Silvia;
marcadas con fluorescencia). Se reserva material en fresco para estudios moleculares de Román Ruiz, Jenifer; Gabaldón Ortega, Francisco Javier; Iglesias Felip, Carmela.
PCR y Quimerismo.
Centro de trabajo: Hospital Universitario Vall d’Hebron. Servicio de Anatomía Patológica.
RESULTADOS: Barcelona.
Los cortes histológicos teñidos con Hematoxilina-eosina mostraron un denso infiltrado
Correo electrónico del primer firmante: [email protected]
celular de linfocitos con morfología atípica. Se realizó un panel de marcadores linfocitarios,
obteniendo positividad para los antígenos: CD3; CD4; CD5 y CD7, y negatividad para CD8 Introducción:
y CD56, con un índice proliferativo (Ki67 del 20%). Estudios moleculares mediante PCR El método OSNA (One Step Nucleic Acid Amplification) es una técnica molecular cuantitativa
para detectar rearreglos del gen receptor de células T de la cadena ³ mostró clonalidad recientemente validada para el estudio intraoperatorio del ganglio centinela de mama. Se
de células T. Las sondas para los cromosomas X e Y marcadas con fluorescencia en la basa en la detección en la totalidad del ganglio del ARN mensajero de la citoqueratina 19.
hibridación in situ muestran cariotipo XX en las células neoplásicas, en contraste con el El ARN es una estructura poco estable, con lo cual para trabajar con él se deben tener en
cariotipo XY en las células cutáneas . El estudio de quimerismo por microsatélites demostró cuenta ciertas recomendaciones.
que las células neoplásicas procedian de la donante. Objetivo:
CONCLUSIONES: Analizar en una serie de casos los problemas detectados debidos a defectos en
de los resultados obtenidos se deduce que estamos ante un nuevo caso de linfoma T post- la manipulación del ganglio y, basándonos en los resultados, proponer algunas
trasplante de precursores hematopoyéticos, y el primero con afectación primaria cutánea. recomendaciones para evitar posibles errores diagnósticos.
—9—
Material y métodos: su arquitectura celular.
Entre mayo y diciembre de 2010 se estudiaron 288 ganglios correspondientes a 139 La manipulación de las muestras es diferente y con el proceamiento de ellas y la información
pacientes. El procedimiento requiere que todo el material que está en contacto con la clínica ayudará al patólogo a realizar un buen diagnóstico.
muestra sea estéril. Cuando se recibe el ganglio, el patólogo retira la grasa que lo acompaña
con la ayuda de pinzas y bisturí estériles. El ganglio se pesa, se corta homogéneamente y Resumen Comunicación Científica - PANEL
se introduce en un tubo falcon que contiene Linorhag, reactivo necesario para evitar la Número: 329
degradación del ARN. El técnico tritura el ganglio con una pala de homogenización durante
un minuto y medio. Se procede a la extracción del ARN hasta obtener dos muestras, una (MÉTODO MOLECULAR PARA EL ANÁLISIS DEL GANGLIO CENTINELA AXILAR EN
concentrada y otra diluida. Por último, se introducen las muestras en el analizador para CARCINOMAS DE MAMA)
obtener el resultado. Trabajo de: Anatomía Patológica.
RESULTADOS: Autor/a/s: ( ENGRACIA SANTÍN PIEDRAFITA, PAZ CASTRO VAL , Mª LUZ BALTASAR
Únicamente en 3 de los 288 ganglios analizados el resultado obtenido no fue válido por MOREIRA JOSÉ MARÍA GONZÁLEZ HERBÓN, NURIA GONZÁLEZ DORADO, LOURDES
defectos en la realización de la técnica. En 2 casos se produjo contaminación de la muestra RODRÍGUEZ CASADO,ANA LUISA ALONSO MONJE, ROSARIO TURIEL VICENTE, ANGELA
por no realizar el tallado sobre una superficie desinfectada. En el tercer caso no se pudo MIGUELEZ SIMÓN)
analizar la muestra por un exceso de grasa -como consecuencia de no retirarla bien del
Centro de trabajo: (COMPLEJO ASISTENCIAL UNIVERSITARIO DE LEÓN)
ganglio- y por no pipetear correctamente.
Correo electrónico del primer firmante: ([email protected])
CONCLUSIONES:
Nuestra experiencia corrobora la necesidad de una correcta manipulación de la muestra, Introducción:.
trabajando sobre una superficie desinfectada y con material estéril. Es también importante El ganglio centinela de mama (GCM) es el primer ganglio linfático regional que recibe la
disecar el ganglio cuidadosamente, evitando la presencia de grasa acompañante que linfa de la zona donde se asienta el tumor, constituyendo un escalón en la progresión de
pueda interferir en el análisis. En la mayor parte del proceso el técnico juega un papel muy la enfermedad. Su detección es importante para evitar la práctica de una linfadenectomía
importante y, junto al patólogo, deberá constituir un buen equipo de trabajo para conseguir regional completa evitando problemas secundarios para la paciente.
los resultados adecuados y, así, el óptimo aprovechamiento de esta técnica molecular El estudio del GCM lo realizábamos a través de la biopsia intraoperatoria, pero actualmente
novedosa y de gran fiabilidad diagnóstica. se utiliza el método OSNA (Amplificación de un solo paso de ácidos nucleicos) que es una
tecnología rápida y directa, para detectar la citoqueratina 19 RNAm presente en los nódulos
Resumen Comunicación Científica - PANEL linfáticos regionales metastásicos del carcinoma de mama.
Número: 317 MATERIAL:
En el Complejo asistencial universitario de León desde junio del 2009 hasta diciembre del
MANEJO DE LAS MUESTRAS OFTALMOLÓGICAS EN EL LABORATORIO DE 2009 se han estudiado 54 casos de GCM.
ANATOMÍA PATOLÓGICA. Desde junio del 2010 hasta diciembre del 2010 se han estudiado 58 casos de GCM.
Trabajo de: Anatomía Patológica. MÉTODOS:
Autor/a/s: Carmona Manzaneda, Noemí; Cerdán Tudela, Miriam; Gabaldón Ortega, Junio 2009-diciembre 2009: Estudio intraoperatorio y estudio posterior en parafina
Francisco Javier; Román Ruiz, Jenifer; Hurtado Mas, Silvia; Magrans Breu, Pilar; Huguet (morfológico con H-E e inmunohistoquímico con citoqueratinas).
Redecilla, Pere. Junio 2010-diciembre 2010: Estudio cuantitativo del RNAm de la CK19 (Método OSNA) e
interpretación (- negativo, + micrometastasis y ++ macrometastasis) durante la intervención
Centro de trabajo: Hospital Universitario Vall d’Hebron. Servicio de Anatomía Pâtológica. quirúrgica.
Barcelona.
RESULTADOS:
Correo electrónico del primer firmante: [email protected] Junio 2009-diciembre 2009: Negativos 41, positivos 14 de estos 6 se diagnoticaron a
Introducción: través de la intraoperatoria y 8 por el estudio en parafina.
Junio 2010-diciembre 2010: Negativos 29, positivos 29 de los cuales 17 fueron
En el éxito de un buen buen diagnóstico histopatológico y citológico en el Servicio de macrometastasis y 12 micrometastasis.
Anatomía Patológica intervienen muchos factores:
La correcta obtención de la muestra. CONCLUSIONES:
El método OSNA permite el diagnostico definitivo durante la intervención quirúrgica
El envío de la muestra en condiciones óptimas.
evitando segundas intervenciones.
Rapidez en el transporte si se envia en fresco.
Debido a su alta sensibilidad y especificidad (100%) detecta micrometastasis que pueden
Fijador adecuado según el proceso a realizar.
pasar inadvertidas con otros métodos.
Buena manipulación en los diferentes pasos hasta llegar al patólogo.
Objetivos: Resumen Comunicación Científica - PANEL
Dar a conocer a los Técnicos Superiores en Anatomía Patológica y Citología los Número: 330
conocimientos básicos de nuestro laboratorio sobre la manipulación y procesamiento de
las muestras oftalmológicas. (EXPRESIÓN DE LOS RECEPTORES DE MELATONINA MT1 Y MT2 POR
INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA EN PACIENTES CON NEUROFIBROMATOSIS
MATERIAL Y MÉTODO: TIPO1)
En el año 2010 se recibieron en el Servicio de Anatomía Patológica 30200 biopsias de las
cuales 193 fueron oftalmológicas. Estas muestras procedian de: Párpado: 75, Córnea: 56, Trabajo de: Anatomía Patológica.
Conjuntiva: 19, Orbita: 16, Evisceración: 11, Piel: 9, Músculo: 4, Exenteración: 3. Autor/a/s: (ROSARIO TURIEL VICENTE, ISIS ATALLAH, ENGRACIA SANTÍN PIEDRAFITA,
Todas las biopsias tienen un procesamiento común: Muestreo de la pieza, fijación en RAQUEL GONZÁLEZ MARTÍNEZ, LOURDES RODRÍGUEZ CASADO , ANA LUISA ALONSO
formol al 10% tamponado, inclusión en parafina, confección del bloque, corte y tinción MONJE, Mª LUZ BALTASAR MOREIRA, PAZ CASTRO VAL , JOSÉ MARÍA GONZÁLEZ
con Hematoxilina-Eosina. HERBÓN, TERESA RIBAS ARIÑO)
Por otra parte se recibieron 25350 citologías de las que 33 fueron oftalmológicas. Centro de trabajo: (COMPLEJO ASISTENCIAL UNIVERSITARIO DE LEÓN)
Según el tipo de citología se procesan de una forma u otra: Correo electrónico del primer firmante: ([email protected])
- Procesamientio del humor vítreo: Obtención de la muestra por PAAF, recepción
de la muestra en el laboratorio de citología, centrifugación a 500 rpm y se obtienen 2 Introducción:
preparaciones, una se fijará al aire para su posterior tinción con Diff-Quick y la otra se fijará La melatonina es una hormona secretada por la glándula pineal siguiendo un patrón
en alcohol para teñirla con Papanicolaou. circadiano. Tiene un papel importante en la regulación de tumorogénesis por la unión de
- Procesamiento de la citología exfoliativa mediante raspado: Obtención de la muestra por receptores de alta afinidad (MT1 y MT2) y baja afinidad (MT3).
contacto del ojo con un portaobjetos, fijación con Citospray y tinción con PAPANICOLAOU. La neurofibromatosis tipo 1 (NF1) es una enfermedad neurocútanea de herencia autosómica
- Procesamiento de la citología de impresión: Obtención de la muestra por contacto del ojo dominante que predispone a la formación de tumores benignos del sistema nervioso
con papel Microporeado, fijación con Citospray y tinción con PAS. periférico: neurofibromas cutáneos (NFc) y neurofibromas plexiformes (NFp). El 30% de
los NFp suele malignizar y transformarse en un tumor maligno de la vaina del sistema
RESULTADOS: nervioso periférico (MPNST).
Cada tipo de muestra se envía a diferente laboratorio para tratarla como muestra citológica o Varios estudios han sugerido un déficit de melatonina en varias complicaciones asociadas a
histológica. Su manipulación es diferente y con nuestros resultados y la información clínica la NF1. Además, moscas Drosophila mutantes para NF1 muestran una alteración completa
ayudará al patólogo a dar un buen diagnóstico. del ritmo circadiano.
CONCLUSIÓN: El principal objetivo de este proyecto fue estudiar el patrón de expresión de los receptores
La fijación debe realizarse lo más rápido posible para conseguir que los tejidos conserven MT1 y MT2 en los tumores neurocutáneos asociados a la NF1.
— 10 —
MATERIAL: µl de fluoresceína al 0,02 % en la parte superior del Transwell® y se incubó a 37ºC
Estudiamos 57 tumores primarios asociados a la NF1 (NFc 25; NFp 19; MPNST 13). durante 30min. Posteriormente se recogió el medio de la parte inferior del Transwell®
Anticuerpos: MEL-1AR (V-15), MEL-1BR (T-18) y donkey anti-goat IgG-FITC de Santa y se cuantificó la fluoresceína presente midiendo la absorbancia a 490 nm con un lector
Cruz Biotechnology. de placas SpectraMax multidetection® M5 (Bionova científica S.L). Los resultados
MÉTODOS: se expresaron como % de fluoresceína retenida respecto al control. Ambos estudios se
La expresión de MT1 y MT2 fueron estudiados por inmunofluorescencia indirecta en llevaron a cabo por triplicado (N=3).
secciones de parafina usando anticuerpos policlonales de cabra MEL-1AR y MEL 1 BR. El análisis estadístico se llevó a cabo mediante un ANOVA de dos factores. Se consideraron
RESULTADOS: como diferencias significativas p ≤ 0.05 (*).
PORCENTAJES DE RESULTADOS:
MT1 CASOS NEGATIVOS POSITIVOS Se vio una disminución significativa en los valores de TER en las células estimuladas con la
POSITIVOS
citoquina pro-inflamatoria TNF± y fueron un 10% más permeables que las células control.
NFc 25 0 25 100% La citoquina IL-10 (anti-inflamatoria) no indujo cambios significativos en los valores de
NFp 19 1 12 95% TER ni en los valores de TEP.
Con el fin de evaluar un efecto protector de la IL-10 en la función de barrera de la córnea
MPNST 13 5 8 61% se estudiaron el TER y el TEP en las células HCE tras la exposición combinada a las
citoquinas TNF± e IL-10. Ambos valores fueron significativamente mayores después de
PORCENTAJES DE la co-estimulación en comparación con los valores obtenidos tras la estimulación con
MT2 CASOS NEGATIVOS POSITIVOS
POSITIVOS TNF± en solitario. Este resultado indica que las células expuestas a TNF± presentan menos
NFc 25 1 14 93% resistencia eléctrica y más permeabilidad a la fluoresceína que cuando está presente la
IL-10.
NFp 19 6 13 68%
MPNST 13 2 11 84% Conclusión:
TNF± e IL-10 alteran la función de barrera del epitelio corneal. IL-10 desempeña un papel
CONCLUSIONES: protector en la barrera corneal mientras que TNF± estaría implicado en su deterioro.
