División de Ciencias Básicas

UNIVERSIDAD DEL NORTE

DEPARTAMENTO DE QUÍMICA Y BIOLOGÍA
PROFESOR: JAVER ESNEYDER HERRERA BAQUERO
BIOLOGÍA

GUÍA 2. MICROSCOPIA
CONOCIMIENTO Y MANEJO DEL MICROSCOPIO

AUTORES

Santiago Polo
GRUPO

INTRODUCCIÓN

El Microscopio óptico es un instrumento que permite observar y cuantificar objetos y organismos muy pequeños. Este instrumento ha sido fundamental
para el avance de las investigaciones biológicas y se ha convertido en una herramienta básica para ampliar las fronteras de la biología. Existen diferentes
tipos de microscopios que varían en su poder de aumento y resolución. La lupa se puede considerar como el microscopio más simple y fue usado
inicialmente para adquirir los primeros conocimientos del mundo microscópico. Luego se perfeccionó y en la actualidad existe una gran variedad de
microscopios, algunos de ellos altamente especializados. Los rangos aproximados de magnificación se encuentran entre 4X y 40X (Estereoscopio), 40X-
1.500X (Microscopio óptico compuesto), 10.000X-16.000X (Microscopio electrónico). X hace referencia al número de veces que se aumenta el tamaño
real del objeto. El propósito de esta práctica es adquirir destrezas en el cuidado y manejo del Microscopio óptico compuesto.
El microscopio permite estudiar las estructuras y células que no son observables con el ojo humano.

ALGUNAS
MEDIDAS EN
BIOLOGÍA

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MARCO TEÓRICO

HISTORIA DEL MICROSCOPIO: DILIGENCIAR ESTE CUESTIONARIO POR GRUPOS DE TRABAJO. SE LLEVA COMPLETAMENTE
DESARROLLADO A LA PRÁCTICA.
1. ¿Qué influencia tuvieron las siguientes personas en la evolución del microscopio?

a) ZACCHARIAS JANSSEN b) GALILEO GALILEI

- Zacharias desarrollo el primer - Galileo Galilei fue el autor

microscopio del que se tenga del primer microscopio
conocimiento, entre 1590 y 1595. compuesto en 1609.
- Su primer microscopio presentaba - Consistió en un tubo de unos
1580- una falla, tenía un solo lente, lo cual 20 cm de largo con dos
1638 Países Bajos limitaba el nivel de aumento del lentes, una cóncava y otra
(Middelburg) dispositivo. convexa.
Fabricaba lentes

c) ANTONY VAN LEEUWENHOEK d) ROBERT HOOKE

-Fue un visionario en -En 1665 Robert

microbiología, siendo uno de Hooke observó con un lente
los primeros en observar los un delgado corte de corcho y
microorganismos. notó que el material era
poroso; contenía cavidades
- Diseño microscopios de poco profundas a modo de
lente única para ver más allá celditas a las que llamó
de lo que permite el sentido células.
de la vista.
16 32-1723 Delft, Países Bajo - Diseñaba sus propios
1635-1703 Reino Unido -Su microscopio era una microscopios de unos 30
  Científico y comerciante simple lupa, pero de exquisita Científico aumentos.
calidad, con la que podía
alcanzar hasta 200
aumentos.

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e) ERNEST ABBE f) CARL ZEISS

-Fue un óptico muy reconocido

 -Es notable por sus mundialmente por la compañía de
contribuciones teóricas de óptica, lentes e instrumentos ópticos de gran
diseño y perfeccionamiento del calidad que fundo.
microscopio.

-Inventó las lentes apocromáticas, -Su compañía actualmente se llama

que eliminan la aberración Carl Zeiss AG.-
cromática presente en los
1840 – 1905. Alemania microscopios. También, un 1816 –1888 Alemania -Uno sus objetivos era desarrollar un
Físico condensador para la iluminación Óptico microscopio con sólo los cálculos
uniforme de los especímenes. ópticos de sus lentes y no con los
métodos utilizados hasta el momento
de ensayos de prueba-error.