Aunque la técnica de inmunofluorescencia se recomienda realizar sobre tejido en Además, la IL-10 sería capaz de contrarrestar, en cierta medida, el efecto del TNF±.
congelación nosotros solo disponíamos de muestras en parafina obteniendo unos Financiación: CICYT MAT2007-64626-C02-01 y Acción Integrada-España/Alemania
resultados óptimos. Siendo además una técnica sensible para el estudio de los receptores DE2009-0085; Ministerio de Ciencia e Innovación.
MT1 y MT2.
La melatonina tiene una actividad oncostática en varios tipos de cáncer, incluyendo tumores Resumen Comunicación Científica - PANEL
de origen mesenquimal como los asociados a la NF1, y parece actuar sinérgicamente con
otros agentes quimioterapéuticos. La mayoría de los tumores asociados a la NF1 expresaron Número: 343
MT1 y MT2, por lo que los pacientes podrían beneficiarse de la administración terapéutica MODELO ORTOTOPICO EN CANCER DE MAMA.
de melatonina nocturna.
Trabajo de: Anatomía Patológica.
Resumen Comunicación Científica - ORAL Autor/a/s: Antonio Luque García / Marta Escorihuela Baez
Número: 342 Centro de trabajo: VHIO (Vall d’Hebron Institut Oncològic)
Efecto de la IL-10 sobre la función de barrera del epitelio corneal Provincia: Barcelona
en un modelo de inflamación in vitro Correo electrónico del primer firmante: [email protected]
Trabajo de: Anatomía Patológica. Introducción:
Autor/a/s: Antonio López-García, Laura Contreras-Ruiz, Laura García-Posadas, Isabel
El cáncer de mama es el tumor más frecuente en las mujeres occidentales. En España
Arranz-Valsero, Yolanda Diebold.
se diagnostican alrededor de 22.000 nuevos cánceres de mama cada año. Gracias a los
Centro de trabajo: Instituto de oftalmobiología aplicada (IOBA) programas de detección precoz y a los avances en el diagnóstico y tratamiento cada
Provincia: Valladolid día es mayor el número de mujeres que viven con el cáncer de mama y lo superan. La
Correo electrónico del primer firmante: [email protected] investigación es fundamental para lograr mejores resultados en la lucha contra el cáncer.
Concretamente, el desarrollo de modelos animales que reproduzcan tumores humanos
Introducción: pude ayudar a avanzar en el tratamiento de este tipo de cáncer.
La superficie ocular es una estructura mucosa expuesta a una gran variedad de agentes
ambientales, potencialmente nocivos. Dentro de esta estructura, el epitelio de la córnea Objetivos:
forma una barrera que no sólo regula el movimiento pasivo de las moléculas, sino que El objetivo de nuestro trabajo es la obtención de tumores en ratón con las mismas
también evita la entrada de material extraño al ojo. La función de barrera del epitelio corneal características fenotípicas que los tumores de mama humanos, partiendo de células
puede verse alterada como consecuencia de varios factores, siendo la inflamación uno de individuales de muestras de pacientes.
los más importantes. Se sabe que las células epiteliales de la córnea participan activamente Material y métodos:
en procesos inflamatorios, expresando moléculas co-estimuladoras y de adhesión en Ratones NOD/ SCID de 3 semanas.
respuesta a diferentes citoquinas, como por ejemplo TNF± (factor pro-inflamatorio) e IL-10.
Muestras de pacientes (cáncer de mama) proporcionadas por el hospital.
Objetivo: Material de cirugía.
Evaluar el efecto de la IL-10 en la función de barrera corneal mediante estudios funcionales Sutura Polypropileno.
en un modelo in vitro de inflamación ocular. Anestesia (Ketamina + Xilacina).
Material y métodos: Analgésicos (Metacam).
Se cultivaron células epiteliales de córnea humana (línea celular HCE) sobre una membrana Caliper Digital.
de policarbonato, con 0,4 micras de poro (placa Transwell® de 24 insertos). El medio de Chips identificativos.
crecimiento fue DMEM-F12 suplementado con 15% de FBS, 100U/ml de penicilina, 0,1 Lector de chips.
mg/ml de insulina, 100 µg/ml de EGF, 0,5% de DMSO y 1 mg/ml de toxina colérica. Se La obtención de muestras de pacientes se realiza con el consentimiento de un comité ético
dejaron crecer durante 8 días hasta que se formó una monocapa celular. Las células se del hospital. Una vez tenemos la muestra de paciente en el laboratorio, se disgrega hasta
incubaron con medio sin suplementos durante 24h, posteriormente, fueron estimuladas obtener células individuales (epiteliales, fibroblastos, etc..), estas células serán las que se
con 25 ng/ml de TNF±, 20 ng/ml de IL-10 y una combinación de IL-10 y TNF± (10 ng/ ml inyecten previa disección parcial de la mama 4 o 6 del animal, con la que se eliminan las
cada una) durante 48h. células epiteliales murinas, favoreciendo el crecimiento de células humanas y no de ratón.
Se realizaron ensayos funcionales para evaluar el efecto de las diferentes condiciones
Desde el primer momento de la operación el agua que beben los animales se trata con
inflamatorias en la función de barrera del epitelio corneal. La evaluación incluyó mediciones
B-Estradiol y antibiótico. Durante las siguientes semanas se hace un seguimiento del ratón,
de resistencia eléctrica transepitelial (TER) y de permeabilidad transepitelial (TEP).
observando si hay crecimiento tumoral, en caso positivo se mide semanalmente hasta que
El ensayo de TER permitió medir la resistencia al flujo de iones a través de la monocapa
celular con el sistema de Millicel-ERS (Millipore, Billerica, MA, EE.UU.). Los resultados se se alcanza un máximo estipulado por el comité ético de animales.
expresaron como la resistencia de la muestra en relación con la del control sin estimular. RESULTADOS:
El ensayo de TEP determinó la permeabilidad de la monocapa epitelial a la difusión de Durante el año que hemos llevado a cabo esta técnica hemos obtenido un 15% de
fluoresceína sódica a través de la barrera celular. Para este ensayo se añadieron 200 crecimiento de tumores de pacientes en ratón.
— 11 —
CONCLUSIONES: Conclusión:
Los tumores obtenidos en los ratones reproducen el fenotipo del tumor original. Ambos marcadores se han estandarizado para su detección inmunohistoquímica sobre
El porcentaje de crecimiento obtenido se encuentra dentro de lo esperado según secciones de tejido fijado e incluido en parafina. Su expresión en áreas específicas, donde
publicaciones del campo. previamente se ha descrito la ubicación de las células madre adultas normales, permite que
sean utilizados en estudios de identificación de las células madre tumorales en diferentes
Resumen Comunicación Científica - PANEL series de tejidos tumorales. Además, la particularidad de ser marcadores de membrana,
Número: 357 hace posible trasladar los resultados obtenidos en series tumorales a ensayos en citometría
y la separación de poblaciones que expresen dichos marcadores.
OPTIMIZACIÓN E IDENTIFICACIÓN INMUNOHISTOQUÍMICA DE CD133 Y CD166
COMO MARCADORES DE CÉLULAS MADRE EN TEJIDO FIJADO E INCLUÍDO EN
PARAFINA Resumen Comunicación Científica - PANEL
Número: 373
Trabajo de: Anatomía Patológica.
Autor/a/s: Barberán Aceituno, Cristina; Aroca Siendones, M Inés; Gómez Ramírez, Raquel; (UTILIDAD DE LA P16INK4a+Ki67 EN EL DIAGNOSTICO DIFERENCIAL DE HSIL Y
Ayala Moscoso Benilde; Sánchez López, Ana María; Navarro Linares, Héctor; De la Cueva LSIL)
Batanero, Paloma; Sáez Castillo, Ana Isabel. Trabajo de: Anatomía Patológica.
Centro de trabajo: Nodo de Coordinacion de la Red de Bancos de Tumores de Andalucia Autor/a/s: (ANA LUISA ALONSO MONJE, MAXIMINA PÉREZ GONZÁLEZ,ROSARIO TURIEL
Servicio:
VICENTE, GONZALO LAGE VÁZQUEZ, ENGRACIA SANTÍN PIEDRAFITA, LOURDES
Provincia: JAEN RODRIGUEZ CASADO, Mª LUZ BALTASAR MOREIRA, PAZ CASTRO VAL , JOSÉ MARÍA
Correo electrónico del primer firmante: [email protected] GONZÁLEZ HERBÓN, JOSÉ SANTOS SALAS VALÍEN)
Introducción: Centro de trabajo: (COMPLEJO ASISTENCIAL UNIVERSITARIO DE LEÓN
La RBTA está organizada como un servicio público comprometido con el fomento Correo electrónico del primer firmante: ([email protected])
de la investigación del cáncer. Entre sus objetivos se encuentra ofrecer los tumores
Introducción:
adecuadamente caracterizados con criterios morfológicos y moleculares. Estos criterios
El carcinoma de cuello uterino es el segundo cáncer más frecuente en mujeres en todo el
se encuentran constantemente en continua revisión. Una de las líneas de investigación con
claro impacto en la tipificación de los tumores, es la caracterización de las células madre de mundo. Las displasias para citologías según el Sistema Bethesda se clasifican en ASCUS
las que proviene el tumor. Numerosos hallazgos identifican estás células con la progresión (Células escamosas atípicas de significado indeterminado), LSIL (Lesión escamosa
del tumor y la resistencia a los tratamientos. Por ello, la RBTA está incorporando técnicas intraepitelial de bajo grado) y HSIL (lesión escamosa intraepitelial de alto grado).
de detección de marcadores de este tipo de células. Debido a la subjetividad de los criterios morfológicos de las tipificaciones en las displasias,
El CD133 y CD166 se han descrito como marcadores de células madre tumorales en es necesario el aporte de nuevas técnicas, como la determinación cualitativa y simultanea de
varios tipos de tumores y se han utilizado en diferentes estudios para la separación de los antígenos P16INK4a y Ki67, cuya expresión conjunta es un indicador de desregulación
subpoblaciones y el testado de su pontencial tumorogénico. De ahí la gran utilidad y del ciclo celular. La sobreexpresión de estas proteínas es indicativo de neoplasia.
potencial que ofrece la detección y caracterización de los mismos en los diferentes tipos Objetivo:
de tejido. Valorar la utilidad de la p16INK4a +Ki67 en el diagnostico diferencial de HSIL y LSIL.
Objetivo: MATERIAL:
El objetivo de este trabajo es optimizar la detección de estos marcadores mediante Desde octubre del 2010 cuando se introdujo esta técnica en nuestro servicio hasta febrero
inmunohistoquímica en tejido fijado e incluido en parafina en una serie de tejidos controles. del 2011, se han analizado 11 casos.
Material y métodos: METODOS:
El procedimiento seguido para la incorporación de nuevos marcadores ha seguido la Screening citológico y estudio inmunocitoquímico con doble marcaje del anticuerpo
siguiente estrategia: a) elección de la clona con las mejores referencias en la literatura, monoclonal de ratón p16INK4a y del anticuerpo monoclonal de conejo Ki67 con dos
b) selección de los controles de expresión, c) identificación del mejor procedimiento reactivos de visualización (HRP y AP) y dos cromógenos (DAB y Fast Red).
de desenmascaramiento antigénico y detección del antígeno, d) determinación de la RESULTADOS:
concentración de Ac primario, e) revisión de los resultados en la serie control y en la serie
de tumores a estudiar. ESTUDIOS
Diagnóstico citológico P16+Ki67 Diagnóstico de biopsia
En la serie de tejidos seleccionada, se incluyeron secciones completas de bloques ANTERIORES
de amígdala reactiva, seminoma, colon normal, piel, así como secciones de tejido
representativos de una serie de carcinomas colorrectales. Esta selección de tejidos Citologías negativas e
ASCUS (HPV +11) -
nos permitirá valorar la expresión en los distintos componente tisulares y celulares y inflamatorias
fenómenos (proliferación, quiescencia, necrosis, apoptosis, efectos de mala fijación,& ). Citologías
En cada ensayo se incluyeron controles negativos omitiendo el anticuerpo primario. HSIL + CIN III
inflamatoria
Para el desenmascaramiento antigénico se utilizó el método HIER (Heat-induced epitope
retrieval) mediante aplicación de calor y presión, realizado en PT Link de Dako, con Toma única vaginal Negativa para
Citologías vaginales
las soluciones Target Retrieval Solution, Low (Tampón Citrato, pH 6) y Target Retrieval Negativa para - malignidad. Metaplasia
atroficas
Solution, High (Tampón EDTA, pH 9). Para la detección del antígeno se probaron malignidad escamosa
concentraciones decrecientes del anticuerpo, diluido en EnVisionTMFLEX Antibody Diluent, Citologías negativas e
ASCUS (HPV +51+38) +
y varias condiciones de incubación: 1 hora, 2 horas y toda la noche a 4 ºC. Como sistema inflamatorias
de detección se utilizó Dako EnVisionTMFLEX , con visualización de la reacción mediante HSIL + 1ª Citología CIN III
DAB+ Chromogen. Para finalizar se evaluó la expresión en los diferentes tejidos y en cada
uno de los componentes histológicos que los componían. HSIL + 1ª Citología CIN I
RESULTADOS: HSIL + 1ª Citología
La clona seleccionada, la identificación del mejor procedimiento de desenmascaramiento y HSIL + Citología LSIL
condiciones más adecuadas de dilución e incubación del anticuerpo primario se resumen Negativa para lesión Citologías negativas Negativa para
en la tabla adjunta. -
intraepitelial tras conización malignidad
Clona, casa comercial, referencia. Incubación Citología HSIL,
Anticuerpo Dilución Citología. Cervicovaginal
Desenmascaramiento antigénico Ac primario + Conización y CIN I
atrófica.