Link sugerido: [Link]

Consulte sobre un(a) científico(a) que haya ganado un premio nobel en química, fisiología o medicina donde el uso del microscopio jugó un papel importante
para el desarrollo de su investigación. Incluya un párrafo que hable brevemente de su biografía, describa cómo se realizó el experimento, en qué momento se
utilizó el microscopio y que tipo de instrumento óptico.

Santiago Ramón y Cajal.

Santiago Ramón y Cajal (1852-1934), fue un médico español especializado

en histología y anatomía patológica. Recibió múltiples distinciones en la cual la más
destacada fue el Premio Nobel en 1906 debido al desarrollo de la “doctrina de la neurona”,
que explica de que el cerebro está compuesto por células independientes y funcionales.

En sus primeros años de vida demostró sus dotes para el dibujo, que le fue de gran utilidad
al momento de mostrar sus hallazgos con el microscopio, en un período donde la fotografía
no era un fuerte aún. Años después, fue enviado a Cuba para actuar en la parte de
Sanidad Militar en la guerra de independencia de esta isla, aquí enfermo y fue enviado de
vuelta a España, en su país se curó e inició su doctorado.
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En 1888 descubrió las claves de la diversidad morfológica y los procesos conectivos de las
neuronas de la materia gris del sistema nervioso cerebroespinal. Este estudio lo proclamó
como la “doctrina de la neurona”. Para lograr su Premio Nobel, Santiago utilizó
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TIPOS DE MICROSCOPIOS

Campo Oscuro Contraste de fases

La luz incide sobre la muestra sólo desde los lados. La Se desarrolló para poder incrementar las diferencias de
única luz que es capaz de entrar en el objetivo es la que, al contraste entre las células y el medio que las rodea, lo
ser dispersada por la muestra, incide sobre el objetivo; de que permite su visualización sin necesidad de tinción.
ahí que los microorganismos se observen brillantes sobre
un fondo oscuro

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MICROSCOPIO DE FLUORESCENCIA

EL MICROSCOPIO ELECTRÓNICO utiliza electrones para iluminar un objeto.

Dado que los electrones tienen una longitud de onda mucho menor que la de la luz pueden mostrar estructuras mucho más pequeñas. No permite
observar muestras vivas.
Hay dos tipos básicos de microscopios electrónicos:

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• . MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE TRANSMISIÓN
Transmission Electron Microscope, TEM
Para utilizarlo debe cortarse la muestra en capas finas, no mayores de un par de miles de ángstroms.
Se coloca una placa fotográfica o una pantalla fluorescente detrás del objeto para registrar la imagen aumentada.
Pueden aumentar un objeto hasta un millón de veces.

MICROSCOPIO ELECTRÓNICO DE BARRIDO (SCANNING ELECTRON MICROSCOPE, SEM).

Crea una imagen ampliada de la superficie de un objeto.
No es necesario cortar el objeto en capas para observarlo
Explora la superficie de la imagen punto por punto, al contrario que el TEM, que examina una gran parte de la muestra
cada vez.
Su funcionamiento se basa en recorrer la muestra
con un haz muy concentrado de electrones, de forma
parecida al barrido de un haz de electrones por la
pantalla de una televisión.
Presenta toda la imagen en el monitor.
Pueden ampliar los objetos 100.000 veces o más.
Produce imágenes tridimensionales realistas de la
superficie del objeto.

Enlace sugerido:
[Link]

OBJETIVOS

1. Aprender a utilizar correctamente el microscopio.

2. Identificar las partes del microscopio e indicar las funciones de cada una de ellas.
3. Observar muestras en el microscopio, haciendo énfasis en la preparación del material a observar y en los procesos de ajuste y enfoque correctos.
4. Determinar el diámetro del campo visual del microscopio.
5. Adquirir destreza en las formas de calcular las medidas de las estructuras celulares, células y organismos microscópicos.