CD133 HIER en EDTA, pH 9 1/50 30 min a RT reconización
CD166 HIER en Citrato, pH 6 1/200 30 min a RT HSIL + Citología HSIL CIN III
Para el anticuerpo CD133 se observó marcaje de membrana en las células de la base de las CONCLUSIONES:
criptas de la mucosa normal, así como en el tejido nervioso del plexo mesentérico colónico. El análisis inmunocitoquímico de P16INK4a+Ki67 ayuda al diagnóstico diferencial entre
El CD166 se expresaba tanto en epitelio como en linfocitos del centro y del área interfolicular lesiones de alto y bajo grado. Su determinación es importante, ya que en las lesiones de
de la amígdala, pero resultó mucho más específico cuando se testó en mucosa normal de alto grado esta indicada la conización y en las de bajo grado el seguimiento citológico.
colon, donde solo se expresaba en la membrana de algunas de las células en la base de las Es también de utilidad en el manejo del ASCUS, obteniéndose una buena correlación con
criptas y células endoteliales el diagnostico del HPV de alto riesgo oncológico.
— 12 —
Resumen Comunicación Científica - PANEL Casa Desenmascaramiento Incubación
Anticuerpo Nº Catalogo Tipo Ac Clona Dilución
Número: 378 Comercial antigénico Ac primario
Monoclonal
IDENTIFICACION DE LOS MARCADORES DE CELULAS MADRE CD44v6 Y MSI1 CD44v6 AbCam ab30436 vff-7 HIER en Citrato, pH 6 1/200 30 min a RT
Ratón
EN TEJIDOS NORMALES Y TUMORALES, MEDIANTE INMUNOHISTOQUÍMICA.
Monoclonal
Trabajo de: Anatomía Patológica. Msi1 AbCam ab52865 EP1302 HIER en EDTA, pH 9 1/50 30 min a RT
Conejo
Autor/a/s: AYALA MOSCOSO, BENILDE; AROCA SIENDONES, MARIA INES; BARBERÁN El CD44v6 mostró una expresión de membrana restringida a las células del epitelio
ACEITUNO CRISTINA; GOMEZ RAMIREZ, RAQUEL, NAVARRO LINARES, HECTOR; DE proliferante, y células en la base de las glándulas de la mucosa normal, siendo negativo
LA CUEVA BATANERO, PALOMA, SAEZ CASTILLO, ANA ISABEL; SANCHEZ-LOPEZ ANA para los endotelios y células estromales.
MARIA.
El Msi1 aparecía expresión citoplasmática y nuclear en las células de seminoma, que sirvió
Centro de trabajo: BIOBANCO PARA INVESTIGACION. HOSPITAL UNIVERSITARIO SAN como control positivo de tinción. Los ensayos en epitelio glandular mostraron que las
CECILIO células en la base de las criptas de la mucosa colónica eran intensamente positivas para
Provincia: CÓRDOBA Msi1
Correo electrónico del primer firmante: [email protected] Conclusión:
Los marcadores elegidos se han optimizado para la realización de estudios de expresión
Introducción y Objetivos: mediante inmunohistoquímica sobre tejido fijado e incluido en parafina. La localización
La identificación de células madre adultas normales y tumorales ha sido difícil. Solo de la expresión de ambos marcadores se han visto relacionada áreas de regeneración y
recientemente se dispone de métodos que permiten su identificación y aislamiento. En este proliferación, donde se han descrito que deben aparecer las células madre adultas normales.
momento, uno de los métodos más importantes es la identificación de marcadores mediante Por lo que ambos marcadores son candidatos para ser estudiados en series completas de
inmunohistoquímica. El estudio de estos marcadores, en concreto, los de superficie, muestras tumorales, y determinar su posible especificidad para la identificación de células
facilitarán los experimentos que implican la separación del tumor en subpoblaciones y el madre tumorales.
testado de su potencial tumorgénico.
El CD44v6, y el MSI1 (Musashi 1) son marcadores descritos en varios tipos de tumores Resumen Comunicación Científica - PANEL
y algunos tipos de células madre adultas, que últimamente parecen relacionarse también Número: 383
con la presencia de células madre tumorales en éstos. El objetivo fundamental es optimizar (UTILIDAD DEL ESTUDIO RUTINARIO DE PIEZAS DE HEMORROIDECTOMÍA EN EL
la detección de la expresión de éstos, mediante inmunohistoquímica, sobre tejido fijado e SERVICIO DE ANATOMÍA PATOLÓGICA)
incluido en parafina en una batería de tejidos seleccionados como control.
Debido al creciente interés por el estudio de estos marcadores, la RBTA, incluye en sus Trabajo de: Anatomía Patológica.
servicios la puesta punto de éstos, para ofrecer a los investigadores tanto las muestras Autor/a/s: (Marín Serrano, María del Carmen
necesarias para el desarrollo de la investigación como una batería de métodos desarrollados Centro de trabajo: (Hospital Santa María Del Rosell)
bajo unos procedimientos estandarizados de trabajo, que aseguren al investigador la Correo electrónico del primer firmante: ([email protected])
calidad de los mismos.
Introducción:
Material y métodos: La prevalencia de patología hemorroidal es de entre un 5 y un 36%, y de éstos requieren
El procedimiento seguido para la incorporación de nuevos marcadores ha seguido la cirugía entre un 5 y un 10%. En una revisión de la literatura actual, la tendencia va dirigida
siguiente estrategia: a) elección de la clona con las mejores referencias en la literatura, a no apoyar el estudio hsitopatológico de rutina de las piezas hemorroidectomía.
b) selección de los controles de expresión, c) identificación del mejor procedimiento Objetivo:
de desenmascaramiento antigénico y detección del antígeno, d) determinación de la Revisar las piezas de hemorroidectomía recibidas en nuestra área de salud en los últimos
concentración de Ac primario, e) revisión de los resultados en la serie de tejido utilizada. 11 años y valorar la correlación clinico-patológica tras el estudio histopatológico de las
En la serie de tejidos seleccionada se incluyeron: secciones completas de bloques mismas.
de amígdala reactiva, seminoma, colon normal, y piel, así como secciones de tejido, Materiales y métodos:
representativos una serie de carcinomas colorrectales; con lo que se podía valorar la Recogimos datos demográficos de pacientes de los que recibimos piezas de
expresión en los distintos componente tisulares y celulares y fenómenos (proliferación, hemorroidectomía desde el año 2000 hasta la actualidad. Así mismo revisamos el
quiescencia, necrosis, apoptosis, efectos de mala fijación. diagnóstico previo, pieza, diagnóstico patológico efectuado y si precisaron intervención tras
El desenmascaramiento antigénico se realizó mediante el método HIER (Heat-induced el diagnóstico, bien fuera quirúrgica o revisión clínica derivada de diagnóstico patológico.
epitope retrieval) aplicación de calor y presión, en PT Link de Dako, con las soluciones RESULTADOS:
Target Retrieval Solution, Low (Tampón Citrato, pH 6) y Target Retrieval Solution, High Desde el año 2000 se han recibido en nuestra área 221 piezas de hemorroidectomía, de
(Tampón EDTA, pH 9). Se testaron además tiempos de incubación y diluciones crecientes las cuáles 107 corresponden a mujeres. Los diagnósticos patológicos encontrados fueron:
de anticuerpo primario, y tiempos de incubación de anticuerpo segundario con cada uno de nódulo hemorroidal (90,96%) que fue el más frecuente, papila anal hipertrófica o pólipo
los tejidos control y anticuerpos seleccionados. fibroepitelial (7,23%), lesión epitelial compatible con infección por virus del papiloma
En todos los ensayos se realizó inactivación de peroxidada endógena mediante la aplicación (0,9%), melanoma (0,45%), adenoma serrado sesil con displasia leve (0,45%) y lesión
epitelial con displasia de alto grado (0,45%).
sobre la muestra de una solución de H2O2 al 3% en metanol durante 10 minutos, y bloqueo
Los diagnósticos histopatológicos encontrados no venían descritos previamente en la
de epítopos inespecíficos mediante aplicación de una solución de BSA (bovin serum petición, salvo la papila anal hipertrófica o pólipo fibroepitelial fueron los hallazgos
albumina) y mezcla de sueros animales, casuales en la pieza.
En cada ensayo se incluyeron controles negativos de segunda capa, omitiendo el anticuerpo Un 2,25% de las piezas precisaron valoración y-o intervención posterior, derivada del
primario, para descartar falsos positivos. diagnóstico patológico.
El sistema de revelado usado fue el EnVisionTMFLEX , de Dako, que combina anticuerpos CONCLUSIÓN:
secundarios anti-IgG de ratón y conejo, fijados a un polímero, y unido a HRP (Horseradish - Casi un 2% de la patología encontrada tiene un potencial maligno.
peroxidase), con visualización de la reacción mediante DAB+ Chromogen - El estudio macroscópico quirúrgico de la pieza no se correlaciona con el diagnóstico
Una vez determinado el protocolo óptimo para cada anticuerpo, se trasladaron al robot patológico.
Autostainer Link 48 , Dako.
Para finalizar se evaluaron los resultados analizando el patrón de expresión de cada Resumen Comunicación Científica - PANEL
marcador en diversos componentes histológicos: cripta colónica, epitelio de superficie y de Número: 384
las criptas de amígdalas, vasos sanguíneos y linfáticos, tejido nervioso (células nerviosas y (IMPORTANCIA DE LA CITOLOGIA URINARIA EN LA DETECCIÓN DEL HPV EN
plexos mesentéricos), infiltrado linfocitario, etc.. También se revisó la expresión en tumores VARONES)
de origen germinal (seminomas) y en adenocarcinomas de colon.
Trabajo de: Anatomía Patológica.
RESULTADOS:
La clona seleccionada, la identificación del mejor procedimiento de desenmascaramiento y Autor/a/s: (Marín Serrano, María del Carmen
condiciones más adecuadas de dilución e incubación del anticuerpo primario se resumen Centro de trabajo: (Hospital Santa María Del Rosell)
en la tabla adjunta. Correo electrónico del primer firmante: ([email protected])
— 13 —
Introducción: María del Carmen; Ruiz Haro, María del Pilar; Carnicero Cáceres, Silvia; Malaxetxebarria
La infección genital por papilomavirus humano (HPV) es una enfermedad de transmisión Unibaso, Séfora; Gómez Román, José Javier; González Vela, María Carmen
sexual frecuente. En los hombres, se definen las infecciones genitales por HPV debido a su Centro de trabajo: Hospital Universitario “Marqués de Valdecilla”
asociación con el cáncer anogenital y las verrugas genitales, y por el papel de los hombres
en la transmisión de HPV a sus parejas sexuales. La mayoría de las infecciones genitales Provincia: Cantabria
por HPV en hombres son asintomáticas, con predominio del HPV tipo 16. Correo electrónico del primer firmante: [email protected]
Objetivos: Introducción:
¿Se puede detectar el ADN HPV en citología urinaria? ¿Hay alguna asociación entre la La foliculitis herpética por virus del herpes simple I y II es una patología poco frecuente.
patología previa del paciente y la infección por HPV? En ocasiones, presenta datos clínicos sugestivos como las pústulas umbilicadas o las
Materiales y métodos: vesículas en racimos. Pero la mayoría de las veces es confundida con otros tipos de
La toma de muestras se realiza mediante recogida de orinas al azar, en nuestra consulta de foliculitis. Debido a su baja frecuencia, los criterios diagnósticos no están todavía bien
citología. Todas ellas fueron remitidas por el servicio de urología con diversos diagnósticos establecidos.
(tumor vesical, hematuria, síntomas locales urinarios y tumor renal). Dicha población Objetivos:
presenta una edad media de 62 años. Estudio mediante inmunohistoquímica y patología molecular de un caso de foliculitis facial
Para la detección del HPV se utilizaron métodos de amplificación de la señal como la que no responde a tratamiento antibiótico y con cultivos negativos. El paciente varón de 80
captura híbrida o PCR. Este método se realizó tanto a la citología urinaria como a la biopsia años no tiene antecedentes médicos de interés.
del mismo paciente (en caso de que la hubiese). Material y método:
RESULTADOS: IHQ: El estudio inmunohistoquímico se realizó a partir del tejido fijado en formol e incluido
De las 200 orinas recogidas, el 89,5% tenían un diagnóstico previo de hematuria y tumor en parafina, utilizando el método EnVision+ (DAKO, Glostrup, Denmark) según protocolo
vesical. En 23 casos, se detectó ADN HPV positivo (11,5%). El subtipo predominante fue el del fabricante.
HPV tipo 16 (26%), seguido del HPV tipo 52 (13%), ambos de alto riesgo. Patología Molecular: Se realiza técnica para la detección de Herpes Simple tipo 1, Herpes
CONCLUSIÓN: Simple tipo 2, Varicela zóster, Citomegalovirus, Virus de Epstein Barr, Herpes tipo 6, Herpes
Creemos que la citología urinaria puede ser un buen método de screening para la detección tipo 7, Herpes tipo 8 y Enterovirus por métodos de amplificación genómica e hibridación
del HPV en varones, especialmente en aquellos casos donde la pareja ya está infectada. tipo específica en array de baja densidad en tubo (PCR-AT) .
No hemos observado ninguna asociación entre la infección por HPV y la neoplasia de RESULTADOS:
origen uroterial. Histológicamente se observó una intensa foliculitis que afectaba a varios folículos pilosos
asociada con áreas de erosión epidérmica, y la presencia de agrandamientos nucleares con
Resumen Comunicación Científica - PANEL marginación cromatínica, e inclusiones virales. Se realizó estudio IHQ y se demostró la
Número: 385 presencia de Virus herpes simple tipo I. La presencia de Virus herpes simple tipo I tambien
se demostró mediante PCR.
(UTILIDAD DE LA PCR PARA EL DIAGNÓSTICO DE LA TUBERCULOSIS (TBC))
CONCLUSIONES:
Trabajo de: Anatomía Patológica. Tanto la IHQ como la PCR son muy útiles para demostrar la presencia de Virus Herpes
Autor/a/s: (Marín Serrano, María del Carmen facilitando el diagnóstico de foliculitis herpética en aquellos casos que no presentan una
clínica específica.