MATERIALES

 Microscopio • Papel milimetrado

 Portaobjetos • Papel con letras impresas
 Cubreobjetos
 Goteros
 Fibras de cabello e hilos

METODOLOGÍA

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DISPOSICIÓN Y CUIDADOS DEL MICROSCOPIO. Es importante tener en cuenta las siguientes precauciones al utilizar el microscopio:
 Al transportar el microscopio, tómelo siempre con las dos manos, de tal forma que una lo sostenga por el Brazo y la otra por debajo de la Base. Nunca
tenga objetos adicionales en sus manos.
 Al colocar el microscopio sobre la mesa, sitúelo suavemente a unos 10 o 15 cm del borde y oriéntelo de manera que el Brazo quede orientado hacia usted.
 Si se requiere limpiar las Lentes utilice sólo el papel y solución destinada para tal fin. No utilice ningún otro tipo de papel.
 Nunca use el Objetivo de inmersión si no se le ha solicitado hacerlo. Recuerde que se requiere el uso de aceite, y si no lo hace puede dañar el lente.
 Al terminar de trabajar deje el Microscopio en el Objetivo de 4 X.

PARTES DEL MICROSCOPIO

ÓPTICO COMPUESTO Y SUS
FUNCIONES.
En la siguiente figura identifique las
siguientes partes: Oculares,
Objetivos, Revólver, Platina,
Condensador, Diafragma-Iris, Tubo,
Brazo, Tornillo macrométrico,
Tornillo micrométrico, Base y
fuente de luz.

PARTE MECÁNICA.

Base: es el punto de apoyo de la armazón del microscopio y donde generalmente se insertan la fuente luminosa

Platina: es el lugar de posición de portaobjetos, posee un orificio central que deja pasar la luz. Con su carro y sus pinzas permite sujetar y mover la preparación
hacia delante, hacia atrás y de derecha a izquierda.

Brazo o Mango: Lugar de agarre y de transporte del instrumento

Tornillo macrométrico: ubicado en el mango ayuda a acercar y alejar la platina de los objetivos. Con este tornillo se realizan movimientos más rápidos. En
algunos microscopios este botón acerca o aleja el tubo, sitio en donde se colocan las lentes oculares.

Tornillo micrométrico: Ubicado junto con el macrométrico. Permite un enfoque preciso de la imagen mediante movimientos suaves.

Revolver: En él se colocan los objetivos del microscopio. Posee un sistema giratorio que permite colocar el objetivo requerido en posición correcta.

PARTE ÓPTICA.

Fuente de Luz: En algunos microscopios no tan modernos, la fuente de luz puede ser: natural o artificial para lo cual se utiliza un espejo que refleje la luz
proveniente de una lámpara o del sol. En los modernos una bombilla o lámpara suministra luz suficiente para la observación de los objetos de interés.

Diafragma (iris): Está situado por debajo de la platina, de apariencia laminar y acoplado al condensador, su función es regular la cantidad de luz que debe
llegara a la muestra. Puede abrirse o cerrarse totalmente.

Condensador: concentra los rayos de luz hacia la preparación

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Objetivos: Son lentes que suministran la imagen del objeto. Pueden ser secos como los de 4X, 10X y 40X o sea que no necesitan aceite para lograr nitidez y
húmedos como el de 100X que si necesita aceite y recibe el nombre de objetivo de inmersión.

Oculares: Son lentes cuya función es aumentar la imagen proveniente del objetivo. Su aumento depende de las lentes que lo conforman, pueden ser de 10, 15 o
16X. Puede ser uno solo en el microscopio monocular y dos en el binocular.

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MICROSCOPÍA VIRTUAL:

Microscopio virtual. En esta página se puede aprender sobre las partes del microscopio óptico compuesto y su principio de funcionamiento:
[Link]

Microscopía. En esta página se puede complementar sobre los principios básicos de la microscopía, tipos de microscopios y microfotografía.
[Link]

Microscopía. En esta página se pueden encontrar diversos recursos relacionados con este tema.
[Link]

PARTE PRACTICA LABORATORIO

Observación de la letra e
Portaobjetos y cubreobjetos limpios
Gota de agua, letra e
Observación en 4X, 10X y 40X

Portaobjetos y cubreobjetos limpios

Observación de cabello e hilo 16 Gota de agua, cabello e hilo
Observación en 4X, 10X y 40X
 Multiplicando el aumento del ocular por el aumento del
objetivo utilizado
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Coloque un pedazo de papel milimetrado sobre un

portaobjetos, sin cubrir
Enfoque en 4X. Mida el diámetro del campo visual en 4X en
Determinación del diámetro del campo mm y en fracciones de mm.
visual
Cálculo del del microscopio
poder de Aumento del Haga la conversión a μm.
Para estimar el tamaño de las Enfoque en 10X. Mida el diámetro del campo visual en 10X
Microscopio.
estructuras o de los organismos que se en mm y en fracciones de mm.
estén observando con el microscopio. Haga la conversión a μm.
Es importante tener las medidas
correspondientes para cada uno de los
objetivos.