Centro de trabajo: (Hospital Santa María Del Rosell)
Provincia: (Murcia) Resumen Comunicación Científica - PANEL
Introducción: Número: 392
La tuberculosis (TBC) es una enfermedad bacteriana en la que se pueden ver afectadas
distintas partes del cuerpo como los pulmones, ganglios linfáticos, riñones, huesos, HALLAZGOS HISTOPATOLÓGICOS DEBIDOS A INFECCIÓN POR VIRUS H1N1
articulaciones entre otras. Los síntomas sugestivos de la infección por TBC pueden plantear Trabajo de: Anatomía Patológica.
problemas de diagnóstico diferencial con otras enfermedades. Las técnicas moleculares
como la PCR cuantitativa han supuesto un importante avance en la detección precoz de Autor/a/s: Pumarejo Gómez, Enriqueta; Estébanez Gallo, Ángel; Díaz García, María del
esta infección. Pilar; Lera Gómez, Leticia; Puente de Mateo, Elena; López Cayarga, Soraya; Pérez Rojas,
María del Campo; Rodríguez Ruiz, María Ángeles; Carnicero Cáceres, Silvia; Bugada, MA;
Objetivo: Mansilla, MR; Sanjuan Bilbao, M.V.; Mayorga Fernández, Marta; Malaxetxebarría Unibaso,
En este estudio tratamos de valorar si existe alguna relación entre la positividad a la Séfora; Arce Mateos, Félix; Gómez Román, Javier; Val Bernal, Fernando.
infección por TBC con la localización anatómica de la lesión o el servicio hospitalario
demandante de esta determinación. Centro de trabajo: Hospital Universitario “Marqués de Valdecilla”
Materiales y métodos: Provincia: Cantabria
Se revisan un total de 169 muestras entre las que se incluyen muestras tomadas o Correo electrónico del primer firmante: [email protected]
seleccionadas por el servicio de anatomía patológica y muestras con petición directa de Introducción:
otros servicios clínicos (medicina infecciosa principalmente) para el estudio de la presencia Se presenta el caso de un varón de 73 años, con cardiopatía isquémica conocida e infarto
de TBC por PCR cuantitativa empleando el kit PALEX y el termociclador a tiempo real 7500F de miocardio inferoposterior en 1988, con aneurisma, que fallece tras 46 días ingresado en
de Applied Biosystems. UCI por una insuficiencia cardiaca complicada con neumonía bilateral comunitaria grave
RESULTADOS: por gripe A, con confirmación analítica.
Los pacientes presentaron una edad media de 50 años. De los casos estudiados se observó Objetivos:
una relación significativa entre la positividad por TBC y la procedencia de las muestras Confirmación de la sospecha de infección por el virus H1N1 mediante estudio histológico
del Servicio de Anatomía Patológica; relación no observada con las peticiones realizadas y de biología molecular.
por otros servicios (75,5% vs 22,5%; p=0,0122), y una mayor positividad para muestras
procedentes de ganglio linfático (30,61%) y muestras procedentes de vías respiratorias Material y método:
(30%). Para el estudio histológico se realizó la técnica habitual de Hematoxilina Eosina.
El diagnóstico de infección por el virus H1N1 se realizó mediante PCR de Applied
CONCLUSIÓN: Biosystems®, utilizando los primers de la OMS.
Se demuestra la importancia de la selección de la muestra por parte del patólogo en base
a los hallazgos morfológicos (presencia de granulomas o necrosis) observados, como RESULTADOS:
mejores predictores de la positividad a la TBC que la sospecha clínica de otros servicios. El estudio macroscópico reveló, como hallazgos más significativos, una condensación
pulmonar bilateral, con aumento de peso de ambos pulmones, una laringotraqueobronquitis
Resumen Comunicación Científica - PANEL y adherencias pleurodiafragmáticas, pleuropericárdicas y pleurocostales, con derrame
organizado. Microscópicamente, los pulmones presentan Daño Alveolar Difuso en distintos
Número: 391 estadios de evolución (agudo, necrotizante y organizado) con focos de bronconeumonía
FOLICULITIS VIRAL POR VIRUS HERPES SIMPLE TIPO I aguda y crónica y reacción gigantocelular a cuerpo extraño, entre otros datos.
Secundariamente existen signos de infarto miocárdico, de entre 3 y 7 días de evolución
Trabajo de: Anatomía Patológica. en ventrículo izquierdo y tabique, así como otros signos que confirman la cardiopatía
Autor/a/s: Estébanez Gallo, Ángel; Pumarejo Gómez, Enriqueta; Díaz García, María del Pilar; isquémica ya conocida.
Herrera Cisneros, María Dolores; Andreu Villagrán, María Cruz; Valdés Rodríguez, Estíbaliz; El resultado de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para el virus de la gripe A,
Palacín Viaña, Yolanda; Lera Gómez, Leticia; Puente de Mateo, Elena; Fernández Muñoz, según la secuencia consenso de la OMS, fue positiva.
— 14 —
CONCLUSIONES: Resumen Comunicación Científica - ORAL
La gripe A, producida por el virus N1H1, es una enfermedad de reciente aparición con una Número: 407
mortalidad que afecta principalmente a individuos con enfermedades graves (cardiopatías,
o estados de inmunodefiencias (por ejemplo, embarazadas). Pocos han sido los estudios Estudio farmacogenético de la capecitabina: análisis de SNPs
necrópsicos publicados de pacientes con gripe A en el mundo y menos aún en nuestro país, (Single Nucleotide Polymorphims) a lo largo de todo el genoma
de ahí el interés de publicar los resultados anatomopatológicos de las autopsias realizadas. mediante arrays de alto rendimiento
Se han publicado los protocolos de protección en las autopsias de pacientes fallecidos Trabajo de: Anatomía Patológica.
con (o de) gripe A, que deben ser de conocimiento y utilización para cuantos aborden la
prosección. Autor/a/s: Herráez Crespo, Belen; D Caronia; M Martin; N Alvarez; TL Moreno; MR Alonso;
G Pita; J Sastre; J De la Torre; JA García-Saenz;J Benitez; A Gonzalez-Neira
Resumen Comunicación Científica - PANEL Centro de trabajo: Centro Nacional de Investigaciones Oncológicas (CNIO).
Número: 395 Correo electrónico del primer firmante: [email protected]
Utilidad de los marcadores virales en el diagnóstico de lesiones Introducción:
relacionadas con infección viral. Importancia del control de Capecitabina (Xeloda) es un profármaco oral de 5-fluoracilo (5-FU) usado en el tratamiento
calidad. de cáncer de mama y cáncer colorrectal. Uno de los efectos adversos mas limitante de este
fármaco y que puede llevar a la interrupción del tratamiento es el denominado síndrome
Trabajo de: Anatomía Patológica. mano-pie (HFS), que se caracteriza por enrojecimiento, sensibilidad, y descamación de
Autor/a/s: Elena Gonzalvo Mallón, Montserrat Tortosa, Ingrid López, Ingrid Victoria, Elena las palmas y plantas.
Rull,Lucila Fresno,José Ramírez,Pedro Luis Fernández, Míriam Cuatrecasas. Objetivo:
Centro de trabajo: Hospital Clínico y Provincial de Barcelona.) El objetivo de este estudio es identificar polimorfismos genéticos asociados a la aparición
Correo electrónico del primer firmante: [email protected] de este efecto adverso en su grado más severo.
Material y métodos:
Introducción:
Para ello se han analizado un total de 610.000 polimorfismos de una base, también
La Inmunohistoquímica (IHQ) constituye una herramienta fundamental para el diagnóstico
denominados SNP (Single Nucleotide Polymorphims) en un total de 238 pacientes con
en Anatomía Patológica al permitir determinar el inmunofenotipo de tumores y otras
cáncer de mama y cáncer colorrectal tratados con este fármaco, utilizando el array Illumina
entidades patológicas, mediante el estudio de la expresión de anticuerpos en el tejido
Human 610-quad (Illumina).
problema. Una de las utilidades de la IHQ se basa en la detección de virus implicados en
El protocolo, denominado Infinium, consta de los siguientes pasos: a) amplificación inicial
lesiones infecciosas, inflamatorias o en tumores humanos (sarcoma de Kaposi, linfoma de
de la muestra, b) fragmentación del DNA, c) hibridación en el array, d) extensión de una
cavidades, carcinoma de cervix uterino, etc).
base alelo especifica en cada posición a interrogar con nucleótidos marcados, e) análisis de
Presentamos la casuística de nuestro laboratorio, los marcadores virales utilizados y fluorescencia en el scanner Illumina f) conversión de fluorescencia en genotipos mediante
las diferentes técnicas de IHQ e hibridación in situ (HIS) utilizadas para su detección. software de análisis.
La correcta realización de éstas técnicas es fundamental para que sean útiles y
complementen el diagnóstico patológico. Para ello es imprescindible una buena calidad RESULTADOS: y CONCLUSIONES::
técnica, estandarización y reproducibilidad, así como la utilización de controles positivos De las 238 muestras procesadas, 4 muestras fueron descartadas por bajo call rate. Del
y negativos para la correcta evaluación del resultado de tinción. Ello evita errores en el resto, la tasa de éxito media fue de un 99,72%. De los 616.795 SNPs genotipados para
diagnóstico por falsos positivos o negativos. cada muestra, se utilizan unos 520.933 para el análisis estadístico, ya que cumplen los
requisitos de tasa de genotipado y MAF (frecuencia del alelo menor)
Objetivos:
Dar a conocer la utilidad de los marcadores inmunohistoquímicos en el diagnóstico de Resumen Comunicación Científica - PANEL
las enfermedades que se derivan de una infección viral. Presentar las distintas técnicas Número: 415
utilizadas y las diferencias metodológicas específicas de cada marcador viral, así como
posibles fuentes de error diagnóstico por reacciones cruzadas o inespecíficas (falsos ESTUDIO DE LA FIBROSIS RENAL EN DONANTES SUBÓPTIMOS. VALORACION
positivos) o falsos negativos por defecto de tinción. TECNICA DEL ROJO SIRIO Y ORCEÍNA PROCESADAS EN HORNO MICROONDAS
Material y métodos: Trabajo de: Anatomía Patológica.
Hemos realizado 2.416 determinaciones virales por IHQ y 618 HIS para virus de Epstein
Autor/a/s: MARIA DOLORES MARTINEZ RUBIA-MARIA DOLORES RODRIGUEZ MARTINEZ-
Barr (EBER) durante el año 2010. Disponemos de los siguientes anticuerpos para IHQ:
ANTONIA MONTES FRANCO
Parvovirus B19 (PvB19), Citomegalovirus (CMV), Epstein-Barr EBNA-2, Epstein-Barr
LMP-1 (EBV), Epstein-Barr Zebra, Helicobacter pilori, p16 como marcador indirecto de Centro de trabajo: HOSPITAL UNIVERSITARIO SAN CECILIO DE GRANADA
VPH, Virus HBcAg, Virus HBsAg, Virus Herpes 6, Virus Herpes 8 LNA-1,Virus Herpes 1, Provincia: GRANADA
Virus Herpes 2, Virus Polioma (Sv40). Correo electrónico del primer firmante: [email protected]
Los cortes parafinados se desparafinan y desenmascaran con el proceso automatizado
PTLink (Dako), utilizando ph alto o ph bajo, según el anticuerpo. La tinción IHQ se realiza RESUMEN:
en Autostainer Link 48 (Dako), con el Kit Envisión Flex (Dako), o el sistema automatizado Un problema que se plantea en la valoración en los transplantes renales para donantes
Benchmark XT (Ventana) con el Kit ultraView Universal DAB Detection (Ventana). Para HIS añosos o con patologías concomitantes (hipertensión arterial, diabetes, etc.) es la
de EBER utilizamos el sistema automatizado Benchmark XT (Ventana) con el kit ISH iVIEW cuantificación precisa de la fibrosis intersticial y la hiperplasia miointimal vascular que,
Blue Plus Detection (Ventana). Se valora con el microscopio óptico. cuando son graves, pueden condicionar la supervivencia futura del injerto. Hasta ahora su
RESULTADOS: valoración se realiza mediante la observación visual por el patólogo de las preparaciones
En el laboratorio de IHQ se han realizado 3.034 determinaciones virales de un total de teñidas con PAS y tricrómico de Masson, que no son completamente específicas para estas
40.728 determinaciones (7,45%). Desglosadas por anticuerpos, corresponden a: lesiones. Además la ausencia de una cuantificación precisa de las mismas es responsable
p16: 1.110; EBER: 618; CMV: 375; Helicobacter pylori: 189; Virus Herpes 1: 153; Virus de notables diferencias ínter- e intraobservador a la hora de informar el resultado de la
Herpes 2: 151; Virus Herpes 8 LNA-1: 120; EBV: 112; Sv40: 48; EBNA-2: 44; ZEBRA: 39; biopsia.
Virus HBsAg: 30; Virus HBcAg: 28; Virus Herpes 6: 11; PvB19: 6; Objetivo:
En todas las determinaciones virales se han utilizado controles positivos y negativos. El objetivo de este panel es aportar un método rápido de coloración con rojo sirio y otro
Algunos anticuerpos presentan tinciones inespecíficas. Las obervadas con más de orceína para fibras elásticas en horno microondas con la finalidad de: 1) estandarizar
frecuencia son: tinción citoplasmática de CMV en células inflamatorias, tinción de células completamente procedimientos que por su duración hasta ahora han sido incompatibles
neuroendocrinas o de sustancia amiloide al realizar HIS-EBER. Estas tinciones pueden ser con la biopsia rápida de los órganos de donante y 2) Comparar los RESULTADOS:
debidas a reacciones cruzadas con otros epítopos semejantes. obtenidos con los clásicamente establecidos para las tinciones de PAS y tricrómico hasta
CONCLUSIONES: ahora empleadas.