Ejercicios de Microscopia Virtual

RESULTADOS Y DISCUSIÓN

1. PREPARACIÓN DE UNA MUESTRA Y OBSERVACIÓN AL MICROSCOPIO.

 Una vez ha tomado un portaobjetos limpio. Y realizado el montaje de la letra e sobre la gota de agua. Y cubierto con el cubreobjetos formando un
ángulo de 45 grados entre el portaobjetos y el cubreobjetos. Evitando la formación de burbujas en la lámina.

 Coloque la preparación sobre la Platina de tal manera que quede bien ajustada por las Pinzas que hay en la platina. Enfoque la letra “e” con el Objetivo
de 4X utilizando el Tornillo macrométrico. Abra el Diafragma hasta que obtenga una buena iluminación de la muestra.

Utilice el Tornillo micrométrico para obtener mayor nitidez. Es importante resaltar que siempre que se haga una observación al microscopio se debe
usar en primer lugar el objetivo de menor aumento.

 Describa la posición de la letra e. ¿Cómo es la imagen o su orientación? Mueva la platina de derecha a izquierda, hacia delante o hacia atrás. ¿En cuál
dirección se mueve la imagen?
Dibuje lo observado:

Descripción: La posición de la letra e es invertida. Esto se debe a que el lente objetivo de un

microscopio compuesto tiene una corta longitud focal. Después de que la luz pasa a través de la
muestra, pasa el lente objetivo y pasa el pinto focal del lente objetivo, así la imagen formada se
invertirá. Esta es la imagen es el objetivo que se ve a través de la lente del ocular. Aparte de la
letra e se pueden apreciar otras como la d y la o.

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En el momento de mirar por el ocular si movemos la platina hacia la derecha, la imagen se mueve hacia, en dirección contrario. Del mismo modo si la
hacia atrás la imagen se moverá hacia arriba.

Objetivo utilizado: 4x
Aumento total obtenido: 4x * 10x = 40x

 Gire lentamente el revólver

macrométrico; éste no es necesario si usted enfocó correctamente con el objetivo de 4X. Si es
necesario, abra un poco el diafragma para aumentar la entrada de luz. ¿Ha cambiado la posición de la
imagen con respecto a la observada con el objetivo de 10X? ¿El campo de observación es mayor o
menor? Describa lo observado y compare con lo visto con el objetivo de menor aumento.

Descripción: La posición de la letra e sigue siendo invertida, y solamente se puede

apreciar esta letra, lo que significa que el campo de observación es menor. Siguiendo la
teoría que dice que el campo de observación visto a través del objetivo del microscopio es
inversamente proporcional al aumento.

Objetivo utilizado: 10x

Aumento total obtenido: 10x * 10x= 100x

 Gire lentamente el revólver para colocar el objetivo 40X. Y compárelo con los dos objetivos observados anteriormente. Al terminar su observación gire
lentamente el revólver y coloque el objetivo de 4X y retire la preparación de la platina.

Descripción: La letra e ya no es apreciada en su totalidad, sino podemos visualizar la tinta en que fue impresa sobre el papel, esto se explica que al aumentar
el objetivo a 40x el campo de observación se redujo aún más.

Objetivo utilizado: 40x

Aumento total obtenido:
40x * 10x= 400x

2. Realice un montaje similar a la letra “e”, pero use fibras de cabello e hilo y haga sus observaciones con los objetivos de 4X, 10X y 40X
FIBRA DE CABELLO E HILO
Objetivo utilizado: Objetivo utilizado: Objetivo utilizado:
Aumento total obtenido: Aumento total obtenido: Aumento total obtenido:

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Descripción de la observación: Descripción de la observación: Descripción de la observación:

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3. Cálculo del poder de aumento del microscopio. El poder de aumento es la capacidad que posee el microscopio para dar una imagen aumentada de un
objeto. El microscopio óptico compuesto consta de dos lentes que aumentan la imagen, los oculares y los objetivos. El poder de aumento del microscopio se
calcula multiplicando el aumento del ocular por el aumento del objetivo utilizado. El ocular de los microscopios que se utilizan en el laboratorio es de 10X.