La IHQ e HIS viral son de gran utilidad y contribuyen al diagnóstico de enfermedades MATERIALES Y METODOS:
infecciosas y tumores relacionados con infecciones virales. Permiten objetivar la - Muestra problema.
presencia directa o indirecta de infección viral, aumentando la sensibildad y especificidad - Coplin capacidad de 50cc
diagnóstica respecto a la tinción con hematoxilina-eosina. No obstante, la calidad técnica y - Orceina, sus reactivos.
reproducibilidad de la misma son fundamentales para su correcta utilización. - Rojo Sirio, sus reactivos
— 15 —
- Microondas convencional. retirando el sobrenadante. a un tubo con el sedimento que ha quedado se le incorpora
- Sistemas de Análisis de Imagen Fibrosis HR® y Visilog 6 (Noesis), que permiten una porción de gelatina G1 (5x5x0,5 mm...)y al otro tubo una porción de gelatina G2
cuantificar en pocas décimas de segundo las áreas teñidas o delimitadas por las estructuras (5x5x2mm) ,dejándolo reposar unos 30 minutos, extrayendo posteriormente la porción de
objeto de coloración con rojo Sirio y orceína. gelatina y pasándola a formol tamponado para su posterior inclusión en el procesador
METODO: histológico habitual.
Las soluciones de las técnicas han sido obtenidas del libro “Laboratorio de anatomía Los cortes se tiñen con H-E y se realiza inmunotinción con Calretinina, Citoqueratinas (CK7
patológica” Autor.:Raimundo García del Moral -Editorial:Interamericana.McGraw-HILL- y CK20), CD68 y Ki67.
introduciendo las siguientes modificaciones: Se realiza análisis de imagen sobre los cortes de la gelatina G1 y G2 para medir la superficie
- Método de orceina para fibras elásticas: media del poro.
Con las muestras ya desparafinadas e hidratadas se introducen en coplin con colorante Se evalúa la cantidad del material citológico útil y la disposición del mismo
de orceína y Se analiza la calidad de la inmunotinción.
al microondas a máxima potencia durante 30 segundos a intervalos de 10 segundos. RESULTADOS:
Posteriormente al lavado se ha suprimido el contraste con picrocarmín de índigo, montando La media del tamaño del poro que generan las gelatinas es similar.
convencionalmente. La cantidad de células es más apreciable.
- Método de rojo sirio para fibras colágenas: No se producen artefactos en las posteriores tinciones realizadas.
Con las muestras ya desparafinadas e hidratadas y antes de teñir se ha introducido una
CONCLUSIONES:
modificación de mordentaje con alcohol de 70º en el horno microondas a máxima potencia
EL MÉTODO ES ÚTIL PARA AUMENTAR SIGNIFICATIVAMENTE LA RECUPERACION DE
durante 30 segundos a intervalos de 10 segundos lo que ha demostrado que estabiliza la
tinción posteriores tiempo de tinción con rojo sirio se hace también en el microondas a CÉLULAS EN LÍQUIDOS PROCEDENTES DE DERRAMES.PUDIENDO CONFECCIONAR
máxima potencia durante 30 segundos a intervalos de 10 segundos. CITOBLOQUES PARA SU POSTERIOR ESTUDIO ANATOMOPATOLOGICO SI SE VIERA
Lavar rápidamente y secar con papel de filtro aclarar y montar. CONVENIENTE.
RESULTADOS: Resumen Comunicación Científica - PANEL
ORCEINA:
-Fibras y membranas elásticas. Pardo-negruzco Número: 419
ROJO SIRIO: GENOTIPOS DE PAPILLOMAVIRUS Y CANCER CERVICAL
-Fibras del tejido conectivo(excepto elásticas). Rojo intenso
-Otros elementos. Amarillo. Trabajo de: Anatomía Patológica.
CONCLUSIONES: Autor/a/s: (1) Rubio Alarcón Joaquín, (2) Mosteiro Lobato Sonia, (1)Moure González
LAS PREPARACIONES OBTENIDAS SON ÓPTIMAS TANTO EN TIEMPO COMO EN Claudia, (1) González Alberte Sonia, (2) García Martín Sonsoles, (1) Martínez Lemos Eva,
TINCIÓN PARA SU ANÁLISIS AUTOMÁTICO MEDIANTE SISTEMAS DE IMAGEN Y ASÍ (1) Barbeito Fernández Victoria.
MISMO PERMITEN COMPLEMENTAR EL DIAGNÓSTICO PROPORCIONADO POR LA Centro de trabajo: Complexo Hospitalario Universitario de Vigo, (1) Servicio de
TINCIONES CONVENCIONALES DE H&E, TRICRÓMICO DE MASSON-GOLDNER Y PAS. Microbiologia, (2) Servicio de Anatomía Patológica. Vigo
Provincia: Pontevedra)
Resumen Comunicación Científica - PANEL
Correo electrónico del primer firmante: [email protected]
Número: 416
Introducción: el papillomavirus (VPH) es el virus responsable del cáncer de cuello
CITOBLOQUES DE CELULAS PROCEDENTES DE DERRAMES CON GELATINA.
uterino, un importante problema sanitario en todo el mundo, siendo el segundo en
VALORACION DEL METODO
incidencia, tras el cáncer de mama. En España se diagnostican cada año aproximadamente
Trabajo de: Anatomía Patológica. 2.100 nuevos casos, un 28% de ellos en mujeres de 15 a 44 años de edad. En nuestro pais
Autor/a/s: MERCEDES GONZALEZ MURIANA-MARIA DOLORES MARTINEZ RUBIA- la incidencia del carcinoma de cuello de útero registra un incremento anual del 1% y la
ANTONIA MONTES FRANCO mortalidad está aumentando, especialmente en mujeres de 25-49 años. Existen genotipos
de bajo y alto riesgo, según su asociación con el cáncer de cuello uterino. Los tipos más
Centro de trabajo: HOSPITAL UNIVERSITARIO SAN CECILIO-GRANADA
comunmente encontrados en esta patología en todos los continentes son VPH 16, 18, 31,
Provincia: GRANADA 33, 35, 45, 52 y 58. VPH 16, 18 y 45 suponen el 75% del carcinoma escamoso y el 94%
Correo electrónico del primer firmante: [email protected] del adenocarcinoma.
Objetivos: conocer los genotipos de VPH responsables de todos los casos de cáncer
RESUMEN: cervical detectados durante los años 2009 y 2010 en las consultas del Hospital do
El hecho de poder contar con citobloques, es decir, células conservadas en bloques de Meixoeiro (Complexo Hospitalario Universitario de Vigo, Servicio Galego de Saúde).
parafina de buena calidad, para su estudio tanto morfológico, inmuno histoquímico o de
biología molecular facilita el diagnostico. Material y métodos: se estudiaron 24 casos de cáncer cervical: 16 CIS (carcinoma
Planteamos el estudio de este método con la incorporaron de distintas gelatinas como escamoso in situ), 6 CES (carcinoma escamoso), 2 AIS (adenocarcinoma in situ). Se
aglutinador. estudiaron 18 muestras de biopsia y 6 muestras de exudado endocervical correspondientes
a la fecha de diagnóstico de carcinoma. Las muestras de biopsias fueron desparafinadas
Objetivo:
siguiendo método convencional. Todas las muestras fueron extraidas por extracción total
El objetivo del citodiagnóstico es interpretar las lesiones presentes sobre células aisladas de ácidos nucleicos (TNAI-Ampliprep-Roche Diagnostics). Para el genotipado se amplificó
extraídas por diversos procedimientos clínicos. Conseguir una cantidad adecuada de estas el ADN (ácido desoxirribonucleico) mediante PCR (reacción en cadena de la polimerasa)
en líquidos procedentes de derrames. y posterior hibridación utilizando Linear Array Genotyping kit (Roche Diagnostics), una
MATERIAL Y METODOS: técnica que permite la detección de todos los genotipos descritos de alto riesgo oncogénico
MATERIAL: (16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 53 (probable alto riesgo), 56, 58, 59, 66, 68, 73, 82), y
- Líquidos procedentes de derrames diversos genotipos de bajo riesgo oncogénico (6, 11 entre otros) y de riesgo indeterminado.
- Tinción Papanicolau El objetivo del citodiagnóstico es interpretar las lesiones presentes RESULTADOS: La distribución de genotipos de alto riesgo encontrados fue: VPH 16
sobre células aisladas extraídas por diversos procedimientos clínicos. (11/24, 45.8%), VPH 31 (4/24, 16.6%), VPH 33 (4/24, 16.6%), VPH 58 (3/24, 12.5%),
- Cytospin VPH 18 (2/24, 8.3%), VPH 35 (2/24, 8.3%), VPH 45, 51, 53, 56, 82 (1 de cada). En 5
- Cito centrifuga. casos se encontró coinfección por 2 ó más genotipos de alto riesgo . En 11/24 pacientes
- Gelatina 1º(marca Cutanplast) (G1) (200x70x0, 5 mm) (45.8%) se encontraron exclusivamente genotipos de alto riesgo diferentes al VPH 16 ó 18,
- Gelatina 2º(marca Willospon) (G2) (80x50x10mm) descritos como los más frecuentes en carcinoma cervical. La media de edad de las mujeres
- Procesador histológico en el momento del diagnóstico fue de 46.7 años (26.6-82.4). Las mujeres diagnosticadas
- Micrótomo-Tinciones convencionales para histología de CES presentaron una media de 71.7 años (62.5-82.4). Entre las mujeres que presentaban
- Sistema de micrófonos Axiovisión AC CIS o AIS, las infectadas por VPH 16, 18 o 45 tenían una media de 35.4 años (26.6-51.1)
- Sistema de Análisis de Imagen Imago Tool. mientras que las infectadas por otros genotipos de alto riesgo tenían una media de 42.9
METODOS: años (30.5-73.6).
Se procede con el líquido de derrame con el protocolo habitual en el Laboratorio de CONCLUSIONES:
Citología. (1) VPH 16 fue el genotipo más frecuentemente encontrado en cáncer cervical, seguido
El resto se centrifuga de la siguiente manera: de otros genotipos como VPH 31 y 33. (2) En casi la mitad de los casos se encontraron
Se centrifugan dos tubos con el líquido del derrame (aproximadamente 10cc. Cada uno), exclusivamente genotipos de alto riesgo diferentes al VPH 16 o al VPH 18.
— 16 —
(3) El diagnóstico de CES se realizó en mujeres de edad muy superior a la del resto de Conclusión: Estos resultados demuestran que cada zona topográfica de la conjuntiva
carcinomas estudiados. humana normal presenta un perfil distinto en cuanto a su fenotipo y viabilidad /proliferación
(4) Los genotipos de alto riesgo incluidos en la vacunación (VPH 16 y VPH 18) se celular, lo que nos podría llevar a pensar que cada región conjuntival estaría desempeñando
encontraron el 46% de los carcinomas estudiados, llegando al 71% si también se una función específica diferente.
consideran otros genotipos de probable protección cruzada (VPH 31 y VPH 45).
Resumen Comunicación Científica - PANEL
Resumen Comunicación Científica - PANEL Número: 440
Número: 429
Estandarización de la detección inmunohistoquímica de SOX2, un
MUTACIONES DEL GEN K-RAS marcador de células madre
Trabajo de: Anatomía Patológica. Trabajo de: Anatomía Patológica.
Autor/a/s: MANUELA SANCHEZ FERNANDEZ, Mª JOSE SOUTO SILVA, JOSEFAPRADA Autor/a/s: Héctor Navarro Linares , Raquel Gómez Ramírez , Cristina Barberán Aceituno,
VALLE Ovidiu Preda, Alina Nicolae, Ana Mª Sánchez López, Ana Isabel Sáez Castillo
Centro de trabajo: HOSPITAL EL BIERZO Centro de trabajo: Red de Bancos de Tumores de Andalucía, Nodo de Coordinación
Provincia: LEON Servicio:
Correo electrónico del primer firmante: [email protected] Provincia: Granada
INTRODUCIÓN: Correo electrónico del primer firmante: [email protected]
Prueba de diagnóstico in Vitro diseñada para la detección de las siete mutaciones somáticas RESUMEN:
en el encogen K-RAS.
El objetivo de la Red de Bancos de Tumores de Andalucía (RBTA) es proveer de muestras de
Objetivo:
tumores a los investigadores. La clasificación de los tumores, su caracterización, depende
Proporcionar una validación cualitativa del estado de las mutaciones.
de criterios morfológicos y moleculares, en continua revisión. Además, la creciente
Material y métodos: disponibilidad de fármacos dirigidos específicamente a alteraciones moleculares ventajosas
El material debe ser un ADN genómico humano obtenido de muestras de cáncer colorectal, para el desarrollo de los tumores, obliga a ceder las muestras tumorales adecuadamente
extraídas de tejido incluido en parafina. caracterizadas. Esta realidad, compromete a los laboratorios con una continua actualización
Una vez evaluada la presencia de células cancerosas por el patólogo se procede a de su cartera de servicios, esto es, con la versatilidad de poder incorporar continuamente
la extracción de ADN mediante el kit manual ( kit para ADN en tejido FEPE de Quiagen nuevas determinaciones moleculares. La RBTA está organizada como un servicio público
QIAamp). comprometido con el fomento de la investigación del cáncer, con estrictos criterios de
Una vez obtenido y cualificado el ADN genómico,se procede a preparar la placa para la calidad. La incorporación de la detección de un nuevo marcador molecular, se hace bajo
técnica utilizando el kit (TheranScreen: K-RAS Mutación Kit ). procedimientos normalizados de trabajo, que aseguren la calidad de la información ofrecida
RESULTADOS: a los investigadores.
Los resultados se expresan como K-RAS mutado( especificando la mutación) y K-RAS Una de las líneas de investigación con claro impacto en la tipificación de los tumores, es
negativo. la caracterización de las células madre de las que proviene el tumor. Numerosos hallazgos
identifican estás células con la progresión del tumor y la resistencia a los tratamientos.
CONCLUSIONES:
Es por ello, que los laboratorios de la RBTA están incorporando técnicas de detección de
La técnica de K-RAS no tiene como objetivo servir de prueba diagnóstica del cáncer marcadores de células madre.
colorrectal, sino como complemento de otros factores pronósticos utilizados para la La proteína SOX2 es un factor de transcripción cuya función es esencial en el mantenimiento
selección de pacientes que puedan ser tratados mediante terapias por inhibición del EGFR de la auto-renovación de las células madre embrionarias no diferenciadas. Es clave en
según el estado de la mutación en el paciente. la inducción de la pluripontencialidad de las células madre. Esta proteína podría actuar
como un activador transcripcional tras la formación de un complejo proteico con otras
Resumen Comunicación Científica - ORAL proteínas. Se ha determinado que la desregulación de SOX2 podría estar relacionada con la
Número: 437 agresividad de algunos tumores, como el cáncer colorrectal.
En esta comunicación describimos la estandarización de la determinación
DISTRIBUCIÓN TOPOGRÁFICA Y CARACTERIZACIÓN DE CELULAS EPITELIALES inmunohistoquímica de SOX-2 y el estudio de su expresión en tumores germinales
Y LINFOCITOS INTRAEPITELIALES EN LA MUCOSA OCULAR HUMANA testiculares, en el contexto de una solicitud de un investigador de provisión de muestras
Trabajo de: Anatomía Patológica. de este tipo de neoplasias, con la restricción de que fuesen tumores con alteraciones de
Autor/a/s: Martino Sanz Mario, Reinoso Roberto, Martín Sanz Raquel, Calonge Margarita, SOX-2.
Mateo María Eugenia, Blanco Salado Rodrigo y Corell Alfredo. Material y métodos:
Centro de trabajo: Instituto de Oftalmobiólogía Aplicada Estandarización de la determinación inmunohistoquímica de SOX2 en tejidos fijados y
embebidos en parafina.
Provincia: Valladolid
Para la incorporación de nuevos marcadores, nuestros procedimientos nos obligan a seguir
Correo electrónico del primer firmante: [email protected] la siguiente estrategia: a) elección de la clona con las mejores referencias en la literatura,
Introducción: La conjuntiva es una membrana mucosa que reviste el globo ocular desde b) selección de los controles de expresión, c) identificación del mejor procedimiento
la cara posterior del párpado hasta el limbo esclerocorneal. Esta estructura juega un papel de desenmascaramiento antigénico y detección del antígeno, d) determinación de la
fundamental en la protección de la superficie ocular ya que se comporta como una barrera concentración de Ac primario, e) revisión de los resultados en una serie de tumores y
mecánica e inmunológica frente a todo tipo de agresiones. Aunque en los últimos años controles.
se ha demostrado la presencia de células inmunes, principalmente linfocitos T y B, en La clona seleccionada fue la 57CT23.3.4. El anticuerpo se adquirió de la empresa AbCam,
la conjuntiva humana sana, falta todavía mucha información acerca de la distribución Cambridge, UK.
topográfica de estas células a lo largo del epitelio conjuntival. El objetivo de este estudio Como SOX2 es un marcador de las células madre neuronales, se utilizó como control
fue por tanto investigar la proporción de linfocitos intraepiteliales y el grado de viabilidad y positivo el epitelio neural periventricular de 4 embriones humanos. A modo de control
proliferación celular en tres diferentes regiones de la conjuntiva humana. negativo, las secciones se incubaron sin el anticuerpo primario.
Materiales y métodos: Las células conjuntivales de la región tarsal superior, bulbar Se seleccionó el sistema Dako Pt Link, basado en la recuperación de epítopos por calor,
superior y fondo de saco inferior de 63 donantes sanos fueron recogidas por una técnica usando citrato a pH 6 y tampón Tris/EDTA a pH9. Y como sistema de detección, se usó Dako
mínimamente invasiva, la citología por cepillado. Posteriormente, estas células fueron EnVisionTMFLEX, con visualización de la reacción mediante DAB+ Chromogen
analizadas fenotípica y funcionalmente mediante citometría de flujo. Se probaron concentraciones decrecientes del anticuerpo, diluido en EnVisionTMFLEX
Antibody Diluent, y varias condiciones de incubación: 1 hora, 2 horas y toda la noche a
RESULTADOS: Los análisis realizados mostraron niveles más altos de linfocitos 4 ºC. Se optó por incubación toda la noche a 1/50.
intraepiteliales, linfocitos T CD3+ y linfocitos T CD8+ en las zonas superiores que en
el fondo de saco inferior, donde curiosamente se registraron los niveles más altos de Se prepararon secciones de 93 tumores testiculares con una histología pura y mixta, y se
linfocitos B CD19+. En el ensayo de apoptosis, observamos dos poblaciones celulares analizó la expresión del anticuerpo. Solo el marcaje nuclear se considero una reacción
totalmente diferenciadas por el tamaño y la complejidad celular. Las células más complejas positiva. Se evaluaron los resultados, para ver si se acogían a la evidencia científica
predominaron en las regiones superiores de la conjuntiva, contrariamente a lo sucedido existente.
con las células menos complejas, las cuales a su vez presentaron una mayor viabilidad. La RESULTADOS:
capacidad proliferativa del epitelio conjuntival fue significativamente más alta en la región La expresión de SOX2 estaba prácticamente restringida a los elementos neuroepiteliales
tarsal superior y fondo de saco inferior que en la conjuntiva bulbar superior. inmaduros de los teratomas y de los carcinomas embrionarios. La neoplasia germinal
— 17 —
intratubular (NGIT), seminomas clásicos y espermatociticos, tumores vitelinos, Centro de trabajo: Hospital CINIC Barcelona
coriocarcinomas y otros elementos teratoideos fueron constantemente negativos. Los Provincia: Barcelona
resultados están representados en la tabla.
Correo electrónico del primer firmante: [email protected]
Número de casos positivos del total
Introducción:
Tejidos embrionarios 4 /4 La reacción en cadena de la ADN polimerasa (PCR) se ha convertido en el paso inicial de
NGIT 0/73 amplificación de ADN más extendido en las determinaciones de marcadores genéticos. Un
Seminomas clasicos 0/52 factor limitante durante el análisis de muestras de tumores sólidos es la heterogeneidad
Carcinoma embrionarios 41/41 celular que dificulta la detección de alelos mutados presentes en minoría respecto a
secuencias normales. La PCR convencional es incapaz de amplificar de forma preferente
Tumores vitelinos 0/21 las moléculas de ADN mutadas, de tal forma que la sensibilidad de los ensayos que utilizan
Choriocarcinoma 0/4 la PCR como paso previo de amplificación viene determinada por la metodología final
Teratomas 3 /20 utilizada para la detección de las mutaciones. La metodología tradicional de secuenciación
basada en Sanger tiene un límite de sensibilidad alrededor de un 20-25% de moléculas
Seminomas espermatociticos 0/2
mutadas. Recientemente se ha descrito la amplificación mediante PCR a bajas temperaturas
- neuroepitelio de desnaturalización (COLD-PCR). Este nuevo formato de PCR permite amplificar
Conclusión: La técnica de detección de SOX2 estandarizada es útil para el fenotipado de preferentemente los alelos mutados presentes en muestras biológicas en las que las células
tumores, y específicamente para tumores germinales. La detección permite valorar si SOX2 tumorales se encuentren poco representadas.
puede ser un marcador rentable en la estadificación de los teratomas inmaduros ováricos Objetivos:
donde el porcentaje de los componentes inmaduros, esencialmente neuroepiteliales, tienen Nos hemos planteado aumentar nuestra sensibilidad en la detección de mutaciones en
un gran valor pronóstico y terapéutico. los codones 12 y 13 del oncogene K-RAS a partir de ADN extraído de muestras fijadas en
formol e incluidas en parafina mediante la estandarización del protocolo de COLD-PCR
Resumen Comunicación Científica - PANEL seguido de secuenciación tradicional (Sanger).
Número: 442 Material y métodos:
DETERMINACIÓN DvbvE LIPÓFAGOS EN ESPUTOS INDUCIDOS Se ha extraído DNA de tres líneas de colon portadoras de mutación de K-RAS: SW620
(G12V); CAL62 (G12R), y NP9 (G12D). También se ha extraído DNA de 39 muestras
Trabajo de: Anatomía Patológica. fijadas en formol e incluidas en parafina. La amplificación de K_RAS mediante PCR
Autor/a/s: ZAPICO ORTIZ, NURIA. MAGAZ RODRIGUEZ, SUSANA. DR. JAVIER RODRIGUEZ convencional se realizó en las líneas celulares y en 4 muestras de tejido. COLD-PCR y el
PANDIELLA kit comercial TheraScreen de Roche se utilizó en el estudio de 39 tumores de colon. Las
Centro de trabajo: HOSPITAL UNIVERSITARIO CENTRAL DE ASTURIAS (INS-HUCA) secuencias se han realizado con el kit BigDye v3.1 de Applied Biosystems. Las secuencias
se analizaron con la aplicación Chromas Lite.
Correo electrónico del primer firmante: [email protected]
RESULTADOS:
Introducción: El ADN procedente de líneas celulares portadoras de mutación de K-RAS fue mezclado con
La presencia de inclusiones lipídicas en macrófagos de pacientes sin patología linfática DNA normal para generar diluciones del alelo mutado (100%, 50%, 25%, 10%, 5% y 1%).
obstructiva, puede evidenciar la bronco-aspiración de contenido gastroesofágico en vías La PCR convencional solo detectó las tres mutaciones de forma robusta y reproducible
respiratorias y el diagnostico diferencial de la tos crónica, cuya persistencia en el tiempo cuando el alelo mutado estaba presente entre el 50% y el 100%. Sin embargo la COLD-
puede dar lugar a diversas patologías pulmonares, como pueden ser las bronquiectasias. PCR fue capaz de detectar de forma sólida el alelo mutado incluso cuando estaba presente
La muestra de esputo inducido, que llega al laboratorio en un tubo de Eppendorf, ha sido solamente en un 5%. Una vez establecidas las condiciones de COLD-PCR y analizada su
previamente tratada con DTT (Sputolysin®), PBS y filtrada a través de una gasa de nylon sensibilidad en ADN procedente de líneas celulares nos centramos en su aplicación para
de 48 µm. el estudio de ADN proveniente de muestras fijadas en formol e incluidas en parafina. El
Objetivo: análisis mediante el kit comercial TheraScreen de Roche y la COLD-PCR fue concordante
Demostrar la presencia de Lipófagos, en pacientes con tos crónica. en el 90% de los casos analizados. En 12 tumores (31%) no se detectó la mutación de
K-RAS. La mutación de K-RAS se detectó en 23 muestras. En todos los casos menos en dos
MATERIAL Y MÉTODO:
la mutación detectada en los dos protocolos fue idéntica. En cuatro casos se observó una
Para la determinación de lipófagos, se estudiaron 85 esputos inducidos, de pacientes con
discrepancia entre los dos ensayos. Es interesante señalar que en los cuatro casos no se
tos crónica.
pudo apreciar mutación mediante el kit TheraScreen de Roche pero si se detectó mutación
El método empleado para evidenciar las inclusiones lipídicas, es la técnica de OIL RED-O.
de K-RAS mediante la COLD-PCR. Además, sometimos nuestro protocolo al control de
Tinción de OIL RED-O calidad coordinado por la Sociedad Española de Anatomia Patológica para el estudio de
- Citocentrifugado de la muestra, a 1100 r.p.m. durante 5 min. K-RAS. La PCR convencional detectó mutación de forma clara en dos de las 4 muestras que
- Fijación en formaldehído al 10%, durante 24 horas. formaban parte de este control de calidad. Mientras que nuestro protocolo de COLD-PCR
- Lavar en agua destilada. y el kit TheraScreen detectaron de forma fiable mutación en tres de las cuatro muestras
- Tratar con 1,2- Propanodiol, durante 5 min. estudiadas.
- Teñir con solución de trabajo de Aceite rojo O , durante 1 hora.
Conclusión:
- 1,2- Propanodiol, durante 3 min.
La COLD-PCR es un protocolo económico, sensible y fácil de implementar que permite
- Lavar en agua destilada
aumentar de forma muy significativa la sensibilidad de la detección de mutaciones de
- Contrastar con Hematoxilina de Harris, 1 min.
K-RAS en muestras fijadas en formol e incluidas en parafina.
- Lavar en agua corriente
- Montar con Aquatex®
Resumen Comunicación Científica - PANEL
Mediante este método, las inclusiones lipídicas se tiñen de color rojo brillante.
Número: 451
RESULTADOS:
Del estudio realizado, 11 casos fueron insuficientes, 57 casos evidenciaron la presencia de PRESENCIA Y DISTRIBUCIÓN DE LOS GENOTIPOS DE VIRUS DEL PAPILOMA
Lipófagos, y 17 casos fueron negativos. HUMANO (HPV) EN CARCINOMAS IN SITU E INFILTRANTES DE CERVIX UTERINO
CONCLUSIONES: EN ZAMORA.
Los resultados obtenidos demuestran que un 67% de pacientes con tos crónica, padecen Trabajo de: Anatomía Patológica.
bronco-aspiración de contenido gastroesofágico en vías respiratorias. Autor/a/s: Olga Rodriguez Santiago, Felipa Cecilio Ramos, Rubén López Aguado,
Clementina Ballesteros López, Agustina Romero Gallego, Mª Luisa Prieto Puente.
Resumen Comunicación Científica -PANEL
Centro de trabajo: Servicio de Anatomía Patológica Complejo Asistencial de Zamora
Número: 444
Provincia: ZAMORA
Estandarización del método de detección de mutaciones en K-RAS Correo electrónico del primer firmante: [email protected]
mediante Cold_PCR
Introducción:
Trabajo de: Anatomía Patológica. El cáncer cervical es la segunda neoplasia más frecuente en la población femenina a nivel
Autor/a/s: Olga Luna Lozano, Judit Vela Escobedo, Mirian Cuatrecasas Freixas, Pedro Jares mundial y en la mayoría de los países en desarrollo es la principal causa de muerte en
Gerboles. mujeres de mediana edad. La asociación entre el Ácido Desoxirribonucleico de Virus del
— 18 —
Papiloma Humano y el cáncer cervical está avalada por un gran número de investigadores,
los cuales han demostrado que se detecta Ácido Desoxirribonucleico de Virus del Papiloma
Humano en la mayoría de los casos, lo que implica que un cáncer cervical sólo se
desarrollará en presencia de Ácido Desoxirribonucleico de Virus del Papiloma Humano.