 Calcule el poder de aumento cuando se estén utilizando los objetivos de 4X, 10X, 40X y 100X, incluya esta información en sus observaciones anteriores.

4. Determinación del diámetro del campo visual del microscopio.

La información del diámetro del campo visual se utiliza para estimar el tamaño de las estructuras o de los organismos que se estén observando con el
microscopio. Es importante tener las medidas correspondientes para cada uno de los objetivos.

4.1 Coloque un pedazo de papel milimetrado sobre un portaobjetos. Enfoque con el objetivo de 10X. Mida el diámetro del campo visual, correspondiente a
este objetivo, en mm y en fracciones de mm. Anote el dato y haga la conversión a μm.

1 mm = 1 000 µm
1 m = 1 000 000 µm
1 nm = 0,001 µm
1 nm = 1x10-9 m = 0,000000001m

1Å = 0.000 000 000 1 m = 10−10 m. Unidad de longitud empleada principalmente para expresar longitudes de onda, distancias moleculares y
atómicas

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Fórmula para calcular el diámetro del campo visual:

AMENTO MAYOR * DIÁMETRO MAYOR = Aumento menor * díámetro menor

 Repita el ejercicio anterior con el objetivo de 40X. ¿A cuántos mm o fracciones de mm corresponde el diámetro del campo visual? ¿La relación entre el
diámetro del campo visual y el poder de aumento es directa o inversa?

Cálculos:

 Calcule el diámetro del campo visual cuando se utilice el objetivo de 100X.

 Estime el tamaño aproximado, en mm y en μm, de la letra e observada anteriormente.

 El diámetro del campo visual de un microscopio es de 1500 μm cuando se observa con un ocular de 10X y un objetivo de 10X. ¿Cuál será el diámetro del
campo visual si se observa con un objetivo de 40X y el mismo ocular?

CONCLUSIONES

Al realizar el laboratorio de Microscopia pudimos llegar a diferentes conclusiones durante el desarrollo de la

experiencia. En primer lugar, cuando visualizamos la letra e observamos que a medida que incrementábamos
el aumento menor era el campo de observación, por lo que son son inversamente proporcionales.

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BIBLIOGRAFÍA

Incluya las referencias completas de los libros, artículos de revistas, etc., que consultó para desarrollar la guía en su totalidad y citados siguiendo las
normas APA.

Pelczar, M. y R. D. Reid. 1996. Microbiología. Mc Graw Hill. Bogotá. 664p

Junqueira, L y J, Carneiro.1998. Biología celular y molecular. Sexta edición. Mc Graw Hill. Bogotá. 324p.
Manual de experiencias de Laboratorio para Biología general y celular. Aracelly Casalle Osorio y Jose Carlos Gutiérrez. 2002.

Chuaire, Lilian. (2006) Santiago Ramón y Cajal: Cien años de un premio Nobel. Colombia Médica, 37 (3), 247-
248. Recuperado el 15 de febrero de 2020, de [Link]
95342006000300012&lng=en&tlng=es

García Luaces, P. (2020). 1906: El Premio Nobel de Medicina le es concedido a Ram ón y Cajal -

Almanaque de la Historia de España. [online] Libertad Digital. Available at:
[Link]
es-concedido-a-ramon-y-cajal-10536/ [Accessed 15 Feb. 2020].

 País, E. (2020). Antoni van Leeuwenhoek, el primer microbiólogo. [online] EL PAÍS. Available at:
[Link] [Accessed 15 Feb. 2020].

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INFORME A ENTREGAR: ACTIVIDAD QUE ENTREGA EN LA SIGUIENTE PRÁCTICA.

El informe consistirá en diligenciar completamente la guía de laboratorio. Asegúrese de incluir los autores que asistieron al laboratorio. Sea muy profundo,
argumente clara y suficientemente todos los resultados obtenidos y discútalos confrontándolos con referencias actualizadas.

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