Objetivos:
-Conocer la frecuencia de detección de Ácido Desoxirribonucleico de Virus del Papiloma
Humano y la distribución de los genotipos, en Zamora, en una muestra seleccionada (desde
Enero de 2010 hasta diciembre de 2010) de casos con carcinoma cervical in situ e invasivo.
Material y métodos:
Se trata de un estudio retrospectivo de casos consecutivos de carcinoma cervical in situ e
infiltrante diagnosticados en biopsia y pieza quirúrgica, en el Hospital Virgen de la Concha
de Zamora, en los últimos dos años.
- Para detección de ADN de HPV se emplea Virus del Papiloma Humano Probe (subtipos;
16, 18, 31, 33, 51) y Virus del Papiloma Humano Probe (subtipos; 6 y 11) subtipos de
los más frecuentes de alto y bajo riesgo respectivamente. Se realizan en tejidos fijados en
formol tamponado e incluidos en parafina mediante Hibridación In Situ usando el sistema
automatizado Bond.
- El tipaje se lleva a cabo mediante Reacción en Cadena de la Polimerasa.
RESULTADOS y CONCLUSIONES:
En la muestra selecionada el resultado para Virus emplea Virus del Papiloma Humano
Probe (subtipos; 16, 18, 31, 33, 51) es de 9 de los 10 casos seleccionados.
La distribución de los genotipos son: Genotipo 16 en todos los casos excepto en un caso
que ha salido 31 y en otro que no fue detectado el Ácido Desoxirribonucleico de Virus del
Papiloma Humano.
Estos resultados evidencian que el genotipo 16 es de los más frecuentes y es denominado
de los de alto riesgo. Además de indicar la alta sensibilidad de la Virus del Papiloma
Humano Probe.
— 33 —
Para el estudio de inexactitud relativa con muestras de pacientes la ecuación obtenida es: Resumen Comunicación Científica - PANEL
Dimensión EXL TnI = 1,136 (0,983 a 1,177) . Centauro CP TnI 0,0084 (-0,011 a 0,0029). Número: 160
Discusión
La National Academy of Clinical Biochemistry and IFCC Committee for Standardization of ESTUDIO DE LA DEMANDA Y COSTE DE TROPONINA EN EL LABORATORIO DE
Marquers of Cardiac Damage Laboratory Medicine Practice Guidelines establece que la URG DEL HOSPITAL DE SAN AGUSTIN DE LINARES
imprecisión en el límite de decisión debe ser inferior al 10%. Teniendo en cuenta que el Trabajo de: Bioquímica.
valor discriminante recomendado para este procedimiento es 0,055 ug/L este procedimiento
cumpliría con esta recomendación ya que para la mezcla de sueros el CV obtenido es 9,6 %. Autor/a/s: MARIA CAPILLA ORTEGA PEREA,ANA AGUDO MORENO,ANTONIA
También establece que para un marcador cardiaco el tiempo de respuesta para la liberación MONTENEGRO CORREDERA ENCARNA PUENTES DIAZ
de resultado debe ser inferior a 1 hora. Con la incorporación de este procedimiento Centro de trabajo: HOSPITAL SAN AGUSTIN DE LINARES
homogéneo se ha pasado de un tiempo de análisis de 16 a 12 minutos con lo cual se ha Provincia: JAEN
mejorado el tiempo de respuesta. Correo electrónico del primer firmante: [email protected]
El estudio de inexactitud relativa con muestras de pacientes indica que no existen diferencias
sistemáticas proporcionales ni constantes entre los dos procedimientos estudiados. Objetivo:
Estudio enfrentado de analíticas de troponina cTnI s y costes de las mismas en el periodo
Resumen Comunicación Científica - PANEL comprendido entre 2008-2010 y comparativo de costes en función de resultados.
Número: 150 Introducción:
ESTUDIO COMPARATIVO PARA IMPLEMENTAR LA MACROPROLACTINA EN UN Como T.E.L es nuestra labor, no solo la realización de pruebas analíticas sino también
LABORATORIO DE ATENCIÓN PRIMARIA conocer la necesidad real de las mismas para el diagnostico clínico y el cargo económico
que supone para la institución en que se realiza.
Trabajo de: Bioquímica. METODO Y MATERIAL:
Autor/a/s: Dorotea San Martín Martínez, Beatriz Serrat Orrios, Ariana Ferri Font, Maria del Estudiadas las solicitudes de analíticas de Troponina recibidas en el servicio de urgencias,
Carmen Fontiveros Sánchez y Concepción Ruiz de la Fuente Alba se realizo el calculo estadístico de resultados positivos y negativos obtenidos durante
Centro de trabajo: Laboratori Clínic L’Hospitalet-Cornellà el transcurso de los años: 2008, 2009, 2010, utilizando el soporte informático del que
Provincia: Barcelona disponemos en nuestro laboratorio (OpenLab), realizando un estudio comparativo entre el
gasto del total de pruebas y el coste que han supuesto las troponinas que nos resultaron
Correo electrónico del primer firmante: [email protected]
positivas.
Introducción: RESULTADOS:
La prolactina es una hormona hipofisaria constituida por una única cadena polipeptídica de El coste anual calculado por estas pruebas en función de sus resultados (positivos o
199 aminoácidos. Sin embargo, se diferencian 3 tipos de prolactina: monomérica, grande negativos) se pueden observar en las graficas siguientes:
y muy grande o macroprolactina.
La prolactina monomérica constituye la forma plasmática predominante y con mayor
actividad biológica, mientras que la prolactina grande y la macroprolactina son menos
activas y se encuentran en menor concentración.
El método más frecuente utilizado para detectar la macroprolactina es la precipitación del
suero con polietilenglicol (PEG) para separar la prolactina activa (sobrenadante) de la
macroprolactina (precipitado).
Objetivos:
Nuestro objetivo es poner en marcha la técnica de precipitación de la macroprolactina con
polietilenglicol (PEG) y posterior cálculo del porcentaje de recuperación de la prolactina.
Hacer un estudio comparativo con los resultados obtenidos en nuestro laboratorio y el
de referencia, y si no existen diferencias significativas, implementar la determinación de
macroprolactina en nuestro laboratorio.
Material y métodos:
El estudio se ha realizado en un total de 43 muestras de suero cuyos valores de prolactina
eran superiores a 500 mU/L.
En nuestro laboratorio, la prolactina sérica fue determinada por electroquimioluminiscencia
mediante el analizador Elecsys MODULAR ANALYTICS E-170 (Roche®) y en el laboratorio
de referencia por quimioluminiscencia no competitiva en el analizador Immulite 2000
(Siemens Healthcare).
La detección de macroprolactina fue realizada mediante la precipitación del suero del
paciente con polietilenglicol (PEG) y posterior determinación de la prolactina activa en
el sobrenadante. Con el resultado de la prolactina inicial (suero) y la prolactina activa
hallada en el sobrenadante (PEG) y aplicando la fórmula del % de recuperación obtenemos
un porcentaje con el que podemos concluir la presencia o ausencia de macroprolactina.
Definimos la presencia de macroprolactina cuando la recuperación es inferior a un 40%.
RESULTADOS:
En los 43 sueros analizados, se han detectado 4 casos de presencia de macroprolactina,
3 de presencia de forma mixta, y el resto (36) ausencia de macroprolactina. Hay una
concordancia del 95,3% entre los resultados resultados de los dos laboratorios. Los
dos casos discrepantes corresponden a recuperaciones del 54.8% y 70.9%, que fueron
clasificados como forma mixta y ausencia de macroprolactina, respectivamente, mientras
que el laboratorio de referencia obtuvo recuperaciones más bajas.
Conclusión:
Se observan mínimas diferencias entre los resultados de los dos laboratorios, las cuales
atribuimos a la utilización de reactivos e instrumentación diferente. La practicabilidad de la
técnica también se valoró positivamente.
Por todo ello, decidimos implementar la determinación de la macroprolactina en nuestro CONCLUSIONES:
laboratorio con la finalidad de evitar la derivación de la muestra a un centro externo, agilizar 1-Los resultados positivos durante el 2008, 2009, 2010, arrojan un resultado del 11%,
la entrega de los resultados y disminuir el indicador de demora de los análisis que se 10%, 9% respectivamente observando una leve disminución en la demanda, con su
derivan. consecuente descenso en los costes.
— 34 —
2-La puesta en marcha del protocolo normalizado para la solicitud de troponina de alta reactivos, calibradores y controles de la casa comercial Menarini. Alternativamente hemos
sensibilidad cTnI s facilita el descenso en el número de solicitudes recibidas al laboratorio empleado un analizador por colorimetría e inmunoturbidimetría LX20 PRO, reactivos,
de urgencias. calibradores y controles de la casa comercial Beckman Coulter.
3-La utilización de otras pruebas alternativas por el diagnostico IAM,como el Para el estudio de intercambiabilidad hemos empleado muestras de sangre total
electrocardiograma supondría una reducción en el coste general por su descarte. anticoagulada con EDTAK3 procesadas en ambos analizadores antes de transcurridas 8
4-Por todo ello el T.E.L tiene la responsabilidad de incorporar a su tarea habitual el análisis horas de su obtención.
tanto de la demanda como del coste de la determinación. Además, hemos realizado estudios de imprecisión intraensayo e interensayo con controles
a dos concentraciones diferentes siguiendo las normas establecidas por la SEQC.
Resumen Comunicación Científica - PANEL En la comparación de métodos hemos empleado el paquete estadístico SPSS para Windows
Número: 164 Vista (V. 17.0) y Microsoft-Excel (V.2007) para obtener la correlación de Pearson y la recta
de regresión lineal (ajuste con mínimos cuadrados).
AUTOMATIZACION DE LA FASE PREANALITICA EN EL HOSPITAL RESULTADOS:
TORRECARDENAS Los resultados de imprecisión intraensayo e interensayo son inferiores al 5% para las dos
Trabajo de: Bioquímica. concentraciones estudiadas:
Autor/a/s: Felices Bernal Hortensia, Ortega González Esther, López López, María Antonia Intraensayo (n=20) Interensayo (n=20)
Centro de trabajo: Complejo Hospitalario Torrecárdenas Concentración= Concentración= Concentración= Concentración=
Provincia: Almería HbA1c 5.7 10.0 5.8 10.1
Correo electrónico del primer firmante: [email protected] C..V.= 1.47% C.V.= 1.85% C..V.= 3.27% C..V.= 2.09%
Disminución del consumo de determinaciones tras la instalación del modular Cobas 711 INTRODUCCION:
Las gammapatías monoclonales engloban un amplio espectro de diferentes entidades en
Trabajo de: Bioquímica las cuales el pilar del diagnostico y de su seguimiento es la identificación y caracterización
Autor/a/s: Dolores Rodríguez Martel, Marcos José Rodríguez del Rosario, Maria del Carmen de la proteína monoclonal. El aumento de los niveles de las cadenas ligeras de
Acevedo Gil, Adoración Diaz Jimenez, Iluminada Ramos Nuez inmunoglobulina es un evento frecuente en estos pacientes. Recientemente, la introducción
de un nuevo inmunoensayo sérico para la determinación de las cadenas ligeras libres kappa
Centro de trabajo: HOSPITAL DE GRAN CANARIA DOCTOR NEGRÍN. y lambda ha proporcionado una nueva herramienta para el cribado, diagnostico, pronóstico
Correo electrónico del primer firmante: [email protected] y seguimiento del mieloma múltiple y otras discrasias de células plasmáticas. Al día de hoy,
— 45 —
se recomienda su utilización en todas las gammapatías monoclonales en el momento del k/l y K/L alterados, 2 muestras(1paciente ),43 muestras(41 pacientes ) que no presentan
cribado, diagnóstico y pronóstico CM y que no estaban incluidos en los grupos anteriores, el 18% tiene cociente k/l, y el
Objetivo: 21% K/L alterados. Orinas:68 muestras de 64 pacientes les determinamos k/l libres, 30
Analizar la utilidad de la cuantificación de cadenas ligeras libres en el cribado de que tenían CM en suero, el 2,3% tenían cociente k/l, y las 38 restantes sin actual CM en
gammapatías monoclonales, comparando con el proteinograma en gel de agarosa e suero, únicamente 1 de las dos existentes (1,06%) tenia cociente alterado y correspondía
inmunofijación selectiva. a una sospecha de amiloidosis. Las 3 muestras pertenecientes a 3 MBJ que habían sido
MATERIALES Y METODOS: anteriormente positivas y actualmente no, estaban en tratamiento.
Se analizaron 45 sueros derivados al Laboratorio de Inmunología con sospecha de CONCLUSIONES:
gammapatía monoclonal, a los cuales les realizamos: proteinograma por electroforesis en En las muestras con componente monoclonal en suero el cociente de cadenas ligeras
gel de agarosa (Microgel, Menarini), determinación nefelométrica (BN-II, Siemens) de los libres en suero presenta una sensibilidad similar al cociente de cadenas ligeras totales
niveles de kappa libre en suero y lambda libre en suero (Freelit≥!, The Binding Site Ltd), e en suero. Los pacientes de MM en tratamiento actual han normalizado sus cocientes
inmunofijación selectiva (Hydrasys, Sebia). tanto libres como totales. En el resto de los pacientes sin componente monoclonal, no
RESULTADOS: incluido en las patologías anteriores, presentan cociente k/l y K/L alterados en un 18%
El 48,8% (22/45) de los pacientes presentó un cociente kappa libre /lambda libre en suero y 21% respectivamente. Para MMBJ es mas sensible el cociente k/l libre en suero. En
patológico (Valores de referencia 0,26-1,65) y en todos los casos se detectó componente las sospechas de Amiloidosis resultados alterados los tres cocientes determinados
monoclonal en el proteinograma e inmunofijación. En el 20% (9/45) de los casos se anteriormente.
observó cociente kappa libre en suero /lambda libre en suero dentro de la normalidad,
sin embargó se observó componente monoclonal en proteinograma o inmunofijación. El Resumen Comunicación Científica - PANEL
análisis de los 9 casos mostró los siguientes resultados 1 caso de gammapatica biclonal
(IgA lambda + IgA kappa), 4 casos de gammapatía monoclonal de significado incierto y 4 Número: 264
casos de gammapatía monoclonal con insuficiencia renal ( con aumento de significativo de ENOLASA NEUROESPECIFICA (NSE) Y PROTEINA S100 COMO MARCADORES DE
kappa y lambda libre en suero) DEMENCIA SENIL
CONCLUSIONES:
La cuantificación de cadenas ligeras kappa y lambda libres en suero proporciona una Trabajo de: BIoquímica.
herramienta de alta sensibilidad para el diagnóstico de gammapatías monoclonales, aunque Autor/a/s: (CELEDONIA AGUADO FRAILE,CARMEN CASADO HERNANDEZ, PAULA
hay que tener en cuenta algunas consideraciones: 1) Siempre hay que valorar el resultado ROMERO GARCIA, MARIA FELICIDAD MARTIN ANDRES, FLORA SIERRA PUPARELLI,JUAN
del cociente kappa libre/lambda libre en suero junto con la función renal del paciente y CARLOS RODRIGUEZ PEREZ,CONSUELO BOYERO SIERRA, MARIA LUISA HERNANDEZ
modificar los valores de referencia en estos pacientes (0,37-3,1). 2) Hay que considerar CERCEÑO.
la posibilidad de resultados normales de cociente kappa libre/lambda libre en suero en
Centro de trabajo: (HOSPITAL UNIVERSITARIO DE SALAMANCA)
gammapatías biclonales y en GMSI.
Resumen Comunicación Científica - PANEL Correo electrónico del primer firmante: [email protected])
Número: 259 INTRODUCCION:
La enolasa neuroespecífica, NSE, y la proteína S 100 son proteínas especificas del sistema
CADENAS LIGERAS LIBRES EN SUERO: UTILIDAD EN EL DIAGNOSTICO,
SEGUIMIENTO Y TRATAMIENTO. nervioso central y periférico. Son liberadas al torrente sanguíneo después de un episodio
de daño neuronal. Hemos estudiado la evolución de dicho daño o deterioro en una serie de
Trabajo de: Bioquímica. pacientes para ver los efectos que produce dependiendo de la edad del sujeto.
Autor/a/s: CONSUELO LAPUEBLA VIEL, JUDITH MARIA GONZALEZ ALVARADO, Objetivo:
FRANCISCA BERRAL BAENA Valorar S100 y NSE como marcadores del deterioro mental fisiológico debido a la edad. Así
Centro de trabajo: UGC HOSPITAL DE VALME SEVILLA como establecer valores de referencia según grupo de edades.
Correo electrónico del primer firmante: [email protected] MATERIAL Y METODOS:
Se analizó S100 y NSE a una población ambulatoria de 808 personas, pertenecientes a
Introducción: : un centro de salud del oeste de Salamanca. Las técnicas de NSE y S 100 se realizaron en
Cuando prolifera un clon de células plasmáticas puede modificar la relación kappa / lambda COBAS 411 ROCHE por quimioluminiscencia en suero. Las concentraciones venían dadas
en suero. La corta vida media,fácil cuantificación y elevada sensibilidad del cociente de en nanogramos/ml para NSE y microgramos /L para S100.
cadenas ligeras libres en suero lo convierten en una herramienta adecuada para el
diagnóstico, pronóstico, y seguimiento de gammapatías monoclonales, y patologías donde RESULTADOS:
no se observa secrección de componente monoclonal(MM Bence Jones, Amiloidosis, MM Se hicieron 3 grupos de edad, grupo 0< 64 años, grupo 1 de 64-74 años y el grupo 2 >74.
no Secretor). La distribución era no normal tanto para el total de la población como para los grupos que
hicimos por edad. Hallamos las medianas para cada grupo y los percentiles entre 25 y 75
Objetivo:
para establecer rangos normales.
Evaluar el comportamiento del nuevo test de cadenas ligeras libres en pacientes a los que
se había solicitado cadenas ligeras totales y/o cadenas ligeras libres en orina, comparando GRUPO S100 NSE
los cocientes séricos k/l libres, K/L totales, y libres en orina. 59 59
CAT.0-1 N validos
Material y métodos: 0 0
perdidos
Analizamos 123 muestras de suero y 68 de orina de 106 pacientes procedentes del servicio .058000 13.7500
Mediana 25
de Hematología, mayoritariamente, y otros Servicios como Reumatología ó Digestivo. .044000 10.9300
Percentiles 75
Algunos pacientes tenían diagnósticos bien establecidos, MM de inmunoglobulina .070000 19.3000
intactas(25), MM cadenas ligeras(4), Gammapatía Monoclonal de significado incierto(19),
Linfoma Hodking y No Hodking 12), MWaldestrom(3), sospecha de Amiloidosis(1), 394 395
patología reumática diversa(10), enfermedades hepáticas(2) otros, procesos poco CAT 2 N validos
3 2
representadas en esta muestra. Se realizó EC a todas las muestras (Capillarys Sebia) Perdidos
.063000 12.3900
,si era necesario Inmunotipado , Inmunofijación en suero u orina (equipo de Sebia).En Mediana 25
.046000 9.8200
las 123 muestras cuantificamos diversos parámetros bioquímicos como creatinina, IG, Percentiles 75
.086000 14.9600
Proteinas etc, Cadenas Ligeras Libres, kappa y lambda (k y l ), CLTotales, Kappa y Lambda,
(K y L) ,en las muestras de orina CL Libres, kappa y lambda Libre (ko ylo), y sus ratios 354
CAT 3-4 N Válidos 354
correspondientes. Las CLséricas Freelite (Binding Site), y las CL en orina (NewScientic 2
perdidos 2
Company), se determinan por nefelometrícamente (BNII ,Siemens ). Las cadenas ligeras 12.460
.064000
totales séricas se cuantifican inmunoturbidimétricamente (Cobas 501 Roche Diagnostic). 9.7375
Mediana 25 .047000
Adaptamos los rangos de referencia de la bibliografia: k/l sérico: [ de 0,26-1,65] y 0,37-3,1] 15.0800
Percentiles 75 .093000
pacientes con insuficiencia renal, K/L total sérica: [1,5-2,5] y en orina k/l:[ 0,5-8].
RESULTADOS: Para los menores de 64 años los valores normales son 0.044-0.070 microgramos/L para
Con CM en suero, 56 muestras, (51 pacientes), presentan el 93% de los cocientes k/l S100 y 10.93-19.3 nanogramos/L para NSE.
libre y 91% de K/L totales, alterados .Sin CM actual, pero en tratamiento por MMII, no Para la población de 64-74 años los valores normales son 0.046-0.086 u para S100 y
presentan alteración de los cocientes k/l, ni K/L, 14 muestras(8 pacientes), Mieloma BJ, 9.82-14.96 u para NSE.
estando en tratamiento ninguno presenta proteinuria, el 71% tiene cociente k/l alterado, Para los mayores de 74 años los valores normales son 0.047-0.093 u para S100 y 9.74-
y sólo el 14% K/L alterado,7 muestras(4 pacientes).Sospecha de AL 100% de cociente 15.08 u.
— 46 —
Comparando el grupo 0 con grupo 1 obtenemos p<0.008 para NSE, mientras que no negativos y diferencia con escasa significación entre los leves moderados y los graves, por
encontramos diferencias significativas para S100 lo que consideramos resulta más interesante la determinación de S-100
Si comparamos el grupo 0 con el 2 tanto la NSE como la S100 presentan diferencias
significativas con p<0.013 y p<0.021 respectivamente. Resumen Comunicación Científica - PANEL
El grupo 1 y 2 no presentan diferencias significativas Número: 266
CONCLUSIONES:
Hemos encontrado diferencias significativas para S100 y NSE entre los menores de 64 Comparación entre Paragon CZE 2000 versus V8 (Helena Biosciences) en la
años y mayores de 74 años. Cuando hemos establecido los valores normales según rango detección de bandas monoclonales.
de edad, observamos que solo la S100 evoluciona en ascenso con respecto a la edad, por Trabajo de: Bioquímica
lo que consideramos este parámetro más adecuado para valorar el deterioro mental debido
a la edad. Autor/a/s: García Fernández Mónica, Prieto Grueso Montserrat, Esteban Pepió Mª Angeles,
García Guantes Esther y Carcas Espinosa Luisa
Resumen Comunicación Científica -PANEL Centro de trabajo: Hospital Universitario Vall d´Hebron (Barcelona)
Número: 265 Correo electrónico del primer firmante: [email protected]
NSE (ENOLASA NEUROESPECIFICA) Y S-100 MARCADORES DE LA GRAVEDAD Introducción:
EN TCE La electroforesis capilar de zona (CZE) es una técnica que separa las proteínas séricas
humanas, según sus características físico-químicas, en cinco fracciones distintas y bien
Trabajo de: Bioquímica
resueltas. Su principal aplicación es para el estudio de gammapatías monoclonales,
Autor/a/s: MARIA FELICIDAD MARTIN ANDRES, CARMEN CASADO HERNANDEZ,PAULA visualizando en el proteinograma bandas monoclonales. Cuando se observa una imagen
ROMERO GARICA, FLORA SIERRA PUPARELLI, CELEDONIA AGUADO FRAILE, JUAN dudosa respecto a un componente homogéneo, se realiza una inmunofijación para el
CARLOS RODRIGUEZ PEREZ, MARIA LUISA HERNANDEZ CERCEÑO. diagnóstico.
Centro de trabajo: (HOSPITAL UNIVERSITARIO DE SALAMANCA) Objetivos:
Correo electrónico del primer firmante: ([email protected]) En un estudio previo calculamos el porcentaje de componentes homogéneos confirmados
por inmunofijación, del total de las muestras enviadas con imagen dudosa en fracción
INTRODUCCION:
La causa principal de injuria cerebral son los traumatismos provocados por accidentes de beta y/o gamma, de los proteinogramas realizados en el analizador Paragon CZE 2000.
trabajo, accidentes deportivos, violencia y caídas. También son causas de esta patología la Debido al cambio de analizador V8 (Helena Biosciences), hemos querido comprobar si el
hipoxia y los desórdenes neurodegenerativos. porcentaje de falsos positivos hallados coinciden con el estudio anterior.
Aproximadamente un 12% de los ingresos de pacientes con trauma y algún riesgo de injuria MATERIAL Y METODOS:
cerebral no son correctamente diagnosticados haciendo uso de la metodología clásica y por Se revisa el resultado de inmunofijación de 213 proteinogramas con imagen dusosa de
este motivo pueden desencadenarse fatalmente. Con la incorporación a los protocolos de componente homogéneo en beta y/o gamma, procesados en cuatro meses desde octubre
una prueba bioquímica a pacientes con riesgo de injuria post trauma podemos reducir del 2010 hasta enero del 2011, en el V8. Se calcula el porcentaje de falsos positivos en
sensiblemente el tiempo de espera y de diagnóstico en urgencias. el V8 comparándolos con los del estudio realizado en el Paragon que en este caso fueron
Objetivo: 398 proteinogramas con imagen dudosa. Para las inmunofijaciones se utiliza un analizador
Evaluar el interés de estos marcadores en el descubrimiento de la intensidad y gravedad de Hydrasys de (Sebia).
un TCE cuando este ingresa en el hospital normalmente por vía urgente. RESULTADOS:
MATERIAL Y METODOS: IMAGEN DUSOSA FRACCIÓN BETA:
Se determinaron 87 muestras: 47 controles frente a 40 pacientes de los cuales 11 no En la revisión de 198 muestras analizadas en Paragon CZE 2000 se obtuvieron los siguientes
tienen TCE, 14 presentan TCE de leve a moderado y el resto 15 pacientes muestran un resultados el 74% de las muestras fueron negativas, un 24% tenían un componente
TCE grave. El análisis de NSE y S-100 en COBAS 411 ROCHE (quimioluminiscència). monoclonal y un 2% presentaban una pequeña intensificación en la que se recomendaba
Las concentraciones las obtuvimos en nanogramos/ml y microgramos/L respectivamente. repetir el estudio en unos 3-6 meses para ver la evolución d la imagen. En las 91 muestras
RESULTADOS: analizadas en el V8 (Helena Biosciences) en el que se obtuvieron los siguientes resultados
Población distribución no normal tanto en la población total como en las tres categorías el 75% de las muestras fueron negativas, un 20,8% tenían un componente monoclonal y un
en las que se fragmentó. (medianas y percentiles). Se agrupan 3 categorías cat=0 3,2% presentaban una pequeña intensificación en la que se recomendaba repetir el estudio
están incluidos los controles y los pacientes sin TCE apreciable ya que no resultaban en unos 3-6 meses para ver la evolución de la imagen.
significativamente diferentes p>0.05 para los dos marcadores. Cat1 los TCE de leves a IMAGEN DUDOSA FRACCIÓN GAMMA:
moderados y cat los TCE graves. Se calcularon medianas y percentiles para cada categoría En la revisión de 200 muestras analizadas en Paragon CZE 2000 se obtuvieron los
siguientes resultados el 53% de las muestras fueron negativas, un 31% tenían un
componente monoclonal y un 15% presentaban una pequeña intensificación en la que
se recomendaba repetir el estudio en unos 3-6 meses para ver la evolución de la imagen.
En las 122 muestras analizadas en el V8 (Helena Biosciences) en el que se obtuvieron
los siguientes resultados el 45% de las muestras fueron negativas, un 50% tenían un
componente monoclonal y un 4,9% presentaban una pequeña intensificación en la que
se recomendaba repetir el estudio en unos 3-6 meses para ver la evolución d la imagen.
CONCLUSIONES:
En la comparación de los autoanalizadores Paragon CZE 2000 versus V8 (Helena
Biosciences) observamos que en la fracción beta prácticamente obtenemos los mismos
resultados, si embargo en la fracción gamma se observa una mayor sensibilidad en la
detección de componentes monoclonales en el autoanalizador V8 (Helena Biosciences).
Las nuevas tecnologías nos dan una apreciación visual más acertada en el envío.